CN106370748B - 有机肥中氟喹诺酮类药物的测定方法及其样品预处理方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种有机肥中氟喹诺酮类药物的测定方法及其样品预处理方法。所述样品预处理方法，包括步骤：取有机肥样品，加入pH＝9.0‑11.0的EDTA缓冲溶液，充分振荡，静置后取第一上清液；调节第一上清液pH值至3.5‑4.5，加入有机溶剂，再次充分振荡，静置后取第二上清液；所述有机溶剂为乙腈或丙酮；向第二上清液中加入吸附剂，充分振荡静置后取第三上清液吹干，得到有机肥预处理样品。所述有机肥中氟喹诺酮类药物的测定方法，采用所述样品预处理方法得到的有机肥预处理样品作为测试样品，直接采用现有氟喹诺酮类药物的测定方法中的一种或者多种进行测定。本发明操作简便、快速且检测结果准确，能够广泛的推广应用。

Description

有机肥中氟喹诺酮类药物的测定方法及其样品预处理方法
技术领域
本发明涉及抗生素的检测技术领域，具体涉及一种有机肥中氟喹诺酮类药物的测定方法及其样品预处理方法。
背景技术
有机肥主要来源于植物和/或动物，施于土壤以提供植物营养为其主要功能的含碳物料。经生物物质、动植物废弃物、植物残体加工而来，消除了其中的有毒有害物质，富含大量有益物质，包括：多种有机酸、肽类以及包括氮、磷、钾在内的丰富的营养元素。不仅能为农作物提供全面营养，而且肥效长，可增加和更新土壤有机质，促进微生物繁殖，改善土壤的理化性质和生物活性，是绿色食品生产的主要养分。实施标准NY525-2012，酸碱度5.5-8.5。虽然有机肥的发酵过程一般会消除原料中的有毒有害物质，但可能会有部分药物残留，例如一些抗生素残留。
氟喹诺酮类药物是20世纪80年代之后研制的一类抗生素，属于第三代喹诺酮药物，如：诺氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星、氧氟沙星等。氟喹诺酮类药物被作为常用的抗生素被广泛使用，其环境残留越来越引起人们的重视。目前，氟喹诺酮类药物的测定方法主要有免疫检测法如酶联免疫检测试剂盒、快速检测试纸、速测板等，化学发光检测法，HPLC检测法，HPLC-荧光检测法等等。
目前有机肥中抗生素残留没有限量标准，参照文献(C.Li,J.Chen,J.Wang,Z.Ma,P.Han…,Occurrence of antibiotics in soils and manures from greenhousevegetable production bases of Beijing,China and an associated riskassessment,Science of the total environmental,2015,521-522(1):101-107)一般采取风险商(HQ)来评估有机肥中残留的抗生素对土壤微生物的潜在风险。HQ是预测的土壤中抗生素浓度(PEC，μg·kg-1)与预测的土壤中无效应抗生素浓度(PNEC，μg·kg-1)的比值。如果HQ值越高风险越高。将HQ的值分为3档，0.01-0.1，低风险；0.1-1，中等风险；>1，高风险并且需要做进一步的评估。同时预测的土壤中抗生素浓度可根据上述文献提出的公式计算。其计算公式如下：
PEC＝(C×M)/(A×H×ρ)
以上公式中，C：当前有机肥中抗生素的浓度(μg·kg-1)；M：耕地中有机肥的施用量(kg)；A：应用有机肥的地区面积，单位为平方米(m2)；H：表层土的深度(m)；ρ：土壤密度(kg·m-3)。参照上述文献及文献(M.Qian，H.Wu，J.Wang,H.Zhang,Z.Zhang…,Occurrenceof trace elements and antibiotics in manure-based fertilizes from ZhejiangProvince of China,Science of the total environmental,2016,559:174-181)，有机肥在我国每亩地使用量为6000kg，折合成m2计算为9.0kg/m2；H值为0.2m，土壤密度ρ参考值为1500kg·m-3。
