CN106153953A - 一种用于检测血清样品中叶酸含量的叶酸释放剂 - Google Patents

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白仲虎
张芃芃
李昕
王军
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Abstract

本发明公开了一种用于检测血清样品中叶酸含量的叶酸释放剂，按照重量体积比计，包括：海藻糖0.3‑1.5％，2‑氯乙酰胺0.1‑1.5％，3‑[(2‑甲基‑2‑十一烷基‑1,3二氧戊环‑4基)甲氧基]‑1‑丙磺酸钠0.01‑1.0％，硼酸0.5‑7％，抗坏血酸0.5‑4.0％。本发明的叶酸释放剂能够提供叶酸合适的液体环境，保证叶酸结合蛋白的完全变性，同时在变性处理过程中叶酸的分子结构和构象保持完整性，使后续的检测结果更加准确。

Description

一种用于检测血清样品中叶酸含量的叶酸释放剂
技术领域
本发明属于体外诊断技术领域，具体涉及一种用于检测血清样品中叶酸含量的叶酸释放剂。
背景技术
叶酸(Folic acid)是广泛分布的一种水溶性B族维生素，其辅酶形式是四氢叶酸的一些衍生物，在一碳单位的代谢中起作用，由喋呤啶、对氨基苯甲酸和谷氨酸等组成的化合物，是米切尔(H.K.Mitchell，1941)从菠菜叶中提取纯化的，故而命名为叶酸，有促进骨髓中幼细胞成熟的作用，人类如缺乏叶酸可引起巨红细胞性贫血以及白细胞减少症，对孕妇尤其重要。
叶酸是人体在利用糖分和氨基酸时的必要物质，是机体细胞生长和繁殖所必需的物质，在体内叶酸以四氢叶酸的形式起作用，四氢叶酸在体内参与嘌呤核酸和嘧啶核苷酸的合成和转化。叶酸在制造核酸(核糖核酸、脱氧核糖核酸)上扮演重要的角色。叶酸帮助蛋白质的代谢，并与叶酸共同促进红细胞的生成和成熟，是制造红血球不可缺少的物质。叶酸也作为干酪乳杆菌(Lactobacilluscasei)及其它微生物的促进增殖因子而起作用，国外研究人员发现，叶酸可引起发癌细胞凋亡，对癌细胞的基因表达有一定影响，故属于一种天然抗癌维生素。
血清叶酸升高常见于肠盲袢综合征、恶性贫血或者是长期素食者叶酸可引起升高。血清叶酸降低多见于巨幼细胞性贫血、溶血性贫血、酒精中毒或正常妊娠时血清叶酸也会降低，骨髓增生性疾病叶酸也会降低。
目前，测定叶酸的免疫学方法有放射性免疫法(RIA)、酶联免疫法(ELISA)、化学发光免疫分析等，例如RIA存在放射性污染、标记物半衰期短、对操作者具有放射性损伤，且操作繁琐，时间长等缺点；而ELISA灵敏度低，检测范围窄。化学发光免疫分析技术具有较高的检测灵敏度和准确性，但是如何将血清样品中的叶酸从结合蛋白中完全释放以获得准确的检测结果仍然是一项技术难题。
发明内容
本发明的发明人提供了一种用于检测血清样品中叶酸含量的叶酸释放剂，能够提供叶酸合适的液体环境，保证叶酸结合蛋白的完全变性，同时在变性处理过程中叶酸的分子结构和构象保持完整性，使后续的检测结果更加准确。
因此，本发明的第一个目的在于提供一种用于检测血清样品中叶酸含量的叶酸释放剂。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：
一种用于检测血清样品中叶酸含量的叶酸释放剂，按照重量体积比计，包括：
海藻糖 0.3-1.5％
2-氯乙酰胺 0.1-1.5％
3-[(2-甲基-2-十一烷基-1,3二氧戊环-4基)甲氧基]-1-丙磺酸钠 0.01-1.0％
硼酸 0.5-7％
抗坏血酸 0.5-4.0％。
根据本发明的优选实施例，按照重量体积比计，所述用于检测血清样品中叶酸含量的叶酸释放剂包括：
海藻糖 0.8％
2-氯乙酰胺 0.49％
3-[(2-甲基-2-十一烷基-1,3二氧戊环-4基)甲氧基]-1-丙磺酸钠 0.1％
