CN106137786B

CN106137786B - 一种透明质酸抗衰组合物及其制备方法和应用

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Publication number: CN106137786B
Application number: CN201610629387.6A
Authority: CN
Inventors: 冯宁; 黄思玲; 申凤同; 石艳丽; 郭学平
Original assignee: HUNAN YUJIA COSMETICS MANUFACTURING Co Ltd; BLOOMAGE FREDA BIOPHARM Co Ltd
Current assignee: Huaxi Biotechnology Co., Ltd.; HUNAN YUJIA COSMETICS MANUFACTURING CO., LTD.
Priority date: 2016-08-02
Filing date: 2016-08-02
Publication date: 2018-09-18
Anticipated expiration: 2036-08-02
Also published as: CN106137786A

Abstract

本发明公开了一种具有抗衰老功效的透明质酸组合物及其制备和应用。所述组合物含有一种水解透明质酸或其盐和两种重均分子量的透明质酸或其盐。经过皮肤水分含量、皮肤弹性和皱纹深度等多项测试，最终确定具有显著抗衰功效的最佳配比。其中水解透明质酸或其盐在组合物所占重量比为60%~62%；低分子量透明质酸或其盐在组合物中的重量比为18%~20%；高分子量透明质酸或其盐在组合物中的重量比为18%~20%。该组合物具有立体保湿、清除自由基、细胞修复、恢复皮肤弹性等抗衰老作用，可用于所有形式的化妆品和清洁产品中。

Description

一种透明质酸抗衰组合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及透明质酸及其衍生物技术领域，特别涉及一种透明质酸抗衰组合物，还涉及所述透明质酸抗衰组合物的制备方法及其应用。

背景技术

皮肤老化表现为皮肤体积和弹性的损失。皮肤体积损失是由于皮肤HA缺失而引起胶原等皮肤填充物失水硬化而导致的；而由于皮肤体积的损失导致皮肤变得粗糙、失去弹性、出现皱纹。因此，透明质酸对于皮肤的健康年轻至关重要。

透明质酸(hyaluronic acid，HA)是一种酸性黏多糖，由N-乙酰氨基葡糖和D-葡糖醛酸双糖重复单位构成的无分支高分子糖胺聚糖，存在于动物组织细胞间质和某些细菌的荚膜中。透明质酸广泛用于医药、化妆品、食品等领域，分子量一般为10⁵－10⁷Da(道尔顿)。众所周知，HA是天然保湿因子，分子量高的HA具有保水保湿、成膜、润滑的优良性能。低分子量HA因其相对分子质量较小，外用时可被皮肤更好的吸收，促进皮肤营养的供给和废物***，从而防止皮肤老化，达到深层保湿和美容养颜的效果，而且还可促进表皮细胞的增殖和分化，清除氧自由基，修复日光或紫外线伤害的皮肤。

现有技术中亦有不少用于防止皮肤老化，清除氧自由基的透明质酸组合物，如下：CN 105233270A公开了一种用于水光治疗的药物组合物，是由高、中、低、寡聚4种分子量的透明质酸及胶原蛋白、表皮生长因子和辅剂组成的凝胶。4种分子量分别为1300～2000kDa，500～1000kDa，50～300kDa，3～8kDa，它们在凝胶中的最优含量分别为0.1％～0.2％、0.1％～0.2％、0.1％～0.5％、0.2％～0.6％。对比文件组合物还含有胶原蛋白、表皮生长因子两种众所周知的抗衰老活性成分。通过面部注射来改善干燥、细纹、老化等皮肤问题。对比文件通过注射将透明质酸、胶原蛋白和表皮生长因子直接输送到皮肤内(水光注射的深度通常在真皮层)，对于皮肤干燥、细纹、老化等皮肤问题的改善，一定程度上来源于注射填充的作用，通过扩充皮肤容积，及直接补充胶原蛋白和生长因子，从而使得皮肤胶原蛋白含量显著增加，并通过生长因子对细胞的增殖作用，达到对抗皮肤老化的效果。

