CN106153947A - 一种尿蛋白快速检测试剂及其制备方法和应用 - Google Patents

一种尿蛋白快速检测试剂及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种尿蛋白快速检测试剂及其制备方法和应用，该制备方法包括：聚丙烯酸钠与水按照90‑95∶5‑10重量份配制，两者总重量为100份，得到高分子吸水颗粒；将蛋白指示剂溶解于pH7.4±0.2的磷酸二氢钠缓冲液中，得到蛋白指示剂缓冲溶液；将所述的高分子吸水颗粒与蛋白指示剂缓冲溶液混合，使高分子吸水颗粒膨胀成直径为20mm±2mm的高分子吸水珠，即得尿蛋白快速检测试剂。本发明的所述尿蛋白快速检测试剂制备方法简单，得到的尿蛋白快速检测试剂具有特异性高，敏感性强，可检测微量白蛋白，且具有检测快速、准确的优点。

Description

一种尿蛋白快速检测试剂及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于医学检测领域，具体是涉及一种尿蛋白快速检测试剂及其制备方法和应用。
背景技术
我国有包括肾病综合征在内的在治疗肾病患者约7000万人，蛋白定量检测是重要的治疗检测指标。尿蛋白测定是肾脏疾病诊断的基础，检测方法包括定性、定量。目前应用较广的尿蛋白定性方法包括磺基水杨酸法、加热乙酸法、干化学试带法。尿蛋白定量测定是肾脏病不可缺少的检查方法，所得的结果是：总尿蛋白。目前常用的方法有，浊度法、染料结合法、化学比色法。但是，这些方法多需要医院检验科、专科实验室、第三方检测中心等专业资质机构才能操作完成。其中，干化学试带法操作简单，也可以利用肉眼观察试带颜色的变化与标准板时行比较，得出相应的数值。80年代，由于计算机技术的高度发展和广泛使用，尿液自动化分析仪也得到迅速发展，逐步由原来的半自动化发展到现在全自动化。但是普通患者以及患者家属却难以实现，或者容易造成错误判断，而且阴性结果可能漏检本周氏蛋白和微量白蛋白。因此，有必要研发一种快速、准确、且方便的尿蛋白检测方法或者试剂。
发明内容
针对上述问题，本发明需要解决的技术问题是提供一种尿蛋白快速检测试剂的制备方法以及得到的尿蛋白快速检测试剂。该尿蛋白快速检测试剂具有特异性高，敏感性强，可检测微量白蛋白，且具有检测快速准确的优点。
解决上述技术问题的技术方案如下。
一种尿蛋白快速检测试剂的制备方法，包括以下步骤：
A.聚丙烯酸钠与水按照90-95∶5-10重量份配制，两者总重量为100份，得到高分子吸水颗粒；
B.配置pH7.4±0.2的磷酸二氢钠缓冲液，将蛋白指示剂溶解于pH7.4±0.2的磷酸二氢钠缓冲液中，得到0.1-1.5g/L的蛋白指示剂缓冲溶液；所述蛋白指示剂为遇到蛋白质能发生颜色改变的无机试剂；
C.将步骤A中所述的高分子吸水颗粒与蛋白指示剂缓冲溶液按混合，使高分子吸水颗粒膨胀成直径为20mm±2mm的高分子吸水珠，即得尿蛋白快速检测试剂。
优选地，所述聚丙烯酸钠与水按照92：8的重量份配制。
优选地，所述蛋白指示剂为四溴酚蓝。
优选地，高分子吸水颗粒与蛋白指示剂缓冲溶液的重量之比为28：9298。
优选地，聚丙烯酸钠的分子量为100万-5000万。
按照上述方法得到的尿蛋白快速检测试剂。
本发明需要解决的另一技术问题是提供上述尿蛋白快速检测试剂的应用。
解决上述技术问题的技术方案如下。
上述尿蛋白快速检测试剂在制备检测尿蛋白的试剂盒中的应用。
本发明的主要有益效果如下。
1、尿蛋白分析是筛检肾脏疾病的重要手段，但传统尿蛋白检测敏感星低，很难筛检出糖尿病、高血压等疾病引起的早起肾脏改变。本发明用聚丙烯酸钠作为载体，吸附溶有蛋白质指示剂例如四溴酚蓝的缓冲液，使之具有稳定的pH值和足够大的表面积。蛋白质存在与否，可使指示剂改变颜色。例如，构成蛋白质的a氨基酸的氨基可与四溴酚蓝分子中的羟基置换，而使四溴酚蓝由绿色变为黄色，变色越深表示蛋白质含量越高。本发明通过大量实验，优化得到的尿蛋白快速检测试剂，制备方法简单。得到的尿蛋白快速检测试剂具有特异性高，敏感性强，可检测微量白蛋白，且具有检测快速、准确的优点。
