CN106310295A - 一种dna疫苗浸泡免疫预防鳜鱼isknv的方法 - Google Patents

一种dna疫苗浸泡免疫预防鳜鱼isknv的方法 Download PDF

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Abstract

本发明属于水产养殖和医药生物工程领域，具体涉及一种DNA疫苗浸泡免疫预防鳜鱼ISKNV的方法。所述方法包括：以ISKNV核酸为模板，利用引物扩增MCP基因序列，将PCR产物克隆到真核表达质粒pcDNA3.1(+)中，构建得到DNA疫苗真核表达质粒pcMCP；将鳜鱼浸泡在免疫浸泡液中进行DNA疫苗浸泡免疫；免疫后的鳜鱼置于25℃环境下、投喂鲮鱼进行恒温养殖。本发明通过构建DNA疫苗并采用DNA疫苗浸泡免疫的方式对鳜鱼苗进行免疫，经试验证明，采用本发明所述方法免疫后，能够有效激活鳜鱼的体液免疫，有效提高鳜鱼脾脏中Mx mRNA的表达量从而提高抗病毒能力，能够显著降低ISKNV病毒感染鳜鱼的死亡率。

Description

一种DNA疫苗浸泡免疫预防鳜鱼ISKNV的方法
技术领域
本发明属于水产养殖和医药生物工程领域，具体涉及一种DNA疫苗浸泡免疫预防鳜鱼ISKNV的方法。
背景技术
在水产养殖中，病毒性疾病造成损失呈上升趋势，病毒性疾病大多缺乏针对性的治疗药物和手段，疫苗防控作为疾病控制方法，越来越受到水产养殖业的重视。但目前大量使用的注射免疫方式使得水产疫苗在水产养殖业的应用和推广受到了很大的限制。因此，开发成本低廉、免疫方式简便的疫苗对水产养殖业尤为重要。研究表明，基于粘膜***的疫苗能够提高病原体感染后实验动物的生存。DNA疫苗不仅能够通过粘膜***使鱼体产生足够的免疫保护力，同时还能够刺激机体非特异性免疫产生额外的免疫保护。
鳜鱼病毒病对我国的鳜鱼养殖业造成很大危害，其主要病原是传染性脾肾坏死病毒(infectious spleen and kidney necrosis virus,ISKNV)。目前，该病没有针对性的特效药物，仍以预防为主，通过水质调节，免疫增强为主，疫苗防治为鳜鱼养殖业急需。由于鳜鱼是肉食性鱼类，性格暴躁，只吃活鱼，口服或注射的免疫方式很难在鳜鱼养殖中使用。疫苗浸泡免疫是鳜鱼免疫的唯一选择。
发明内容
本发明针对现有技术中存在的不足，目的在于提供一种DNA疫苗浸泡免疫预防鳜鱼ISKNV的方法。
为实现上述发明目的，本发明所采用的技术方案为：
一种DNA疫苗浸泡免疫预防鳜鱼ISKNV的方法，包括如下步骤：
(1)DNA疫苗的构建：以ISKNV核酸为模板，利用引物扩增MCP基因全长序列，并将PCR产物MCP基因克隆到真核表达质粒pcDNA3.1(+)中，构建得到DNA疫苗真核表达质粒pcMCP；
(2)DNA疫苗浸泡免疫：取1～4厘米长的鳜鱼浸泡在免疫浸泡液中进行DNA疫苗浸泡免疫，所述免疫浸泡液为含有pcMCP真核表达质粒的磷酸盐缓冲液；
(3)将浸泡免疫后的鳜鱼置于25℃环境下、投喂鲮鱼进行恒温养殖。
上述方案中，所述引物为：
P1：5’-CGGGTACCATGGCTGCAATCTCA-3’
P2：5’-GCGAATTCTTACAGGATAGGGAAGC-3’。
上述方案中，所述免疫浸泡液中pcMCP真核表达质粒的浓度为大于100ng/mL。
上述方案中，所述1～4厘米的鳜鱼在进行DNA疫苗浸泡免疫之前，先被禁食8h～14h。
上述方案中，所述DNA疫苗浸泡免疫的时间为大于30min。
为方便生产上使用，可将本发明所述方法简化，简化后的方法更为方便渔民实际操作：
(1)在鳜鱼苗下塘前，鳜鱼在种苗厂装活鱼充氧车(或氧气袋)，根据运输体积含量加入磷酸盐平衡后的DNA疫苗，确保pcMCP质粒浓度大于100ng/ml。
(2)鳜鱼苗运输到塘边后，确保免疫时间大于30分钟。
(3)鳜鱼苗下塘时确保鱼苗运输温度和池塘温度接近。
本发明的有益效果：本发明通过构建DNA疫苗并采用DNA疫苗浸泡免疫的方式对鳜鱼苗进行免疫用以预防鳜ISKNV感染，经试验证明，采用本发明所述方法免疫后，能够有效激活鳜鱼的体液免疫(IgM表达量显著增加)，能够有效提高鳜鱼脾脏中Mx mRNA的表达量从而提高鳜鱼的抗病毒能力，能够显著降低ISKNV病毒感染的鳜鱼的死亡率。
附图说明
图1为PCR检测pcMCP质粒的电泳结果图，其中M为DL 2000；1-2为MCP基因；3为阴性对照。
图2为间接荧光免疫检测重组质粒在EPC细胞中表达的结果图，其中1为转染空质粒pcDNA3.1(+)的EPC细胞；2为转染pcMCP的EPC细胞。
图3为DNA疫苗浸泡免疫后鳜鱼脾脏中IgM mRNA的表达结果。
图4为DNA疫苗浸泡免疫后鳜鱼脾脏中Mx mRNA的表达结果。
图5为不同免疫组攻毒实验后的鳜鱼的累计死亡率结果，其中pcDNA3.1和PBS为对照组，pcMCP为免疫组。
具体实施方式
为了更好地理解本发明，下面结合实施例进一步阐明本发明的内容，但本发明的内容不仅仅局限于下面的实施例。
实施例1 DNA疫苗的构建及鉴定
1、DNA疫苗的构建：
(1)以ISKNV核酸为模板，利用引物P1(如表3所示)和P2(如表3所示)PCR扩增得到MCP基因全长序列(如SEQ NO.1所示)，其中下划线表示限制性内切酶Kpn I和EcoRI的酶切位点。PCR反应体系如下表1，PCR反应条件如下表2所示。
