CN106093233A

CN106093233A - 埃索美拉唑钠冻干粉针剂中异构体含量的测定方法

Info

Publication number: CN106093233A
Application number: CN201610392514.5A
Authority: CN
Inventors: 李勇; 付国琴; 陈学明; 尹博; 潘俊锋; 刘建; 袁建成
Original assignee: GANSU CHENGJI BIOPHARMACEUTICAL CO Ltd
Current assignee: GANSU CHENGJI BIOPHARMACEUTICAL CO Ltd
Priority date: 2016-06-06
Filing date: 2016-06-06
Publication date: 2016-11-09

Abstract

本发明公开了一种测定埃索美拉唑冻干粉针剂中异构体含量的高效液相色谱法，其中使用多糖衍生物类手性色谱柱进行检测；所用流动相为由C₃‑C₈直链烷烃、异丙醇、无水乙醇组成的三元混合物体系；流速为0.2‑2.0ml/min；检测波长为302nm；柱温为20‑40℃。该方法具有灵敏度高、适用样品浓度较大、重复性好、成本较低的优点。

Description

埃索美拉唑钠冻干粉针剂中异构体含量的测定方法

技术领域

本发明涉及一种检测埃索美拉唑异构体含量的方法，具体涉及一种用于测定埃索美拉唑钠冻干粉针剂中异构体含量的液相色谱法。

背景技术

埃索美拉唑钠是奥美拉唑的S-旋光异构体的钠盐，是全球首个异构体质子泵抑制剂(PPI),通过特异性抑制胃壁细胞质子泵减少胃酸分泌。经大量临床实验和药物研究证实:其维持胃内pH>4的时间更长,抑酸效率更高,疗效优于前两代PPI，个体差异小。作为新一代PPI,现已广泛应用于临床治疗诸多酸相关疾病。

埃索美拉唑钠英文名称：Esomeprazolesodium。分子式：C₁₇H₁₈N₃NaO₃S，分子量为367.41，CAS号：161796-78-7，为白色粉末。化学式为5-甲氧基-2-((S)-((4-甲氧基-3,5-二甲基-2-吡啶基)甲基)亚磺酰基-1H-苯并咪唑钠。埃索美拉唑钠异构体为白色粉末，化学式为5-甲氧基-2-((R)-((4-甲氧基-3,5-二甲基-2-吡啶基)甲基)亚磺酰基-1H-苯并咪唑钠。埃索美拉唑异构体的分子结构式如下：

由于在合成埃索美拉唑钠过程中能够产生异构体，因此为了提高埃索美拉唑钠原料及冻干粉针剂的质量，降低临床用药的风险，亟需在目前检测方法的基础上开发一种灵敏度更高的检测埃索美拉唑异构体的液相色谱法，以快速、简便、高效的检测埃索美拉唑钠原料及冻干粉针剂中异构体的含量。

目前在美国药典(USP35)中有检测埃索美拉唑镁异构体的高效液相色谱法，用α1酸糖蛋白为固定相的色谱柱(100mm×4.0mm)，流动相为磷酸缓冲盐-乙腈(V:V＝15:85)，检测波长为302nm；流速0.6ml/min，供试品溶液浓度为0.03mg/ml。经试验，此法分离度较好，但α1酸糖蛋白色谱柱的适用样品浓度较低(不大于0.1mg/ml)，使得供试品浓度较低，导致此法的检测范围受到限制。同时，美国药典规定的方法本身的灵敏度非常有限，达不到更高的产品质量控制要求。另外，所用色谱柱使用α1酸糖蛋白为固定相，蛋白填料寿命较短，成本较高。

因此亟需建立一种灵敏度高、适用样品浓度较大、稳定性好、成本较低的检测方法，为埃索美拉唑钠原料及冻干粉针剂质量提高提供依据。

发明内容

本发明提供了一种测定埃索美拉唑钠原料及冻干粉针剂中异构体含量的液相色谱法。该方法在分离度和理论塔板数均符合《中国药典》2015年版的要求的前提下，具有下述优点：灵敏度高、适用样品浓度较大、重复性好、成本较低。

本发明中使用液相色谱法测定埃索美拉唑钠原料及冻干粉针剂中异构体含量的方法包括：

使用多糖衍生物类手性色谱柱进行检测；其中所用流动相为由C₃-C₈直链烷烃、异丙醇、无水乙醇组成的三元混合物体系；流速为0.2-2.0ml/min；检测波长为302nm；柱温为20-40℃。

