CN106324253A - 一种***抗体测定试剂盒及其检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种***抗体测定试剂盒,包括以下组分:磁分离试剂;生物素抗原;酶标试剂,检测抗原与检测抗体偶联碱磷酶;阴性对照品;阳性对照品;定标液;其中生物素抗原和检测抗原为重组抗原,检测抗体为鼠单抗二抗;所述定标液中包含待检抗体。同时公开了该试剂盒的检测方法。本发明通过将间接法和双抗原夹心法进行结合,即保证了双抗原夹心法的特异性,又避免了双抗原夹心法中2个固相抗原或2个示踪剂标记抗原结合同一个抗体而导致无法被检测的情况,避免了由于假阳或假阴而导致的检测结果不准确的情况,因此,两种方法混合要优于单纯的间接法和双抗原夹心法。
Description
技术领域
本发明涉及一种磁微粒化学发光法***抗体测定试剂盒及其检测方法。
背景技术
***抗体作为传统的传染病项目,在疾病筛查、输血和术前检查中起着重要的作用,该类传染病对检测结果的准确性要求也很高。目前,医院的检验流程一般分2步:首先,用甲苯胺红不加热血清试验(toluLized red unheated serum test,TRUST)或TP-ELISA的方法进行初步筛选;然后对筛选为阳性的样本用TPPA的方法进行确认。由于TRUST针对的不是梅毒特异性抗体,因此特异性较差,因此,越来越多的医院开始用TP-ELISA的方法进行初筛。
ELISA作为一种较成熟检测手段,优势很明显,即抗原和抗体的特异性很高,并且包被对其生物活性影响很小,所以对待检抗原和抗体的结合有着很好的识别作用。从本世纪初开始,同样是基于免疫反应原理的各种化学发光法的试剂逐步开始成熟并替代市场上的ELISA产品。
对于梅毒等被检测物为抗体的项目来说,方法学一般为间接法和双抗原夹心法。所谓的间接法就是固相连接物为抗原,通过抗原-待检抗体特异性结合来识别样本中的抗体,洗涤后加入示踪剂标记的二抗,由于信号的强弱与样本中的待检抗体量呈正比,这样通过信号的强弱就能判断样本中的待检抗体的量,通过与定标液或参考值进行对比就能确定待测样本的阴阳性;双抗原夹心法原理即固相连接抗原和示踪剂标记的抗原可以对样本中的待检抗体的两个可变区进行结合,信号强则待检抗体量就多,反之就少。一般来说,由于双抗原夹心法使用了2个特异性抗原,不但可以同时检测IgG和IgM,而且结果的准确性要优于间接法,事实上,由于双抗原夹心法的2个结合固相的抗原都可以结合同一个抗体,会导致该抗体不能产生信号从而导致检测结果失败,同时还可能出现两个示踪剂标记的抗原结合同一个抗体的情况(一步法),使得该抗体不能被结合至固相,因此使得结果不准确。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有技术的缺陷,提供一种磁微粒化学发光法***抗体测定试剂盒。
为了解决上述技术问题,本发明提供了如下的技术方案:
一种***抗体测定试剂盒,其特征在于,包括以下组分:
磁分离试剂;
生物素抗原;
酶标试剂,检测抗原与检测抗体偶联碱磷酶;
阴性对照品
阳性对照品
定标液;
其中生物素抗原和检测抗原为重组抗原,检测抗体为鼠单抗二抗;所述定标液中包含待检抗体。
进一步的,所述的生物素抗原采用以下方法制备:
1)将PD-10透析柱用PH9.0的0.1M的NaHCO3缓冲液20mL进行缓冲体系更换,然后取2mg/mL的抗原0.25mL加入PD-10透析柱中,再加入0.1M的NaHCO3缓冲液补足2.5mL,然后加入3mL 0.1M的NaHCO3缓冲液进行洗脱,将洗脱液收集之后进行浓缩,浓缩至抗原的浓度为2.5mg/mL;
2)称取2mg的生物素-NHS,并用DMSO进行溶解至终浓度为20mg/mL;
3)按照抗原:生物素的摩尔比1:20的投料量在抗原中加入DMSO溶解的生物素;
4)充分混匀后室温反应2h;
5)反应完成后按照第1步的操作用PD-10透析柱进行透析除盐,并收集偶联物溶液即为生物素偶联抗原;
6)用抗试剂缓冲液生物素偶联抗原稀释至0.5ug/mL作为工作液使用。
