CN106309506B - 一种具有调经功能的益生菌组合物及其应用 - Google Patents
一种具有调经功能的益生菌组合物及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明属于生物医药领域，具体涉及一种具有调经功能的益生菌组合物及其应用，适用妇女经期痛经，特别适用于青年女性的原发性痛经。具有调经功能的益生菌组合物，由鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌和长双歧杆菌组成。益生菌组合物也可以与具调经功能的药食同源中药复配，具有协同作用。益生菌是国际公认的益生物质，具有来源安全、效果显著、无任何毒副作用等优点。本发明的益生菌组合物不仅可安全食用，而且还具有调经功能，特别是能够抑制原发性痛经，提供了益生菌的一种新用途。益生菌与药食同源中药复配，共同发挥优势，从而达到安全有效地治疗痛经的作用。
Description
技术领域
本发明属于生物医药领域，具体涉及一种具有调经功能的益生菌组合物及其应用，适用妇女经期痛经，特别适用于青年女性的原发性痛经。
背景技术
痛经是一种临床妇科常见病，是指在经期及其前后，出现小腹或腰部疼痛，甚至痛及腰骶的疾病；每随***而发，严重者可伴恶心呕吐、冷汗淋漓、手足厥冷，甚至昏厥。据有关调查表明，痛经的发病率为33.19％，轻度占45.73％，中度占38.81％，重度占13.55％。青年女性的原发性痛经达75％，给女性的生活、社交、健康带来严重的影响，长期痛经还可引起***不育，诱发多种妇科疾病，同时会对婴儿在子宫内的发育造成影响。
目前市场上治疗痛经常用西药止痛药、激素类药物、中药等，中药可归纳为两类：一类是内服的调理型中成药产品，如元胡止痛胶囊、逍遥丸、四物汤、艾附暖宫丸等，另一类是外用的调理兼保健型产品，如痛经贴、益母草暖宫贴等。关于治疗妇女痛经的中药中国专利如CN200610002243.4、CN103585403 A、CN103656463 A等多由常见的具有益气养血、活血化瘀、温经散寒、止痛功效的中草药制成。长期服药会造成患者心理压力，也会引起药物副作用。因此需要提供一种适于女性痛经的可食用产品。
益生菌是一类对宿主有益的活性微生物，是定植于人体肠道、生殖***内，能产生确切健康功效从而改善宿主微生态平衡、发挥有益作用的活性有益微生物的总称。它是国际上公认的安全性食品添加剂，已广泛应用于乳制品、保健品和医药行业，主要用于调节肠道功能、降低血液胆固醇水平、防止有害物质产生、延缓人体衰老、调节人体免疫功能、抑制乳糖不耐症、抗肿瘤作用等，如中国专利CN101772308A、CN102511707A、CN101864375A、CN103653170A等。但目前尚未有关于益生菌具有治疗痛经方面作用的报道。
发明内容
本申请的发明人发现，由鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌和长双歧杆菌组成的益生菌组合物不仅可安全食用，而且还具有调经功能，特别是能够抑制原发性痛经。本发明正是基于该发现而完成的。
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种具有调经功能的益生菌组合物，该益生菌组合物由可食用的益生菌组成，具有安全有效的特点。并且，该益生菌组合物对原发性痛经能够起到很好的抑制作用。
为实现上述目的，本发明的技术方案为：
一种具有调经功能的益生菌组合物，所述益生菌组合物由鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌和长双歧杆菌组成。
肠道菌群是导致机体代谢性疾病的可能因素，“益生菌”是机体补充摄入的具有活性的微生物，可以有效改善肠道菌群的平衡，对宿主产生良好的健康效应。大量研究表明，益生菌株具有调节体内菌群平衡、提高机体免疫力、降低血清胆固醇、血压、血糖、抗癌等生理功能。
本发明的试验证明，本发明的益生菌组合物还具有调经功能。
进一步，所述的益生菌组合物中，所述鼠李糖乳杆菌的含量为2.5×106-2.5×109CFU/g，所述植物乳杆菌的含量为2.5×106-2.5×109CFU/g，所述长双歧杆菌的数量为5×106-5×109CFU/g。