依据文献(X.L.Wu,L.Xiang,Q.Y.Yan,Y.N.Jiang,Y.W.Li,…,Distribution andrisk assessment of quinolone antibiotics in the soils from organic vegetablefarms of subtropical city,Southern China.Science of the total environmental,2014,487(1):399-406)，土壤中诺氟沙星的无效应浓度为29.7μg·kg-1，依据公式推算，对应高、中、低风险商的有机肥中诺氟沙星的浓度阈值分别为1000μg·kg-1、100μg·kg-1、10μg·kg-1。恩诺沙星在土壤中的无效应浓度为24μg·kg-1，依据公式推算，对应高、中、低风险商的有机肥中恩诺沙星的浓度阈值分别为800μg·kg-1、80μg·kg-1、8μg·kg-1。有机肥中成分复杂，对其中氟喹诺酮类药物的测定干扰较大，直接用有机肥作为样品进行氟喹诺酮类药物的测定目前还没有适用的方法，因此有必要建立有机肥中氟喹诺酮类药物快速测定的方法，可用于实际样品的现场检测，防范达到高、中风险的含氟喹诺酮类药物有机肥样品。
发明内容
针对现有技术中存在的不足，本发明提供了一种操作简便、快速且检测结果准确的有机肥中氟喹诺酮类药物的测定方法及其样品预处理方法。
一种有机肥中氟喹诺酮类药物测定的样品预处理方法，包括步骤：
(1)取有机肥样品，加入pH＝9.0-11.0的乙二胺四乙酸(EDTA)缓冲溶液，充分振荡使有机肥样品与缓冲溶液接触充分，静置后取第一上清液；
(2)调节第一上清液pH值至3.5-4.5，加入有机溶剂，再次充分振荡，静置后取第二上清液；所述有机溶剂为乙腈或丙酮；
(3)向第二上清液中加入吸附剂，充分振荡静置后取第三上清液吹干，得到有机肥预处理样品。
本发明针对有机肥的特性，通过pH＝9.0-11.0的EDTA缓冲溶液能使氟喹诺酮类药物化合物带负电，与有机肥基质中的干扰物充分解离，能够有效的从有机肥中提取出待测物氟喹诺酮类药物；调节第一上清液pH值至3.5-4.5时，能使溶液中氟喹诺酮类药物呈分子状态，被有机溶剂有效提取；有机溶剂乙腈或丙酮能够将待测物氟喹诺酮类药物从EDTA缓冲溶液中成功反提取出来；加入吸附剂能够快速吸附第二上清液中的偏酸性杂质、净化基质并提高第三上清液吹干的速度，最终得到适用于现有氟喹诺酮类药物的测定方法的有机肥预处理样品。
采用本发明预处理方法得到的有机肥预处理样品能够有效的克服有机肥中其他物质对氟喹诺酮类药物测定的干扰。
所述氟喹诺酮类药物包括诺氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星、氧氟沙星、培氟沙星、依诺沙星、沙拉沙星、洛美沙星等中的一种或者多种。
为了达到更好的发明效果，进行以下优选：
步骤(1)中，所述EDTA缓冲溶液的pH＝10，提取效果最好。氟喹诺酮类药物例如诺氟沙星为两性化合物，当pH＝10时，能使化合物带负电，与有机肥基质中的干扰物充分解离。
步骤(1)中，所述EDTA缓冲溶液的毫升数与有机肥样品的克数之比至少为20:1，能够从有机肥中提取出有效量的待测物氟喹诺酮类药物，增加EDTA缓冲溶液的用量对提取效果没有影响，从节约成本的角度考虑，优选EDTA缓冲溶液的毫升数与有机肥样品的克数之比为20:1。