进一步的,酶标试剂采用以下方法制备:
1)将检测抗原和检测抗体分别用0.1倍PBS进行透析,然后分别用2IT进行活化;
2)将碱磷酶用SMCC进行活化;
3)将活化后的检测抗原和检测抗体分别和活化后的碱磷酶进行混合,2~8°反应18小时;
4)将反应物用层析柱进行纯化,收集I峰和II峰进行混合后,用抗试剂缓冲液将混合物稀释后作为工作液使用。
进一步的,磁分离试剂为链霉亲和素磁微粒。
进一步的,阴性对照品为定标液用缓冲液;阳性对照品为定标液用缓冲液中加入待测抗体使待测抗体的终浓度为1.5ug/ml;定标液为定标液用缓冲液中加入待测抗体使待测抗体的终浓度为1ug/ml。
该***抗体测定试剂盒的检测方法,包括以下步骤:
1)取待测样本15uL加入生物素抗原30uL,孵育15min;
2)加入磁分离试剂30uL,孵育5min;
3)加入磁-场进行磁分离2min,去上清;
4)洗涤3次,每次300uL洗液,重复步骤3操作;
5)加入酶标试剂60uL,孵育15min;
6)加入磁场进行磁分离2min,去上清;
7)洗涤3次,每次300uL洗液,重复步骤3操作;
8)加入底物200uL,测吸光值。
本发明所达到的有益效果是:
本发明通过将间接法和双抗原夹心法进行结合,即保证了双抗原夹心法的特异性,又避免了双抗原夹心法中2个固相抗原或2个示踪剂标记抗原结合同一个抗体而导致无法被检测的情况,避免了由于假阳或假阴而导致的检测结果不准确的情况,因此,两种方法混合要优于单纯的间接法和双抗原夹心法。
具体实施方式
以下对本发明的优选实施例进行说明,应当理解,此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明,并不用于限定本发明。
一种***抗体测定试剂盒,其特征在于,包括以下组分:
磁分离试剂;
生物素抗原;
酶标试剂,检测抗原与检测抗体偶联碱磷酶;
阴性对照品
阳性对照品
定标液;
其中生物素抗原和检测抗原为重组抗原,检测抗体为鼠单抗二抗;所述定标液中包含待检抗体。
其中,生物素抗原采用以下方法制备:
1)将PD-10透析柱用PH9.0的0.1M的NaHCO3缓冲液20mL进行缓冲体系更换,然后取2mg/mL的抗原0.25mL加入PD-10透析柱中,再加入0.1M的NaHCO3缓冲液2.25mL补足2.5mL,然后加入3mL0.1M的NaHCO3缓冲液进行洗脱,将洗脱液收集之后进行浓缩,浓缩至抗原的浓度为2.5mg/mL,约0.2mL;
2)称取2mg的生物素-NHS,并用DMSO进行溶解至终浓度为20mg/mL;
3)按照抗原(分子量65KD):生物素(分子量587)的摩尔比1:20的投料量在抗原中加入DMSO溶解的生物素;
4)充分混匀后室温反应2h;
5)反应完成后按照第1步的操作用PD-10透析柱进行透析除盐,并收集3mL偶联物溶液即为生物素偶联抗原;
6)用抗试剂缓冲液生物素偶联抗原稀释至0.5ug/mL作为工作液使用。
酶标试剂采用以下方法制备:
1)将检测抗原和检测抗体分别用0.1倍PBS进行透析,然后分别用2IT进行活化;
2)将碱磷酶用SMCC进行活化;
3)将活化后的检测抗原和检测抗体分别和活化后的碱磷酶进行混合,2~8°反应18小时;
4)将反应物用层析柱进行纯化,收集I峰和II峰进行混合后,用抗试剂缓冲液将将抗原-碱磷酶和抗体-碱磷酶分别稀释至0.02ug/ml和0.1ug/ml作为工作液,将两种浓度的工作液等比例混合后使用,抗原-碱磷酶和抗体-碱磷酶终浓度分别为0.01ug/ml和0.05ug/ml。
磁分离试剂为链霉亲和素磁微粒。
阴性对照品为定标液用缓冲液;阳性对照品为定标液用缓冲液中加入待测抗体使待测抗体的终浓度为1.5ug/ml;定标液为定标液用缓冲液中加入待测抗体使待测抗体的终浓度为1ug/ml。
本发明的***抗体测定试剂盒的检测方法,包括以下步骤:
1)取待测样本15uL加入生物素抗原30uL,孵育15min;
2)加入磁分离试剂30uL,孵育5min;
3)加入磁场进行磁分离2min,去上清;
4)洗涤3次,每次300uL洗液,重复步骤3操作;