进一步，所述的益生菌组合物，优选的，所述鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌的含量为2.5×107CFU/g，所述长双歧杆菌的含量为5×107CFU/g。
更进一步，所述的益生菌组合物，所述的鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、长双歧杆菌的活菌数比例为1：1：2。
本发明所述具有调经功能的益生菌组合物可以按照如下方法进行制备：
1)分别将鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、长双歧杆菌经培养基活化后，接种于发酵培养基中，使菌体浓度达到对数生长期0.5-2×109CFU/mL；
2)将步骤1)中各菌种发酵液离心，弃上清，收集菌泥；
3)配制菌种保护剂；
4)将菌种保护剂和各菌种菌泥分别混合均匀，然后将混合物预冻，再冷冻干燥，制成活性益生菌菌粉；
5)取各活性益生菌菌粉，按照鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、长双歧杆菌的活菌数比例进行配料，混合均匀即得具有调经功能的益生菌组合物。
所述的菌种保护剂可以选用本领域通用的菌种保护剂。
在一个具体实施例中，所述的菌粉保护剂配方为：蔗糖8g、脱脂奶粉26g、甘油1mL，蒸馏水100mL，115℃，灭菌15min。
优选的，所得的活性益生菌菌粉经过筛后再进行配料。
优选的，过80-100目筛。
本发明的具有调经功能的益生菌组合物，该益生菌组合物由可食用的益生菌组成，具有安全有效的特点。并且，经试验研究证明，本发明的益生菌组合物具有调经功能，特别是对原发性痛经能够起到很好的抑制作用。
因此，本发明除了保护该益生菌组合物外，还保护所述的益生菌组合物在制备治疗痛经和调经产品中的应用。所述的产品包括但不限于药物、食品及保健品。
本发明的具有调经功能的益生菌组合物可以添加一种或多种食品和药品上可接受的载体制成片剂、粉剂、胶囊剂等剂型。
本发明的另一目的还在于提供一种具有调经功能的组合物，该组合物由具调经功能的药食同源中药与具有调经功能的益生菌协同组合而成，克服单独中药用药时间长、有药物副作用的缺点，两者组合具有协同作用。
为实现上述目的，本发明的技术方案为：
具有调经功能的组合物，由益生菌与具调经功能的药食同源中药协同组合而成；所述益生菌由鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌和长双歧杆菌组成。
进一步，所述的具有调经功能的组合物，所述益生菌中，所述鼠李糖乳杆菌的含量为2.5×106-2.5×109CFU/g，所述植物乳杆菌的含量为2.5×106-2.5×109CFU/g，所述长双歧杆菌的数量为5×106-5×109CFU/g。
进一步，所述益生菌中，优选的，所述鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌的含量为2.5×107CFU/g，所述长双歧杆菌的含量为5×107CFU/g。
更进一步，所述益生菌中，所述的鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、长双歧杆菌的活菌数比例为1：1：2。
进一步，所述的具有调经功能的组合物，所述药食同源中药由炙甘草、枸杞、红枣、陈皮、干姜和桂圆组成。
优选的，所述的具有调经功能的组合物，所述药食同源中药，按重量份计，由以下组分组成：炙甘草的5-10份，枸杞6-12份，红枣6-20份，陈皮3-10份，干姜3-10份，桂圆9-15份。
更优选的，所述药食同源中药，按重量份计，由以下组分组成：炙甘草8份，枸杞6份，红枣20份，陈皮10份，干姜3份，桂圆10份。
药食同源中药与益生菌协同作用，相互促进。本发明除了保护具有调经功能的组合物外，还保护所述的组合物在制备治疗痛经和调经产品中的应用。所述的产品包括但不限于药物、食品及保健品。
同理，本发明的具有调经功能的组合物也可以添加一种或多种食品和药品上可接受的载体制成片剂、粉剂、胶囊剂等剂型。
本发明的有益效果在于：