步骤(2)中，调节第一上清液pH值至4。当pH＝4时，能使溶液中氟喹诺酮类药物呈分子状态，被有机溶剂有效提取。
步骤(2)中，所述有机溶剂与第一上清液的体积比至少为3:1，能够将待测物氟喹诺酮类药物从EDTA缓冲溶液中成功反提取出来，增加有机溶剂的用量对反提取效果没有影响，从节约成本的角度考虑，优选有机溶剂与第一上清液的体积比为3:1。
步骤(2)中，所述有机溶剂选用丙酮，反提取效果好且吹干耗时短。
步骤(3)中，所述吸附剂选用乙二胺-N-丙基硅烷(PSA)吸附剂或者聚苯乙烯/二乙烯基苯共聚物(PLS)吸附剂，进一步优选磁性PSA吸附剂或者磁性PLS吸附剂，在磁场作用下很容易将吸附有杂物的吸附剂聚集在底物中，大大缩短预处理的时间。所述PLS吸附剂可选用含亲水基团吡咯烷酮基的聚苯乙烯/二乙烯基苯共聚物吸附剂。所述吸附剂均可采用市售产品，例如英芮诚生化科技的MSi500-N-PSA、MSi500-N-PLS；Dikma Technologies公司的ProElut PLS等。
步骤(3)中，所述吸附剂的毫克数与第二上清液的毫升数之比至少为25:1，吸附剂能够快速吸附第二上清液中的偏酸性杂质，净化基质并提高第三上清液吹干的速度，优化的吸附剂的用量为吸附剂的毫克数与第二上清液的毫升数之比为25:1，增加吸附剂用量不能明显提高净化效果。
本发明所用的原料EDTA缓冲溶液、有机溶剂等均可采用市售产品。
一种有机肥中氟喹诺酮类药物的测定方法，采用所述样品预处理方法得到的有机肥预处理样品作为测试样品，直接采用现有氟喹诺酮类药物的测定方法中的一种或者多种进行测定。具体包括：取测试样品，直接采用现有氟喹诺酮类药物检测试剂盒(例如：氟喹诺酮类(酶联免疫)检测试剂盒，杭州恒奥生物技术有限公司)、现有氟喹诺酮类药物速测板(例如：氟喹诺酮免疫胶体金快速检测试剂板Smart！杭州南开日新生物技术有限公司)、现有氟喹诺酮类药物的HPLC检测法、现有氟喹诺酮类药物的HPLC-荧光检测法、现有氟喹诺酮类药物的化学发光检测法等中的一种或多种方法测定测试样品中的氟喹诺酮类药物。
所述有机肥中氟喹诺酮类药物的测定方法，采用氟喹诺酮类药物速测板测定测试样品中的氟喹诺酮类药物，包括：将测试样品用pH＝7.0的EDTA缓冲溶液稀释后，滴加到速测板上测定有机肥中氟喹诺酮类药物。检测快速，结果准确。
所述氟喹诺酮类药物的HPLC检测法如诺氟沙星的HPLC检测法可参考《中华人民共和国药典》中诺氟沙星的HPLC检测法。
本发明具有以下有益效果：
本发明针对有机肥的特性，通过pH＝9.0-11.0的EDTA缓冲溶液能使氟喹诺酮类药物化合物带负电，与有机肥基质中的干扰物充分解离，能够有效的从有机肥中提取出待测物氟喹诺酮类药物；调节第一上清液pH值至3.5-4.5时，能使溶液中氟喹诺酮类药物呈分子状态，被有机溶剂有效提取；有机溶剂乙腈或丙酮能够将待测物氟喹诺酮类药物从EDTA缓冲溶液中成功反提取出来；加入吸附剂能够快速吸附第二上清液中的偏酸性杂质、净化基质并提高第三上清液吹干的速度，最终得到适用于现有氟喹诺酮类药物的测定方法的有机肥预处理样品。
采用本发明预处理方法得到的有机肥预处理样品能够有效的克服有机肥中其他物质对氟喹诺酮类药物测定的干扰。
本发明方法能够有效筛查出有机肥中氟喹诺酮类药物残留范围超过风险商的样品，保障有机肥的质量，且操作简便、快速、检测结果准确，能够广泛的推广应用。
具体实施方式
氟喹诺酮类药物包括诺氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星、氧氟沙星、培氟沙星、依诺沙星、沙拉沙星、洛美沙星等中的一种或者多种。
PSA吸附剂、PLS吸附剂分别采用英芮诚生化科技的MSi500-N-PSA、MSi500-N-PLS。
溶剂标：氟喹诺酮类药物标准品溶液，即氟喹诺酮类药物标准品用0.1mol/L盐酸溶液2mL溶解后加水配制成浓度为0.25g/L的溶液。
