CN106029077A - 包含噻吩并***并二氮杂卓化合物的药物制剂 - Google Patents

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Abstract

一种治疗淋巴细胞性白血病、急性骨髓性白血病、BCR‑ABL阳性急性淋巴细胞性白血病或CD34阳性急性骨髓性白血病的方法，包括向患者施用药学可接受的量的组合物的步骤，该组合物包含由下式(1)表示的作为固体分散体的噻吩并***并二氮杂卓化合物、其可药用的盐、或其水合物；以及可药用的聚合物：其中X为卤素，R1为C1-C4烷基；R2为C1-C4烷基、a为1至4的整数；R3为C1-C4烷基、C1-C4羟烷基、C1-C4烷氧基、任选地具有取代基的苯基、或任选地具有取代基的杂芳基。在一个实施方案中，所述可药用的聚合物为HPMCAS。

Description

包含噻吩并***并二氮杂卓化合物的药物制剂
相关专利申请的交叉引用
本专利申请要求2013年8月1日提交的美国临时申请No.61/861,291、以及2013年8月7日提交的美国临时申请No.61/863,118的优先权，所有这些申请的全文均以引用的方式并入本文。
序列表
计算机可读的核苷酸/氨基酸序列表的全文通过引用的方式并入本文，该序列表与本文同时提交并且标识如下：于2014年7月22日创建的名为“filename.txt”的xxx字节的ASCII(Text)文件。
技术领域
在一些方面，本发明涉及药物组合物以及利用这些药物组合物治疗白血病的方法。更具体而言，本发明涉及含有噻吩并***并二氮杂卓(thienotriazolodiazepine)化合物的分散体的组合物以及治疗BCR-ABL阳性急性淋巴细胞性白血病和/或CD34阳性急性骨髓性白血病的方法，所述噻吩并***并二氮杂卓化合物具有改善的溶解度和生物利用度。
背景技术
下文所述的式(1)的化合物已经显示出可抑制乙酰化的组蛋白H4与包含串联的溴结构域(BRD)的转录调节子家族(称为BET(溴结构域和额外末端)蛋白质，包括BRD2、BRD3和BRD4)的结合。参见美国专利申请公开No.2010/0286127 A1，其全文以引用的方式并入本文。Denis,G.V.在文献“Bromodomain coactivators in cancer,obesity,type2diabetes,and inflammation,”Discov Med 2010；10:489-499(该文献的全部内容以引用方式并入本文)中报道了如下内容：BET蛋白质作为增殖和分化的主要的表观遗传调节子而出现，并且还与倾向于血脂异常或脂肪生成不当调节、心血管病和2型糖尿病的升高的炎症性质和风险、以及自体免疫疾病(例如类风湿性关节炎和***性红斑狼疮)的易感性增加有关。因此，式(II)所示的化合物可以用于治疗多种癌症、心血管疾病、2型糖尿病和自体免疫失调(例如类风湿性关节炎和***性红斑狼疮)。
下文所述的式(1)的噻吩并***并二氮杂卓化合物表现出与广泛施用和制备盖伦组合物有关的非常特有的困难，尤其包括药物生物利用度以及患者间和患者内的剂量应答的差异性的特定问题，由此迫切需要针对噻吩并***并二氮杂卓的几乎不溶于水的性质而开发非常规的剂型。
之前，如美国专利申请公开No.20090012064 A1中所报告(该文献的全部内容以引用方式并入本文)，已经发现式(1)的噻吩并***并二氮杂卓化合物可以使用载体丙烯酸乙酯-甲基丙烯酸甲酯-三甲基铵乙基甲基丙烯酸酯氯化物(trimethylammonioethylmethacrylate chloride)的共聚物(Eudragit RS，由Rohm公司生产)来配制，从而提供在下部肠道优先释放药物组分以用于治疗炎性肠病(例如溃疡性结肠炎和克罗恩病)的口服制剂。通过多种实验(包含动物测试)，发现就炎性肠病而言，与式(1)的噻吩并***并二氮杂卓化合物由胃肠道被吸收至循环中相比，式(1)的噻吩并***并二氮杂卓化合物在病变部位的释放及其对炎性病变的直接作用更为重要。但是，对于许多其他的病症而言，则要求将式(1)的噻吩并***并二氮杂卓化合物由胃肠道高度吸收至循环中。因此，需要可以使式(1)的噻吩并***并二氮杂卓化合物由胃肠道高度吸收至循环中的式(1)的噻吩并***并二氮杂卓化合物的制剂。
发明内容
在一个实施方案中，本发明提供了一种治疗急性淋巴细胞性白血病的方法，包括向患者施用药学可接受的量的组合物，该组合物包含噻吩并***并二氮杂卓化合物、或其可药用的盐、或其水合物或溶剂化物，所述噻吩并***并二氮杂卓化合物由下式(1)表示：
其中R1为具有1至4个碳的烷基；R2为氢原子、卤素原子、或任选地被卤素原子或羟基取代的具有1至4个碳的烷基；R3为卤素原子；任选地被卤素原子、具有1至4个碳的烷基、具有1至4个碳的烷氧基、或氰基取代的苯基；--NR5--(CH2)m--R6，其中R5为氢原子、或具有1至4个碳的烷基，m为0至4的整数，并且R6为任选地被卤素原子取代的苯基或吡啶基；或--NR7--CO--(CH2)n--R8，其中R7为氢原子或具有1至4个碳的烷基，n为0至2的整数，并且R8为任选地被卤素原子取代的苯基或吡啶基；并且R4为--(CH2)a--CO--NH--R9，其中a为1至4的整数，并且R9为具有1至4个碳的烷基；具有1至4个碳的羟烷基；具有1至4个碳的烷氧基；或任选地被具有1至4个碳的烷基、具有1至4个碳的烷氧基、氨基或羟基取代的苯基或吡啶基；或--(CH2)b--COOR10，其中b为1至4的整数，并且R10为具有1至4个碳的烷基；其中所述噻吩并***并二氮杂卓化合物形成含有无定形噻吩并***并二氮杂卓化合物以及可药用的聚合物的固体分散体，其中所述固体分散体展现出基本不存在与结晶的式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物有关的衍射线的X射线粉末衍射图案。在一个这样的实施方案中，所述可药用的聚合物为醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯，其中噻吩并***并二氮杂卓化合物与醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯(HPMCAS)的重量比为1:3至1:1。
在一个实施方案中，所述由式(1)表示的噻吩并***并二氮杂卓化合物独立地选自由以下化合物构成的组：(i)(S)-2-[4-(4-氯代苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]***并-[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基]-N-(4-羟苯基)乙酰胺或其二水合物；(ii)(S)-{4-(3'-氰基联苯-4-基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]***并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基}乙酸甲酯；(iii)(S)-{2,3,9-三甲基-4-(4-苯基氨基苯基)-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]***并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基}乙酸甲酯；以及(iv)(S)-{2,3,9-三甲基-4-[4-(3-苯基丙酰基氨基)苯基]-6H-噻吩并[3,2-f-][1,2,4]***并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基}乙酸甲酯。
在另一个实施方案中，所述噻吩并***并二氮杂卓化合物为(S)-2-(4-(4-氯代苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]***并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-N-(4-羟苯基)乙酰胺二水合物。
在又一个实施方案中，所述固体分散体表现出约130℃至约140℃的单一的玻璃化转变温度(Tg)拐点。
在一个实施方案中，本公开还提供了一种治疗急性骨髓性白血病的方法，包括向患者施用药学可接受的量的组合物的步骤，所述组合物包含噻吩并***并二氮杂卓化合物、或其可药用的盐、或其水合物或溶剂化物，所述噻吩并***并二氮杂卓化合物由下式(1)表示：
其中R1为具有1至4个碳的烷基；R2为氢原子、卤素原子、或任选地被卤素原子或羟基取代的具有1至4个碳的烷基；R3为卤素原子；任选地被卤素原子、具有1至4个碳的烷基、具有1至4个碳的烷氧基、或氰基取代的苯基；--NR5--(CH2)m--R6，其中R5为氢原子、或具有1至4个碳的烷基，m为0至4的整数，并且R6为任选地被卤素原子取代的苯基或吡啶基；或--NR7--CO--(CH2)n--R8，其中R7为氢原子或具有1至4个碳的烷基，n为0至2的整数，并且R8为任选地被卤素原子取代的苯基或吡啶基；并且R4为--(CH2)a--CO--NH--R9，其中a为1至4的整数，并且R9为具有1至4个碳的烷基；具有1至4个碳的羟烷基；具有1至4个碳的烷氧基；或任选地被具有1至4个碳的烷基、具有1至4个碳的烷氧基、氨基或羟基取代的苯基或吡啶基；或--(CH2)b--COOR10，其中b为1至4的整数，并且R10为具有1至4个碳的烷基；其中所述噻吩并***并二氮杂卓化合物形成含有无定形噻吩并***并二氮杂卓化合物以及可药用的聚合物的固体分散体，其中所述固体分散体展现出基本不存在与结晶的式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物有关的衍射线的X射线粉末衍射图案。在一个这样的实施方案中，所述可药用的聚合物为醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯，其中噻吩并***并二氮杂卓化合物与醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯(HPMCAS)的重量比为1:3至1:1。
在一个实施方案中，所述由式(1)表示的噻吩并***并二氮杂卓化合物独立地选自由以下化合物构成的组：(i)(S)-2-[4-(4-氯代苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]***并-[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基]-N-(4-羟苯基)乙酰胺或其二水合物；(ii)(S)-{4-(3'-氰基联苯-4-基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]***并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基}乙酸甲酯；(iii)(S)-{2,3,9-三甲基-4-(4-苯基氨基苯基)-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]***并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基}乙酸甲酯；以及(iv)(S)-{2,3,9-三甲基-4-[4-(3-苯基丙酰基氨基)苯基]-6H-噻吩并[3,2-f-][1,2,4]***并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基}乙酸甲酯。
在另一个实施方案中，所述噻吩并***并二氮杂卓化合物为(S)-2-(4-(4-氯代苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]***并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-N-(4-羟苯基)乙酰胺二水合物。
在一个实施方案中，所述固体分散体展现出基本不存在与结晶的式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物有关的衍射线的X射线粉末衍射图案。在又一个实施方案中，所述固体分散体表现出约130℃至约140℃的单一的玻璃化转变温度(Tg)拐点。
在一个方面，本发明提供了一种治疗BCR-ABL阳性急性淋巴细胞性白血病的方法，包括向患者施用药学可接受的量的组合物的步骤，所述组合物包含噻吩并***并二氮杂卓化合物。在所述治疗BCR-ABL阳性急性淋巴细胞性白血病的方法的一些优选的实施方案中，所述噻吩并***并二氮杂卓化合物由下式(1)的结构表示：
其中R1为具有1至4个碳的烷基；R2为氢原子、卤素原子、或任选地被卤素原子或羟基取代的具有1至4个碳的烷基；R3为卤素原子；任选地被卤素原子、具有1至4个碳的烷基、具有1至4个碳的烷氧基、或氰基取代的苯基；--NR5--(CH2)m--R6，其中R5为氢原子、或具有1至4个碳的烷基，m为0至4的整数，并且R6为任选地被卤素原子取代的苯基或吡啶基；或--NR7--CO--(CH2)n--R8，其中R7为氢原子或具有1至4个碳的烷基，n为0至2的整数，并且R8为任选地被卤素原子取代的苯基或吡啶基；并且R4为--(CH2)a--CO--NH--R9，其中a为1至4的整数，并且R9为具有1至4个碳的烷基；具有1至4个碳的羟烷基；具有1至4个碳的烷氧基；或任选地被具有1至4个碳的烷基、具有1至4个碳的烷氧基、氨基或羟基取代的苯基或吡啶基；或--(CH2)b--COOR10，其中b为1至4的整数，并且R10为具有1至4个碳的烷基。或其可药用的盐、或其水合物或溶剂化物。
在治疗BCR-ABL阳性急性淋巴细胞性白血病的方法的一些优选的实施方案中，所述由式(1)表示的噻吩并***并二氮杂卓化合物独立地选自由以下化合物构成的组：
(i)(S)-2-[4-(4-氯代苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]***并-[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基]-N-(4-羟苯基)乙酰胺或其二水合物；
(ii)(S)-{4-(3'-氰基联苯-4-基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]***并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基}乙酸甲酯；
(iii)(S)-{2,3,9-三甲基-4-(4-苯基氨基苯基)-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]***并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基}乙酸甲酯；以及
(iv)(S)-{2,3,9-三甲基-4-[4-(3-苯基丙酰基氨基)苯基]-6H-噻吩并[3,2-f-][1,2,4]***并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基}乙酸甲酯。
在治疗BCR-ABL阳性急性淋巴细胞性白血病的方法的一些优选的实施方案中，所述由式(1)表示的噻吩并***并二氮杂卓化合物为(S)-2-(4-(4-氯代苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]***并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-N-(4-羟苯基)乙酰胺二水合物。
在治疗BCR-ABL阳性急性淋巴细胞性白血病的方法的一些优选的实施方案中，所述由式(1)表示的噻吩并***并二氮杂卓化合物形成固体分散体，其中所述固体分散体包含无定形的式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物、和其可药用的盐、或其水合物；以及可药用的聚合物。
在治疗BCR-ABL阳性急性淋巴细胞性白血病的方法的一些优选的实施方案中，所述由式(1)表示的噻吩并***并二氮杂卓化合物形成固体分散体，其中所述固体分散体包含无定形的式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物、和其可药用的盐、或其水合物；以及可药用的聚合物，其中所述可药用的聚合物为醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯，其中噻吩并***并二氮杂卓化合物与醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯(HPMCAS)的重量比为1:3至1:1。
在治疗BCR-ABL阳性急性淋巴细胞性白血病的方法的一些优选的实施方案中，所述包含式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物的固体分散体表现出约130℃至约140℃的单一的玻璃化转变温度(Tg)拐点。在一个实施方案中，所述固体分散体展现出基本不存在与结晶的式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物有关的衍射线的X射线粉末衍射图案。
在另一方面，本发明提供了一种治疗CD34阳性急性骨髓性白血病的方法。在治疗CD34阳性急性骨髓性白血病的方法的一些示例性实施方案中，所述方法包括向患者施用药学可接受的量的包含噻吩并***并二氮杂卓化合物的组合物。在治疗CD34阳性急性骨髓性白血病的方法的一些优选的实施方案中，所述方法包括向患者施用药学可接受的量的组合物，该组合物包含：噻吩并***并二氮杂卓化合物、或其可药用的盐、或其水合物或溶剂化物，所述噻吩并***并二氮杂卓化合物具有式(1)所示的结构：