表1 PCR反应体系(25μL)
反应体系 用量(μL)
10×Taq PCR buffer 2.5
2.5mM dNTP Mix 0.4
20μM P1 0.4
20μM P2 0.4
Taq DNA聚合酶 0.3
DNA模版 2
ddH2O 19
Total 25
表2 PCR反应条件
变性 退火 延伸 循环数
94℃,3min 1
94℃,30s 58℃,45s 72℃,1min 30s 30
72℃,10min 1
(2)将PCR产物MCP基因克隆到真核表达质粒pcDNA3.1(+)中，构建得到DNA疫苗真核表达质粒pcMCP。
2、重组质粒PCR鉴定
采用引物P1和引物P2对上述构建获得的DNA疫苗真核表达质粒pcMCP进行PCR鉴定和测序，PCR产物经电泳结果如图1所示：大小为1362bp的ISKNV MCP基因成功克隆到真核表达质粒pcDNA3.1(+)。
3、免疫荧光方法检测转染重组质粒的基因表达
脂质体Lipofectamine 2000介导上述构建获得的真核表达质粒pcMCP转染EPC细胞，转染后72h进行间接荧光免疫试验检测基因在细胞中的表达情况，同时用pcDNA3.1(+)空质粒转染EPC细胞作为对照，实验结果如图2所示：转染真核表达质粒pcMCP的EPC细胞胞质中可观察到红色荧光，而用pcDNA3.1(+)空质粒转染EPC细胞的对照组中未发现任何荧光，这表明成功构建的真核表达质粒pcMCP能够在EPC细胞中表达。
实施例2 DNA疫苗浸泡免疫效果的检测
1、免疫相关基因的检测
利用荧光定量RT-PCR分析免疫鳜鱼鱼体免疫相关基因(Mx，IgM)的表达差异。分别在浸泡免疫后12h、24h、48h、72h、96h采样，每组随机取3尾鱼，解剖取其脾脏组织，用Trizol(Invitrogen)提取样品中的总RNA，经DNAse I消化后，反转录获得cDNA第一链。按照Realtime PCR Master Mix(SYBR Green)试剂盒中的操作说明，在AB plus one荧光定量PCR仪上对所取的实验样品进行Real-time PCR，引物见表3。
表3 质粒构建引物以及实时定量PCR基因表达分析引物
实时定量PCR检测DNA疫苗浸泡免疫对鳜鱼脾脏中IgM mRNA表达变化,结果如图3所示：在浸泡免疫后48h内，IgM mRNA含量与对照组几乎没有变化，72h后IgM mRNA表达量逐步升高，72h IgM mRNA表达量是PBS对照组的2.04倍，96h IgM mRNA表达量是PBS对照组的3.05倍，这表明DNA疫苗浸泡免疫能够有效激活鳜鱼体液免疫，表达IgM。
实时定量PCR检测DNA疫苗浸泡免疫对鳜鱼脾脏中Mx mRNA表达变化，结果如图4所示：浸泡免疫后12h和24h，Mx mRNA脾脏中的含量略低于PBS对照组，72h和96h的Mx mRNA含量分别是PBS对照组的1.45倍和2.02倍，这表明，Mx基因表达量在浸泡免疫组随时间的增加含量逐步增加(Mx(Myxovirusresistance)蛋白是一类由I型干扰素(IFN)诱导表达的抗病毒蛋白，当机体或细胞受到病毒感染时，能与其它干扰素诱导的蛋白一起形成体内抗病毒感染的防线，以达到抗病毒的目的)，因此，Mx基因表达量的增加能够有效提高鳜鱼的抗病毒感染能力从而达到抗病毒的目的。
2、DNA疫苗浸泡免疫的保护效果
免疫后第28天，进行攻毒试验，各组每尾鱼通过腹腔注射10×TCID50 ISKNV，连续观察15天，记录感染发病和死亡情况，计算相对免疫保护率(relative percent survival，RPS)，RPS＝[1-(免疫组死亡率/对照组死亡率)]×100％。
用10×TCID50 ISKNV攻毒后，免疫组与对照组在11天内均出现了不同程度的死亡，死亡时间集中在攻毒的第5天后，如图5所示。DNA疫苗浸泡免疫鳜鱼后产生了较高的免疫力，PCR检测死亡鳜鱼为ISKNV阳性，同时观察其发病症状，与自然环境下感染ISKNV发病症状相同，表明其死亡原因是由于人工感染ISKNV所致。免疫后第11天，ISKNV DNA疫苗浸泡免疫组累计死亡率40％，空质粒pcDNA3.1(+)和PBS对照组累计死亡率为100％。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的实例，而并非对实施方式的限制。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而因此所引申的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之内。
序列表
<110>武汉市农业科学技术研究院水产科学研究所
<120>一种DNA疫苗浸泡免疫预防鳜鱼ISKNV的方法
<160> 9
<210> 1
<211> 1362 bp
<212> DNA
<213> ISKNV MCP基因序列
<400> 1
atgtctgcaa tctcaggtgc gaacgtaacc agtgggttca tcgacatctc cgcgtttgat 60