2、通过本发明的尿蛋白快速检测试剂，尿蛋白阳性患者可以少去或者不去医院化验检测就可以动态观察治疗效果，安全、方便并且释放了医疗资源。
3、本发明所述尿蛋白快速检测试剂可以作为民众的肾脏功能普查监测项目，及早发现、及时治疗、减少医疗费用。
具体实施方式
为了便于理解本发明，下面将对本发明进行更全面的描述。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。
首先，本发明提供一种尿蛋白快速检测试剂的制备方法，该方法包括将聚丙烯酸钠与水按照90-95∶5-10重量份配制，最优选两者的重量比为92：8，且两者的两者总重量为100份，得到高分子吸水颗粒；配置pH7.4±0.2的磷酸二氢钠缓冲液，将蛋白指示剂溶解于pH7.4±0.2的磷酸二氢钠缓冲液中，得到0.1-1.5g/L的蛋白指示剂缓冲溶液(其浓度更优选为0.1-0.5g/L)，所述蛋白指示剂为遇到蛋白质能发生颜色改变的无机试剂，蛋白质存在与否，可使该指示剂改变颜色。本实施例优选为四溴酚蓝，例如，构成蛋白质的a氨基酸的氨基可与四溴酚蓝分子中的羟基置换，而使四溴酚蓝由绿色变为黄色，变色越深表示蛋白质含量越高。最后将上述步骤中的高分子吸水颗粒与蛋白指示剂缓冲溶液按混合，使高分子吸水颗粒膨胀成直径为 20mm±2mm的高分子吸水珠，即得尿蛋白快速检测试剂。
其次，本发明所述尿蛋白快速检测试剂可用于检测尿蛋白实验，指示尿液中是否有蛋白存在的试剂，能半定量显示蛋白浓度，并以不同颜色指示。将20mm±2mm的高分子吸水珠(尿蛋白快速检测试剂)一粒投放在新鲜尿液中，高分子吸水珠在尿液中膨胀到直径30mm左右，颜色将显示为绿、黄、红三种颜色。绿色为表示正常，黄色为异常，指示进医院确诊，红色为危险，指示马上入院治疗。以此直观的表达尿蛋白正常、异常、危险三种状况，尤其是便于非专业人士观察判断。该尿蛋白快速检测试剂不仅能测出尿液中是否含有蛋白成分，根据其设计原理，还能方便地区分其蛋白含量是正常范围、异常范围、危险范围。
聚丙烯酸钠，英文名Sodium polyacry late，缩写PAAS或简称PAA-Na、分子质量大的可为固体。国体的商品为白色粉末或颗粒，无灵无味，遇水膨胀，吸湿性极强。具有亲水和疏水篆团的高分子化合物。缓慢溶于水成无色透明弹性胶体形成极粘稠的透明液体，由于分子内许多阴离子基团的离子现象使分子链增长，表现粘度增大而形成高粘性溶液。其粘度约为CMC(羧甲基纤维素)、海藻酸钠的1至20倍。聚丙烯酸钠经强热至300度不分解，久存粘度变化极小，不易腐败。本发明所用的聚丙烯酸钠购买于山东济南华迪工贸有限公司，其分子量为100万-5000万。
以下将结合具体实施例对本发明做进一步说明。
实施例1
本实施例所述的尿蛋白快速检测试剂的制备方法，包括以下步骤：
1)聚丙烯酸钠与水按照92：8重量份配制，两者总重量为100份，得到高分子吸水颗粒；
2)配置pH7.4的磷酸二氢钠缓冲液，将蛋白指示剂(四溴酚蓝)溶解于pH7.4的磷酸二氢钠缓冲液中，得到0.5g/L蛋白指示剂缓冲溶液；所述pH7.4的缓冲液的配制如下：A液：0.2mol/L磷酸二氢钠水溶液磷酸二氢钠(NaH2PO·H2O)27.6g，溶于蒸馏水1，000ml中；B液：0.2mol/L磷酸氢二钠水溶液磷酸氢二钠(Na2HPO4·7H2O)53.6g，加蒸馏水到1,000ml完全溶解；A液19ml，B液8lml加蒸馏水至200ml，即得pH7.4的磷酸二氢钠缓冲液；
3)将步骤1)中所述的高分子吸水颗粒与蛋白指示剂缓冲溶液按5∶95的重量比混合，使高分子吸水颗粒膨胀成直径为20mm±2mm的高分子吸水珠，即得尿蛋白快速检测试剂。
实施例2
本实施例所述的尿蛋白快速检测试剂的制备方法，包括以下步骤：
1)聚丙烯酸钠与水按照94：6重量份配制，两者总重量为100份，得到高分子吸水颗粒；
2)配置pH7.4±0.1的磷酸二氢钠缓冲液，将蛋白指示剂(四溴酚蓝)溶解于pH7.4的磷酸二氢钠缓冲液中，得到1-1.5g/L蛋白指示剂缓冲溶液；所述pH7.4的缓冲液的配制如实施例1；