其中R1为具有1至4个碳的烷基；R2为氢原子、卤素原子、或任选地被卤素原子或羟基取代的具有1至4个碳的烷基；R3为卤素原子；任选地被卤素原子、具有1至4个碳的烷基、具有1至4个碳的烷氧基、或氰基取代的苯基；--NR5--(CH2)m--R6，其中R5为氢原子、或具有1至4个碳的烷基，m为0至4的整数，并且R6为任选地被卤素原子取代的苯基或吡啶基；或--NR7--CO--(CH2)n--R8，其中R7为氢原子或具有1至4个碳的烷基，n为0至2的整数，并且R8为任选地被卤素原子取代的苯基或吡啶基；并且R4为--(CH2)a--CO--NH--R9，其中a为1至4的整数，并且R9为具有1至4个碳的烷基；具有1至4个碳的羟烷基；具有1至4个碳的烷氧基；或任选地被具有1至4个碳的烷基、具有1至4个碳的烷氧基、氨基或羟基取代的苯基或吡啶基；或--(CH2)b--COOR10，其中b为1至4的整数，并且R10为具有1至4个碳的烷基。
在治疗CD34阳性急性骨髓性白血病的方法的一些优选的实施方案中，所述由式(1)表示的噻吩并***并二氮杂卓化合物独立地选自由以下化合物构成的组：
(i)(S)-2-[4-(4-氯代苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]***并-[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基]-N-(4-羟苯基)乙酰胺或其二水合物；
(ii)(S)-{4-(3'-氰基联苯-4-基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]***并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基}乙酸甲酯；
(iii)(S)-{2,3,9-三甲基-4-(4-苯基氨基苯基)-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]***并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基}乙酸甲酯；以及
(iv)(S)-{2,3,9-三甲基-4-[4-(3-苯基丙酰基氨基)苯基]-6H-噻吩并[3,2-f-][1,2,4]***并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基}乙酸甲酯。
在治疗CD34阳性急性骨髓性白血病的方法的一些优选的实施方案中，所述由式(1)表示的噻吩并***并二氮杂卓化合物为(S)-2-(4-(4-氯代苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]***并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-N-(4-羟苯基)乙酰胺二水合物。
在治疗CD34阳性急性骨髓性白血病的方法的一些优选的实施方案中，所述由式(1)表示的噻吩并***并二氮杂卓化合物形成固体分散体，其中所述固体分散体包含无定形的式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物、和其可药用的盐、或其水合物；以及可药用的聚合物。在一个实施方案中，所述固体分散体展现出基本不存在与结晶的式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物有关的衍射线的X射线粉末衍射图案。
在一些优选的实施方案中，治疗CD34阳性急性骨髓性白血病的方法包括向患者施用药学可接受的量的无定形的式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物、及其可药用的盐、或其水合物，其中式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物形成固体分散体，所述固体分散体包含无定形的式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物、及其可药用的盐、或其水合物；以及可药用的聚合物，并且其中所述可药用的聚合物为醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯，其中噻吩并***并二氮杂卓化合物与醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯(HPMCAS)的重量比为1:3至1:1。
在一些优选的实施方案中，治疗CD34阳性急性骨髓性白血病的方法包括向患者施用在可药用的聚合物中形成固体分散体形式的药学可接受的量的无定形的式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物、及其可药用的盐、或其水合物，其中所述固体分散体表现出约130℃至约140℃的单一的玻璃化转变温度(Tg)拐点。在一个实施方案中，所述固体分散体展现出基本不存在与结晶的式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物有关的衍射线的X射线粉末衍射图案。
附图说明
参照示例性实施方案的附图来阅读时，将会更好的理解前面的发明概述以及下面的对本发明的包含噻吩并***并二氮杂卓制剂的药物组合物和方法的实施方案的详述。但是，应该理解的是本发明不限于所示的精确设置和手段。
在附图中：
图1A示出了包含固体分散体的比较制剂的溶解情况，其中所述的固体分散体包含25％的化合物(1-1)和Eudragit L100-55。
图1B示出了包含固体分散体的比较制剂的溶解情况，其中所述的固体分散体包含50％的化合物(1-1)和Eudragit L100-55。
图1C示出了包含固体分散体的示例性制剂的溶解情况，其中所述的固体分散体包含25％的化合物(1-1)和聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。
图1D示出了包含固体分散体的示例性制剂的溶解情况，其中所述的固体分散体包含50％的化合物(1-1)和PVP。
图1E示出了包含固体分散体的示例性制剂的溶解情况，其中所述的固体分散体包含25％的化合物(1-1)和PVP-乙酸乙烯酯(PVP-VA)。
图1F示出了包含固体分散体的示例性制剂的溶解情况，其中所述的固体分散体包含50％的化合物(1-1)和和PVP-VA。
图1G示出了包含固体分散体的示例性制剂的溶解情况，其中所述的固体分散体包含25％的化合物(1-1)和醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯(HPMCAS-M)。
图1H示出了包含固体分散体的示例性制剂的溶解情况，其中所述的固体分散体包含50％的化合物(1-1)和HPMCAS-M。
图1I示出了包含固体分散体的示例性制剂的溶解情况，其中所述的固体分散体包含25％的化合物(1-1)和羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯(HPMCP-HP55)。
图1J示出了包含固体分散体的示例性制剂的溶解情况，其中所述的固体分散体包含50％的化合物(1-1)和HMCP-HP55。
图2A示出了示例性制剂的体内筛选结果，该示例性制剂包含25％化合物(1-1)和PVP的固体分散体。
图2B示出了示例性制剂的体内筛选结果，该示例性制剂包含25％化合物(1-1)和HPMCAS-M的固体分散体。
图2C示出了示例性制剂的体内筛选结果，该示例性制剂包含50％化合物(1-1)和HPMCAS-M的固体分散体。
图3示出了化合物(1-1)的固体分散体的X射线粉末衍射图谱。
图4A示出了在环境条件下平衡的25％化合物(1-1)和PVP的固体分散体的修正的差示扫描量热轨迹。
图4B示出了在环境条件下平衡的25％化合物(1-1)和HPMCAS-M的固体分散体的修正的差示扫描量热轨迹。
图4C示出了在环境条件下平衡的50％化合物(1-1)和HPMCAS-M的固体分散体的修正的差示扫描量热轨迹。
图5示出了25％化合物(1-1)和PVP或HPMCAS-M的固体分散体、以及50％化合物(1-1)和HPMCAS-MG的固体分散体的玻璃化转变温度(Tg)对相对湿度(RH)的图。
图6示出了在75％相对湿度下平衡的25％化合物(1-1)和PVP的固体分散体的修正的差示扫描量热轨迹。
图7A和7B示出了1mg/kg静脉定量给药后的化合物(1-1)(实心矩形)、3mg/kg口服定量给药的25％化合物(1-1):PVP(空心圆圈)、3mg/kg口服定量给药的25％化合物(1-1):HPMCAS-MG(空心三角形)和3mg/kg口服定量给药的50％化合物(1-1):HPMCAS-MG(空心倒三角)的血浆浓度对时间的曲线。插图描绘了在半对数标度上绘制的相同的数据。
图8A和8B示出了化合物(1-1)作为25％化合物(1-1):PVP(空心圆圈)、25％化合物(1-1):HPMCAS-MG(空心三角形)和50％化合物(1-1):HPMCAS-MG(空心倒三角)在3mg/kg口服定量给药后的血浆浓度对时间的曲线。插图描绘了在半对数标度上绘制的相同的数据。
图9示出了在稳定性测试时间为0时，化合物(1-1)在HPMCAS-MG中的固体分散体的X射线粉末衍射图谱。
图10示出了在40℃和75％相对湿度的环境下暴露1个月后，化合物(1-1)在HPMCAS-MG中的固体分散体的X射线粉末衍射图谱。
图11示出了在40℃和75％相对湿度的环境下暴露2个月后，化合物(1-1)在HPMCAS-MG中的固体分散体的X射线粉末衍射图谱。
图12示出了在40℃和75％相对湿度的环境下暴露3个月后，化合物(1-1)在HPMCAS-MG中的固体分散体的X射线粉末衍射图谱。
图13A-13C示出了化合物(1-1)对ALL细胞系(Jurkat、RS 4-11和TOM-1细胞)诱导的凋亡动力学，这些细胞在处理后的不同时间点收获。凋亡细胞定义为膜联蛋白V+具有或不具有PI吸收。X轴示出化合物(1-1)的剂量，Y轴示出凋亡细胞的百分比。示出了三个试验中的一个代表性试验。
图14A-14D示出了化合物(1-1)对AML细胞系(HL60、K562、KGl和KGla细胞)诱导的凋亡动力学，这些细胞在处理后的不同时间点收获。凋亡细胞定义为annexin V+具有或不具有PI吸收。X轴示出化合物(1-1)的剂量，Y轴示出凋亡细胞的百分比。示出了两个试验中的一个代表性试验。
图15A-15C示出了化合物(1-1)对ALL和AML细胞系诱导的细胞周期改变。(A)为未处理HL60和用100nM的化合物(1-1)处理24小时的细胞的流式细胞图谱的代表性柱状图。在细胞周期分析之前用PI孵育细胞。ALL(图15B)和AML(图15C)细胞系的细胞周期改变。X轴示出细胞系，并且Y轴示出细胞处于细胞周期时相的百分比。
图16示出了由较低剂量的化合物(1-1)诱导的凋亡。用10nM化合物(1-1)孵育KGl细胞。凋亡细胞定义为Snnexin V+具有或不具有PI吸收。示出了代表性点图(PI：FL2，Annexin V：FLl)。
图17A-17C示出了白血病细胞系和患者样品中的BRD基因表达。BRD2、BRD3和BRD4在白血病细胞系中的表达水平(图17A)，ALL(图17B)和AML(图17C)患者样品中的表达水平。X轴示出细胞系，Y轴示出相对于ABL的cDNA的量。通过利用磁珠的阳性选择(positiveselection)得到了CD34+细胞。
图18A和18B示出了通过化合物(1-1)处理，BRD蛋白和c-MYC的下调。从不同的ALL和AML细胞系得到细胞裂解物和cDNA提取物。通过免疫印迹(图18A)和QT-PCR(图17B)研究蛋白质和cDNA水平。
图19A-19D示出了用化合物(1-1)处理后BRD2、BRD3和BRD4的cDNA动力学。从不同的ALL和AML细胞系得到cDNA提取物。通过QT-PCR研究表达水平。
图20示出了化合物(1-1)对原发性细胞(primary cell)的影响。通过用抗体标记的磁珠的阳性选择得到CD34+和CD34-脐血细胞、以及AML细胞。用不同剂量的化合物(1-1)处理细胞并在24小时后收获细胞。Y轴示出了具有或不具有PI吸收的Annexin V。
图21A-21T示出了短暂暴露于10nM和100nM浓度的化合物(1-1)96小时后，对ALL细胞系(Jurkat和RS 4-11)以及AML细胞系(HL60和K562)凋亡的流式细胞分析。
图22A-22L示出了短暂暴露于0nM、1nM和10nM浓度的化合物(1-1)后，对AML细胞系HL60的凋亡的流式细胞分析。
图23A、23B和23C示出了图22A-22L中的HL60细胞系的凋亡。
图24A和24B示出了HL60和K562细胞系的凋亡。
图25A和25B示出了KG1和KG1a细胞系的凋亡。
图26A和26B示出了Jurkat和RS4-11细胞系的凋亡。
图27示出了TOM1细胞系的凋亡。
图28为从Jurkat细胞系洗去药物后的凋亡图。
图29A和29B为从HL60和K562细胞洗去药物后的凋亡图。
图30A和30B为从Jurkat和RS4-11细胞洗去药物后的凋亡图。
图31A和31B示出了在三种ALL细胞系(Jurkat、RS 4-11、TOM-1)和四种AML细胞系(HL60、K562、KG1和KG1a)中的MTT检验。
图32A-32C示出了用化合物(1-1)处理后，AML患者的凋亡情况。
图33A-33G示出了AML患者的凋亡情况。
图34A和34B示出了AML患者的凋亡情况。
图35示出了用化合物(1-1)处理后，在AML和ALL细胞系中的c-MYC动力学。
图36示出了用化合物(1-1)处理后，在AML和ALL细胞系中的BRD4动力学。
图37示出了用化合物(1-1)处理后，在AML和ALL细胞系中的BRD2动力学。
图38示出了用化合物(1-1)处理后，在AML和ALL细胞系中的BRD3动力学。
图39A-39C示出了在AML和ALL细胞系中，由不同剂量的化合物(1-1)诱导的凋亡动力学。用剂量增加的化合物(1-1)处理72小时后收获骨髓和淋巴细胞系。凋亡细胞定义为annexin V+具有或不具有PI吸收。X轴示出化合物(1-1)的剂量，Y轴示出凋亡细胞的百分比。结果用平均±SD表示，其来自用化合物(1-1)处理AML和ALL细胞系的三个独立实验的重复。
图40A-40H示出了在白血病细胞系中用化合物(1-1)(OTX015)诱导的细胞周期改变。用剂量升高的OTX015处理RS4-11细胞48h，其流式细胞图谱的代表性柱状图在图40A-40F中示出。在细胞周期分析之前，将细胞与PI孵育1h。图40G示出在48h时分析得到的所有AML和ALL细胞系的细胞周期改变。X轴示出细胞系，Y轴示出处于G1和S期的细胞百分比。结果用来自三个独立实验的重复的平均±SD表示。
图41A和41B示出了在白血病细胞系中溴结构域的基因表达，以及由化合物(1-1)(OTX015)的调节。用RQ-PCR检测不同细胞系表达的异质水平的BRD2、BRD3和BRD4，其中bcr-abl驱动的细胞系BV-173和K562具有最低的基因表达水平(图41A)。
图41C-41H示出了分别用250nM和500nM的OTX015处理48h时，BRD4、BRD2和BRD3的cDNA水平的调节。检测到在KG1、K562和Jurkat中BRD3和BRD2显著上调，在KG1和HL60中BRD2增加。在图41A和41B中示出了白血病细胞系中BRD4、BRD2和BRD3的基线水平的基因表达水平。暴露在250nM和500nM的OTX015 48h后的BRD4(图41C和41D)、BRD3(图41E和41F)和BRD2(图41G和41H)的基因表达水平。X轴示出细胞系，Y轴示出cDNA相对于ABL的量。结果用来自两个独立实验的重复的平均±SD表示。
图42A-42D示出了OTX015在所有细胞系中诱导c-MYC下调。图42A和42B示出了不同白血病细胞系中c-MYC的基础基因表达水平。图42C和42D示出了用250nM和500nM的OTX015处理不同白血病细胞系，并在48h时用QT-PCR检测的c-MYC下调。
图43A-43L示出了OTX015对BRD4、BRD2和BRD3的蛋白质水平以及c-MYC的影响。在暴露于500nM OTX015 72h后，在选定的AML细胞系HL60中BRD4和BRD3保持未受影响，并且在24h处理后观察到c-MYC瞬时下调(43A-43C)，而几乎抗性的AML细胞系K562在24h暴露后开始显示出BRD4、BRD3和c-MYC下调(图43D-43F)。对于敏感性ALL细胞系，Jurkat在48h和72h显示出c-MYC的下调(图43G-43I)，而在RS4-11中，BRD4、BRD3和c-MYC保持未受影响(图4JD-43L)。用500nM的OTX015处理AML细胞系HL60、K562(图43A-43C；图43D-43F)和ALL细胞系Jurkat和RS4-11(图43G-43I；图4JD-43L)，并与暴露于相应浓度的DMSO的对照比较。在指定时间点，提取蛋白质，电泳，并用BRD4、BRD3、BRD2或c-MYC抗体进行免疫印迹。用ODYSSEY(LiCor)技术显示BRD4、BRD3、c-MYC和GAPDH的条带，其允许通过化学发光而示出的与GAPDH或BRD2相关的蛋白质的精确定量。该技术不允许蛋白质定量。示出了三个实验中的一个代表性实验。