加标有机肥样品：加有250ng氟喹诺酮类药物标准品的0.5g有机肥。
氟喹诺酮类药物速测板：采用氟喹诺酮免疫胶体金快速检测试剂板Smart！杭州南开日新生物技术有限公司。
采用氟喹诺酮免疫胶体金快速检测试剂板Smart！测定样品中的氟喹诺酮类药物，快速检测试剂板应用竞争抑制免疫层析的原理，样品中的氟喹诺酮在侧向移动的过程中与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，抑制了抗体和NC膜检测线上喹诺酮-BSA偶联物的结合。如样品中氟喹诺酮类药物含量大于快速检测试剂板灵敏度，检测线不显颜色或者颜色比控制线浅，结果为阳性；反之，检测线显红色，结果为阴性。依据快速检测试剂板测定氟喹诺酮类药物的灵敏度和前处理过程中的稀释倍数，将经1.5mL第三上清液吹干得到的测试样品用pH＝7.0的EDTA缓冲溶液定容至0.3mL-1mL，滴加到快速检测试剂板上测定有机肥中氟喹诺酮类药物。
一、水溶液提取后，通过净化手段直接测量，效果不明显。
采用溶剂标分别进行pH＝4.0、pH＝7.0EDTA缓冲溶液振荡提取实验，得到明显阳性结果；采用加标有机肥样品实验时，采用同样EDTA缓冲溶液振荡提取处理方法，阳性结果不明显；表明pH＝4.0、pH＝7.0EDTA缓冲溶液未能从有机肥中提取出待测物或者是基质效应较大；
采用溶剂标和0.5g加标有机肥样品进行对比实验：加入10mL EDTA(pH＝7.0)缓冲溶液，上下翻转振荡8min，静置至上层澄清；两组实验各取4份1mL上清液，并分别加入20mg磺酸基磁珠、季胺盐磁珠、PLS磁珠、磁性PSA吸附剂4种磁性吸附剂净化，取上清液滴氟喹诺酮免疫胶体金快速检测试剂板，结果溶剂标组均得到明显阳性，实际加标有机肥样品组结果仍不明显，说明4种吸附剂并未吸附掉待测物，可能是缓冲溶液未能从有机肥中提取出待测物或者是基质效应较大；
0.5g有机肥(未加氟喹诺酮类药物标准品)，加入10mL EDTA(pH＝7.0)缓冲溶液，上下翻转振荡8min，静置至上层澄清，不加吸附剂，直接取1mL上清液加0.01μg诺氟沙星标准品后滴板，结果明显阳性，说明不是基质效应影响，而是该预处理方法未能提取出待测物；
0.5g加标有机肥样品，加入20mL EDTA(pH＝7.0)缓冲溶液，上下振荡8min，静置至上层澄清，不加吸附剂，取上清液滴氟喹诺酮免疫胶体金快速检测试剂板，结果不明显，说明增加提取溶剂的量对提取效果没有影响。
二、水溶液提取，乙腈反提后，测定效果明显。
采用溶剂标进行3组实验：加入10mL EDTA(pH＝4.0、7.0、10.0)缓冲溶液，上下翻转振荡8min，静置至上层澄清，取2mL上清液加入6mL乙腈，再次振荡5min，取3mL上清液吹干，以EDTA(pH＝7.0)缓冲溶液定容至1mL，滴氟喹诺酮免疫胶体金快速检测试剂板，结果明显阳性，且EDTA缓冲溶液pH＝4时效果最好，说明乙腈能够从缓冲溶液中反提出待测物，且乙腈层能大大降低基质影响，因此考虑采用有机溶剂反提待测物；
0.5g加标有机肥样品，加入10mL EDTA(pH＝4.0)缓冲溶液，上下翻转振荡8min，静置至上层澄清，取2mL上清液，加入6mL乙腈，再次振荡5min，取3mL上清液吹干，以EDTA(pH＝7.0)缓冲溶液定容至1mL，滴氟喹诺酮免疫胶体金快速检测试剂板，结果仍不理想，说明EDTA(pH＝4.0)缓冲溶液适合乙腈反提，但不能将待测物从有机肥中提取出来；
采用0.5g加标有机肥样品进行3组实验：加入10mL EDTA(pH＝4.0、7.0、10.0)缓冲溶液，上下翻转振荡8min，静置至上层澄清，取2mL上清液，调节pH值至4.0，加入6mL乙腈，再次振荡5min，取3mL上清液吹干，以EDTA(pH＝7.0)缓冲溶液定容至1mL，滴氟喹诺酮免疫胶体金快速检测试剂板，结果EDTA缓冲溶液pH＝10.0时，得到明显阳性，因此得到初步实验方案；