(1)本发明采用益生菌为原料制备的具有调经功能的益生菌组合物，开发了益生菌的新用途，其治疗痛经的效果优于市售的中药产品，具有安全有效的特点，能够促进益生菌在人体内的增殖，在治疗痛经作用的同时调节人体肠道菌群、有益于人体健康。
(2)本发明具有调经功能的组合物由益生菌与具调经功能的药食同源中药协同组合而成，通过传统中药与益生菌合理配伍用药，经试验验证，药效优于单独使用任何一种原料，克服单独中药用药时间长、有药物副作用的缺点，两者组合具有协同作用。
具体实施方式
所举实施例是为了更好地对本发明的内容进行说明，但并不是本发明的内容仅限于所举实施例。所以熟悉本领域的技术人员根据上述发明内容对实施方案进行非本质的改进和调整，还包括各具体实施方式间的任意组合，仍属于本发明的保护范围。
第一部分 具有调经功能的益生菌组合物的应用
实施例1 具有调经功能的益生菌组合物
一种具有调经功能的益生菌组合物，所述益生菌组合物由鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌和长双歧杆菌组成。
益生菌组合物配方1：鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、长双歧杆菌的活菌数比例为1：1：2的比例进行配料，其中鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌的含量为2.5×106CFU/g、长双歧杆菌的含量为5×106CFU/g。
益生菌组合物配方2：鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、长双歧杆菌的活菌数比例为1：1：2的比例进行配料，其中鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌的含量为2.5×107CFU/g、长双歧杆菌的含量为5×107CFU/g。
益生菌组合物配方3：鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、长双歧杆菌的活菌数比例为1：1：2的比例进行配料，其中鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌的含量为2.5×108CFU/g、长双歧杆菌的含量为5×108CFU/g。
益生菌组合物配方4：鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、长双歧杆菌的活菌数比例为1：1：2的比例进行配料，其中鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌的含量为2.5×109CFU/g、长双歧杆菌的含量为5×109CFU/g。
实施例2 具有调经功能的产品
按以下方法进行制备：
(1)制备活性益生菌干粉：
1)分别将鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌和长双歧杆菌经培养基活化后，接种于发酵培养基中，震荡培养，使菌体浓度达到对数生长期0.5-2×109CFU/mL。
双歧杆菌种子液的制备：取出菌种保藏管，用双歧杆菌固体培养基划平板进行复苏，37℃厌氧培养48-72小时。在平板下挑取单个菌落接种50毫升双歧杆菌培养基中，在厌氧培养箱中培养48小时。种子采用5％的接种量接种至3L大三角瓶中(装液量为2.5L)，用无菌植物油进行油封，37度厌氧培养36-48小时，检测其菌液浓度，菌含量为5亿/毫升，即可作为双歧杆菌液体发酵的终止。其中，所述的双歧杆菌培养基为：酪蛋白胨1％，大豆蛋白胨0.5％，酵母粉0.25％，葡萄糖1.5％，K2HPO4 0.2％，MgCl2·6H2O 0.05％，CaCl2 0.015％，ZnSO4·7H2O 0.025％，FeCl3 0.01％，L-半胱氨酸盐酸盐0.005％，吐温-80 1mL(1000mL加1mL)，调pH至6.5，固体培养基添加1.5％琼脂粉，0.1MPa灭菌15min。