图44A-44D示出了OTX015对原发性患者细胞(primary patient cell)的影响。用OTX015活体外(ex vivo)处理来自AML患者的5个样品、以及两个ALL样品(包括1个ALL Ph+患者)。图44D示出了患者的特征。在原发性患者样品中，OTX015以35-85％的不同程度诱导凋亡(图6)。Ph+ALL患者似乎具有耐药性。OTX015在AML和ALL患者的原发性细胞中诱导凋亡。从来自AML和ALL患者的骨髓(BM)和外周血(PB)获得单核细胞。细胞暴露于250nM和500nM的OTX015 72小时，并通过annexin V和PI染色来评价凋亡。结果用来自一个试验的两个重复的平均±SD表示。
图45A-45E示出了患者样品中的c-MYC在蛋白质水平的调节。在分别用250nM和500nM的OTX015活体外处理之后，从患者5的骨髓(BM)细胞获得蛋白质提取物(图44D；图45A-45D)。在暴露于OTX015 72h后BM细胞示出了c-MYC的下调。来自患者5的骨髓细胞用250nM和500nM的OTX015处理，并与暴露于相应浓度的DMSO的对照比较。在72h后提取蛋白质、电泳并用适当的c-MYC抗体进行免疫印迹。条带用ODYSSEY(LiCor)技术显示，其允许与GAPDH相关的蛋白质的精确定量(图45A)。在三个时间点24、48和72h，通过RQ-PCR示出cMYC相对于ABL的表达水平(图45B)。图45B的结果以重复实验的平均±SD表示。
图46示出了OTX015的生物学作用的总结。
图47A-47D示出了通过RQ-PCR分析所评价的患者样品中的BRD2、BRD3和BRD4的基础基因表达。在ALL患者中，Ph+ALL示出了较低的BRD表达水平(图47A和47B；图47E的患者3至6)，而在AML患者中，BRD表达水平更加异质化(图47C和47D)
图47E提供了患者的特征的总结，这些患者的样品经评价给出图47A-47D的结果。
发明详述
现在，下文将参照附图和实施例来更全面地描述本发明的主题，所述附图和实施例示出了代表性的实施方案。但是，本发明的主题可以以不同的形式体现，并且不应该解释成局限于本发明列出的实施方案。提供这些实施方案旨在描述并使本领域的技术人员能够实施。除非另有说明，否则本发明所用的所有技术和科学术语都具有所述主题所属技术领域的普通技术人员通常所理解的相同的含义。本发明中所提及的所有公开、专利申请、专利和其他参考文献均以引用的方式全文并入本文中。
本发明提供了治疗急性淋巴细胞性白血病、急性骨髓性白血病、BCR-ABL阳性急性淋巴细胞性白血病和CD34阳性急性骨髓性白血病的方法。本文详细地描述了本公开的各个部分：I.噻吩并***并二氮杂卓化合物；II.制剂；III.剂型；IV.剂量；V.工艺；和VI.例子。本领域技术人员能够理解治疗方法的各个实施方案包括本文所述的噻吩并***并二氮杂卓化合物、制剂、剂型、剂量和工艺的多个实施方案。
在一个方面，本发明提供了一种治疗急性淋巴细胞性白血病的方法，包括向患者施用药学可接受的量的组合物的步骤，所述组合物包含本文所述的噻吩并***并二氮杂卓化合物，其形成含有无定形噻吩并***并二氮杂卓化合物及其可药用的盐或其水合物；以及可药用的聚合物的固体分散体。本文中描述了这样的固体分散体的多种实施方案并且可以相应地应用。
在一个方面，本发明提供了一种治疗急性骨髓性白血病的方法，包括向患者施用药学可接受的量的组合物的步骤，所述组合物包含本文所述的噻吩并***并二氮杂卓化合物，其形成包含无定形噻吩并***并二氮杂卓化合物及其可药用的盐、或其水合物；以及可药用的聚合物的固体分散体。本文中描述了这样的固体分散体的多种实施方案并且可以相应地应用。
在一个方面，本发明提供了一种治疗BCR-ABL阳性急性淋巴细胞性白血病的方法，包括向患者施用药学可接受的量的包含本文各个实施方案所述的噻吩并***并二氮杂卓化合物的组合物的步骤。在治疗BCR-ABL阳性急性淋巴细胞性白血病的方法的一些实施方案中，本文所述的噻吩并***并二氮杂卓化合物形成含有无定形噻吩并***并二氮杂卓化合物及其可药用的盐、或其水合物以及可药用的聚合物的固体分散体。本文中描述了这样的固体分散体的各种实施方案并且可以相应地应用。
在一个方面，本发明提供了一种治疗CD34阳性急性骨髓性白血病的方法，包括向患者施用药学可接受的量的包含本文各个实施方案所述的噻吩并***并二氮杂卓化合物的组合物的步骤。在治疗CD34阳性急性骨髓性白血病的方法的一些实施方案中，本文所述的噻吩并***并二氮杂卓化合物形成含有无定形噻吩并***并二氮杂卓化合物及其可药用的盐、或其水合物以及可药用的聚合物的固体分散体。本文中描述了这样的固体分散体的各种实施方案并且可以相应地应用。
I.噻吩并***并二氮杂卓化合物:
在一个实施方案中，在本发明的制剂中使用的噻吩并***并二氮杂卓化合物由式(1)表示(包括其任意的盐、异构体、对映异构体、消旋物、水合物、溶剂化物、代谢物和多型变体):
其中R1为具有1至4个碳的烷基；R2为氢原子、卤素原子、或任选地被卤素原子或羟基取代的具有1至4个碳的烷基；R3为卤素原子；任选地被卤素原子、具有1至4个碳的烷基、具有1至4个碳的烷氧基、或氰基取代的苯基；--NR5--(CH2)m--R6，其中R5为氢原子、或具有1至4个碳的烷基，m为0至4的整数，并且R6为任选地被卤素原子取代的苯基或吡啶基；或--NR7--CO--(CH2)n--R8，其中R7为氢原子或具有1至4个碳的烷基，n为0至2的整数，并且R8为任选地被卤素原子取代的苯基或吡啶基；并且R4为--(CH2)a--CO--NH--R9，其中a为1至4的整数，并且R9为具有1至4个碳的烷基；具有1至4个碳的羟烷基；具有1至4个碳的烷氧基；或任选地被具有1至4个碳的烷基、具有1至4个碳的烷氧基、氨基或羟基取代的苯基或吡啶基；或--(CH2)b--COOR10，其中b为1至4的整数，并且R10为具有1至4个碳的烷基。
在一个实施方案中，合适的烷基包括含有1个碳原子至4个碳原子的线性或支链烷基基团。在一个实施方案中，合适的烷基包括含有1个碳原子至3个碳原子的线性或支链烷基基团。在一个实施方案中，合适的烷基包括含有1个碳原子至2个碳原子的线性或支链烷基基团。在一个实施方案中，示例性的烷基基团包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基。在一个实施方案中，示例性的烷基基团包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、2-甲基-1-丙基和2-甲基-2-丙基。
在一些实施方案中，本发明提供了本发明所述的噻吩并***并二氮杂卓化合物的可药用的的盐、溶剂化物(包括水合物)和同位素标记的形式。在一个实施方案中，噻吩并***并二氮杂卓化合物的可药用的盐包括与无机酸形成的酸加成盐。在一个实施方案中，噻吩并***并二氮杂卓的可药用的无机酸加成盐包括盐酸、氢溴酸、氢碘酸、磷酸、偏磷酸、硝酸和硫酸的盐。在一个实施方案中，噻吩并***并二氮杂卓化合物的可药用的盐包括与有机酸形成的酸加成盐。在一个实施方案中，噻吩并***并二氮杂卓化的可药用的有机酸加成盐包括以下酸的盐：酒石酸、乙酸、三氟乙酸、柠檬酸、苹果酸、乳酸、富马酸、苯甲酸、甲酸、丙酸、乙醇酸、葡萄糖酸、马来酸、琥珀酸、樟脑硫酸、异硫羰酸(isothionic acid)、粘酸、龙胆酸、异烟酸、糖二酸、葡萄糖醛酸、糠酸、谷氨酸、抗坏血酸、邻氨基苯甲酸、水杨酸、苯乙酸、扁桃酸、扑酸(帕莫酸)、甲烷磺酸、乙烷磺酸、泛酸、硬脂酸、磺胺酸、褐藻酸、半乳糖醛酸和芳基磺酸(例如苯磺酸和4-甲基苯磺酸)。
式(1)表示的典型噻吩并***并二氮杂卓化合物包括但不限于噻吩并***并二氮杂卓化合物(1-1)至(1-18)，其列于下表A中。
本文将表A的化合物(1-1)称为OTX-015或Y803。
表A：本发明的示例性化合物：
在一些实施方案中，式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物包括：(i)(S)-2-[4-(4-氯代苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]***并-[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基]-N-(4-羟苯基)乙酰胺或其二水合物；(ii)(S)-{4-(3'-氰基联苯-4-基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]***并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基}乙酸甲酯；(iii)(S)-{2,3,9-三甲基-4-(4-苯基氨基苯基)-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]***并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基}乙酸甲酯；以及(iv)(S)-{2,3,9-三甲基-4-[4-(3-苯基丙酰基氨基)苯基]-6H-噻吩并[3,2-f-][1,2,4]***并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基}乙酸甲酯。
在一些实施方案中，式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物包括(S)-2-[4-(4-氯代苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,-4]***并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基]-N-(4-羟苯基)乙酰胺二水合物。
在一些实施方案中，式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物包括(S)-2-[4-(4-氯代苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,-4]***并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基]-N-(4-羟苯基)乙酰胺。
II.制剂：
式(1)所示的化合物在盖伦组合物的常规给药和制备方面表现出非常特有的困难，特别包括药物生物利用度以及患者间和患者内的剂量应答的可变性的特定问题，由此需要针对几乎水不溶性的所述化合物开发非常规的剂型。
之前，已经发现可以利用载体丙烯酸乙酯-甲基丙烯酸甲酯-三甲基铵乙基甲基丙烯酸酯氯化物共聚物(Eudragit RS，由Rohm公司制造)将式(1)所示的化合物配置成固体分散体，从而提供在下肠道中优先释放药物组分以用于治疗炎性肠病(例如溃疡性结肠炎和克罗恩病)的口服制剂(2009年1月8日公开的美国专利申请20090012064A1)。通过多个实验(包括动物试验)，发现就炎性肠病而言，药物在病变部位的释放及其对炎性病变的直接作用比其由胃肠道吸收至循环中更为重要。
目前，意外地发现根据式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物、其可药用的盐、溶剂化物(包含水合物)、消旋物、对映异构体以及同位素标记的形式可以使用可药用的聚合物而配制成固体分散体，从而提供口服制剂，该口服制剂能够使药物组分由胃肠道高度吸收至循环中，从而治疗炎性肠病以及其他疾病。在狗和人类中的研究证明，与之前研发的用于治疗炎性肠病的Eudragit固体分散体制剂相比，所述这些固体分散体具有高的口服生物利用度。
固体分散体为改善水溶性差的药物的口服生物利用度的一种手段。
如本文所用，术语“固体分散体”是指一组固体产物，其包含至少2种不同的成分，通常为亲水性载体和疏水性药物(根据式(1)的噻吩并***并二氮杂卓化合物)。基于药物在分散体内的分子排布，可以区分为6种不同类型的固体分散体。通常，固体分散体分为：简单低共熔混合物、固溶体、玻璃溶液和悬浮液、以及结晶载体中的无定形沉淀。此外，可存在一些组合，例如在同一样品中，一些分子可以成簇存在，而一些分子以分子形式分散。
在一个实施方案中，根据式(1)的噻吩并***并二氮杂卓化合物可以以分子形式分散于无定形颗粒(簇)中。在另一个实施方案中，根据式(1)的噻吩并***并二氮杂卓化合物可以以结晶颗粒形式分散。在一个实施方案中，载体可以是结晶的。在另一个实施方案中，载体可以是无定形的。
在一个实施方案中，本发明提供了包含固体分散体的药物组合物，其中所述固体分散体由以下形成：根据式(1)的噻吩并***并二氮杂卓化合物或其可药用的盐、溶剂化物(包括水合物)、消旋物、对映异构体、异构体或其同位素标记形式；以及可药用的聚合物。在一个实施方案中，可药用的聚合物为醋酸羟丙甲纤维素琥珀酸酯(也称为醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯或HPMCAS)。在一个实施方案中，分散体中噻吩并***并二氮杂卓化合物与醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯(HPMCAS)的重量比为1:3至1:1。在一个实施方案中，至少一部分噻吩并***并二氮杂卓化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在另一个实施方案中，噻吩并***并二氮杂卓化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在一些实施方案中，固体分散体表现出单一拐点的玻璃化转变温度(Tg)。在一些实施方案中，单一的Tg在130℃至140℃之间出现。在其他这样的实施方案中，单一的Tg在约135℃出现。在一些这样的实施方案中，固体分散体在40℃、相对湿度为75％的环境下暴露至少1个月。在一些实施方案中，在固体分散体的X射线粉末衍射图案中，基本上不存在与结晶的式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物有关的衍射线。就本申请的目的而言，“基本上不存在”是指在约21°2θ下，在无定形晕(amorphous halo)上不存在与结晶的式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物有关的衍射线。在一些实施方案中，醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯(HPMCAS)可包括：具有9％乙酰基/11％琥珀酰基的M级(例如，平均粒径为5μm的HPMCAS(即，HPMCAS-MF，细粉级)或平均粒径为1mm的HPMCAS(即，HPMCAS-MG，颗粒级))；具有12％乙酰基/6％琥珀酰基的H级(例如，平均粒径为5μm的HPMCAS(即，HPMCAS-HF，细粉级)或平均粒径为1mm的HPMCAS(即，HPMCAS-HG，颗粒级))；以及具有8％乙酰基/15％琥珀酰基的L级(例如，平均粒径为5μm的HPMCAS(即，HPMCAS-LF，细粉级)或平均粒径为1mm的HPMCAS(即，HPMCAS-LG，颗粒级))。
在一个实施方案中，本发明提供了一种药物组合物，其包含式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物或其可药用的盐、溶剂化物(包括水合物)、消旋物、对映异构体、异构体或同位素标记形式在可药用的聚合物中的固体分散体。在一个实施方案中，可药用的聚合物为聚乙烯吡咯烷酮(也称为聚维酮或PVP)。在一个实施方案中，分散体中噻吩并***并二氮杂卓化合物与PVP的重量比为1:3至1:1。在一个实施方案中，至少一部分噻吩并***并二氮杂卓化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在另一个实施方案中，噻吩并***并二氮杂卓化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在一些实施方案中，固体分散体表现出单一拐点的玻璃化转变温度(Tg)。在一些实施方案中，单一的Tg在175℃至约185℃之间出现。在其他此类的实施方案中，单一的Tg在约179℃出现。在一些此类的实施方案中，固体分散体在40℃、相对湿度为75％的环境下暴露至少1个月。在一些实施方案中，在固体分散体的X射线粉末衍射图案中，基本上不存在与结晶的式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物有关的衍射线。就本申请的目的而言，“基本上不存在”是指在约21°2θ下，在无定形晕(amorphous halo)上不存在与结晶的式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物有关的衍射线。在一些实施方案中，聚乙烯吡咯烷酮的分子量可为约2,500(12PF，重均分子量在2,000至3,000之间)、约9,000(17PF，重均分子量在7,000至11,000之间)、约25,000(25，重均分子量在28,000至34,000之间)、约50,000(30，重均分子量在44,000至54,000之间)和约1,250,000(90或90F，重均分子量在1,000,000至1,500,000之间)。
