CN106309358A - 含有人甲状旁腺激素的药物组合物及其制备方法与用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及含有人甲状旁腺激素rhPTH(1-34)的药物组合物，采用蔗糖与甘露醇的组合物作为稳定剂，所述药物组合物具有成分简单，稳定性好等特点，其进一步制备得到的冻干制剂具有稳定性高、复溶性好等特点，符合临床用药要求。本发明还提供了所述的药物组合物的制备方法和用于制备冻干制剂的方法，及其在制备治疗和/预防骨质疏松症药物中的用途。

Description

含有人甲状旁腺激素的药物组合物及其制备方法与用途

技术领域

本发明涉及医药领域，更具体的，本发明涉及一种含有人甲状腺激素的药物组合物及其制备方法，以及该药物组合物用于制备冻干制剂的方法及其在治疗和/或预防骨质疏松症方面的用途。

背景技术

骨质疏松症是一种以骨量低下，骨微结构破环而导致骨脆性增加，易发生骨折为特征的常见的全身性疾病，已严重威胁着中老年人群，尤其是绝经后女性的身体健康。目前，全世界约有2亿以上人群患有骨质疏松，其发病率已跃居常见病、多发病的第六位。我国骨质疏松患者居于世界首位，约9000万人，其发生率在50岁以上的人群中约为15.7％，在60岁以上的人群中约56％，其中绝经后妇女发生率高于男性，为60～70％，一般发生在妇女绝经后的5～10年内。随着社会老龄化的发展，骨质疏松症的发病率呈上升趋势，预计到2050年将增加到2.21亿。

目前，用于治疗绝经后妇女骨质疏松症的药物主要有***、选择性***受体调节剂、双磷酸盐和钙素等，这些药物主要通过抑制骨吸收来提高骨密度，却不能维持正常骨量和骨强度，而促进骨形成的药物可以弥补其不足。

甲状旁腺激素(Parathyroid Hormone，PTH)是由甲状旁腺主细胞合成和分泌的一种单链多肽激素，成熟PTH含有84个氨基酸残基，是人体内调节钙磷代谢及骨转换最为重要的激素之一，小剂量间断给药能提高骨密度、改善骨质量、降低骨折的发生率。研究表明，PTH生物学活性主要来自其N端，如N端片段PTH(1-34)保留了PTH完整肽段的生物学活性，可促进骨生长而有效治疗骨质疏松症，临床应用中多采用PTH(1-34)治疗骨质疏松疾病。

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn Ser Met Glu Arg

1 5 10 15 20

Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val Hi s Asn Phe

25 30

PTH(1-34)氨基酸序列

PTH(1-34)的N末端和C末端序列的完整与否决定了其生物活性，而作为一种大分子蛋白质，PTH(1-34)对氧化、脱酰胺基和水解尤为敏感，使得在生产、制剂及储运过程中保证其N末端和C末端序列完整是保证产品质量的技术关键之一。

目前PTH(1-34)原料多采用基因工程重组技术获得，市售人重组PTH(rhPTH(1-34))注射液(Teriparatide，特立帕肽)采用的是预装式笔式注射器，其生产工艺复杂，生产成本高，储运存在不便，使得产品价格昂贵，其处方主要包含冰醋酸、无水醋酸钠、甘露醇、间甲酚和注射用水等。其中，间甲酚容易氧化生成醌类及其他复杂的化合物，使得特立帕肽注射液在制备和储存过程中易产生杂质，导致注射液产品不稳定，长期使用间甲酚对人体易产生毒副作用。

因此，寻找一种储运方便、使用方便、工艺简单、稳定性高的rhPTH(1-34)制剂产品是现有技术没有解决的技术问题。

发明内容

本发明从解决现有技术的不足出发，提供了一种含有rhPTH(1-34)的稳定药物组合物及其进一步得到的冻干制剂，该药物组合物可用于大规模生产制备rhPTH(1-34)冻干制剂，制备得到的冻干制剂具有稳定性高、复溶性好等特点。