5)加入酶标试剂60uL,孵育15min;
6)加入磁场进行磁分离2min,去上清;
7)洗涤3次,每次300uL洗液,重复步骤3操作;
8)加入底物200uL,测吸光值。
验证实验
为了对比3种反应模式的优劣,选取20例阴性样本和20例阳性样本同时用3种模式进行检测,检测结果如下:
表1三种反应模式的对照
由表1的结果可以看出,双抗原夹心法的灵敏度较高,因此阳性测值也较高,而间接法和间接法+双抗原夹心法混合则要差一些,但是从检测结果的阴阳性来看,单纯的间接法和双抗原夹心法都会出现假阳性和假阴性的情况,而间接法和双抗原夹心两种方法混合使用则很好的避免了由于假阳或假阴而导致的检测结果不准确的情况,因此,两种方法混合要优于单纯的间接法和双抗原夹心法。
最后应说明的是:以上所述仅为本发明的优选实施例而已,并不用于限制本发明,尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明,对于本领域的技术人员来说,其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改,或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换,均在本发明的保护之内。
Claims (8)
1.一种***抗体测定试剂盒,其特征在于,包括以下组分:
磁分离试剂;
生物素抗原;
酶标试剂,检测抗原与检测抗体偶联碱磷酶;
阴性对照品;
阳性对照品;
定标液;
其中生物素抗原和检测抗原为重组抗原,检测抗体为鼠单抗二抗;所述定标液中包含待检抗体。
2.如权利要求1所述的***抗体测定试剂盒,其特征在于,所述的生物素抗原采用以下方法制备:
1)将PD-10透析柱用PH9.0的0.1M的NaHCO3缓冲液20mL进行缓冲体系更换,然后取2mg/mL的抗原0.25mL加入PD-10透析柱中,再加入0.1M的NaHCO3缓冲液补足2.5mL,然后加入3mL0.1M的NaHCO3缓冲液进行洗脱,将洗脱液收集之后进行浓缩,浓缩至抗原的浓度为2.5mg/mL;
2)称取2mg的生物素-NHS,并用DMSO进行溶解至终浓度为20mg/mL;
3)按照抗原:生物素的摩尔比1:20的投料量在抗原中加入DMSO溶解的生物素;
4)充分混匀后室温反应2h;
5)反应完成后按照第1步的操作用PD-10透析柱进行透析除盐,并收集偶联物溶液即为生物素偶联抗原;
6)用抗试剂缓冲液生物素偶联抗原稀释至0.5ug/mL作为工作液使用。
3.如权利要求1所述的***抗体测定试剂盒,其特征在于,所述的酶标试剂采用以下方法制备:
1)将检测抗原和检测抗体分别用0.1倍PBS进行透析,然后分别用2IT进行活化;
2)将碱磷酶用SMCC进行活化;
3)将活化后的检测抗原和检测抗体分别和活化后的碱磷酶进行混合,2~8°反应18小时;
4)将反应物用层析柱进行纯化,收集I峰和II峰进行混合后,用抗试剂缓冲液将混合物稀释后作为工作液使用。
4.如权利要求1所述的***抗体测定试剂盒,其特征在于,所述的磁分离试剂为链霉亲和素磁微粒。
5.如权利要求1所述的***抗体测定试剂盒,其特征在于,所述的阴性对照品为定标液用缓冲液。
6.如权利要求1所述的***抗体测定试剂盒,其特征在于,所述的阳性对照品为定标液用缓冲液中加入待测抗体使待测抗体的终浓度为1.5ug/ml。
7.如权利要求1所述的***抗体测定试剂盒,其特征在于,所述定标液为定标液用缓冲液中加入待测抗体使待测抗体的终浓度为1ug/ml。
8.如权利要求1所述的***抗体测定试剂盒的检测方法,其特征在于,包括以下步骤:
1)取待测样本15uL加入生物素抗原30uL,孵育15min;
2)加入磁分离试剂30uL,孵育5min;
3)加入磁场进行磁分离2min,去上清;
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Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109991428A (zh) * | 2019-04-10 | 2019-07-09 | 成都博奥新景医学科技有限公司 | 一种经过封闭处理的双抗原夹心间接法 |