3)将步骤1)中所述的高分子吸水颗粒与蛋白指示剂缓冲溶液按6-8∶94-92的重量比混合，两者的量为100重量份，使高分子吸水颗粒膨胀成直径为20mm±2mm的高分子吸水珠，即得尿蛋白快速检测试剂。
实施例3
本实施例所述的尿蛋白快速检测试剂的制备方法，包括以下步骤：
1)聚丙烯酸钠与水按照93∶7重量份配制，两者总重量为100份，得到高分子吸水颗粒；
2)配置pH7.4±0.1的磷酸二氢钠缓冲液，将蛋白指示剂(四溴酚蓝)溶解于pH7.4的磷酸二氢钠缓冲液中，得到0.1-0.4g/L蛋白指示剂缓冲溶液；所述pH7.4的缓冲液的配制如实施例1；
3)将步骤1)中所述的高分子吸水颗粒与蛋白指示剂缓冲溶液按2-4∶96-98的重量比混合，两者的量为100重量份，使高分子吸水颗粒膨胀成直径为20mm±2mm的高分子吸水珠，即得尿蛋白快速检测试剂。
使用时将实施例1-3所述的尿蛋白快速检测试剂一粒投放在新鲜尿液中，高分子吸水珠在尿液中膨胀到直径30mm左右，颜色将显示为绿、黄、红三种颜色。绿色为指示正常，黄色为异常，指示进医院确诊，红色为危险，指示马上入院治疗。以此直观的表达尿中蛋白含量正常、异常、危险三种状况。
实施例4：使用实施例1所述的尿蛋白快速检测试剂的进行检测
为了验证其检验方法的特异性和敏感性，以特定蛋白分析仪上白蛋白检测作为真阳性和真阴性标准，计算本方法的灵敏度、特异性、阳性预期值、阴性预期值结果如下：一、标本来源：南方医院肾内科住院的疑似糖尿病肾病患者尿液标本89例，其中男51例，女38例，年龄39-65岁，平均年龄50.2±8.5岁。所有患者均符合WHO规定的2型糖尿病诊断标准。
二、方法
1.本发明方法：将实施例1所述的尿蛋白快速检测试剂放入待测标本中，观察其颜色变化：呈绿色为阴性(-)，黄绿色为弱阳性(±)，黄色为阳性(+)，红色为强阳性(++)。
2.干化学试纸法：采用希森美康UF500尿液分析仪及配套试剂(尿10项试纸)，按操作规程检测。
3.特种蛋白仪定量法(免疫比浊法)：采用芬兰QuikeRead仪器及配套试剂和质控，保证质控在控前提下，定量检测白蛋白。
三、步骤
1.比较以上三种方法的灵敏度：配制不同浓度的人血清白蛋白溶液(购自江西博雅生物制药股份有限公司)，浓度分别为10、20、40、80、160、320mg/L，用以上三种方法对其检测， 比较灵敏度。
2.本发明方法性能评价：分别用特种蛋白仪定量法(免疫比浊法)和快速法测定89例患者尿微量白蛋白，定量法以尿微量白蛋白＜20mg/L为阴性，＞20mg/L为阳性。对测定结果进行数据分析。
四、数据分析
以特定蛋白仪定量法测定尿微量白蛋白结果作为真阴性和真阳性标准。敏感性＝真阳性/(真阳性+假阴性)，特异性＝真阴性/(真阴性+假阳性)，阳性预测值＝真阳性/(真阳性+假阳性)，阴性预测值＝真阴性/(真阴性+假阴性)。
五、结果
1.灵敏度比较：见表1。
表1 三种方法测定人血清白蛋白结果
本发明方法的灵敏度可达20mg/L，高于干化学试纸法。
2.用特种蛋白仪定量法测定89例尿微量白蛋白，有48例阳性，41例阴性。而用本发明方法测定这48例阳性标本，结果44例阳性，4例阴性；测定41例阴性标本，结果为35例阴性，6例阳性。见表2。
表2 本发明方法和特种蛋白仪测定89例尿微量白蛋白结果
以特定蛋白仪定量法测定尿微量白蛋白结果作为真阴性和真阳性标准，本发明方法灵敏度为91.67％，特异性为85.36％，阴性预测值为89.74％，阳性预测值为88％。
用实施例2和3所述的尿蛋白快速检测试剂，进行以上同样的验证其在蛋白质检测方 法的特异性和敏感性实验，实验结果大致相同，其灵敏度为89％一92％，特异性为81％一86％，阴性预测值为89±2％，阳性预测值为88±2％。
本发明所述尿蛋白快速检测试剂具有灵敏度高，特异性强的优点，且简便易行，适用于尿微量白蛋白的筛选，可满足了肾脏病早期损害筛检实验的要求。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (9)