本发明的上述目的通过如下技术方案实现：

一种含有rhPTH的药物组合物，所述药物组合物为溶液体系，其pH值为6～7，所述药物组合物包括治疗有效剂量的rhPTH、稳定剂、氯化钠和可药用缓冲剂。

所述的rhPTH是指rhPTH(1-34)，可通过现有公知的基因工程重组技术制备。所述药物组合物中rhPTH浓度为50～60μg/ml，优选的，所述药物组合物中rhPTH浓度为56.5μg/ml。

所述的稳定剂为蔗糖和甘露醇的组合物。由于rhPTH(1～34)的N末端及C末端不稳定，稳定剂一方面可以保证rhPTH(1-34)在制备及储存过程中不会发生降解反应，另一方面还可以在冻干过程中起到支撑作用。具体的，作为最终产品的主要成分之一，对稳定剂的选择需要同时考量其稳定作用、原辅料兼 容性及对于冻干工艺的适应性等，本发明所述的稳定剂具有多羟基糖结构，且亲水性强，玻璃态温度较高，可有效阻止rhPTH(1-34)二级结构的改变，并使其在冷冻干燥失去水分后仍能保持其生物活性；另外，本发明所述的稳定剂在冷冻干燥中同时还具有膨化、支撑的作用，有利于在冻干时形成多孔疏松粉状物，便于冻干工艺中水分的去除，保证rhPTH(1-34)冻干制剂的重建稳定性。所述药物组合物中稳定剂的浓度(用量)存在选择，过高浓度不会对rhPTH(1-34)保护作用提高，且在某些配方中的保护作用反而会有所下降；过低浓度不足以在rhPTH(1-34)蛋白表面形成单分子层，而不能有效保护rhPTH(1-34)的活性，具体的，所述药物组合物中稳定剂的浓度为20～50mg/ml，更具体的，所述稳定剂蔗糖和甘露醇的组合，其中蔗糖浓度为10～20mg/ml；甘露醇浓度为10～30mg/ml，优选20mg/ml。

所述的可药用缓冲剂为磷酸氢二钠/磷酸二氢钠，优选的，所述药物组合物中的缓冲剂为浓度0.20～0.45mg/ml磷酸氢二钠与浓度0.25～1.20mg/ml磷酸二氢钠的组合。选用缓冲剂的目的在于将药物组合物pH值稳定在6～7之间，在保证有效成分稳定的同时，将制剂的复溶性保证在较好的状态，并将给药疼痛降低到最小。

所述的氯化钠(NaCl)为渗透压调节剂，其在药物组合物中的浓度为0.50～1mg/ml。

上述rhPTH(1-34)药物组合物的处方中原、辅料具有较好的兼容性，所包含的辅料种类及用量使得处方在整体上保证了产品的稳定性，并最有利于后续的生产工艺，并通过后续工艺制备得到符合临床使用的冻干制剂产品。所得冻干制剂同样具有稳定性好的特性，并且具有较好的复溶性能。

本发明的另一目的在于提供一种前述含有rhPTH(1-34)的药用组合物的制备方法，并进一步包含将药物组合物制备成冻干制剂的方法，所述的方法包括如下步骤：

1)将rhPTH(1-34)蛋白原液加入到含有稳定剂、NaCl和可药用缓冲剂的混合溶液中，混匀；

2)采用盐酸或氢氧化钠溶液将体系pH值调节至6～7；

3)除菌、无菌分装；

4)冷冻干燥，即得所述冻干制剂。

所述步骤3)的除菌优选过滤除菌；所述步骤4)中

冷冻干燥的过程进一步包括：

a)预冻；

b)一次干燥；

c)二次干燥。

所述步骤a)中的预冻温度为：室温～-45℃，预冻时间为2～4h；所述步骤b)中一次干燥温度为：-40℃～-20℃，一次干燥时间为10～15h，真空度为：15～10Pa；所述步骤c)中二次干燥温度为：-15℃～30℃，二次干燥时间为10～15h，真空度为10～2Pa。所述一次干燥和二次干燥的温度可选择恒温，也可以选择梯度变温干燥。