乳杆菌种子液的制备：取出菌种保藏管，用MRS固体培养基划平板进行复苏，37℃厌氧培养48小时。在平板下挑取单个菌落接种100毫升MRS培养基中，37℃培养箱中厌氧培养24小时。种子采用5％的接种量，接种至3L大三角瓶中(装液量为2.5L)，37℃厌氧培养24-48小时，检测其菌液浓度，菌含量超过10亿/毫升，即可作为乳杆菌液体发酵终止。其中，所述的MRS培养基：葡萄糖2.0％，柠檬酸铵0.2％，乙酸钠0.5％，磷酸氢二钾0.5％，硫酸锰0.02％，硫酸镁0.05％，蛋白胨1.0％，牛肉膏1.0％，酵母膏0.5％，吐温-80 0.1％、PH6.0；固体培养基加1.5％琼脂粉，0.1MPa灭菌15min。
2)将各菌种发酵液混合后离心，弃上清，菌体沉淀洗涤，离心，弃上清，获得菌泥。
3)配制菌粉保护剂，配方为蔗糖含量为8g、脱脂奶粉26g、甘油1mL，蒸馏水100mL，115℃，灭菌15min。
4)将菌粉保护剂和菌泥充分混合，然后将混合物预冻，再进行真空冷冻干燥，得活性益生菌干粉。
(2)过筛
将步骤(1)中所得的活性益生菌干粉，过80-100目筛。
(3)菌粉计数：利用平板菌落计数法测量益生菌干粉的活菌数。
(4)配料：称量过筛后的益生菌干粉，按照配方1-4中的鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、长双歧杆菌的活菌数比例进行配料；辅料为脱脂奶粉。
(5)混合：将配好的各组益生菌组合物与辅料充分混匀至色泽均匀一致，无色差，即得到具有调经功能的产品1、产品2、产品3和产品4。
实施例3 具有调经功能的产品试验验证
1、动物实验
小鼠原发性痛经模型的构建、分组及给药：选用18-22g的雌性昆明白小鼠80只，随机分为8个处理组，分别为空白对照组、模型组、阳性组(市售产品月月舒痛经宝颗粒)、产品1、产品2、产品3、产品4组，每组10只。除空白组外，其余各组以***和缩宫素联合复制原发性痛经模型，具体操作如下：以10mg·kg-1·d-1给小鼠连续腹腔注射苯甲酸***10d，使小鼠子宫同步化，第4天起正常组和模型组给予等量的蒸馏水，其他各组给予人体等效量的药物(人体用量为20g/d，依据体表面积折算小鼠每日给药剂量；给药体积为0.5mL/只)，连续给药7d，第7天给药1h后，腹腔注射缩宫素0.05mL/只，同时开始记录腹腔注射缩宫素后30min内各组小鼠扭体次数，并按以下公式计算扭体反应抑制率和扭体发生率。本发明人对其治疗小鼠原发性痛经的结果进行分析，见表1。
扭体发生率＝各组扭体发生动物/各组实验动物总数×100％
扭体抑制率＝[(模型组扭体反应次数－给药组扭体反应次数)÷模型组扭体反应次数]×100％
表1本发明提供的益生菌组合物对小鼠原发性痛经的治疗效果表
注：采用SPSS 16.0对扭体次数进行统计，采用One-way ANOVA进行单因素方差分析，用Duncan氏法进行多重比较，结果以平均值±标准差表示，表中同一列标有不同小写字母者表示组间差异显著(P<0.05)；标有相同小写字母表示组间差异不显著。
2、人体试用
为了验证本发明中的产品治疗痛经的效果，本发明人对20例痛经患者进行了临床观察，以产品2为例，每次用药10g，每日2次，于经前5天开始连服7d，经1个疗程治疗后，共治愈3例(主要症状消失，经期前后无明显不适)，占15％；有效(主要症状明显减轻，经期前后稍有不适)12例，占60％；总有效率75％。
第二部分 具有调经功能的药食同源中药的应用
实施例4 具有调经功能的药食同源中药配方
配方A：炙甘草50g、枸杞60g、红枣60g、陈皮30g、干姜30g、桂圆90g。
配方B：炙甘草100g、枸杞120g、红枣200g、陈皮100g、干姜100g、桂圆150g。
配方C：、炙甘草80g、枸杞60g、红枣200g、陈皮100g、干姜30g、桂圆100g。
配方D：炙甘草60g，枸杞100g，红枣150g、陈皮60g、干姜30g、桂圆120g。
配方E：炙甘草60g，枸杞120g，红枣100g、陈皮60g、干姜60g、桂圆120g。
按照上述配方分别取药食同源中药，加入药物总重量的8倍水(质量体积比)，浸泡2h，大火煮沸后，调文火煎煮30min后，过滤，保留滤液一；滤渣再加入药物总重量的6倍水，大火煮沸后文火煎煮20min，过滤，保留滤液二；合并滤液一和二，减压真空浓缩，真空冷冻干燥，分别获得中药提取物产品A、产品B、产品C、产品D、产品E。
实施例5 具有调经功能的药食同源中药的功效验证