1.一种尿蛋白快速检测试剂的制备方法，其特征是，包括以下步骤：
A.聚丙烯酸钠与水按照90-95∶5-10重量份配制，两者总重量为100份，得到高分子吸水颗粒；
B.配置pH7.4±0.2的磷酸二氢钠缓冲液，将蛋白指示剂溶解于pH7.4±0.2的磷酸二氢钠缓冲液中，得到蛋白指示剂缓冲溶液；所述蛋白指示剂为遇到蛋白质能发生颜色改变的无机试剂；
C.将步骤A中所述的高分子吸水颗粒与蛋白指示剂缓冲溶液混合，使高分子吸水颗粒膨胀成直径为20mm±2mm的高分子吸水珠，即得尿蛋白快速检测试剂。
2.根据权利要求1所述的尿蛋白快速检测试剂的制备方法，其特征是，所述蛋白指示剂为四溴酚蓝。
3.根据权利要求1所述的尿蛋白快速检测试剂的制备方法，其特征是，所述聚丙烯酸钠的分子量为100万-5000万。
4.根据权利要求1所述的尿蛋白快速检测试剂的制备方法，其特征是，所述蛋白指示剂缓冲溶液中，蛋白指示剂的浓度为0.1-1.5g/L。
5.根据权利要求4所述的尿蛋白快速检测试剂的制备方法，其特征是，所述蛋白指示剂缓冲溶液中，蛋白指示剂的浓度为0.1-0.5g/L。
6.根据权利要求1-5任一项所述的尿蛋白快速检测试剂的制备方法，其特征是，步骤C中，高分子吸水颗粒与蛋白指示剂缓冲溶液的重量之比为2-8∶92-98。
7.根据权利要求1-5任一项所述的尿蛋白快速检测试剂的制备方法，其特征是，所述聚丙烯酸钠与水按照92∶8的重量份配制。
8.根据权利要求1-7任一项所述的制备方法得到的尿蛋白快速检测试剂。
9.权利要求7所述的尿蛋白快速检测试剂在制备检测尿蛋白的试剂盒中的应用。
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Patentee after: ZHUJIANG HOSPITAL, SOUTHERN MEDICAL University

Address before: Room A704, 7th Floor, Building A, Qilin Building, 13-35 Panfu Road, Yuexiu District, Guangzhou City, Guangdong Province, 510013, China

Patentee before: GUANGZHOU JIEJIAN BIOTECHNOLOGY DEVELOPMENT CO.,LTD.

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