本发明的一个优选的冷冻干燥过程：采用逐步降温法，具体的，所述的预冻温度为室温～-45℃，预冻时间为3h；所述的一次干燥温度为：-40℃～-20℃，一次干燥时间为13h，真空度为：15～10Pa；所述的二次干燥温度为：-15℃～30℃，二次干燥时间为11h，真空度为10～2Pa。所述一次干燥和二次干燥选择的是梯度变温干燥。

本发明的第三个目的在于提供一种含有rhPTH(1-34)药用组合物在制备用于治疗和/或预防骨质疏松症的药物中的用途。由于该药物组合物含有高浓度的rhPTH(1-34)，可有效得减少临床给药次数/频率，且采用基因工程重组技术规模化生产rhPTH(1-34)，可满足临床大量用药的需求，具有良好的临床应用前景。

本发明相对于现有技术具有如下的优点及有益效果：

1、提供了一种含有rhPTH(1-34)的药用组合物，所述药物组合物具有成分简单，稳定性好等特点，其进一步制备得到的冻干制剂同样具有稳定性高的特点，且其复溶性好，符合临床用药要求；

2、提供了一种制备含有rhPTH(1-34)的药物组合物的方法，并将所得药物组合物进一步用于制备药物冻干制剂的方法，该生产方法有利于制备得到符合临床用药要求的冻干制剂产品，且生产方法简单易行，适用于工业化大规模 生产；

3、提供了一种含有rhPTH(1-34)的药用组合物在制备用于治疗和/或预防骨质疏松症的药物中的应用，由于该药物组合物含有高浓度的rhPTH(1-34)，可有效得减少临床给药次数/频率；且所用的组合物配方安全无毒，不含杂质，降低药物发生毒副反应的概率，有效增加了rhPTH(1-34)药物的顺应性。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但发明的实施方式不限于此。

实施例使用的含有rhPTH(1-34)的蛋白质原液采用文献：Sung WL.J Biol Chem.1991；266(5):2831-5.的方法制备。所得蛋白质原液含有rhPTH(1-34)浓度为2mg/ml，纯度98.0％。

实施例1

含有rhPTH(1-34)药物组合物及其冻干制剂的制备

1、含rhPTH(1-34)药物组合物的制备

将重组制备的rhPTH(1-34)蛋白原液(纯度98％，浓度2mg/ml)于室温或2～8℃下解冻，解冻后于2～8℃保存。按照下表中A-D各辅料配比，分别准确称量稳定剂、氯化钠、缓冲剂，用800mL注射用水溶解后配制为混合液，加入解冻后的rhPTH(1-34)蛋白原液，搅拌混匀，盐酸或氢氧化钠溶液调节至目的pH值，继续用注射用水定容至1L，无菌条件下用孔径为0.22μm滤膜过滤除菌，并无菌分装后分别得到A-D药物组合物。

0.20～0.45mg/ml磷酸氢二钠与浓度0.25～1.20mg/ml磷酸二氢钠的组合

组分	A	B	C	D
					rhPTH(1-34)(μg/ml)	56.5	56.5	50	60
磷酸氢二钠(mg/ml)	0.21	0.433	0.21	0.21
					磷酸二氢钠(mg/ml)	1.18	0.269	1.18	1.18

蔗糖(mg/ml)	11.2	20	11.2	11.2
					甘露醇(mg/ml)	20	20	20	20
NaCl(mg/ml)	0.56	1	0.56	0.56
					pH	6.0	7.0	6.0	6.0
装量(ml/支)	1	1	1	1