其中：

所述三元混合物体系的流动相中，基于流动相的总体积100％计，异丙醇的体积百分比在50％至85％范围内，优选60％至70％，最优选65％。如果异丙醇的体积百分比大于85％，则流动相会因为异丙醇的粘度大而为粘稠状，流动性小，不利于进行液相色谱分离。如果异丙醇的体积百分比小于50％，则主峰埃索美拉唑的理论塔板数达不到《中国药典》(2015年版)中规定的要求。

流动相中C₃-C₈直链烷烃、异丙醇、无水乙醇的体积比优选25-35:60-70:4-6，最优选30:65:5。

C₃-C₈直链烷烃应理解为意指含有3至8个碳原子的正烷烃，例如正丙烷、正丁烷、正戊烷、正己烷、正庚烷、正辛烷。所述C₃-C₈直链烷烃可选自上述提到的任意一种，优选正己烷。

所述多糖衍生物类手性色谱柱应理解为意指采用在硅胶表面上有纤维素衍生物类、直链淀粉类的硅胶作为手性固定相的手性色谱柱；所述纤维素衍生物类的实例为，例如纤维素-三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)、纤维素-三(4-甲基苯甲酸酯)、纤维素-三(4-甲苯基氨基甲酸酯)；所述直链淀粉类的实例为，例如直链淀粉-三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)。在本发明方法中，手性色谱柱优选采用在硅胶表面上有直链淀粉-三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)的硅胶作为手性固定相的手性色谱柱，例如市售的DAICEL CHIRALCEL AD-H。

所述流速优选0.5-1.5ml/min，更优选0.6-1.2ml/min，最优选0.8ml/min。

所述手性色谱柱的柱温优选为25-38℃，最优选35℃。

在本发明方法中，所检测的供试品溶液可为每1毫升含埃索美拉唑钠1mg的溶液，大于美国药典(USP35)中所采用的CHIRAL-AGP色谱柱的适用样品浓度0.1mg/ml；此外，对于测定埃索美拉唑异构体的含量而言，本发明方法的定量限浓度(0.016ug/ml)为美国药典(USP35)的检测方法中的定量限浓度(0.05ug/ml)的1/3倍。由此表明本发明方法与美国药典(USP35)的检测方法相比，本发明测定方法能够检测更低的定量限浓度且可适用于更大的样品浓度，可以测定更低的异构体含量，灵敏性更好。

附图说明

图1为实施例1中的***适用性溶液的液相色谱图。

图2为实施例2中的检测灵敏度的溶液的液相色谱图。

图3为实施例3中的供试品溶液的液相色谱图。

图4为图3的放大图。

图5为对比实施例1中美国药典(USP35)中检测方法的***适用性溶液的液相色谱图。

图6为对比实施例2中的供试品溶液的液相色谱图。

具体实施方式

本发明所述的测定方法按照以下步骤进行：

1)精密称取埃索美拉唑钠冻干粉适量，加适量无水乙醇溶解并定量稀释制成每1毫升含埃索美拉唑钠0.2-2.0mg的溶液，优选每1毫升含埃索美拉唑钠1.0mg的溶液，作为供试品溶液；

2)精密称取奥美拉唑对照品适量，加适量无水乙醇溶解并定量稀释制成每1毫升含奥美拉唑0.0005-0.05mg的溶液，优选每1毫升含奥美拉唑0.01mg的溶液作为***适用性溶液；

3)取***适用性溶液10-30μl(优选20μl)直接注入液相色谱仪，记录色谱图；

4)在***适用性溶液色谱图中埃索美拉唑峰和埃索美拉唑异构体峰的分离度和理论塔板数均符合要求的情况下，取供试品溶液10-30μl(优选20μl)直接注入液相色谱仪，记录色谱图；

其中色谱条件为：

色谱柱：多糖衍生物类手性色谱柱，优选采用在硅胶表面上有直链淀粉-三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)的硅胶作为手性固定相的手性色谱柱，例如市售的DAICELCHIRALCEL AD-H。

流动相：正己烷:异丙醇:无水乙醇的体积比优选25-35:60-70:4-6，最优选30:65:5；

检测波长：302nm；

流速：优选0.5-1.5ml/min，更优选0.6-1.2ml/min，最优选0.8ml/min；

柱温：优选为25-38℃，最优选35℃。

在计算时，奥美拉唑对照品折算为50％的埃索美拉唑和50％的埃索美拉唑异构体。埃索美拉唑异构体的含量按照面积归一法计算得到，基于埃索美拉唑和埃索美拉唑异构体的峰面积之和为100％计。分离度和理论塔板数通过高效液相色谱仪给出。