gcgatggaga cccacttgta tggcggcgac aatgccgtga cctactttgc ccgtgagacc 120
gtgcgtagtt cctggtacag caagctgccc gtcaccctat caaaacagac tggccatgct 180
aatttcggcc aggagtttag tgtgactgtg gcaaggggtg gcgactacct cattaatgtg 240
tggctgcgtg ttaagatccc ctccatcacg tccagcaagg agaacagcta cattcgctgg 300
tgtgataatt tgatgcacaa tctagttgag gaggtgtcgg tgtcatttaa cgacctggtg 360
gcacagaccc tgaccagcga gttccttgac ttttggaacg cctgcatgat gcctggcagc 420
aaacaatctg gctacaacaa gatgattggc atgcgcagcg acctggtggg cggtatcacc 480
aacggtcaga ctatgcccgc cgcctacctt aatttgccca ttcccctgtt ctttacccgt 540
gacacaggcc ttgcattgcc tactgtgtct ctgccgtaca atgaggtgcg catccacttc 600
aagctgcggc gctgggagga cctgctcatc agccagagca cccaggccga catggccata 660
tcgactgtca ccctggctaa cattggcaat gtagcacccg cactgaccaa cgtgtccgtg 720
atgggcacct acgctgtact gacaagtgag gagcgtgagg ttgtggccca gtctagccgt 780
agcatgctca ttgagcagtg tcaggtggcg cctcgtgtgc ctgtcacacc cgtagacaat 840
tccttggtgc atctcgacct gaggttcagt caccctgtga aggccttgtt ctttgcagtc 900
aagaatgtca ctcaccgcaa cgtgcaaagc aattacaccg cggccagtcc cgtgtatgtc 960
aacaacaagg tgaatctgcc tttgctggcc accaatcccc tgtccgaggt gtcgctcatt 1020
tacgagaaca cccctcggct ccaccagatg ggagtagact acttcacatc tgtcgacccc 1080
tactactttg cgcccagcat gcctgagatg gatggtgtta tgacctactg ttatacgctg 1140
gacatgggca atatcaaccc tatgggctcg accaactacg gccgcctgtc caacgtcacc 1200
ctgtcatgta aggtgtcgga caatgccaag accaccgcgg cgggcggtgg aggcaacggc 1260
accggctaca cggtcgccca aaagtttgaa ctggtcgtta ttgcagtcaa ccacaacatc 1320
atgaagattg ctgacggcgc tgcaggcttc cctatcctgt aa 1362
<210>2
<211> 23bp
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
cgggtaccat ggctgcaatc tca 23
<210>3
<211> 25bp
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
gcgaattctt acaggatagg gaagc 25
<210>4
<211> 19bp
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 4
attgtcaggt ccatcgggc 19
<210>5
<211> 23bp
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 5
tcagggatgt tcatgttgag gtt 23
<210>6
<211> 21bp
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 6
ggattctgac atcgggagca a 21
<210>7
<211> 20bp
<212> DNA
<213> 人工序列
<400>7
gtgcagtaga ctcatgctgt 20
<210>8
<211> 20bp
<212> DNA
<213> 人工序列
<400>8
gacttcgagc aggagatggg 20
<210>9
<211> 20 bp
<212> DNA
<213> 人工序列
<400>9
cgaggaagga aggctggaag 20