在一个实施方案中，本发明的药物组合物包含无定形形式的式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物或其可药用的盐、溶剂化物(包括水合物)、消旋物、对映异构体、异构体或同位素标记形式与可药用的聚合物的固体分散体。在一个实施方案中，可药用的聚合物为醋酸羟丙甲纤维素琥珀酸酯。在一个实施方案中，式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物与醋酸羟丙甲纤维素琥珀酸酯的重量比为1:3至1:1。在一个实施方案中，至少一部分噻吩并***并二氮杂卓化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在另一个实施方案中，噻吩并***并二氮杂卓化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在一些实施方案中，固体分散体表现出单一拐点的玻璃化转变温度(Tg)。在一些实施方案中，单一的Tg在130℃至140℃之间出现。在其他此类的实施方案中，单一的Tg在约135℃出现。在一些此类的实施方案中，固体分散体在40℃、相对湿度为75％的环境下暴露至少1个月。在一些实施方案中，在固体分散体的X射线粉末衍射图案中，基本上不存在与结晶的式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物有关的衍射线。就本申请的目的而言，“基本上不存在”是指在约21°2θ下，在无定形晕上不存在与结晶的式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物有关的衍射线。
在一个实施方案中，本发明的药物组合物包含无定形形式的式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物或其可药用的盐、溶剂化物(包括水合物)、消旋物、对映异构体、异构体或同位素标记形式与可药用的聚合物的固体分散体。在一个实施方案中，可药用的聚合物为聚乙烯吡咯烷酮。在一个实施方案中，式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物与聚乙烯吡咯烷酮的重量比为1:3至1:1。在一个实施方案中，至少一部分噻吩并***并二氮杂卓化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在另一个实施方案中，噻吩并***并二氮杂卓化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在一些实施方案中，固体分散体表现出单一拐点的玻璃化转变温度(Tg)。在一些实施方案中，单一的Tg在175℃至约185℃之间出现。在其他此类的实施方案中，单一的Tg在约179℃下出现。在一些此类的实施方案中，固体分散体在40℃、相对湿度为75％的环境下暴露至少1个月。在一些实施方案中，在固体分散体的X射线粉末衍射图案中，基本上不存在与结晶的式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物有关的衍射线。就本申请的目的而言，“基本上不存在”是指在约21°2θ下，在无定形晕上不存在与结晶的式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物有关的衍射线。
在一个实施方案中，本发明的药物组合物包含结晶形式的式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物或其可药用的盐、溶剂化物(包括水合物)、消旋物、对映异构体、异构体或同位素标记形式与可药用的聚合物的固体分散体。在一个实施方案中，可药用的聚合物为醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯。在一个实施方案中，式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物与醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯的重量比为1:3至1:1。
在一个实施方案中，本发明的药物组合物包含结晶形式的式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物或其可药用的盐、溶剂化物(包括水合物)、消旋物、对映异构体、异构体或同位素标记形式与可药用的聚合物的固体分散体。在一个实施方案中，可药用的聚合物为聚乙烯吡咯烷酮。在一个实施方案中，式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物与聚乙烯吡咯烷酮的重量比为1:3至1:1。
在一些实施方案中，通过喷雾干燥来制备包含固体分散体的药物组合物。
在一个实施方案中，本发明的药物组合物包含喷雾干燥的固体分散体，该固体分散体由以下形成：式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物或其可药用的盐、溶剂化物(包括水合物)、消旋物、对映异构体、异构体或同位素标记形式，和可药用的聚合物。在一个实施方案中，可药用的聚合物为醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯。在一个实施方案中，化合物(1)与醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯的重量比为1:3至1:1。在一个实施方案中，至少一部分噻吩并***并二氮杂卓化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在另一个实施方案中，噻吩并***并二氮杂卓化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在一些实施方案中，固体分散体表现出单一拐点的玻璃化转变温度(Tg)。在一些实施方案中，单一的Tg在130℃至140℃之间出现。在其他此类的实施方案中，单一的Tg在约135℃出现。在一些此类的实施方案中，固体分散体在40℃、相对湿度为75％的环境下暴露至少1个月。在一些实施方案中，在固体分散体的X射线粉末衍射图案中，基本上不存在与结晶的式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物有关的衍射线。就本申请的目的而言，“基本上不存在”是指在约21°2θ下，在无定形晕上不存在与结晶的式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物有关的衍射线。
在一个实施方案中，本发明的药物组合物包含喷雾干燥的固体分散体，该固体分散体由以下形成：式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物或其可药用的盐、溶剂化物(包括水合物)、消旋物、对映异构体、异构体或同位素标记形式和可药用的聚合物。在一个实施方案中，可药用的聚合物为聚乙烯吡咯烷酮。在一个实施方案中，化合物(1)与聚乙烯吡咯烷酮的重量比为1:3至1:1。在一个实施方案中，至少一部分噻吩并***并二氮杂卓化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在另一个实施方案中，噻吩并***并二氮杂卓化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在一些实施方案中，固体分散体表现出单一拐点的玻璃化转变温度(Tg)。在一些实施方案中，单一的Tg在175℃至185℃之间出现。在其他此类的实施方案中，单一的Tg在约179℃出现。在一些此类的实施方案中，固体分散体在40℃、相对湿度为75％的环境下暴露至少1个月。在一些实施方案中，在固体分散体的X射线粉末衍射图案中，基本上不存在与结晶的式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物有关的衍射线。就本申请的目的而言，“基本上不存在”是指在约21°2θ下，在无定形晕上不存在与结晶的式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物有关的衍射线。
在一个实施方案中，本发明的药物组合物包含喷雾干燥的固体分散体，该固体分散体由以下形成：无定形的式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物或其可药用的盐、溶剂化物(包括水合物)、消旋物、对映异构体、异构体或同位素标记形式和可药用的聚合物。在一个实施方案中，可药用的聚合物为醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯。在一个实施方案中，式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物与醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯的重量比为1:3至1:1。在一个实施方案中，至少一部分噻吩并***并二氮杂卓化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在另一个实施方案中，噻吩并***并二氮杂卓化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在一些实施方案中，固体分散体表现出单一拐点的玻璃化转变温度(Tg)。在一些实施方案中，单一的Tg在130℃至140℃之间出现。在一些此类的实施方案中，固体分散体在40℃、相对湿度为75％的环境下暴露至少1个月。在其他此类的实施方案中，单一的Tg在约135℃出现。在一些实施方案中，在固体分散体的X射线粉末衍射图案中，基本上不存在与结晶的式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物有关的衍射线。就本申请的目的而言，“基本上不存在”是指在约21°2θ下，在无定形晕上不存在与结晶的式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物有关的衍射线。
在一个实施方案中，本发明的药物组合物包含喷雾干燥的固体分散体，该固体分散体由以下形成：无定形的式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物或其可药用的盐、溶剂化物(包括水合物)、消旋物、对映异构体、异构体或同位素标记形式和可药用的聚合物。在一个实施方案中，可药用的聚合物为聚乙烯吡咯烷酮。在一个实施方案中，式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物与聚乙烯吡咯烷酮的重量比为1:3至1:1。在一个实施方案中，至少一部分噻吩并***并二氮杂卓化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在另一个实施方案中，噻吩并***并二氮杂卓化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在一些实施方案中，固体分散体表现出单一拐点的玻璃化转变温度(Tg)。在一些实施方案中，单一的Tg在175℃至185℃之间出现。在一些此类的实施方案中，固体分散体在40℃、相对湿度为75％的环境下暴露至少1个月。在其他此类的实施方案中，单一的Tg在约179℃出现。在一些实施方案中，在固体分散体的X射线粉末衍射图案中，基本上不存在与结晶的式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物有关的衍射线。就本申请的目的而言，“基本上不存在”是指在约21°2θ下，在无定形晕上不存在与结晶的式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物有关的衍射线。
在一个实施方案中，本发明的药物组合物包含喷雾干燥的固体分散体，该固体分散体由以下形成：结晶形式的式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物或其可药用的盐、溶剂化物(包括水合物)、消旋物、对映异构体、异构体或同位素标记形式和可药用的聚合物。在一个实施方案中，可药用的聚合物为醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯。在一个实施方案中，式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物与醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯的重量比为1:3至1:1。
在一个实施方案中，本发明的药物组合物包含喷雾干燥的固体分散体，该固体分散体由以下形成：结晶形式的式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物或其可药用的盐、溶剂化物(包括水合物)、消旋物、对映异构体、异构体或同位素标记形式和可药用的聚合物。在一个实施方案中，可药用的聚合物为聚乙烯吡咯烷酮。在一个实施方案中，式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物与聚乙烯吡咯烷酮的重量比为1:3至1:1。
在一个优选的实施方案中，本发明提供了一种药物组合物，其包含固体分散体，该固体分散体由以下形成：2-[(6S)-4-(4-氯代苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f]-[1,2,4]***并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基]-N-(4-羟苯基)乙酰胺二水合物(化合物(1-1))或其可药用的盐、溶剂化物(包括水合物)、消旋物、对映异构体、异构体或同位素标记形式；以及可药用的聚合物，其中所述化合物(1-1)如下：
在一个实施方案中，可药用的聚合物为HPMCAS。在一个实施方案中，分散体中化合物(1-1)和HPMCAS的重量比为1:3至1:1。在一个实施方案中，至少一部分噻吩并***并二氮杂卓化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在另一个实施方案中，噻吩并***并二氮杂卓化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在一个实施方案中，固体分散体是喷雾干燥的。在一些实施方案中，固体分散体表现出单一拐点的玻璃化转变温度(Tg)。在一些实施方案中，单一的Tg在130℃至140℃之间出现。在其他此类的实施方案中，单一的Tg在约135℃出现。在一些此类的实施方案中，固体分散体在40℃、相对湿度为75％的环境下暴露至少1个月。在一些实施方案中，在固体分散体的X射线粉末衍射图案中，基本上不存在与结晶的式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物有关的衍射线。就本申请的目的而言，“基本上不存在”是指在约21°2θ下，在无定形晕上不存在与结晶的噻吩并***并二氮杂卓化合物(1-1)有关的衍射线。
在另一个实施方案中，所述药物组合物包含化合物(1-1)或其可药用的盐、溶剂化物(包括水合物)、消旋物、对映异构体、异构体或同位素标记形式；以及可药用的聚合物的固体分散体。在一个实施方案中，可药用的聚合物为PVP。在一个实施方案中，分散体中化合物(1-1)和PVP的重量比为1:3至1:1。在一个实施方案中，至少一部分噻吩并***并二氮杂卓化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在另一个实施方案中，噻吩并***并二氮杂卓化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在一个实施方案中，固体分散体是喷雾干燥的。在一些实施方案中，固体分散体表现出单一拐点的玻璃玻璃化转变温度(Tg)。在一些实施方案中，单一的Tg在175℃至185℃之间出现。在其他此类的实施方案中，单一的Tg在约179℃出现。在一些此类的实施方案中，固体分散体在40℃、相对湿度为75％的环境下暴露至少1个月。在一些实施方案中，在固体分散体的X射线粉末衍射图案中，基本上不存在与结晶的式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物有关的衍射线。就本申请的目的而言，“基本上不存在”是指在约21°2θ下，在无定形晕上不存在与结晶的噻吩并***并二氮杂卓化合物(1-1)有关的衍射线。
在一个实施方案中，本发明的药物组合物包含无定形形式的噻吩并***并二氮杂卓化合物(1-1)或其可药用的盐、溶剂化物(包括水合物)、消旋物、对映异构体、异构体或同位素标记形式；以及可药用的聚合物。在一个实施方案中，可药用的聚合物为HPMCAS。在一个实施方案中，分散体中化合物(1-1)与HPMCAS的重量比为1:3至1:1。在一个实施方案中，至少一部分噻吩并***并二氮杂卓化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在另一个实施方案中，噻吩并***并二氮杂卓化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在一个实施方案中，固体分散体是喷雾干燥的。在一些实施方案中，固体分散体表现出单一拐点的玻璃化转变温度(Tg)。在一些实施方案中，单一的Tg在130℃至140℃之间出现。在其他此类的实施方案中，单一的Tg在约135℃出现。在一些此类的实施方案中，固体分散体在40℃、相对湿度为75％的环境下暴露至少1个月。在一些实施方案中，在固体分散体的X射线粉末衍射图案中，基本上不存在与结晶的式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物有关的衍射线。就本申请的目的而言，“基本上不存在”是指在约21°2θ下，在无定形晕上不存在与结晶的噻吩并***并二氮杂卓化合物(1-1)有关的衍射线。