以下将参照附图结合实施例对本发明作进一步说明，旨在用于说明本发明而非限定本发明。

原料与仪器

埃索美拉唑钠冻干粉针：甘肃成纪生物药业有限公司。

奥美拉唑对照品：中国食品药品检定研究院。

高效液相色谱仪：型号Waters e2695。

实施例1：***适用性试验

色谱条件如下：

手性色谱柱：DAICEL CHIRALCEL AD-H(250mm×4.6mm，5um)；

流动相：正己烷:异丙醇:无水乙醇(体积比为30:65:5)；

检测波长：302nm；

流速：0.8ml/min；

柱温：35℃。

精密称取奥美拉唑对照品适量，加适量无水乙醇溶解并定量稀释制成每1毫升含奥美拉唑0.01mg的溶液，作为***适用性溶液。取***适用性溶液20μl，直接注入液相色谱仪，记录色谱图(图1)，结果示于表1中。

表1：

上述分离度和理论塔板数均符合《中国药典》2015年版要求(分离度≥1.5；理论塔板数≥2000)。

实施例2：灵敏度试验

采用实施例1的色谱条件。

精密称取奥美拉唑对照品适量，加适量无水乙醇溶解并定量稀释制成每1毫升含奥美拉唑0.5ug的溶液，作为检测灵敏度的溶液。取该溶液20μl，直接注入液相色谱仪，记录色谱图，如图2所示。

结果：

埃索美拉唑峰和埃索美拉唑异构体峰的信噪比(S/N)分别为152和156。(见图2)。计算时，奥美拉唑对照品折算为50％的埃索美拉唑和50％的埃索美拉唑异构体，即埃索美拉唑和埃索美拉唑异构体的浓度均为0.25ug/ml。

推算埃索美拉唑异构体的检测限(S/N＝3)浓度和定量限(S/N＝10)浓度：

检测限浓度：0.25ug/ml÷156×3＝0.005ug/ml

定量限浓度：0.25ug/ml÷156×10＝0.016ug/ml

实施例3：样品检测

采用实例1的色谱条件。

分别称取埃索美拉唑钠冻干粉27.16mg、27.25mg，精密称定，分别置25ml量瓶中，加无水乙醇适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每1毫升含埃索美拉唑钠1mg的溶液，作为供试品溶液。

在***适用性溶液色谱图中埃索美拉唑峰和埃索美拉唑异构体峰分离度和埃索美拉唑峰的理论塔板数符合要求的情况下，取供试品溶液20μl，直接注入液相色谱仪，记录色谱图，如图3和图4所示。

结果：

按面积归一法计算埃索美拉唑异构体的含量，基于埃索美拉唑和埃索美拉唑异构体的峰面积之和为100％计。结果显示，两份供试品溶液中埃索美拉唑异构体含量分别为0.008％和0.007％，埃索美拉唑钠冻干粉针中埃索美拉唑异构体含量的平均值为0.0075％。

对比实施例1：

美国药典(USP35)中埃索美拉唑异构体检测方法的***适用性试验。

色谱条件：

色谱柱：CHIRAL-AGP(100mm×4.0mm)(色谱柱分类:L41)；

流动相：乙腈-磷酸盐缓冲液(V:V＝75:425)

检测波长：302nm；

流速：0.6ml/min

进样量：20ul

磷酸盐缓冲液：量取1mol/L磷酸二氢钠70ml和0.5mol/L磷酸氢二钠20ml，加水稀释至1000ml，摇匀，量取250ml，加水稀释至1000ml，摇匀，即得。

稀释剂：量取0.25mol/L磷酸钠11ml和0.5mol/L磷酸氢二钠22ml，加水稀释至1000ml，摇匀，即得。

取奥美拉唑对照品2mg，置10ml量瓶中，加稀释剂使溶解并稀释至刻度，摇匀，再精密量取1ml，置50ml量瓶中，加稀释剂使溶解并稀释至刻度，摇匀，即制成每1毫升含奥美拉唑0.004mg的溶液。取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图(图5)，结果示于表2中。

表2：

灵敏度：埃索美拉唑峰和埃索美拉唑异构体的信噪比(S/N)分别为205和402。计算时，奥美拉唑对照品折算为50％的埃索美拉唑和50％的埃索美拉唑异构体，即埃索美拉唑和埃索美拉唑异构体的浓度均为0.002mg/ml。

推算埃索美拉唑异构体的检测限浓度和定量限浓度：

检测限浓度：0.002mg/ml÷402×3＝0.015ug/ml

定量限浓度：0.002mg/ml÷402×10＝0.05ug/ml

由此可见，该方法的定量限浓度(0.05ug/ml)约为本发明方法的定量限浓度(0.016ug/ml)的3倍，表明本发明方法的灵敏性更高。

对比实施例2：

美国药典(USP35)中埃索美拉唑异构体检测方法检测冻干粉针。

采用对比实施例1的色谱条件。

分别称取埃索美拉唑钠冻干粉40.04mg、40.17mg，精密称定，分别置25ml量瓶中，加甲醇5ml使溶解，再加稀释剂(对比实施例1)稀释至刻度，摇匀；再精密量取1ml，置50ml量瓶中，加稀释剂(对比实施例1)稀释至刻度，摇匀，制成每1毫升含埃索美拉唑钠0.03mg的溶液，作为供试品溶液。由图6所示，两份供试品溶液中均未检出埃索美拉唑异构体。