Claims (5)

1.一种DNA疫苗浸泡免疫预防鳜鱼ISKNV的方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）DNA疫苗的构建：以ISKNV核酸为模板，利用引物扩增MCP基因全长序列，并将PCR产物MCP基因克隆到真核表达质粒pcDNA3.1(+)中，构建得到DNA疫苗真核表达质粒pcMCP；
（2）DNA疫苗浸泡免疫：取1~4厘米长的鳜鱼浸泡在免疫浸泡液中进行DNA疫苗浸泡免疫，所述免疫浸泡液为含有pcMCP真核表达质粒的磷酸盐缓冲液；
（3）将浸泡免疫后的鳜鱼置于25℃环境下、投喂鲮鱼进行恒温养殖。
2.根据权利要求1所述DNA疫苗浸泡免疫预防鳜鱼ISKNV的方法，其特征在于，所述引物为：
P1：5’-CGGGTACCATGGCTGCAATCTCA-3’；
P2：5’-GCGAATTCTTACAGGATAGGGAAGC-3’。
3.根据权利要求1所述DNA疫苗浸泡免疫预防鳜鱼ISKNV的方法，其特征在于，所述免疫浸泡液中pcMCP真核表达质粒的浓度大于100ng/mL。
4.根据权利要求1所述DNA疫苗浸泡免疫预防鳜鱼ISKNV的方法，其特征在于，所述1~4厘米的鳜鱼在进行DNA疫苗浸泡免疫之前，先被禁食8~14h。
5.根据权利要求1所述DNA疫苗浸泡免疫预防鳜鱼ISKNV的方法，其特征在于，所述DNA疫苗浸泡免疫的时间大于30min。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111733283A (zh) * 2020-04-28 2020-10-02 广东海大畜牧兽医研究院有限公司 传染性脾肾坏死病毒、大口黑鲈鱼病毒和鳜弹状病毒的三重荧光pcr检测试剂盒

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102240399A (zh) * 2011-07-09 2011-11-16 中国水产科学研究院珠江水产研究所 鳜传染性脾肾坏死病毒（isknv）orf093蛋白的应用
CN103041404A (zh) * 2012-05-17 2013-04-17 上海七海复泰生物科技有限公司 一种鱼类虹彩病毒dna疫苗制备方法
CN104096240A (zh) * 2014-06-20 2014-10-15 中国水产科学研究院珠江水产研究所 一种抗传染性脾肾坏死病毒的dna疫苗

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102240399A (zh) * 2011-07-09 2011-11-16 中国水产科学研究院珠江水产研究所 鳜传染性脾肾坏死病毒（isknv）orf093蛋白的应用
CN103041404A (zh) * 2012-05-17 2013-04-17 上海七海复泰生物科技有限公司 一种鱼类虹彩病毒dna疫苗制备方法
CN104096240A (zh) * 2014-06-20 2014-10-15 中国水产科学研究院珠江水产研究所 一种抗传染性脾肾坏死病毒的dna疫苗

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
M. FERNANDEZ-ALONSO,ET AL: "DNA vaccination by immersion and ultrasound to trout viral haemorrhagic septicaemia virus", 《VACCINE》 *
周伟东 等: "DNA 疫苗浸泡免疫预防鳜鱼传染性脾肾坏死病毒", 《湖北农业科学》 *
罗霞 等: "鳜浸泡嗜水气单胞菌全菌疫苗后皮肤黏液抗体的变化", 《中国水产科学》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111733283A (zh) * 2020-04-28 2020-10-02 广东海大畜牧兽医研究院有限公司 传染性脾肾坏死病毒、大口黑鲈鱼病毒和鳜弹状病毒的三重荧光pcr检测试剂盒

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