在一个实施方案中，本发明的药物组合物包含无定形形式的噻吩并***并二氮杂卓化合物(1-1)或其可药用的盐、溶剂化物(包括水合物)、消旋物、对映异构体、异构体或同位素标记形式与可药用的聚合物的固体分散体。在一个实施方案中，可药用的聚合物为PVP。在一个实施方案中，分散体中化合物(1-1)与PVP的重量比为1:3至1:1。在一个实施方案中，至少一部分噻吩并***并二氮杂卓化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在另一个实施方案中，噻吩并***并二氮杂卓化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在一个实施方案中，固体分散体是喷雾干燥的。在一些实施方案中，固体分散体表现出单一拐点的玻璃化转变温度(Tg)。在一些实施方案中，单一的Tg在175℃至185℃之间出现。在其他此类的实施方案中，单一的Tg在约189℃出现。在一些此类的实施方案中，固体分散体在40℃、相对湿度为75％的环境下暴露至少1个月。在一些实施方案中，在固体分散体的X射线粉末衍射图案中，基本上不存在与结晶的式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物有关的衍射线。就本申请的目的而言，“基本上不存在”是指在约21°2θ下，在无定形晕上不存在与结晶的噻吩并***并二氮杂卓化合物(1-1)有关的衍射线。
在一个实施方案中，本发明的药物组合物包含结晶形式的噻吩并***并二氮杂卓化合物(1-1)或其可药用的盐、溶剂化物(包括水合物)、消旋物、对映异构体、异构体或同位素标记形式与可药用的聚合物的固体分散体。在一个实施方案中，可药用的聚合物为HPMCAS。在一个实施方案中，分散体中化合物(1-1)与HPMCAS的重量比为1:3至1:1。在一个实施方案中，固体分散体是喷雾干燥的。
在一个实施方案中，本发明的药物组合物包含结晶形式的噻吩并***并二氮杂卓化合物(1-1)或其可药用的盐、溶剂化物(包括水合物)、消旋物、对映异构体、异构体或同位素标记形式与可药用的聚合物的固体分散体。在一个实施方案中，可药用的聚合物为PVP。在一个实施方案中，分散体中化合物(1-1)与PVP的重量比为1:3至1:1。在一个实施方案中，固体分散体是喷雾干燥的。
当经口施用本发明所述的固体分散体时，其表现出特别有利的性质。当在动物或人类的标准生物利用度试验中施用时，所述固体分散体的有利性质的例子包括但不限于一致的且高水平的生物利用度。本发明的固体分散体可以包括含有式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物、聚合物以及添加剂的固体分散体。在一些实施方案中，固体分散体可以实现使式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物吸收入血流中，而这是不可能通过仅仅将式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物与添加剂混合而获得的，这是因为式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物药物在水和大多数水性介质中的溶解度可忽略不计。可以使用多种体外和/或体内研究来测量式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物或者噻吩并***并二氮杂卓化合物(1-1)的生物利用度。体内研究可以使用例如大鼠、狗或人类来进行。
可以通过沿着相对于横坐标(X轴)的时间的纵坐标(Y轴)，绘制式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物或者噻吩并***并二氮杂卓化合物(1-1)的血清或血浆浓度，从而获得曲线下面积(AUC)值，由此测量生物利用度。然后，将所述固体分散体中的式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物或者噻吩并***并二氮杂卓化合物(1-1)的AUC值与等价浓度的不包含聚合物的结晶的式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物或结晶性的噻吩并***并二氮杂卓化合物(1-1)的AUC值比较。在一些实施方案中，当将所述固体分散体经口施用给狗时，该固体分散体的曲线下面积(AUC)值选自：由静脉施用给狗的对照组合物的相应AUC值的至少0.4倍、0.5倍、0.6倍、0.8倍、1.0倍，其中所述对照组合物包含等价量的结晶的式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物。
可以通过模拟胃环境和肠环境的pH值的体外测试来测量生物利用度。可以通过以下方法进行测量：将式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物或噻吩并***并二氮杂卓化合物(1-1)的固体分散体悬浮在pH为1.0至2.0之间的水性体外测试介质中，随后将对照体外测试介质的pH值调节为5.0至7.0。可以在pH值调节后的最初2个小时中的任何时间来测量无定形的式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物或无定形噻吩并***并二氮杂卓化合物(1-1)的浓度。在一些实施方案中，在pH值为5.0至7.0之间的水性体外测试介质中，与不包含聚合物的结晶的式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物或者结晶的噻吩并***并二氮杂卓化合物(1-1)的浓度相比，固体分散体使无定形的式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物或者无定形的噻吩并***并二氮杂卓化合物(1-1)的浓度高至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍或者至少10倍。
在其他的实施方案中，在pH值为1.0至2.0的水性体外测试介质中，与不包含聚合物的结晶的式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物的浓度相比，固体分散体中无定形的式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物或无定形噻吩并***并二氮杂卓化合物(1-1)的浓度高至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％。在一些此类的实施方案中，固体分散体的聚合物为HPMCAS。在一些此类的实施方案中，固体分散体的聚合物为PVP。
在其他的实施方案中，所述固体分散体中的无定形的式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物或者无定形噻吩并***并二氮杂卓化合物(1-1)的浓度是式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物和可药用的聚合物的固体分散体中的式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物的浓度的至少40％、至少50％以上、至少60％、至少70％、至少80％，其中所述可药用的聚合物选自以下物质组成的组中：羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯和丙烯酸乙酯-甲基丙烯酸甲酯-三甲基铵乙基甲基丙烯酸酯氯化物共聚物，其中各固体分散体被放置在pH值为1.0至2.0的水性体外测试介质中。在一些此类的实施方案中，固体分散体的聚合物为HPMCAS。在一些此类的实施方案中，固体分散体的聚合物为PVP。
在一些实施方案中，当在一定的湿度和温度下暴露一段时间时，本发明所述的固体分散体表现出抵抗式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物或噻吩并***并二氮杂卓化合物(1-1)的重结晶的稳定性。在一个实施方案中，无定形的式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物或噻吩并***并二氮杂卓化合物(1-1)的保持无定形的浓度选自：至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％和至少99％。
III.剂型:
可以用于本发明的固体分散体的合适的剂型包括但不限于胶囊、片剂、小型片剂、珠、微囊剂(beadlet)、丸剂、小颗粒(granule)、粒剂(granulate)和粉末。可以使用例如肠溶包衣来包裹合适的剂型。合适的包衣可以包括但不限于邻苯二甲酸乙酸纤维素、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、聚甲基丙烯酸共聚物、或醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯(HPMCAS)。在一些实施方案中，可存在某些组合，例如，在同一样品中，本发明的噻吩并***并二氮杂卓的一些分子可以成簇存在，而一些分子则以分子形式分散于载体中。
在一些实施方案中，本发明的固体分散体可以配制成片剂、囊片或胶囊。在一些实施方案中，本发明的固体分散体可以配制成小型片剂或倒入口中(pour-into-mouth)的小颗粒、或者成分(constitution)的口服粉末。在一些实施方案中，本发明的固体分散体与其他的赋形剂(例如，抑制重结晶/沉淀的聚合物、掩味成分等)组合并分散于合适的稀释剂中，从而提供即用型的悬浮制剂。在一些实施方案中，本发明的固体分散体可以配制用于儿科治疗。
在一个实施方案中，本发明的药物组合物被配制用于口服给药。在一个实施方案中，所述的药物组合物包含根据本发明所述的多个实施方案的固体分散体，其包含：式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物、或其可药用的盐、溶剂化物(包括水合物)、消旋物、对映异构体、异构体或同位素标记的形式；以及聚合物载体。在一个实施方案中，所述的药物组合物还包含一种或多种添加剂，例如崩解剂、润滑剂、助流剂、粘结剂和填料。
用于所述的药物组合物含义合适的可药用的润滑剂和可药用的助流剂的实例包括但不限于胶态氧化硅、三硅酸镁、淀粉、滑石、三碱式磷酸钙、硬脂酸镁、硬脂酸铝、硬脂酸钙、碳酸镁、氧化镁、聚乙二醇、粉末状纤维素、甘油二十二烷酸酯、硬脂酸、氢化蓖麻油、单硬脂酸甘油酯和硬脂酰富马酸钠。
用于所述的药物组合物的合适的可药用的粘结剂的实例包括但不限于：淀粉、纤维素及其衍生物，例如微晶纤维素(例如AVICEL PH，得自FMC公司)、羟丙基纤维素、羟乙基纤维素和羟丙基甲基纤维素(HPMC，例如METHOCEL，得自Dow Chemical公司)；蔗糖、右旋糖、玉米糖浆；多糖和明胶。
用于所述的药物组合物的合适的可药用的填料和可药用的稀释剂的实例包括但不限于：糖果制造商的糖、可压缩糖、葡萄糖结合剂、糊精、右旋糖、乳糖、甘露醇、微晶纤维素(MCC)、粉末状纤维素、山梨醇、蔗糖和滑石。
在一些实施方案中，在所述的药物组合物中，赋形剂可以发挥多于一种的功能。例如，填料或粘结剂还可以为崩解剂、助流剂、抗粘附剂、润滑剂、甜味剂等。
在一些实施方案中，本发明的药物组合物可以还包含添加剂或配料，例如抗氧化剂(例如抗坏血酸棕榈酸酯、丁基化羟基茴香醚(BHA)、二丁基化羟基甲苯(BHT)、α-生育酚、丙基没食子酸盐和富马酸)、抗微生物剂、酶抑制剂、稳定剂(例如丙二酸)和/或防腐剂。
通常，本发明的药物组合物可以配制成任何合适的固体剂型。在一些实施方案中，本发明的固体分散体混合在单位剂型中，例如作为胶囊或片剂、或者多微粒***(例如小颗粒或粒剂、或者粉末)，以用于给药。
在一个实施方案中，药物组合物包含：根据本发明所述的固体分散体的多个实施方案的式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物和醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯(HPMCAS)的固体分散体，其中所述噻吩并***并二氮杂卓化合物在固体分散体中是无定形的，并且噻吩并***并二氮杂卓化合物与醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯(HPMCAS)的重量比为1:3至1:1；45重量％至50重量％的乳糖一水合物；35重量％至40重量％的微晶纤维素；4重量％至6重量％的交联羧甲基纤维素钠；0.8重量％至1.5重量％的胶体二氧化硅；和0.8重量％至1.5重量％硬脂酸镁。
IV.剂量:
在一个实施方案中，本发明提供了可以配制成任何合适的固体剂型的药物组合物。在一个实施方案中，根据本发明的药物组合物包含本发明所述式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物的多种实施方案中的一种或多种，其中所述式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓的剂量为约10mg至约100mg。在一个实施方案中，本发明的药物组合物包含本发明所述式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓的多种实施方案中的一种或多种，其中所述式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓的剂量选自由如下剂量组成的组：约10mg至约100mg、约10mg至约90mg、约10mg至约80mg、约10mg至约70mg、约10mg至约60mg、约10mg至约50mg、约10mg至约40mg、约10mg至约30mg和约10mg至约20mg。在一个实施方案中，本发明的药物组合物包含本发明所述式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓的多种实施方案中的一种或多种，其中所述式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓的剂量选自由约10mg、约50mg、约75mg、约100mg构成的组。
在一些实施方案中，本发明的方法包括向有需要的受试者施用本发明所述多种实施方案中的一种或多种的式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓，其剂量选自由如下剂量组成的组：约1mg、约2mg、约2.5mg、约3mg、约4mg、约5mg、约7.5mg、约10mg、约15mg、约20mg、约25mg、约30mg、约35mg、约40mg、约45mg、约50mg、约55mg、约60mg、约65mg、约70mg、约75mg、约80mg、约85mg、约90mg、约95mg、约100mg、约110mg、约120mg、约130mg、约140mg和约150mg；其剂型选自由以下组成的组：每周一次、每六天一次、每五天一次、每四天一次、每三天一次、每隔一天一次、每天一次、每天两次、每天三次、每天四次、每天五次。在另一个实施方案中，任意前述剂量或剂型可以定期减少或增加。
在一些实施方案中，本发明的方法包括向有需要的受试者施用选自由以下化合物构成的组中的噻吩并***并二氮杂卓：化合物(1-1)、(1-2)、(1-3)、(1-4)、(1-5)、(1-6)、(1-7)、(1-8)、(1-9)、(1-10)、(1-11)、(1-12)、(1-13)、(1-14)、(1-15)、(1-16)、(1-17)和(1-18)；所述噻吩并***并二氮杂卓的施用剂量选自由以下剂量构成的组：约1mg、约2mg、约2.5mg、约3mg、约4mg、约5mg、约7.5mg、约10mg、约15mg、约20mg、约25mg、约30mg、约35mg、约40mg、约45mg、约50mg、约55mg、约60mg、约65mg、约70mg、约75mg、约80mg、约85mg、约90mg、约95mg、约100mg、约110mg、约120mg、约130mg、约140mg和约150mg；其剂型选自由以下组成的组：每周一次、每六天一次、每五天一次、每四天一次、每三天一次、每隔一天一次、每天一次、每天两次、每天三次、每天四次以及每天五次。在另一个实施方案中，任意前述剂量或剂型可以定期减少或增加。
根据特定的治疗目的、治疗阶段等，所述单位剂型适合每日给药1至5次。在一个实施方案中，有需要的受试者可以至少连续两天每日至少1次施用该剂型。在一个实施方案中，有需要的受试者可以至少隔日并每日至少1次施用该剂型。在一个实施方案中，有需要的受试者可以至少每周施用该剂型，并且将该剂型分成相等的和/或不等的剂量。在一个实施方案中，有需要的受试者可以每周施用该剂型，每隔3天和/或每周6次施用。在一个实施方案中，有需要的受试者可以每隔1天、每3天、每4天、每5天、每6天和/或每周以分剂量施用该剂型。在一个实施方案中，有需要的受试者可以每个月服用该剂型的2个或多个等分剂量或非等分剂量。
可以使用例如肠溶包衣来包裹所用的剂型(例如胶囊、片剂、小型片剂、珠、微囊剂、丸剂、小颗粒、粒剂或粉末)。合适的包衣可以包括但不限于邻苯二甲酸乙酸纤维素、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、聚甲基丙烯酸共聚物、或醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯(HPMCAS)。
V.工艺:
本发明所公开的噻吩并***并二氮杂卓化合物可以以游离碱或酸加成盐的形式存在，其可以根据美国专利申请公开No.2010/0286127(其全部内容以引用方式并入本文或本申请中)中所述的工序来获得。本发明的噻吩并***并二氮杂卓化合物的各对映异构体和非对映异构体可以由包含不对称中心或立体异构中心的市售可得的起始材料以合成方式制备，或者通过制备外消旋的混合物、然后通过本领域普通技术人员公知的拆分方法来制备。