由此可见，就美国药典(USP35)检测方法中的色谱体系而言，埃索美拉唑异构体的定量限浓度为0.05ug/ml，其相当于对比实施例2中的供试品溶液浓度(0.03mg/ml)的0.17％，即在该供试品浓度下，所能检测到的埃索美拉唑异构体的含量的最小限度为0.17％(该数值仅刚好接近美国药典(USP35)中规定的埃索美拉唑异构体限度0.2％的要求)。与之相比，就本发明的检测方法中的色谱体系而言，埃索美拉唑异构体的定量限浓度(0.016ug/ml)相当于实施例3中的供试品溶液浓度(1.0mg/ml)的0.0016％，即在该供试品浓度下，所能检测到的埃索美拉唑异构体的含量的最小限度为0.0016％；并且由实施例3可见，已测得埃索美拉唑钠冻干粉中埃索美拉唑异构体含量的平均值为0.0075％，表明本发明方法可以用于测定异构体含量更低的样品。

实施例4：回收率和重复性试验

采用实施例1的色谱条件。

分别称取奥美拉唑对照品20.18mg、20.24mg，精密称定，分别置20ml量瓶中，加无水乙醇适量使溶解并稀释至刻度，摇匀；再精密量取1ml，分别置100ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液；

分别取埃索美拉唑钠冻干粉26.75mg、27.04mg、26.87mg、26.92mg、27.11mg、27.20mg,分别置25ml量瓶中；再精密量取0.5ml的上述的任意一种奥美拉唑对照品溶液6份，分别加入上述25ml量瓶中，加无水乙醇适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

在***适用性试验符合要求的情况下，取对照品溶液、供试品溶液20μl，直接注入液相色谱仪进行分析。

任取上述一份供试品溶液重复进样6次，所测得的6个结果(埃索美拉唑异构体含量)的RSD为0.52％。对上述6份供试品溶液进行检测，通过计算得埃索美拉唑异构体的回收率分别为99.2％、98.9％、99.8％、99.9％、98.7％、99.5％，RSD为0.49％。均符合《中国药典》2015年版要求(RSD≤2％)。(计算时，奥美拉唑对照品折算为50％的埃索美拉唑和50％的埃索美拉唑异构体。)

由此表明，本发明的高效液相色谱法具有准确度高、重复性好的优点。

应当指出，对于本技术人员而言，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也同样落入本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种测定埃索美拉唑钠冻干粉针剂中异构体含量的高效液相色谱法，其中：

使用多糖衍生物类手性色谱柱进行检测；所用流动相为由C₃-C₈直链烷烃、异丙醇、无水乙醇组成的三元混合物体系；流速为0.2-2.0ml/min；检测波长为302nm；柱温为20-40℃。

2.根据权利要求1所述的测定方法，其中流动相中异丙醇的体积百分比在50％至85％范围内，优选60％至70％，最优选65％，基于流动相的总体积为100％计。

3.根据权利要求1所述的测定方法，其中流动相中C₃-C₈直链烷烃、异丙醇、无水乙醇的体积比为25-35:60-70:4-6，优选30:65:5。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的测定方法，其中所述C₃-C₈直链烷烃选自下述的任意一种：正丙烷、正丁烷、正戊烷、正己烷、正庚烷、正辛烷；优选正己烷。

5.根据权利要求1所述的测定方法，其中多糖衍生物类手性色谱柱为采用在硅胶表面上有纤维素衍生物类、直链淀粉类的硅胶作为手性固定相的手性色谱柱；所述纤维素衍生物类选自纤维素-三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)、纤维素-三(4-甲基苯甲酸酯)、纤维素-三(4-甲苯基氨基甲酸酯)中的任意一种；所述直链淀粉类为直链淀粉-三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)。

6.根据权利要求5所述的测定方法，其中多糖衍生物类手性色谱柱为采用在硅胶表面上有直链淀粉-三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)的硅胶作为手性固定相的手性色谱柱。

7.根据权利要求1所述的测定方法，其中流速为0.5-1.5ml/min，更优选0.6-1.2ml/min，最优选0.8ml/min。

8.根据权利要求1所述的测定方法，其中手性色谱柱的柱温为35℃。