具体步骤同实施例3，不同之处在于：分组为空白对照组、模型组、阳性组、产品A组、产品B组、产品C组、产品D组、产品E组，各中药组给予人体等效量的中药干物质(按照20g生药/天计算，依据体表面积折算小鼠每日给药剂量；给药体积为0.5mL/只)。本发明人对其治疗小鼠原发性痛经的结果进行分析，见表2。
表2本发明提供的药食同源中药提取物对小鼠原发性痛经的治疗效果表
注：采用SPSS 16.0对扭体次数进行统计，采用One-way ANOVA进行单因素方差分析，用Duncan氏法进行多重比较，结果以平均值±标准差表示，表中同一列标有不同小写字母者表示组间差异显著(P<0.05)；标有相同小写字母表示组间差异不显著。
第三部分 具有调经功能的药食同源中药与益生菌的协同作用
实施例6
具体步骤同实施例3，不同之处在于：分组为空白对照组、模型组、阳性组、产品C、产品2、产品2+产品C，产品2的剂量同实施例3和产品C的剂量同实施例5。本发明人对其治疗小鼠原发性痛经的结果进行分析，见表3。
表3本发明提供的药食同源中药提取物对小鼠原发性痛经的治疗效果表
注：采用SPSS 16.0对扭体次数进行统计，采用One-way ANOVA进行单因素方差分析，用Duncan氏法进行多重比较，结果以平均值±标准差表示，表中同一列标有不同小写字母者表示组间差异显著(P<0.05)；标有相同小写字母表示组间差异不显著。
实施例7
为了验证具有调经功能的药食同源中药与益生菌的协同作用，以产品2和产品C混合为例，观察治疗痛经的效果，本发明人对30例痛经患者进行了临床观察，每次用药10g(含生药10g、鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌的含量为2.5×107CFU/g、长双歧杆菌的含量为5×107CFU/g，辅料为脱脂奶粉)，每日2次，于经前5天开始连服7d，经1个疗程治疗后，共治愈7例(主要症状消失，经期前后无明显不适)，占23.33％；有效(主要症状明显减轻，经期前后稍有不适)17例，占56.67％；总有效率80％。
最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。
Claims (6)
1.一种具有调经功能的益生菌组合物，其特征在于，所述益生菌组合物由鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌和长双歧杆菌组成；所述益生菌组合物中，所述鼠李糖乳杆菌的含量为2.5×106-2.5×109CFU/g，所述植物乳杆菌的含量为2.5×106-2.5×109CFU/g，所述长双歧杆菌的含量为5×106-5×109CFU/g；所述的鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、长双歧杆菌的活菌数比例为1：1：2。
2.根据权利要求1所述的益生菌组合物，其特征在于，所述鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌的含量为2.5×107CFU/g，所述长双歧杆菌的含量为5×107CFU/g。
3.权利要求1-2任一项所述的益生菌组合物在制备治疗痛经和调经产品中的应用。
4.具有调经功能的组合物，其特征在于，由益生菌与具调经功能的药食同源中药协同组合而成；所述益生菌由鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌和长双歧杆菌组成；所述鼠李糖乳杆菌的含量为2.5×106-2.5×109CFU/g，所述植物乳杆菌的含量为2.5×106-2.5×109CFU/g，所述长双歧杆菌的含量为5×106-5×109CFU/g；所述的鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、长双歧杆菌的活菌数比例为1：1：2；所述药食同源中药由炙甘草、枸杞、红枣、陈皮、干姜和桂圆组成。
5.根据权利要求4所述的具有调经功能的组合物，其特征在于，所述药食同源中药，按重量份计，由以下组分组成：炙甘草5-10份，枸杞6-12份，红枣6-20份，陈皮3-10份，干姜3-10份，桂圆9-15份。
6.权利要求4或5任一项所述的具有调经功能的组合物在制备治疗痛经和调经产品中的应用。
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