在一些实施方案中，通过溶剂蒸发法来制备所述多种实施方案中的一种或多种的根据式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓的制剂。在一个实施方案中，溶剂蒸发法包括使根据式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓和载体溶解于挥发性溶剂中，然后使挥发性溶剂蒸发。在一个实施方案中，挥发性溶剂可以为一种或多种赋形剂。在一个实施方案中，一种或多种赋形剂包括但不限于抗粘剂、惰性填料、表面活性剂润湿剂、pH调节剂和添加剂。在一个实施方案中，赋形剂可以溶解于挥发性溶剂中，或者在挥发性溶剂中呈悬浮或溶胀状态。
在一个实施方案中，根据本发明的固体分散体的制备包括使悬浮于挥发性溶剂中的一种或多种赋形剂干燥。在一个实施方案中，所述的干燥包括真空干燥、使挥发性溶剂在低温下缓慢蒸发、使用旋转蒸发器、喷雾干燥、喷雾制粒、冷冻干燥或使用超临界流体。
在一个实施方案中，使用喷雾干燥制备根据式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓组合物的制剂，其包括使所述的组合物的悬液或溶液雾化形成小滴，然后快速从制剂中除去溶剂。在一个实施方案中，根据本发明的制剂的制备涉及喷雾制粒，其中将溶剂中的组合物的溶液或悬液喷雾至合适的化学惰性和/或物理惰性填料(例如乳糖或甘露醇)上。在一个实施方案中，通过双向或三向喷嘴实现所述的组合物的溶液或悬液的喷雾制粒。
通过以下非限定性实施例来说明本发明。
VI.实施例:
在以下非限定性的实施例中说明本发明。
实施例1：化合物(1-1)的固体分散体的体外筛选
使用化合物(1-1)以及5种聚合物中的一种来制备十种固体分散体，其中所述聚合物包括醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯(HPMCAS-M)、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯(HPMCP-HP55)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、PVP-乙酸乙烯酯(PVP-VA)和Euragit L100-55，并且对于每种聚合物，化合物(1-1)的载量为25％和50％。使用喷雾干燥，然后在低温对流烘箱中进行二次干燥，从而通过溶剂蒸发法来制备固体分散体。通过非沉降溶解性能测试(non-sink dissolution performance test)来评估各固体分散体的性能，所述测试测量药物的总量和随着时间溶液中所存在的游离药物的量。选择非沉降溶解是由于其能够最好地代表低溶解度化合物在体内的情况。该测试包括在分散体被引入至测试介质后约30分钟至40分钟，分散体由胃pH(0.1N NaCl，pH 1.0)至肠pH(FaFSSIF，pH 6.5)的“胃转移”，从而模拟了体内的情况。[FaFSSIF为禁食状态的人工肠液，其由3mM的牛黄胆酸钠、0.75mM的卵磷脂、0.174g NaOH颗粒、1.977g NaH2PO4·H2O、3.093g NaCl和适量纯净水500mL组成]。使用高效液相色谱(HPLC)法和Agilent 1100串联HPLC来定量溶解药物的量。制剂的溶解情况(图1A- 1J)表明：相对于在相同介质中的未经配制的化合物而言，在所有的分散体候选物中，药物的溶解度均大幅升高。在所有的固体分散体中，基于在肠pH下释放的游离药物的水平较高这一发现可知，与未经配制的化合物相比，25％化合物(1-1)在PVP中的分散体、25％化合物(1-1)在HPMCAS-M中的分散体、以及50％化合物(1-1)在HPMCAS-M中的分散体对于增强的经口吸收而言是最有前景的候选物。
实施例2：化合物(1-1)的固体分散体的体内筛选
以更大的规模制备三种最有前景的化合物(1-1)的固体分散体，即25％化合物(1-1)在PVP中的分散体、25％化合物(1-1)在HPMCAS-MG中的分散体、以及50％化合物(1-1)在HPMCAS-M中的分散体，以用于体内研究。各制剂均经过了实施例1所述的体外溶解测试的评估。为了确保这些分散体是无定形且均质的，通过X射线粉末衍射法(PXRD)和修正的差示扫描量热法(mDSC)来评估各分散体。另外，为了了解水对各种分散体的玻璃化转变温度(Tg)的影响，对首先在设定的相对湿度(即，25％、50％和75％RH)下平衡至少18小时的样品进行mDSC。[水可以用作固体分散体的增塑剂，并且由活性化合物或聚合物导致的体系的吸湿性可以影响被这些体系吸收的水的量]。
非沉降溶解结果(图2A-2C)与实施例1中分散体的结果相当。PXRD结果(图3)显示没有证据表明任意一种分散体中存在结晶化合物，并且mDSC结果(图4A-4C)显示各分散体均存在单一的玻璃化转变温度(Tg)，这表明各分散体是均匀的。X射线衍射计为Bruker D-2Phaser。对于各分散体，观察到Tg与相对湿度之间逆相关(图5)。值得注意的是，对于在75％RH下平衡的25％化合物(1-1)在PVP中的固体分散体，出现了两个Tg，这表明发生了相分离，并且该分散体还显示出在75％RH下发生了熔化，这表明在RH平衡过程中发生了结晶(图6)。该发现表明25％化合物(1-1)在PVP中的分散体的稳定性弱于HPMCAS-M分散体。
为了评估这三种分散体的生物利用度，向多组雄性猎兔犬(每组3只)给予剂量为3mg/kg的化合物(1-1)的固体分散体的水性悬液(通过口服填喂法给药)，或者给予剂量为3mg/kg的溶解于水:乙醇:聚乙二醇(PEG)400(60:20:20)中的化合物(1-1)(并以静脉推注给药至头静脉中)。在静脉给药后的0分钟(服药之前)、5分钟、15分钟和30分钟、和1小时、2小时、4小时、8小时、12小时和24小时，以及在口服填喂给药后的0分钟(服药之前)、15分钟和30分钟、和1小时、2小时、4小时、8小时、12小时和24小时由各动物的颈静脉收集血液样品。使用合格的LC-MS/MS法检测各样品中存在的化合物(1-1)的量，并且量化下限为0.5ng/mL。通过使用线性梯形法则(直至最终可测的浓度，而未将终末消除相外推至无穷大)来测定血浆浓度-时间曲线的曲线下面积(AUC)。通过对对数浓度-时间曲线的终末线性部分进行最小二乘回归分析来计算消除半衰期(t1/2)。由血浆浓度数据直接得到最大血浆浓度(Cmax)和达到Cmax的时间(tmax)。通过用口服给药后的剂量归一化的AUC除以静脉给药后的剂量归一化的AUC来计算口服生物利用度(F)，并以百分数(％)形式报告。下表1中总结的结果给出了25％化合物(1-1)在PVP中的固体分散体、25％化合物(1-1)在HPMCAS-M中的固体分散体和50％化合物(1-1)在HPMCAS-M中的固体分散体的平均口服生物利用度，分别为58％、49％和74％。
表1：狗口服(po)和静脉(iv)给药后的化合物(1-1)的药物动力学参数(数值为3只狗的平均值)
AUC：血浆浓度-时间曲线下的面积；Cmax：最大血浆浓度；F：生物利用度；HPMCAS：醋酸羟丙基甲基纤维素钠；IV：静脉内；PEG：聚乙二醇；PO：经口，口服；PVP：聚乙烯吡咯烷酮；tmax：达到Cmax的时间；t1/2：血浆消除半衰期
实施例3：包含化合物(1-1)的固体分散体的胶囊的制备和临床应用
制备10mg强度的明胶胶囊，在患有恶性血液病的患者中进行初步的临床研究。基于实施例1和2中所述的化合物(1-1)的固体分散体的体外和体内测试结果，选择50％化合物(1-1)在HPMCAS-M中的固体分散体用于胶囊的研发。以3号尺寸的硬明胶胶囊，190mg的填充量为目标来开始胶囊的研发，因为这样的构造可以通过填充更大尺寸的胶囊而潜在地增加胶囊的强度，同时保持药物组合物。根据经验，设计了4种胶囊制剂，其中具有不同量的崩解剂并且具有或不具有润湿剂。由于所有4种制剂都显示出相似的崩解测试和溶解测试结果，所以选择最简单的制剂(不具有润湿剂，并具有最少量的崩解剂)用于制造。进行制造工艺的研发和规模扩大的研究，以确定固体分散体的喷雾干燥工艺和干燥后的时间；共混的参数；为获得约0.60g/cc的目标堆密度的共混物的辊压和研磨；以及胶囊填充的条件。
将结晶化合物(1-1)和聚合物醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯(HPMCAS-M)溶解于丙酮中，并喷雾干燥，从而生产包含50％化合物(1-1)载量的固体分散体中间体(SDI)颗粒。PXRD分析显示SDI是无定形的，mDSC分析显示SDI是均匀的(即在环境条件下具有单一的Tg)。在V型搅拌机的多个段中将50％化合物(1-1)在HPMCAS-M中的固体分散体(1000g)和赋形剂(包括微晶纤维素填料-粘结剂(4428g)、交联羧甲基纤维素钠崩解剂(636g)、胶体二氧化硅分散剂/润滑剂(156g)、硬脂酸镁分散剂/润滑剂(156g)和乳糖一水合物填料(5364g))共混。然后将混合物压制并制粒，从而得到约0.6g/mL的堆密度。使用自动化的填充机将混合物分配至3号尺寸的硬明胶胶囊(目标填充量：190mg)中，并使用胶囊抛光机将制得的胶囊抛光。
在口服给药10mg胶囊(包含50％化合物(1-1)在HPMCAS中的固体分散体)后进行药物动力学的评估，并将结果与对健康志愿者口服给药4x 10mg胶囊(其包含化合物(1-1)的Eudragit固体分散体)后进行的药物动力学评估加以对比。
在下表2A和2B中提供了这两种药物组合物的比较。之前的Eudragit制剂在2009年1月8日公开的美国专利申请2009/0012064 A1中的实施例5中有所描述。该申请记载：通过在水和乙醇的混合物中溶解和/或分散式(A)所示的噻吩并***并二氮杂卓和包裹用赋形剂(包含氨溶甲基丙烯酸酯共聚物B型(Eudragit RS)、甲基丙烯酸共聚物C型(EudragitL100-55)、滑石和硅酸铝镁)来制备Eudragit固体分散体制剂。然后，使用离心流化床制粒机将上述的非均匀混合物施加在微晶纤维素球(Nonpareil 101，Freund)上，从而生产分配至2号尺寸的羟丙基甲基纤维素胶囊中的颗粒。
在这两个临床研究中，使用经验证的LC-MS/MS方法来测定化合物(1-1)的血液水平，并根据在胶囊给药后24小时内各时间点测量的化合物(1-1)的血浆浓度来进行药物动力学分析。下表3中总结的结果显示，根据AUC(924*4/1140，由于给药剂量的差异而改变)，HPMCAS-M固体分散体制剂在人中的生物利用度比Eudragit固体分散体制剂高3倍以上。此外，根据观察到的Tmax，HPMCAS制剂的吸收速度快于Eudragit制剂(Tmax为1小时vs 4-6小时)。HPMCAS-M固体分散体制剂的在***暴露方面的明显改善是意料之外的。
表2A：用于临床应用的化合物(1-1)的固体分散体胶囊
包含化合物(1-1)的50％HPMCAS固体分散体的药物组合物：10mg强度，3号尺寸的硬明胶胶囊
表2B：包含化合物(1-1)的Eudragit L100-55固体分散体的药物组合物：10mg强度，2号尺寸的硬明胶胶囊
*为无水形式
表3：在将化合物(1-1)的固体分散体经口施用给人后的药物动力学参数
AUC0-24h：24小时内OTX015血浆浓度对时间曲线下的面积
Cmax：最大血浆浓度
hr：小时
HPMCAS：醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯
mL：毫升
ng：纳克
PO：经口，口服
Tmax：达到Cmax的时间
实施例4：在大鼠中的口服暴露
在大鼠中测定化合物(1-1)的固体分散体的3种制剂的口服生物利用度。所选的3种分散体为25％化合物(1-1)在PVP中的分散体、25％化合物(1-1)在HPMCAS-MG中的分散体和50％化合物(1-1)在HPMCAS-MG中的分散体。在该研究中使用的动物为得自土尔库大学(芬兰)的中央动物实验室(Central Animal Laboratory)的无特定病体(SPF)的Hsd:Sprague Dawley大鼠。大鼠最初购自位于荷兰的Harlan。大鼠为雌性，并且为10周龄，12只大鼠用于该研究中。在聚碳酸酯Makrolon II笼中饲养动物(每个笼中3只)，动物室温为21+/-3℃，动物室内的相对湿度为55+/-15％，并且动物室内照明为人工照明，而且为12小时明暗周期的循环(暗周期为18:00至06:00之间)。白杨木屑(Tapvei Oy，Estonia)用于垫料，并且每周至少更换1次垫料。在对动物定量给药之前提供食物和水，但是在定量给药后最初的2个小时中移除食物和水。
将预先计算的量的注射用无菌水加入至装有采用合适的量的分散体的容器中，获得化合物(1-1)的浓度为0.75mg/mL，由此制备包含25％化合物(1-1)在PVP中的分散体的口服定量给药溶液、包含25％化合物(1-1)在HPMCAS-MG中的分散体的口服定量给药溶液和包含50％化合物(1-1)在HPMCAS-MG中的分散体的口服定量给药溶液。在每次给药之前，将口服定量给药溶液进行涡旋混合20秒。用于静脉给药的定量给药溶液包含0.25mg/mL的化合物(1-1)，该定量给药溶液是通过将5mg的化合物(1-1)溶解于这样的混合物中来制备的，所述混合物包含4mL的平均分子量为400Da的聚乙二醇(PEG400)、4mL的乙醇(96％纯度)和12mL的注射用无菌水。在加入水后的30分钟之内使用含有25％化合物(1-1)在PVP中的分散体的定量给药溶液。在加入水后的60分钟之内使用含有25％化合物(1-1)在HPMCAS-MG中的分散体的定量给药溶液和含有50％化合物(1-1)在HPMCAS-MG中的分散体的定量给药溶液。使用4mL/kg定量给药量，从而使化合物(1-1)的静脉给药的给药水平为1mg/kg，口服给药的给药水平为3mg/kg。定量给药方案在表4中给出。
表4.用于大鼠口服暴露研究的定量给药方案
大鼠 重量 剂量(mL) 测试项目 途径
1 236.5 0.95 化合物(1-1) 静脉
2 221 0.88 化合物(1-1) 静脉
3 237.5 0.95 化合物(1-1) 静脉
4 255.5 1.02 25％化合物(1-1)在PVP中的分散体 口服
5 224.2 0.90 25％化合物(1-1)在PVP中的分散体 口服
6 219.2 0.88 25％化合物(1-1)在PVP中的分散体 口服
7 251.6 1.01 25％化合物(1-1)在HPMCAS-MG中的分散体 口服
8 240.4 0.96 25％化合物(1-1)在HPMCAS-MG中的分散体 口服
9 238 0.95 25％化合物(1-1)在HPMCAS-MG中的分散体 口服
10 226.6 0.91 50％化合物(1-1)在HPMCAS-MG中的分散体 口服
11 228.4 0.91 50％化合物(1-1)在HPMCAS-MG中的分散体 口服
12 228.5 0.91 50％化合物(1-1)在HPMCAS-MG中的分散体 口服
在定量给药后的0.25小时、0.5小时、1小时、2小时、4小时、8小时、12小时和24小时的时间点，将约50μL的血液样品收集至包含5μL乙二胺四乙酸(EDTA)溶液的Eppendorf管中，并且每个样品都是在距所述时间点5分钟时间窗内收集的。由各样品获得20μL血浆并储存在干冰温度下以用于分析。使用经验证的液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)法对各样品中化合物(1-1)的浓度进行分析，其定量下限为0.5ng/mL。
使用Phoenix WinNonlin软件包(6.2.1版，Pharsight Corp公司，CA,USA)，采用标准的非房室模型方法来计算药物动力学参数。通过对对数浓度-时间曲线的终末线性部分进行最小二乘回归分析来计算消除半衰期(t1/2)。通过使用线性梯形法则直至最终可测的浓度，此后将终末消除相外推至无穷大来测定血浆浓度-时间曲线的曲线下面积(AUC)。通过将药物浓度曲线外推至无穷大来计算平均保留时间(MRT)，其代表了化合物在房室或***中保留的平均时间量。由血浆浓度数据直接得到最大血浆浓度(Cmax)和达到Cmax的时间(tmax)。通过用口服给药后的剂量归一化的AUC除以静脉给药后的剂量归一化的AUC来计算试验性口服生物利用度(F)，即F＝(AUC(口服)/剂量(口服))/(AUC(静脉)/剂量(静脉))]，并以百分数(％)形式报告。
药物动力学参数在表5中给出，血浆浓度对时间的图示于图7和8中。
表5.口服和静脉给药后的化合物(1-1)的药物动力学参数。值为得自3只动物的平均值。
实施例5.喷雾干燥分散体的制备
使用5种所选的聚合物来制备化合物(1-1)的喷雾干燥的分散体，这5种聚合物为：HPMCAS-MG(Shin Etsu Chemical公司)、HPMCP-HP55(Shin Etsu Chemical公司)、PVP(ISP，Ashland公司的部门)、PVP-VA(BASF公司)和Eudragit L100-55(Evonik Industries AG)。使用每种聚合物以25％和50％制备所有的喷雾干燥溶液。除了PVP溶液以外，所有的溶液都是在丙酮中制备的，PVP溶液是在乙醇中制备的。对于各溶液而言，在10g溶剂中制备1.0g固体(聚合物和化合物(1-1))。使用具有1.5mm喷嘴的Büchi B-290，PE-024喷雾干燥器和Büchi B-295，P-002冷凝器将溶液喷雾干燥。将喷雾干燥器的喷嘴压力设定为80psi，目标出口温度设定为40℃，冷却器的温度设定至-20℃，泵速设定为100％，并且抽吸器设定为100％。在喷雾干燥后，收集固体分散体，并在低温对流烘箱中过夜干燥，从而除去残余的溶剂。
实施例6：湿度和温度的稳定性