硼酸 2.97％
抗坏血酸 2.0％。
根据本发明，所述用于检测血清样品中叶酸含量的叶酸释放剂的制备方法，包括如下步骤：按照所述配比，分别称取海藻糖、2-氯乙酰胺、3-[(2-甲基-2-十一烷基-1,3二氧戊环-4基)甲氧基]-1-丙磺酸钠、硼酸和抗坏血酸，然后将所述组分分别溶解于水中，定容。
本发明的有益效果：本发明的叶酸释放剂能够提供叶酸合适的液体环境，保证叶酸结合蛋白的完全变性，同时在变性处理过程中叶酸的分子结构和构象保持完整性，使后续的检测结果更加准确。
附图说明
图1为采用不同方法检测血清样品中叶酸浓度的结果，其中，1代表本发明的叶酸释放剂与放射性免疫试剂检测结果对照；2代表现有的叶酸释放剂与放射性免疫试剂检测结果对照；3代表普通样品稀释液与放射性免疫试剂检测结果对照。
具体实施方式
以下结合具体实施例，对本发明做进一步说明。应理解，以下实施例仅用于说明本发明而非用于限制本发明的范围。
以下实施例中，除特别注明外，所使用的原料均市售可得。
实施例1、制备
按照重量体积比计，本实施例的叶酸释放剂的组分及配比如下：
海藻糖 0.8％
2-氯乙酰胺 0.49％
3-[(2-甲基-2-十一烷基-1,3二氧戊环-4基)甲氧基]-1-丙磺酸钠 0.1％
硼酸 2.97％
抗坏血酸 2.0％。
按照上述配比，分别称取海藻糖、2-氯乙酰胺、3-[(2-甲基-2-十一烷基-1,3二氧戊环-4基)甲氧基]-1-丙磺酸钠、硼酸和抗坏血酸，然后将上述组分分别溶解于水中，定容。
实施例2、检测
取110份临床血清样品，按照以下方法对血清样品中的叶酸浓度进行检测：
实施例2：取200μl血清样品，加入100μl实施例1中制备的叶酸释放剂，室温反应15min，取50μl使用化学发光检测试剂盒(来源自盐城拜明生物技术有限公司)进行检测；
阳性对照：取50μl血清样品，使用FA放射性免疫试剂盒(来源自瑞士帝肯公司)进行检测；
对比例1：取200μl血清样品，加入100μl现有的叶酸释放剂(来源自深圳市新产业生物医学工程股份有限公司)，室温反应15min，取50μl使用化学发光检测试剂盒(来源自盐城拜明生物技术有限公司)进行检测；
对比例2：取200μl血清样品，加入100μl普通样品稀释液(0.01M pH7.2的PBS缓冲液)，使用化学发光检测试剂盒(来源自盐城拜明生物技术有限公司)直接进行检测。
结果如表1和图1所示。
表1 (单位：ng/ml)
表1和图1的结果表明，以放射性免疫检测方法的检测结果作为阳性对照，采用本发明的叶酸释放剂的检测结果的直线方程为y＝1.041x+0.167，相关系数为R2＝0.960，采用现有的叶酸释放剂的检测结果的直线方程为y＝0.642x+0.137，相关系数为R2＝0.945，而不采用叶酸释放剂处理的检测结果的直线方程为y＝0.030x+0.950，相关系数为R2＝0.090。说明采用本发明的叶酸释放剂处理后的样品与阳性对照具有较好的一致性，相较于现有的叶酸释放剂处理能够提供更为准确的检测结果，能够很好地应用于血清样品的叶酸检测，具有广泛的应用前景。

Claims (3)

1.一种用于检测血清样品中叶酸含量的叶酸释放剂，其特征在于，按照重量体积比计，包括：
2.如权利要求1所述的用于检测血清样品中叶酸含量的叶酸释放剂，其特征在于，按照重量体积比计，包括：
3.如权利要求1或2所述的用于检测血清样品中叶酸含量的叶酸释放剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：按照所述配比，分别称取海藻糖、2-氯乙酰胺、3-[(2-甲基-2-十一烷基-1,3二氧戊环-4基)甲氧基]-1-丙磺酸钠、硼酸和抗坏血酸，然后将所述组分分别溶解于水中，定容。
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