在上述实验方案中未加入吸附剂，有黄色油状物残留难以吹干，为了缩短实验时间，考虑加入吸附剂并优化吸附剂用量，实验对0.5g加标有机肥样品进行3组实验：加入10mL EDTA(pH＝10.0)缓冲溶液，上下翻转振荡8min，静置至上层澄清，取2mL上清液，调节pH值至4.0，加入6mL乙腈，再次振荡5min，取2mL上清液，分别加入30mg、50mg、70mg磁性PSA吸附剂，振荡后在磁场作用下磁性吸附剂聚集于底物，取1.5mL上清液吹干，以EDTA(pH＝7.0)缓冲溶液定容至0.3mL，滴氟喹诺酮免疫胶体金快速检测试剂板，结果提取物吹干后呈透明状态，未出现黄色油状物质，吸附剂用量为50mg和70mg时滴板获得的条带清晰，无干扰；为节约成本选取50mg的吸附剂用于有效净化杂质并提高吹干的速度。
由于乙腈沸点较高，吹干耗时较长，考虑优化有机溶剂，实验对0.5g加标有机肥样品进行3组实验：加入10mL EDTA(pH＝10.0)缓冲溶液，上下翻转振荡8min，静置至上层澄清，取2mL上清液，调节pH值至4.0，分别加入6mL乙腈、甲醇、丙酮，再次振荡5min，取2mL上清液，加入50mg PSA吸附剂，振荡静置后取1.5mL上清液吹干，以EDTA(pH＝7.0)缓冲溶液定容至0.3mL，滴氟喹诺酮免疫胶体金快速检测试剂板，实验过程发现加入甲醇时分层所需时间较长，且上层偏黄，不够澄清，丙酮与乙腈分层效果相近，且滴板后结果也相近，综合考虑优先选择丙酮。
以下结合具体实施例对本发明作进一步详细描述。
实施例1
取0.5g有机肥样品，加入10mL EDTA(pH＝10.0)缓冲溶液，上下翻转振荡8min，静置至上层澄清，取2mL第一上清液，调节pH值至4.0，加入6mL丙酮，再次振荡5min，静置至上层澄清，取2mL第二上清液，加入50mg磁性PSA吸附剂，在磁场作用下固液分离后取适量第三上清液经2min吹干，得到呈透明状态的有机肥预处理样品。
实施例2
取0.5g有机肥样品，加入10mL EDTA(pH＝9.0)缓冲溶液，上下翻转振荡8min，静置至上层澄清，取2mL第一上清液，调节pH值至3.5，加入6mL丙酮，再次振荡5min，静置至上层澄清，取2mL第二上清液，加入50mg磁性PSA吸附剂，在磁场作用下固液分离后取适量第三上清液经2min吹干，得到呈透明状态的有机肥预处理样品。
实施例3
取0.5g有机肥样品，加入10mL EDTA(pH＝11.0)缓冲溶液，上下翻转振荡8min，静置至上层澄清，取2mL第一上清液，调节pH值至4.5，加入6mL丙酮，再次振荡5min，静置至上层澄清，取2mL第二上清液，加入50mg磁性PSA吸附剂，在磁场作用下固液分离后取适量第三上清液经2min吹干，得到呈透明状态的有机肥预处理样品。
实施例4
取0.5g有机肥样品，加入10mL EDTA(pH＝10.0)缓冲溶液，上下翻转振荡8min，静置至上层澄清，取2mL第一上清液，调节pH值至4.0，加入6mL乙腈，再次振荡5min，静置至上层澄清，取2mL第二上清液，加入50mg磁性PLS吸附剂，在磁场作用下固液分离后取适量第三上清液经15min吹干，得到呈透明状态的有机肥预处理样品。
实施例5
取0.5g有机肥样品，加入20mL EDTA(pH＝10.0)缓冲溶液，上下翻转振荡8min，静置至上层澄清，取2mL第一上清液，调节pH值至4.0，加入10mL丙酮，再次振荡5min，静置至上层澄清，取2mL第二上清液，加入60mg磁性PSA吸附剂，在磁场作用下固液分离后取适量第三上清液经2min吹干，得到呈透明状态的有机肥预处理样品。
实施例6