充分利用透明质酸本身的性能，研制出一种具有很好抗衰效果的单纯的透明质酸组合物，对透明质酸性能的充分利用和行业的发展，都具有更深远的意义。

发明内容

为了解决以上现有技术中透明质酸在抗衰中的性能发挥不够充分的问题，本申请公开一种立体保湿、清除自由基、细胞修复、恢复皮肤弹性等抗衰老作用显著的透明质酸抗衰组合物。

本发明的另一个目的是提供所述透明质酸抗衰组合物的制备方法。

本发明的再一个目的是提供所述透明质酸抗衰组合物的应用。

本发明是通过以下步骤得到的：

一种透明质酸抗衰组合物，原料重量百分含量如下：

分子量为3～8kDa的水解透明质酸或其盐60％～62％，分子量为300～500kDa的透明质酸或其盐18％～20％，分子量为1000～1200kDa的透明质酸或其盐18％～20％。

所述的透明质酸抗衰组合物，原料重量百分含量如下：

分子量为7kDa的水解透明质酸或其盐60％～62％，分子量为320kDa的透明质酸或其盐18％～20％，分子量为1100kDa的透明质酸或其盐18％～20％。

所述的透明质酸抗衰组合物，原料重量百分含量如下：

分子量为7kDa的水解透明质酸或其盐62％，分子量为320kDa的透明质酸或其盐18％，分子量为1100kDa的透明质酸或其盐20％。

所述的透明质酸抗衰组合物，所述的水解透明质酸或其盐为以芽孢杆菌A50CGMCCNO.5744发酵培养得到的芽孢杆菌透明质酸酶对透明质酸或其盐进行降解得到的酶切寡聚透明质酸或其盐。

寡聚透明质酸是指分子量小于10kDa的透明质酸。研究表明，分子量对透明质酸的活性有很大影响。寡聚透明质酸能渗入真皮，提高皮肤的持久保湿效果，同时具有轻微扩张毛细血管，增加血液循环、改善中间代谢、促进皮肤营养吸收作用，还具有较强的消皱功能，可增加皮肤弹性，延缓皮肤衰老。此外，寡聚透明质酸盐分子中的羟基、羧基和其他极性基团可与水分子形成氢键而结合大量的水分，保水效果明显，因此寡聚透明质酸盐可用于防晒、抗衰老、保湿化妆品中。

酶切寡聚透明质酸即水解透明质酸，为华熙福瑞达生物医药公司自主研发并生产的HA产品，采用微生物发酵得到的透明质酸酶对高分子量透明质酸或其盐进行降解，酶活高、条件温和、操作简单、无环境污染；并且得到的酶切寡聚透明质酸或其盐结构完整。与其他厂家化学法生产的寡聚透明质酸相比，酶切寡聚透明质酸具有透皮吸收性好、纯度高、无细胞毒性、抗氧化能力强等优点。另外，试验证实，酶切寡聚透明质酸还具有清除自由基、修复晒后细胞、防晒以及促血管生成等作用，可用在化妆品、食品及医药领域，前景广阔。

但是，针对皮肤老化，保持及改善皮肤水分、营养皮肤、清除皮肤自由基及改善皮肤弹性都是极为重要的，只有酶切寡聚透明质酸并不能完全达到此目的。所以，本领域迫切需要一种组合物能够达到保持及改善皮肤水分、营养皮肤、清除皮肤自由基、修复损伤细胞及改善皮肤弹性的抗衰老效用。

所述的透明质酸盐或水解透明质酸盐为透明质酸或水解透明质酸的钠盐、钾盐、镁盐、钙盐或锌盐。

所述的透明质酸抗衰组合物的制备方法：将两种分子量的透明质酸或其盐和水解透明质酸或其盐按照重量比混合，搅拌均匀，即得。

所述的透明质酸抗衰组合物在制备抗衰老产品中的应用。

所述抗衰老为保湿、清除自由基、细胞修复、恢复皮肤弹性。

所述抗衰老产品为柔肤水、精华液、啫喱、乳液、膏霜、面膜、彩妆、香皂、洗面奶或沐浴露。

本发明的有益效果：

1)透明质酸抗衰组合物含有水解透明质酸或其盐和透明质酸或其盐，将不同分子量透明质酸或其盐与水解透明质酸或其盐(即酶切寡聚透明质酸或其盐)组合，既具有高分子HA皮肤防护、天然保湿的本质效用，又具有中分子HA易吸收、营养皮肤的特性，另具有酶切寡聚透明质酸透皮吸收、清除自由基、细胞修复、抗衰老等生物活性，可透皮吸收，并具有立体保湿、清除自由基、修复损伤细胞和恢复皮肤弹性的抗衰老效用；