通过在高温下暴露于水分来评估化合物(1-1)在HPMCAS-MG中的喷雾干燥分散体的稳定性。通过在75％相对湿度和40℃下放置1、2和3个月，来测定作为相对湿度的函数的玻璃化转变温度(Tg)。在HDPE瓶中将喷雾干燥的分散体储存在LDPE袋内，从而模拟散装物品包装。结果总结于表6中。在时间0时，Tg为134℃，在1个月时Tg为134℃，在2个月时Tg为135℃，在3个月时Tg为134℃，并且在各测量中仅观测到单一的拐点。对每种样品还获得了X射线衍射图谱。图9示出了在稳定性测试的时间0时，化合物(1-1)在HPMCAS-MG中的固体分散体的X射线粉末衍射图谱。图10、11和12示出了在暴露于40℃和75％相对湿度分别1个月、2个月和3个月后，化合物(1-1)在HPMCAS-MG中的固体分散体的X射线粉末衍射图谱。
图案未显示与化合物(1-1)有关的任何衍射线。
实施例7：细胞系和原发性细胞的选择
ALL的不同代表性细胞系包括：Jurkat细胞(T-ALL)、RS 4-11(MLL-AF4B-前体ALL)、TO`M-1、BV173(均为Ph+ALL)；以及AML的不同代表性细胞系包括：K562(处于急性转换期的Ph+CML)、HL-60(NRAS驱动的AML2)、NOMO1(MLL-AF9驱动的AML)、KG1(BMP-FGRF+AML6)及其更不成熟的亚型KG1a；在添加有10％或20％热灭活胎牛血清(分别)、2mM L-谷氨酰胺、100IU/mL青霉素和100g/mL链霉素的RPMI 1640(Gibco Invitrogen公司，瑞士巴塞尔市)中培养上述细胞。
利用Ficoll-Paque PLUS密度梯度仪(Amersham Biosciences，美国森尼维耳市)从骨髓(BM)中分离单核细胞(MNC)。将患者细胞保持在不含生长因子的添加有10％热灭活胎牛血清、2mM L-谷氨酰胺、100IU/mL青霉素和100g/mL链霉素的IMDM(Gibco)中。
实施例8：MTT检验、凋亡评价和细胞周期分析
MTT检验：以每孔106的密度将细胞首先接种在24孔板中，以避免在较小体积中发生浓度改变，用不同剂量的由1mM DMSO储存液新鲜制备的OTX015处理。将细胞转移到96孔板中用于MTT检验。未处理的细胞和用相等量的用于稀释OTX015的DMSO(0.2-1％)处理的细胞作为对照。制备5mg/ml的3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑溴化物(MTT)(分子探针,Eugene,USA)的PBS储存液。然后在每孔中加入0.5mg/mL的MTT溶液，并在暗中在37℃下孵育4h。然后用25％SDS裂解缓冲液裂解细胞，并在570nm处读取吸光度。每种细胞系进行两次独立试验。用Prism v5软件(GraphPad公司，La Jolla,USA)计算GI50值。
凋亡评价：将来自患者或细胞系的共计1x106个细胞重悬于1mL的培养液中，并与指定剂量的由1mM DMSO储存液新鲜制备的OTX015孵育。对照细胞与相当量的二甲基亚砜(DMSO 0.2-1％)孵育以排除赋形剂的毒性。使用FACScan(Becton Dickinson,MountainView,USA)通过流式细胞分析检测凋亡细胞。细胞用碘化丙啶(PI；5μg/mL；BectonDickinson)染色，并根据制造商说明在室温下与annexin-V-FITC(Becton Dickinson)共同放置15分钟，从而确定外膜磷脂酰丝氨酸暴露。数据用Flowjo(Tree Star公司，Ashland,USA)流式细胞仪软件分析。
细胞周期分析：对于常规的细胞周期分析，收获1x106个细胞，用PBS洗涤，并用70％冰乙醇固定。细胞与100μg/mL RNAse(Sigma,Saint-Quentin Fallavier,法国)共孵育，并用PI(25μg/mL,Becton Dickinson)染色，然后在37℃下孵育30分钟。随后，通过流式细胞分析来确定细胞周期分布。数据用Flowjo(Tree Star公司，Ashland,USA)流式细胞仪软件分析。
通过外膜磷脂酰丝氨酸暴露和在不同时间点掺入碘化丙啶进行检测，化合物(1-1)诱导了用不同剂量的药物处理的三种ALL细胞系(Jurkat、RS 4-11、TOM-1)和四种AML细胞系(HL60、K562、KG1和KG1a)的凋亡(图13A-13C和图14A-14D)。化合物(1-1)在所有检测的细胞系中诱导凋亡，但是在K562和KGla细胞中程度较轻(图14B、D)。在所有其它细胞系中，在用100nM的化合物(1-1)处理后的12小时至24小时内，50％的细胞开始凋亡。
此外，化合物(1-1)在所有细胞系中诱导细胞周期停滞(图15A-15C)。凋亡数据显示，K562、KG1a和TOM-1在暴露于化合物(1-1)后在细胞周期退化方面敏感性差。注意到，较低剂量的式2(10nM)在时间延长的孵育后(即72小时)诱导凋亡(如在KG1细胞中所检测的，如图16所示)。
表7：在72小时的MTT检验和GI50值。
细胞系 GI50/nM 范围/nM
K562 11342.5 8352-14333
HL60 1306.7 543-2298
KG1 198.3 168.5-213.6
KG1a 1342.9 453.7-2214
NOMO1 229.1 96.94-332.7
Jurkat 249.7 161.5-346.6
RS4-11 34.2 29.24-38.84
BV-173 161 105.5-207.6
TOM-1 133.1 30.7-200.8
AML和ALL细胞系暴露于浓度增加的化合物(1-1)(0.1 nM-10μM)。通过在72小时的MTT检验确定增殖细胞的百分比，并用Prism软件由五个重复的平均±SD计算GI50值。GI50值以3个独立实验的平均值来表示。
如表7所示，当用不同剂量的化合物(1-1)处理AML细胞系(参见KG1a和NOMO1)以及ALL细胞系(参见RS4-11、BV-173、Jurkat和TOM-1)时，通过外膜磷脂酰丝氨酸暴露和在72小时掺入碘化丙啶进行检测(如图39A-39C所示)，化合物(1-1)在这些细胞中以增强的剂量依赖的方式诱导凋亡。在AML细胞系中，2种(KG1和NOMO1)似乎是敏感的，GI50值分别为198.3nM和229.1 nM。2种细胞系(HL60和KG1a)似乎是敏感性较差的，GI值均为1.3μM，而K562被认为是具有抗性的，其GI50值为11.3μM。OTX015在所有ALL细胞系中引起细胞存活率的剂量依赖性降低，GI50在34.2nM至249.7 nM之间。
通常，化合物的最大半抑制浓度(IC-50值)是该化合物抑制生物学或生化功能的有效性的度量。因此，可以认为IC-50值是显示抑制给定生物学过程一半(50％)时需要多少特定药物或任意化学物质的定量度量。然而，有时使用GI-50来表征导致50％生长抑制的浓度值。使用GI-50表明已经校正了时间为0时的细胞计数。作为用于计算GI-50值的一个式子的例子，将GI-50定义为100x(T-T0)/(C-T0)＝50时的测试化合物的浓度，其中例如T为暴露于测试药物48小时后的测试孔的光密度，T0为时间为0时测试孔的光密度。
此外，在几乎所有细胞系中化合物(1-1)降低了S期部分(图40A-40H)。该效果在ALL细胞系RS4-11和BV-173中更为显著，这些细胞系出现G1期累积。
实施例9：溴结构域的表达
使用实时定量聚合酶链式反应(QT-PCR)分析在不同细胞系和患者样品中研究溴结构域的表达。在用苯酚和异硫氰酸胍的试剂溶液(商标试剂，Invitrogen，Grand Island，NY)提取后获得总RNA，滴定至1μg/μL并储存在-80℃。由1μg RNA合成互补DNA(cDNA)。在热循环仪ABI 7900HT中以标准模式用十分之一的cDNA(相当于100ng的RNA)以25μL的体积进行QT-PCR反应(50℃下2分钟-95℃下10分钟，1个循环；然后95℃15秒-6℃1分钟，50个循环)。
通过QT-PCR检测不同细胞系以不同水平表达的BRD2、BRD3和BRD4(图17A-17C)。研究了三种不同类型的BRD4：保守型(BRD4c)、中间型和短型(BRD4s)。在不同的细胞系中，所述不同形式的表达没有差异。在凋亡和BRD表达之间没有明显的相关性。AML细胞系K562具有最低的表达水平，并且对化合物(1-1)处理的敏感性较低。与乳腺癌细胞系MCF-7相比，BRD的表达水平之间没有差异。在所选的来自脐血的CD34+细胞中观察到非常高水平的BRD。在患者样品中研究BRD2、BRD3和BRD4的表达。患者特征总结在表8中。在所有ALL患者中，Ph+ALL示出了较低的BRD表达水平，而在AML患者中，BRD表达水平差异较大(图17A-17C)。
表8：ALL和AML患者特征
研究用化合物(1-1)进行处理以确定其是否诱导BRD2、BRD3、BRD4和c-MYC的下调。致癌基因c-MYC是BRD4的下游伴侣以维持白血病(Delmore,J.E等，Cell.2011；146:904-917)。诸如JQ1的其他小抑制剂诱导BRD4下调以及随后的c-MYC下调。不同的白血病细胞系用100nM式2处理，在3小时内在蛋白质水平观察到与c-MYC下调相关的BRD2、BRD3和BRD4的快速下调(图18A和18B)。与TOM-1细胞相比，在3小时内，在KG1和KGla中蛋白质下调不与cDNA降低相关(图18A和18B)。在Jurkat和RS 4-11细胞中，BRD 2-4的cDNA起初下调，但是在3小时之前升高(图19A-19D)。结果示出了式2诱导了BRD2、BRD3、BRD4和c-MYC的快速下调。
此外，如图41A-41H所示，通过RQ-PCR检测到不同细胞系以不同水平表达BRD2、BRD3和BRD4，并且bcr-abl驱动细胞系BV-173和K562具有最低的基因表达水平(图41A-41B)。在包括MTT、凋亡或细胞周期停滞以及BRD基因表达在内的生物学效应之间没有明显相关性。我们研究了分别用250nM和500nM的OTX015处理，在48小时时在cDNA水平上的BRD2、BRD3和BRD4的调节。我们不能检测到由化合物(1-1)处理导致的BRD4、BRD2或BRD3的一致性下调(图41C-41H)，而在KG1、K562和Jurkat细胞中检测到BRD3和BRD2显著上调，以及在KG1和HL60细胞中BRD2增加。
实施例10：化合物(1-1)诱导CD34+和CD34-细胞凋亡的有效性
研究了化合物(1-1)在原发性细胞中诱导凋亡的有效性。通过CD34+微珠阳性选择从脐血(健康对照)和一个AML患者中获得CD34+和CD34-细胞。常规免疫表型分型显示30％的母细胞(blast cell)是CD34+阳性的。CD34+和CD34-脐血细胞的处理证明在500nM剂量水平时对未成熟CD34+细胞有毒性，而成熟的细胞未受影响(图20)。CD34+和CD34-AML细胞的处理显示出以剂量依赖的方式在体外诱导凋亡。
图32A-32C示出了以不同浓度的化合物(1-1)处理CD34-24小时后的凋亡情况。
实施例11：短暂暴露于化合物(1-1)后的凋亡
图21A-21T示出了短暂暴露于化合物(1-1)之后96小时时的凋亡。分别用10nM和100nM的化合物(1-1)处理HL60、KS62、Jurkat和RS4-11细胞。在6h时(10nM和100nM)以及24h(10nM)时洗涤细胞，丢弃上清，将细胞再次接种在新鲜培养基中。在96h时(24h至72h未示出)，通过FACS分析评价凋亡细胞，并定义为Annexin V+具有或不具有PI吸收。图21A-21T示出了两个实验中的一个代表性试验。
实施例12：暴露于不同浓度的化合物(1-1)之后的凋亡
图22A-22L示出了当暴露于0nM、1nM和10nM的化合物(1-1)后，对AML细胞系HL60进行流式细胞分析的凋亡数据。图23A、23B和23C示出了图22A-22L中HL60细胞系的凋亡。
用化合物(1-1)进行处理在HL60和K562细胞中显著地诱导凋亡(分别为图24A和24B)。在KG1和KG1a细胞(图25A和25B)、Jurkat和RS4-11细胞(图26A和26B)以及TOM1细胞(图27)中也观察到显著的凋亡。K562对化合物(1-1)的处理敏感性较差，在24h时观察到20％的凋亡细胞。在1nM和10nM浓度延长暴露时间得到不同的应答情况：仅在10nM暴露96h后，HL60、KG1和Jurkat细胞示出了>90％的凋亡并且TOM-1细胞示出了70％的凋亡；与此相比，KG1a、MLL-融合RS4-11和K562细胞示出了较低的凋亡(分别为45％、30％和20％)，而在对照中观察到15％至20％水平的凋亡。
实施例13：洗去药物后的凋亡
在敏感性HL60和Jurkat细胞系中，短暂暴露于药物6h后洗去药物也与在96小时的显著延后的凋亡有关(分别为图28和29A、29B)，但在较不敏感的K562和RS4-11细胞系中并非如此(图30A和30B)。
图31A和31B中示出了三种ALL细胞系的MTT检验数据。
实施例14：血液和骨髓的凋亡
图33A-33G和34A-34B示出了不同浓度的化合物(1-1)对血液和骨髓细胞的浓度。
实施例15：c-MYC动力学
在用化合物(1-1)处理后对AML和ALL细胞测量c-MYC动力学，在图35中示出。在用化合物(1-1)处理AML和ALL细胞系后还测量BRD4动力学，在图36中示出。图37示出了在用化合物(1-1)处理AML和ALL细胞系后的BRD2动力学。图38示出了在用化合物(1-1)处理AML和ALL细胞系后的BRD3动力学。
认为致癌基因c-MYC受到BRD4的激活，并且对白血病的维持至关重要。其他小BRD抑制剂(即JQ1)在不同设置下诱导BRD4下调以及随后的c-MYC下调。我们在不同白血病细胞系中确定了c-MYC的基础基因表达水平，其示出了有差异的结果，并且与化合物(1-1)针对MTT、凋亡或细胞周期影响的生物学效果没有明确的相关性(图42A和42B)。这些细胞系用250nM和500nM的化合物(1-1)处理，在48h时通过QT-PCR检测，在所有细胞系中观察到c-MYC下调(图42C和42D)。
由于通过RQ-PCR检测到BRD和c-MYC基础基因表达与化合物(1-1)调节之间不存在明显的相关性，我们接着研究了化合物(1-1)在蛋白质水平上对BRD 4、BRD2和BRD 3以及c-MYC的潜在影响。
在所选的AML细胞系HL60中，在暴露于500nM的化合物(1-1)72h后，BRD4和BRD3保持不受影响，而在24h-处理后观察到c-MYC的暂时下调(图43A-43C)；而几乎耐受的AML细胞系K562显示出BRD4、BRD3和c-MYC在24h暴露后开始下调(图43D-43F)。对于敏感性ALL细胞系，Jurkat示出了在48h和72h时c-MYC下调(图43G-43I)，而在RS4-11中BRD4、BRD3和c-MYC保持未受影响(图43J-43L)。
实施例16：免疫印迹
由7x106个细胞制备蛋白质提取物；在十二烷基硫酸钠(SDS)-聚丙烯酰胺凝胶上利用4-15％梯度凝胶(Bio-Rad,Marnes-la-Coquette,法国)分离30μg的蛋白质提取物，并利用小型Trans-Blot Electrophoretic Transfer cell(Bio-Rad)转移至硝酸纤维素膜上。所述膜用LiCor封闭缓冲液(LiCor,Lincoln,NE,USA)封闭，并用相应的第一抗体孵育：抗BRD4(Epitomics 5716-1,Burlingame,USA)、抗BRD3(ab56342,AbCam,UK)、抗BRD2(ab37633,AbCam,UK)、抗c-MYC(sc-764(N262)、Santa Cruz,USA)和抗GAPDH(Invitrogen398600,Grand Island,USA)。所得条带用羊抗兔InfraRedDye 680RD或羊抗鼠InfraRedDye800CW第二抗体(LiCor)染色。利用LiCor Odyssey扫描仪对膜进行成像。手动将框置于各目的条带周围，其通过Odyssey 3.0分析软件(LiCor)报告已经减去泳道内背景的原始强度的近红外荧光值。
BRD2的条带用羊(BRD2)抗兔过氧化物酶或羊抗鼠(GAPDH)过氧化物酶标记的第二抗体(Biorad,Hercules,USA)染色，并且利用增强的化学发光检测***(ECL and ECLplus，GE Healthcare，Buckinghamshire，UK)显示。
实施例17:实时定量聚合酶链式反应(RQ-PCR)
将用TRIZOL(Invitrogen,Grand Island,USA)提取后获得的总RNA滴定至1μg/uL并储存在-80℃下。由1μg RNA合成互补DNA(cDNA)。在热循环仪ABI 7900HT中以标准模式(50℃2分钟-95℃10分钟，1个循环；然后是95℃15秒-60℃1分钟，50个循环)用十分之一的cDNA(相当于100ng的RNA)以25μL体积进行QT-PCR反应(BRD2、BRD3、BRD4、c-MYC和ABL)。
表9：PCR所用的引物
实施例18：化合物(1-1)对原发性细胞的影响
我们进一步研究了化合物(1-1)对原发性患者细胞的影响。我们对来自AML患者的5个活体外样品和2个ALL患者(包括1个ALLPh+)进行了处理。患者特征在图44D中示出。化合物(1-1)在原发性AML患者样品中以不同程度(35-85％)诱导凋亡(图44A-44C)。Ph+ALL患者似乎具有耐受性。
通过RQ-PCR分析评价患者样品中BRD2、BRD3和BRD4的基础基因表达。患者特征总结在表10中。在ALL患者中，Ph+ALL显示出较低的BRD表达水平(图47A和47B；患者3至6)，而在AML患者中BRD表达水平差异较大(图47C和47D)。
表10:研究BRD表达的不同ALL和AML患者的特征
蛋白质提取物可以得自分别用250nM和500nM的OTX015活体外处理的患者5(表10；图44)的BM细胞。这些细胞在暴露于OTX015 72h后示出c-MYC的下调(45A-45C)。