分别将取实施例1、实施例2、实施例3、实施例4、实施例5中1.5mL第三上清液吹干得到的有机肥预处理样品以EDTA(pH＝7.0)缓冲溶液定容至0.3mL，滴加至氟喹诺酮类药物速测板(氟喹诺酮免疫胶体金快速检测试剂板Smart！杭州南开日新生物技术有限公司)。检测结果均为阳性，显示检测出氟喹诺酮类药物。经液相色谱-荧光检测法检测显示检测出诺氟沙星、恩诺沙星。
实施例7
分别取实施例1、实施例2、实施例3、实施例4、实施例5中的有机肥预处理样品，按《中华人民共和国药典》中诺氟沙星的HPLC检测法进行测定，具体为：取25mg有机肥预处理样品，精密称定，置100ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液2ml使溶解后，用水稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取诺氟沙星对照品，同法测定，按外标法以峰面积计算供试品中C16H18FN3O3的含量。色谱条件与***适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.025mol/L磷酸溶液(用三乙胺调节pH值至3.0±0.1)-乙腈(87：13，体积比)为流动相；检测波长为278nm。称取诺氟沙星对照品、环丙沙星对照品、依诺沙星对照品和杂质对照品各适量，加0.1mol/L盐酸溶液适量使溶解，用流动相稀释制成每1ml中含诺氟沙星25μg、环丙沙星和依诺沙星各5μg的混合溶液，取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，诺氟沙星峰与环丙沙星峰和依诺沙星峰的分离度均应不小于2.0。有机肥预处理样品中均检测出诺氟沙星。
对比例1
取0.5g有机肥样品，加入10mL EDTA(pH＝4)缓冲溶液，上下翻转振荡8min，静置至上层澄清，取2mL第一上清液，调节pH值至4.0，加入6mL乙腈，再次振荡5min，静置至上层澄清，取适量第二上清液(难以吹干)，得到含黄色油状物的待测样品。
对比例2
取0.5g有机肥样品，加入10mL EDTA(pH＝7)缓冲溶液，上下翻转振荡8min，静置至上层澄清，取2mL第一上清液，调节pH值至4.0，加入6mL乙腈，再次振荡5min，静置至上层澄清，取适量第二上清液吹干(难以吹干)，得到含黄色油状物的待测样品。
对比例3
取0.5g有机肥样品，加入6mL乙腈上下翻转振荡8min，静置至上层澄清，取2mL第一上清液，再加入10mL EDTA(pH＝4)缓冲溶液，再次振荡5min，静置至上层澄清，取适量第二上清液(难以吹干)，得到含黄色油状物的待测样品。
对比例4
取0.5g有机肥样品，加入6mL乙腈上下翻转振荡8min，静置至上层澄清，取2mL第一上清液，再加入10mL EDTA(pH＝7)缓冲溶液，再次振荡5min，静置至上层澄清，取适量第二上清液吹干(难以吹干)，得到含黄色油状物的待测样品。
对比例5
分别将取对比例1、对比例2、对比例3、对比例4中1.5mL第二上清液得到的待测样品以EDTA(pH＝7.0)缓冲溶液定容至0.5mL，滴加至氟喹诺酮类药物速测板(氟喹诺酮免疫胶体金快速检测试剂板Smart！杭州南开日新生物技术有限公司)。检测结果均为阴性，显示未检测出氟喹诺酮类药物。
对照实验：取0.5g加有0.1mg诺氟沙星标准品的有机肥样品，分别按照对比例1、对比例2、对比例3、对比例4中的样品预处理方法进行预处理得到经1.5mL第二上清液得到的加标有机肥预处理样品，将各加标有机肥预处理样品以EDTA(pH＝7.0)缓冲溶液定容至0.5mL，滴加至氟喹诺酮类药物速测板(氟喹诺酮免疫胶体金快速检测试剂板Smart！杭州南开日新生物技术有限公司)，检测结果均为阴性，显示未检测出氟喹诺酮类药物。说明对比例1-4中的样品预处理方法不能有效的从有机肥中提取出待测物氟喹诺酮类药物。