2)充分利用不同分子量段HA的不同的护肤作用，经过皮肤水分含量、皮肤弹性和皱纹深度等多项测试，最终确定了具有显著抗衰功效的最佳配比，充分挖掘透明质酸的抗衰功效，为透明质酸制品研制提供了更多的可能性。

附图说明

图1皮肤水分增加量测定结果，

图2皮肤水分流失降低量测定结果，

图3皱纹平均深度测试结果，

图4在使用实施例2组合物前和使用后8周的原始照片，

图5为在使用实施例2组合物前的3D照片，

图6为在使用实施例2组合物后的3D照片。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行进一步说明：

实施例1：

精确称量水解透明质酸钠(酶切寡聚透明质酸钠，商品名为HA)6.0kg，分子量5.4kDa；透明质酸钠Ⅰ2.0kg，分子量480kDa；透明质酸钠Ⅱ2.0kg，分子量1050kDa；分别投入双锥回转真空干燥机，开启机器，旋转混合1小时。混匀后的产品装入已灭菌的包装材料内(瓶装、袋装、铝塑装等)。以上操作均在洁净车间进行。

实施例2：

精确称量水解透明质酸钠(酶切寡聚透明质酸钠，商品名为HA)6.2kg，分子量7.0kDa；透明质酸钠Ⅰ1.8kg，分子量320kDa；透明质酸钠Ⅱ2.0kg，分子量1100kDa；分别投入双锥回转真空干燥机，开启机器，旋转混合1小时。混匀后的产品装入已灭菌的包装材料内(瓶装、袋装、铝塑装等)。以上操作均在洁净车间进行。

实施例3：

精确称量水解透明质酸钠(酶切寡聚透明质酸钠，商品名为HA)6.2kg，分子量8.5kDa；透明质酸钠Ⅰ2.0kg，分子量230kDa；透明质酸钠Ⅱ1.8kg，分子量1500kDa；分别投入双锥回转真空干燥机，开启机器，旋转混合1小时。混匀后的产品装入已灭菌的包装材料内(瓶装、袋装、铝塑装等)。以上操作均在洁净车间进行。

实施例4：

精确称量水解透明质酸钠(酶切寡聚透明质酸钠，商品名为HA)6.2kg，分子量3.5kDa；透明质酸钠Ⅰ1.9kg，分子量120kDa；透明质酸钠Ⅱ1.9kg，分子量1010kDa；分别投入双锥回转真空干燥机，开启机器，旋转混合1小时。混匀后的产品装入已灭菌的包装材料内(瓶装、袋装、铝塑装等)。以上操作均在洁净车间进行。

实施例5：

精确称量水解透明质酸钠(酶切寡聚透明质酸钠，商品名为HA)6.1kg，分子量9.5kDa；透明质酸钠Ⅰ1.9kg，分子量580kDa；透明质酸钠Ⅱ2.0kg，分子量1760kDa；分别投入双锥回转真空干燥机，开启机器，旋转混合1小时。混匀后的产品装入已灭菌的包装材料内(瓶装、袋装、铝塑装等)。以上操作均在洁净车间进行。

对比例1：

精确称量水解透明质酸钠(酶切寡聚透明质酸钠，商品名为HA)2.0kg，分子量7.0kDa；透明质酸钠Ⅰ2.0kg，分子量320kDa；透明质酸钠Ⅱ6.0kg，分子量1100kDa；分别投入双锥回转真空干燥机，开启机器，旋转混合1小时。混匀后的产品装入已灭菌的包装材料内(瓶装、袋装、铝塑装等)。以上操作均在洁净车间进行。

对比例2：

精确称量水解透明质酸钠(酶切寡聚透明质酸钠，商品名为HA)8.0kg，分子量7.0kDa；透明质酸钠Ⅰ1.0kg，分子量320kDa；透明质酸钠Ⅱ1.0kg，分子量1100kDa；分别投入双锥回转真空干燥机，开启机器，旋转混合1小时。混匀后的产品装入已灭菌的包装材料内(瓶装、袋装、铝塑装等)。以上操作均在洁净车间进行。

对比例3：

精确称量水解透明质酸钠(酶切寡聚透明质酸钠，商品名为HA)5.0kg，分子量7.0kDa；透明质酸钠Ⅰ2.5kg，分子量320kDa；透明质酸钠Ⅱ2.5kg，分子量1100kDa；分别投入双锥回转真空干燥机，开启机器，旋转混合1小时。混匀后的产品装入已灭菌的包装材料内(瓶装、袋装、铝塑装等)。以上操作均在洁净车间进行。