CN111308073A (zh) * | 2019-12-17 | 2020-06-19 | 郑州安图生物工程股份有限公司 | 一种***抗体检测试剂盒 |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5914243A (en) * | 1992-06-03 | 1999-06-22 | Behring Diagnostics Gmbh | Process for the immunochemical determination of an analyte |
CN101363860A (zh) * | 2007-08-06 | 2009-02-11 | 北京科美东雅生物技术有限公司 | ***抗体化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法 |
CN101713780A (zh) * | 2009-12-07 | 2010-05-26 | 陕西北美基因股份有限公司 | 磁酶免化学发光检测***抗体的方法 |
CN104698185A (zh) * | 2015-02-10 | 2015-06-10 | 深圳市新产业生物医学工程股份有限公司 | 检测***抗体的试剂盒及其检测方法和应用 |
US20150204868A1 (en) * | 2014-01-21 | 2015-07-23 | Abaxis, Inc. | Peptides, devices, and methods for the detection of anaplasma antibodies |
-
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Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5914243A (en) * | 1992-06-03 | 1999-06-22 | Behring Diagnostics Gmbh | Process for the immunochemical determination of an analyte |
CN101363860A (zh) * | 2007-08-06 | 2009-02-11 | 北京科美东雅生物技术有限公司 | ***抗体化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法 |
CN101713780A (zh) * | 2009-12-07 | 2010-05-26 | 陕西北美基因股份有限公司 | 磁酶免化学发光检测***抗体的方法 |
US20150204868A1 (en) * | 2014-01-21 | 2015-07-23 | Abaxis, Inc. | Peptides, devices, and methods for the detection of anaplasma antibodies |
CN104698185A (zh) * | 2015-02-10 | 2015-06-10 | 深圳市新产业生物医学工程股份有限公司 | 检测***抗体的试剂盒及其检测方法和应用 |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109991428A (zh) * | 2019-04-10 | 2019-07-09 | 成都博奥新景医学科技有限公司 | 一种经过封闭处理的双抗原夹心间接法 |
CN111308073A (zh) * | 2019-12-17 | 2020-06-19 | 郑州安图生物工程股份有限公司 | 一种***抗体检测试剂盒 |
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