2、含rhPTH(1-34)药物组合物冻干制剂的制备

将前述步骤制备得到的药物组合物，按照下表的冻干工艺制备分别为冻干制剂A-D，具体步骤如下：

(1)预冻阶段：将温度由室温降至-45℃，再将药物组合物置于-45℃，维持3h，真空度为0Pa。

(2)一次干燥阶段：维持真空度为15～10Pa，将药物组合物置于-40℃下干燥1h；-35℃下干燥1h；-30℃下干燥1h；-25℃下干燥1h；-20℃下干燥9h；

(3)二次干燥阶段：维持真空度为10～2Pa，将药物组合物置于-15℃下干燥1h；-10℃下干燥1h；-5℃下干燥1h；0℃下干燥3h；5℃下干燥1h；10℃下干燥1h；15℃下干燥1h；20℃下干燥1h；30℃下干燥1h，分别对应得到冻干制剂A-D。

所得冻干制剂A-D均未发生喷瓶现象，且冻干粉末呈白色疏松体，成形性好，水分去除充分、完全，符合临床用药质量控制要求。

对比实施例1

含有rhPTH(1-34)药用组合物E及其冻干制剂的制备

1、含rhPTH(1-34)药用组合物的制备

将重组制备的rhPTH(1-34)蛋白原液(纯度98％，浓度2mg/ml)，解冻后于2～8℃保存。按照下表中E各辅料配比，分别准确称量稳定剂、氯化钠、缓冲剂，用800mL注射用水溶解后配制为混合液，加入解冻后的rhPTH(1-34)蛋白原液，搅拌混匀，用盐酸或氢氧化钠溶液调节pH为7.0，继续用注射用水定容至1L，无菌条件下用孔径为0.22μm滤膜过滤除菌，并无菌分装得到E药物组合物。

组分	E
		rhPTH(1-34)(μg/ml)	56.5
磷酸氢二钠(mg/ml)	0.433
		磷酸二氢钠(mg/ml)	0.269
甘露醇(mg/ml)	50
		NaCl(mg/ml)	1
pH值	7.0

装量(ml/支)

1

2、含rhPTH(1-34)药用组合物冻干制剂的制备

采用与实施例1相同的冻干步骤制备得到冻干制剂E。

所得冻干制剂E未发生喷瓶现象，且冻干粉末呈白色疏松体，成形性好，水分去除充分、完全。

对比实施例2

含有rhPTH(1-34)药用组合物F及其冻干制剂的制备

1、含rhPTH(1-34)药用组合物的制备

按照下表中F各辅料配比，采用与实施例1相同的方法制备得到F药物组合物。

组分	F
		rhPTH(1-34)(μg/ml)	56.5
醋酸(mg/ml)	0.03
		醋酸钠(mg/ml)	1.6
蔗糖(mg/ml)	11.2
		NaCl(mg/ml)	0.56
pH值	6.0
		装量(ml/支)	1

2、含rhPTH(1-34)药用组合物冻干制剂的制备

采用与实施例1相同的冻干步骤制备得到冻干制剂F。

由于药物组合物F采用过少的稳定剂，使得其在制备冻干制剂F时粉末发生崩塌，使得冻干制剂F不成形，不符合临床用药质量控制的要求。

实施例2

复溶性检测

将冻干制剂A-E置于37℃下保存，并采用《中国药典》(2010)版附录26处的方法，用1.1ml注射用水分别溶解所述冻干制剂，检测其在加速储存实验过 程中完全溶解的时间(复溶时间)的变化情况，并观察溶解后溶液的外观及可见异物，所得结果如下表：

可知，冻干制剂A和B在37℃加速实验中复溶时间、溶液外观及可见异物方面均符合临床用药质量要求，且均无明显波动。在重复实验中发现，冻干制剂C和D也能达到与冻干制剂A和B同样的临床用药质量要求。

对于冻干制剂E，由于未使用本发明要求保护的稳定剂，使得制剂尽管在0天体现为无色澄清且无异物，但在加速试验1周后发现细小蛋白絮状物，并随加速试验的进行逐渐聚合为蛋白颗粒，不符合《中国药典》(2010年版)的相关规定。