对比例4

精确称量水解透明质酸钠(酶切寡聚透明质酸钠，商品名为HA)5.8kg，分子量7.0kDa；透明质酸钠Ⅰ2.1kg，分子量320kDa；透明质酸钠Ⅱ2.1kg，分子量1100kDa；分别投入双锥回转真空干燥机，开启机器，旋转混合1小时。混匀后的产品装入已灭菌的包装材料内(瓶装、袋装、铝塑装等)。以上操作均在洁净车间进行。

对比例5：

精确称量水解透明质酸钠(酶切寡聚透明质酸钠，商品名为HA)6.7kg，分子量7.0kDa；透明质酸钠Ⅰ1.6kg，分子量320kDa；透明质酸钠Ⅱ1.7kg，分子量1100kDa；分别投入双锥回转真空干燥机，开启机器，旋转混合1小时。混匀后的产品装入已灭菌的包装材料内(瓶装、袋装、铝塑装等)。以上操作均在洁净车间进行

对比例6：

精确称量水解透明质酸钠(酶切寡聚透明质酸钠，商品名为HA)6.0kg，分子量8.5kDa；透明质酸钠Ⅰ2.0kg，分子量900kDa；透明质酸钠Ⅱ2.0kg，分子量2000kDa；分别投入双锥回转真空干燥机，开启机器，旋转混合1小时。混匀后的产品装入已灭菌的包装材料内(瓶装、袋装、铝塑装等)。以上操作均在洁净车间进行。

对比例7：

精确称量透明质酸钠Ⅰ5.0kg，分子量240kDa；透明质酸钠Ⅱ5.0kg，分子量1150kDa；分别投入双锥回转真空干燥机，开启机器，旋转混合1小时。混匀后的产品装入已灭菌的包装材料内(瓶装、袋装、铝塑装等)。以上操作均在洁净车间进行。

试验例1：透明质酸组合物的保湿功效

以化妆品乳液基础配方做为对照组，加入0.2％透明质酸组合物的样品作为实验组，通过测定涂抹后皮肤水分含量与皮肤水分流失量来比较样品间保湿效果的差异。

1、乳液基础配方制备工艺

表1 乳液基础配方

注：A相为油相，B相为水相

1)首先A相加入油相罐，加热至70-75℃，搅拌至完全熔解备用。

2)B相加入乳化罐，升温至80-85℃，用7把8分散均匀，再加入罐中，保温，搅拌至完全溶解。

3)A相加入B相，混匀后开均质2分钟。然后加入C相，搅拌均匀。降温至40-45℃之间加入D相，混合均匀，38-40℃出料。

2、试验方法：

受试者年龄为22－55岁，共12人。在左右手前臂内侧标记4×4cm²试验区域，按3mg样品/cm²的用量，将试样均匀涂布于试验区内。分别使用皮肤水分测试仪CorneometerCM825(Courage+Khazaka公司，德国)和皮肤水分流失测试仪TewanmeterTM300(Courage+Khazaka公司，德国)测量涂抹前及涂抹后1h、2h、4h、6h时受试区域和空白对照区域的皮肤含水量和皮肤水分流失量。同一个志愿者的测试由同一个测量人员完成。前后测定时测定部位和室内温度湿度保持一致。

3、计算方法：

4、测试结果：

人体皮肤水分测试结果如图1和图2所示。

从图1、图2可知，各实施例组皮肤水分含量比对比例组明显提高，水分流失量情况也明显改善。各实施例相比，实施例1～2优于实施例3～5。因此，透明质酸组合物能够在短时间内提高皮肤的水分含量，同时皮肤屏障也能维持较好的状态，保水保湿的效果好。

试验例2：透明质酸组合物自由基清除能力研究

分别精密量取0.1mM DPPH(2-甲基-2,3-二氢-5,6-二苯基吡嗪)乙醇溶液5.0mL和0.5％各实施例与比较例样品溶液5.0mL置具塞试管中，混匀。以等体积的水与95％乙醇混合溶液为空白对照。室温放置30分钟，于523nm处分别测定溶液吸光度值。自由基清除剂的能力越强，吸光度越小。