本领域技术人员应该理解的是，在不脱离本发明的宽泛的发明构思的条件下可以对上文所示的并描述的示例性实施方案进行修改。因此，应该理解的是本发明不限于所示的并描述的示例性实施方案，其旨在涵盖在权利要求书所限定的本发明的精神和范围内的修改。例如，示例性实施方案的特定特征可以为所要求保护的发明的一部分或不是其一部分，并且所公开的实施方案的特征可以结合。除非本发明作出具体说明，术语“一个”、“一种”和“所述”不限于一个元素，而是应该理解为“至少一个”。
应该理解的是，本发明的至少一些特征和描述被简化为集中于与清楚地理解本发明有关的元素，同时为了清晰起见，除去了本领域普通技术人员将理解的其他元素(也可以包含本发明的一部分)。但是由于此类元素是本领域公知的，并且由于它们不一定会更有利于更好地理解本发明，所以在本发明中未提供此类元素的描述。
此外，所述的方法并非依赖于本发明列出的步骤的特定顺序，就此而言，步骤的特定顺序不应该解释为对权利要求的限定。涉及本发明的方法的权利要求不应该限于书写顺序的步骤的性能，并且本领域的技术人员可以容易理解这些步骤可以改变，并且仍然保持在本发明的精神和范围内。

Claims (24)

1.一种治疗急性淋巴细胞性白血病的方法，包括向患者施用药学可接受的量的组合物，该组合物包含噻吩并***并二氮杂卓化合物、或其可药用的盐、或其水合物或溶剂化物，所述噻吩并***并二氮杂卓化合物由下式(1)表示：
其中R1为具有1至4个碳的烷基；R2为氢原子、卤素原子、或任选地被卤素原子或羟基取代的具有1至4个碳的烷基；R3为卤素原子；任选地被卤素原子、具有1至4个碳的烷基、具有1至4个碳的烷氧基、或氰基取代的苯基；--NR5--(CH2)m--R6，其中R5为氢原子、或具有1至4个碳的烷基，m为0至4的整数，并且R6为任选地被卤素原子取代的苯基或吡啶基；或--NR7--CO--(CH2)n--R8，其中R7为氢原子或具有1至4个碳的烷基，n为0至2的整数，并且R8为任选地被卤素原子取代的苯基或吡啶基；并且R4为--(CH2)a--CO--NH--R9，其中a为1至4的整数，并且R9为具有1至4个碳的烷基；具有1至4个碳的羟烷基；具有1至4个碳的烷氧基；或任选地被具有1至4个碳的烷基、具有1至4个碳的烷氧基、氨基或羟基取代的苯基或吡啶基；或--(CH2)b--COOR10，其中b为1至4的整数，并且R10为具有1至4个碳的烷基；其中所述噻吩并***并二氮杂卓化合物形成含有无定形噻吩并***并二氮杂卓化合物和可药用的聚合物的固体分散体，其中所述固体分散体展现出基本上不存在与结晶的式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物有关的衍射线的X射线粉末衍射图案。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述由式(1)表示的噻吩并***并二氮杂卓化合物独立地选自由以下化合物构成的组：
(i)(S)-2-[4-(4-氯代苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]***并-[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基]-N-(4-羟苯基)乙酰胺或其二水合物；(ii)(S)-{4-(3'-氰基联苯-4-基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]***并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基}乙酸甲酯；(iii)(S)-{2,3,9-三甲基-4-(4-苯基氨基苯基)-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]***并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基}乙酸甲酯；以及(iv)(S)-{2,3,9-三甲基-4-[4-(3-苯基丙酰基氨基)苯基]-6H-噻吩并[3,2-f-][1,2,4]***并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基}乙酸甲酯。
3.根据权利要求2所述的方法，其中所述噻吩并***并二氮杂卓化合物为(S)-2-(4-(4-氯代苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]***并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-N-(4-羟苯基)乙酰胺二水合物。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述可药用的聚合物为醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯，其中噻吩并***并二氮杂卓化合物与醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯(HPMCAS)的重量比为1:3至1:1。
5.根据权利要求4所述的方法，其中所述固体分散体表现出约130℃至约140℃的单一的玻璃化转变温度(Tg)拐点。
6.一种治疗急性骨髓性白血病的方法，包括向患者施用药学可接受的量的组合物，该组合物包含噻吩并***并二氮杂卓化合物、或其可药用的盐、或其水合物或溶剂化物，所述噻吩并***并二氮杂卓化合物由下式(1)表示：
其中R1为具有1至4个碳的烷基；R2为氢原子、卤素原子、或任选地被卤素原子或羟基取代的具有1至4个碳的烷基；R3为卤素原子；任选地被卤素原子、具有1至4个碳的烷基、具有1至4个碳的烷氧基、或氰基取代的苯基；--NR5--(CH2)m--R6，其中R5为氢原子、或具有1至4个碳的烷基，m为0至4的整数，并且R6为任选地被卤素原子取代的苯基或吡啶基；或--NR7--CO--(CH2)n--R8，其中R7为氢原子或具有1至4个碳的烷基，n为0至2的整数，并且R8为任选地被卤素原子取代的苯基或吡啶基；并且R4为--(CH2)a--CO--NH--R9，其中a为1至4的整数，并且R9为具有1至4个碳的烷基；具有1至4个碳的羟烷基；具有1至4个碳的烷氧基；或任选地被具有1至4个碳的烷基、具有1至4个碳的烷氧基、氨基或羟基取代的苯基或吡啶基；或--(CH2)b--COOR10，其中b为1至4的整数，并且R10为具有1至4个碳的烷基；其中所述噻吩并***并二氮杂卓化合物形成含有无定形噻吩并***并二氮杂卓化合物和可药用的聚合物的固体分散体，其中所述固体分散体展现出基本上不存在与结晶的式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物有关的衍射线的X射线粉末衍射图案。
7.根据权利要求6所述的方法，其中所述由式(1)表示的噻吩并***并二氮杂卓化合物独立地选自由以下化合物构成的组：
(i)(S)-2-[4-(4-氯代苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]***并-[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基]-N-(4-羟苯基)乙酰胺或其二水合物；(ii)(S)-{4-(3'-氰基联苯-4-基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]***并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基}乙酸甲酯；(iii)(S)-{2,3,9-三甲基-4-(4-苯基氨基苯基)-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]***并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基}乙酸甲酯；以及(iv)(S)-{2,3,9-三甲基-4-[4-(3-苯基丙酰基氨基)苯基]-6H-噻吩并[3,2-f-][1,2,4]***并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基}乙酸甲酯。
8.根据权利要求6所述的方法，其中所述噻吩并***并二氮杂卓化合物为(S)-2-(4-(4-氯代苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]***并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-N-(4-羟苯基)乙酰胺二水合物。
9.根据权利要求6至8中任一项所述的方法，其中所述可药用的聚合物为醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯，其中噻吩并***并二氮杂卓化合物与醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯(HPMCAS)的重量比为1:3至1:1。
10.根据权利要求9所述的方法，其中所述固体分散体表现出约130℃至约140℃的单一的玻璃化转变温度(Tg)拐点。
11.一种治疗BCR-ABL阳性急性淋巴细胞性白血病的方法，包括向患者施用药学可接受的量的组合物，该组合物包含噻吩并***并二氮杂卓化合物、或其可药用的盐、或其水合物或溶剂化物，所述噻吩并***并二氮杂卓化合物由下式(1)表示：
其中R1为具有1至4个碳的烷基；R2为氢原子、卤素原子、或任选地被卤素原子或羟基取代的具有1至4个碳的烷基；R3为卤素原子；任选地被卤素原子、具有1至4个碳的烷基、具有1至4个碳的烷氧基、或氰基取代的苯基；--NR5--(CH2)m--R6，其中R5为氢原子、或具有1至4个碳的烷基，m为0至4的整数，并且R6为任选地被卤素原子取代的苯基或吡啶基；或--NR7--CO--(CH2)n--R8，其中R7为氢原子或具有1至4个碳的烷基，n为0至2的整数，并且R8为任选地被卤素原子取代的苯基或吡啶基；并且R4为--(CH2)a--CO--NH--R9，其中a为1至4的整数，并且R9为具有1至4个碳的烷基；具有1至4个碳的羟烷基；具有1至4个碳的烷氧基；或任选地被具有1至4个碳的烷基、具有1至4个碳的烷氧基、氨基或羟基取代的苯基或吡啶基；或--(CH2)b--COOR10，其中b为1至4的整数，并且R10为具有1至4个碳的烷基。
12.根据权利要求11所述的方法，其中所述由式(1)表示的噻吩并***并二氮杂卓化合物独立地选自由以下化合物构成的组：
(i)(S)-2-[4-(4-氯代苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]***并-[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基]-N-(4-羟苯基)乙酰胺或其二水合物；(ii)(S)-{4-(3'-氰基联苯-4-基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]***并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基}乙酸甲酯；(iii)(S)-{2,3,9-三甲基-4-(4-苯基氨基苯基)-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]***并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基}乙酸甲酯；以及(iv)(S)-{2,3,9-三甲基-4-[4-(3-苯基丙酰基氨基)苯基]-6H-噻吩并[3,2-f-][1,2,4]***并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基}乙酸甲酯。
13.根据权利要求12所述的方法，其中所述噻吩并***并二氮杂卓化合物为(S)-2-(4-(4-氯代苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]***并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-N-(4-羟苯基)乙酰胺二水合物。
14.根据权利要求11至13中任一项所述的方法，其中所述噻吩并***并二氮杂卓化合物形成固体分散体，其中所述固体分散体包含无定形的式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物、和其可药用的盐、或其水合物；以及可药用的聚合物。
15.根据权利要求14所述的方法，其中所述固体分散体展现出基本上不存在与结晶的式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物有关的衍射线的X射线粉末衍射图案。
16.根据权利要求15所述的方法，其中所述可药用的聚合物为醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯，其中噻吩并***并二氮杂卓化合物与醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯(HPMCAS)的重量比为1:3至1:1。
17.根据权利要求16所述的方法，其中所述固体分散体表现出约130℃至约140℃的单一的玻璃化转变温度(Tg)拐点。
18.一种治疗CD34阳性急性骨髓性白血病的方法，包括向患者施用药学可接受的量的组合物，该组合物包含噻吩并***并二氮杂卓化合物、或其可药用的盐、或其水合物或溶剂化物，所述噻吩并***并二氮杂卓化合物由下式(1)表示：
其中R1为具有1至4个碳的烷基；R2为氢原子、卤素原子、或任选地被卤素原子或羟基取代的具有1至4个碳的烷基；R3为卤素原子；任选地被卤素原子、具有1至4个碳的烷基、具有1至4个碳的烷氧基、或氰基取代的苯基；--NR5--(CH2)m--R6，其中R5为氢原子、或具有1至4个碳的烷基，m为0至4的整数，并且R6为任选地被卤素原子取代的苯基或吡啶基；或--NR7--CO--(CH2)n--R8，其中R7为氢原子或具有1至4个碳的烷基，n为0至2的整数，并且R8为任选地被卤素原子取代的苯基或吡啶基；并且R4为--(CH2)a--CO--NH--R9，其中a为1至4的整数，并且R9为具有1至4个碳的烷基；具有1至4个碳的羟烷基；具有1至4个碳的烷氧基；或任选地被具有1至4个碳的烷基、具有1至4个碳的烷氧基、氨基或羟基取代的苯基或吡啶基；或--(CH2)b--COOR10，其中b为1至4的整数，并且R10为具有1至4个碳的烷基。
19.根据权利要求18所述的方法，其中所述由式(1)表示的噻吩并***并二氮杂卓化合物独立地选自由以下化合物构成的组：
(i)(S)-2-[4-(4-氯代苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]***并-[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基]-N-(4-羟苯基)乙酰胺或其二水合物；(ii)(S)-{4-(3'-氰基联苯-4-基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]***并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基}乙酸甲酯；(iii)(S)-{2,3,9-三甲基-4-(4-苯基氨基苯基)-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]***并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基}乙酸甲酯；以及(iv)(S)-{2,3,9-三甲基-4-[4-(3-苯基丙酰基氨基)苯基]-6H-噻吩并[3,2-f-][1,2,4]***并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基}乙酸甲酯。
20.根据权利要求18所述的方法，其中所述噻吩并***并二氮杂卓化合物为(S)-2-(4-(4-氯代苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]***并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-6-基)-N-(4-羟苯基)乙酰胺二水合物。
21.根据权利要求18至20中任一项所述的方法，其中所述噻吩并***并二氮杂卓化合物形成固体分散体，其中所述固体分散体包含无定形的式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物、和其可药用的盐、或其水合物；以及可药用的聚合物。
22.根据权利要求21所述的方法，其中所述固体分散体展现出基本上不存在与结晶的式(1)所示的噻吩并***并二氮杂卓化合物有关的衍射线的X射线粉末衍射图案。
23.根据权利要求22所述的方法，其中所述可药用的聚合物为醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯，其中噻吩并***并二氮杂卓化合物与醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯(HPMCAS)的重量比为1:3至1:1。
24.根据权利要求23所述的方法，其中所述固体分散体表现出约130℃至约140℃的单一的玻璃化转变温度(Tg)拐点。
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