实施例3

稳定性检测

将冻干制剂A和B置于37℃下保存，分别采用cAMP测定法、RP-HPLC法分别检测冻干制剂A和B在加速储存实验过程中生物学活性、rhPTH(1-34) 纯度及肽含量的变化，所得结果如下表：

实验结果表明，冻干制剂A和B在0天时rhPTH(1-34)纯度为98％以上，生物学活性也保持了较高水平，可知冻干工艺对rhPTH各项特性影响较小。

在随后的储存过程中，生物活性、rhPTH(1-34)纯度和含量波动较小，且均保持了相对较高的稳定性，符合临床用药质量要求。

将冻干制剂C和D在同样条件下进行稳定性实验，冻干制剂C和D能达到与冻干制剂A和B基本一致的稳定性实验结果。

综上可知，并本发明制备的rhPTH(1-34)冻干制剂具有良好的稳定性、生物学活性及复溶性，所得冻干制剂符合临床用药质量要求。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (12)

1.一种含有rhPTH(1-34)的药物组合物，所述药物组合物为溶液体系，其pH值为6～7，所述药物组合物包括治疗有效剂量的rhPTH(1-34)、稳定剂、氯化钠和可药用缓冲剂，其特征在于所述的稳定剂为蔗糖和甘露醇的组合物，所述稳定剂的浓度为20～50mg/ml。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于所述稳定剂中蔗糖浓度为10-20mg/ml，甘露醇浓度为10-30mg/ml。

3.根据权利要求2所述的药物组合物，其特征在于所述稳定剂中甘露醇浓度的为20mg/ml。

4.根据权利要求1-3任意一项所述的药物组合物，其特征在于所述治疗有效剂量的rhPTH(1-34)浓度为50～60μg/ml。

5.根据权利要求1-4任意一项所述的药物组合物，其特征在于所述治疗有效剂量的rhPTH(1-34)浓度为56.5μg/ml。

6.根据权利要求1-5任意一项所述的药物组合物，其特征在于所述可药用缓冲剂为磷酸氢二钠/磷酸二氢钠。

7.根据权利要求1-6任意一项所述的药物组合物，其特征在于所述可药用缓冲剂为0.20～0.45mg/ml磷酸氢二钠与0.25～1.20mg/ml磷酸二氢钠的组合。

8.根据权利要求1-7任意一项所述的药物组合物，其特征在于所述氯化钠在药物组合物中的浓度为0.50～1mg/ml。

9.根据权利要求1-8任意一项所述的rhPTH(1-34)的药用组合物在制备用于治疗和/或预防骨质疏松症的药物中的用途。

10.一种含有rhPTH(1-34)的冻干制剂，由权利要求1-8任意一项所述的rhPTH(1-34)的药用组合物制备得到。

11.一种如权利要求10所述rhPTH(1-34)的冻干制剂的制备方法，其特征在于所述制备方法包括如下步骤：

1)将rhPTH(1-34)蛋白原液加入到含有稳定剂、NaCl和可药用缓冲剂的混合溶液中，混匀；

2)采用盐酸或氢氧化钠溶液将体系pH值调节至6～7；

3)除菌、无菌分装；

4)冷冻干燥，即得所述冻干制剂。

12.一种如权利要求11所述rhPTH(1-34)的冻干制剂的制备方法，其特征在于所述步骤3)的除菌为过滤除菌；所述步骤4)中冷冻干燥的过程进一步包括：

a)预冻；

b)一次干燥；

c)二次干燥。

所述步骤a)中的预冻温度为：室温～-45℃，预冻时间为2～4h；所述步骤b)中一次干燥温度为：-40℃～-20℃，一次干燥时间为10～15h，真空度为：15～10Pa；

所述步骤c)中二次干燥温度为：-15℃～30℃，二次干燥时间为10～15h，真空度为10～2Pa。