透明质酸组合物的清除自由基能力的实验结果见表2。

表2 透明质酸组合物的清除自由基能力

实施例1、2、4的自由基清除率明显高于各对比例，因此，透明质酸组合物具有较好的清除自由基的能力，从而对皮肤起到和抗氧化的作用，延缓皮肤衰老。

试验例3：透明质酸组合物对皮肤弹性的影响

按照试验例1中的方法配制实施例样品和比较例样品。

皮肤弹性测试方法：每个样品招募受试者10人，样品涂抹在面颊部处，轻轻按摩至全部吸收。每天早晚各一次，持续8周。分别于涂抹前及涂抹后2周、4周、8周用皮肤弹性测定仪MPA580(Courage+Khazaka公司，德国)测定面颊部位(苹果肌)的弹性变化状况。测试两次，求平均值。

常用弹性指数有以下三种：

粗弹性：R2＝Ua/Uf；

净弹性：R5＝Ur/Ue；

生物弹性：R7＝Ur/Uf；

结果：涂抹8周后皮肤弹性的测定结果见表3。

表3 含透明质酸组合物涂抹8周后对皮肤弹性的影响

从表3可以看出，与对比例相比，连续使用8周后，本发明实施例样品可以明显提高皮肤的弹性，恢复皮肤弹力。

试验例4：透明质酸组合物对皮肤皱纹的影响

按照试验例1中的方法配制实施例2样品、对比例4和对比例5样品。

测试方法：每个样品招募受试者10人，样品涂抹在眼角处，每天早晚各一次，持续8周。分别在使用后2周、4周、8周用人体皮肤快速三维成像***(Primos)对受试者右眼角皱纹深度进行评估。

评价方法：

a通过拍摄涂抹前后照片进行评价

b用三维快速成像***对皱纹深度进行评价

从图3可以看出，与对比例相比，连续使用8周后，使用本发明实施例2样品的受试者，其眼角皱纹深度明显减轻。图4是其中一名使用实施例2样品的受试者眼角照片，使用8周后，从原始照片上其皱纹改善情况肉眼可见，从3D照片(图5、6)可以看出皱纹沟壑明显减少。

因此，综合以上功效实验数据可以表明，本发明透明质酸组合物充分利用了不同分子量段HA的不同的护肤作用，通过对自由基的清除作用，及对皮肤水分、弹性和皱纹等多方面的改善，从而表现出显著的抗衰老效果。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受实施例的限制，其它任何未背离本发明的精神实质与原理下所做的改变、修饰、组合、替代、简化均应为等效替换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种透明质酸抗衰组合物，其特征在于原料重量百分含量如下：

分子量为7 kDa的水解透明质酸或其盐60%~62%，分子量为320 kDa的透明质酸或其盐18%~20%，分子量为1100 kDa的透明质酸或其盐18%~20%。

2.根据权利要求1所述的透明质酸抗衰组合物，其特征在于原料重量百分含量如下：

分子量为7 kDa的水解透明质酸或其盐62%，分子量为320 kDa的透明质酸或其盐18%，分子量为1100 kDa的透明质酸或其盐20%。

3.根据权利要求1所述的透明质酸抗衰组合物，其特征在于所述的水解透明质酸或其盐为以芽孢杆菌A50CGMCC NO.5744 发酵培养得到的芽孢杆菌透明质酸酶对透明质酸或其盐进行降解得到的酶切寡聚透明质酸或其盐。

4.根据权利要求1所述的透明质酸抗衰组合物，其特征在于所述的透明质酸盐或水解透明质酸盐为透明质酸或水解透明质酸的钠盐、钾盐、镁盐、钙盐或锌盐。

5.一种权利要求1~4中任一项所述的透明质酸抗衰组合物的制备方法，其特征在于将两种分子量的透明质酸或其盐和水解透明质酸或其盐按照重量比混合，搅拌均匀，即得。

6.一种权利要求1~4中任一项所述的透明质酸抗衰组合物在制备抗衰老产品中的应用。

7.一种权利要求5所述的制备方法得到的透明质酸抗衰组合物在制备抗衰老产品中的应用。

8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于所述抗衰老为保湿、清除自由基、细胞修复、恢复皮肤弹性。

9.根据权利要求6所述的应用，其特征在于所述抗衰老产品为柔肤水、精华液、啫喱、乳液、膏霜、面膜、彩妆、香皂、洗面奶或沐浴露。