对比例6
分别取对比例1、对比例2、对比例3、对比例4中的待测样品，按《中华人民共和国药典》中诺氟沙星的HPLC检测法进行测定，待测样品中均未检测出诺氟沙星。
对照实验：取0.5g加有0.1mg诺氟沙星标准品的有机肥样品，分别按照对比例1、对比例2、对比例3、对比例4、对比例5中的样品预处理方法进行预处理得到加标有机肥预处理样品，将各加标有机肥预处理样品按《中华人民共和国药典》中诺氟沙星的HPLC检测法进行测定，均未检测出诺氟沙星。说明对比例1-4中的样品预处理方法不能有效的从有机肥中提取出待测物诺氟沙星。
本发明针对有机肥的特性，通过pH＝9.0-11.0的EDTA缓冲溶液能使氟喹诺酮类药物化合物带负电，与有机肥基质中的干扰物充分解离，能够有效的从有机肥中提取出待测物氟喹诺酮类药物；调节第一上清液pH值至3.5-4.5时，能使溶液中氟喹诺酮类药物呈分子状态，被有机溶剂有效提取；有机溶剂乙腈或丙酮能够将待测物氟喹诺酮类药物从EDTA缓冲溶液中成功反提取出来；加入吸附剂能够快速吸附第二上清液中的偏酸性杂质、净化基质并提高第三上清液吹干的速度，最终得到适用于现有氟喹诺酮类药物的测定方法的有机肥预处理样品。本发明限定范围内任意参数的组合均可实现本发明的效果。在此不再赘述。

Claims (10)

1.一种有机肥中氟喹诺酮类药物测定的样品预处理方法，其特征在于，包括步骤：
(1)取有机肥样品，加入pH＝9.0-11.0的EDTA缓冲溶液，充分振荡，静置后取第一上清液；
(2)调节第一上清液pH值至3.5-4.5，加入有机溶剂，再次充分振荡，静置后取第二上清液；所述有机溶剂为乙腈或丙酮；
(3)向第二上清液中加入吸附剂，充分振荡静置后取第三上清液吹干，得到有机肥预处理样品；
步骤(3)中，所述吸附剂为乙二胺-N-丙基硅烷吸附剂或者聚苯乙烯/二乙烯基苯共聚物吸附剂。
2.根据权利要求1所述的样品预处理方法，其特征在于，步骤(1)中，所述EDTA缓冲溶液的pH＝10；步骤(2)中，调节第一上清液pH值至4。
3.根据权利要求1所述的样品预处理方法，其特征在于，步骤(2)中，所述有机溶剂为丙酮。
4.根据权利要求1所述的样品预处理方法，其特征在于，所述吸附剂为磁性乙二胺-N-丙基硅烷吸附剂或者磁性聚苯乙烯/二乙烯基苯共聚物吸附剂。
5.根据权利要求1所述的样品预处理方法，其特征在于，所述聚苯乙烯/二乙烯基苯共聚物吸附剂为含亲水基团吡咯烷酮基的聚苯乙烯/二乙烯基苯共聚物吸附剂。
6.根据权利要求1所述的样品预处理方法，其特征在于，步骤(1)中，所述EDTA缓冲溶液的毫升数与有机肥样品的克数之比至少为20:1；
步骤(2)中，所述有机溶剂与第一上清液的体积比至少为3:1；
步骤(3)中，所述吸附剂的毫克数与第二上清液的毫升数之比至少为25:1。
7.一种有机肥中氟喹诺酮类药物的测定方法，其特征在于，采用权利要求1-6任一项所述样品预处理方法得到的有机肥预处理样品作为测试样品。
8.根据权利要求7所述的有机肥中氟喹诺酮类药物的测定方法，其特征在于，取测试样品，直接采用氟喹诺酮类药物检测试剂盒、氟喹诺酮类药物速测板、氟喹诺酮类药物的HPLC检测法、氟喹诺酮类药物的化学发光检测法中的一种或多种方法测定测试样品中的氟喹诺酮类药物。
9.根据权利要求8所述的有机肥中氟喹诺酮类药物的测定方法，其特征在于，采用氟喹诺酮类药物速测板测定测试样品中的氟喹诺酮类药物，包括：将测试样品用pH＝7.0的EDTA缓冲溶液稀释后滴加到速测板上测定有机肥中氟喹诺酮类药物。
10.根据权利要求8所述的有机肥中氟喹诺酮类药物的测定方法，其特征在于，所述的氟喹诺酮类药物的HPLC检测法包括氟喹诺酮类药物的HPLC-荧光检测法。
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