CN105997876A - 一种食品级的壳聚糖修饰的白藜芦醇脂质体的制备方法 - Google Patents

一种食品级的壳聚糖修饰的白藜芦醇脂质体的制备方法 Download PDF

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Abstract

一种壳聚糖修饰的白藜芦醇脂质体，它是一种脂质体呈规则的球形、带正电荷、粒径在100～200nm之间的食品级的脂质体；其制备方法主要是将β‑谷甾醇、大豆卵磷脂和白藜芦醇溶在无水乙醇中，通过磁力搅拌得到脂质乙醇溶液，之后缓慢滴加到超纯水中，通过搅拌除去无水乙醇，得到白藜芦醇纳米脂质体；将壳聚糖溶解在冰醋酸或苯甲酸或乳酸溶液中，在磁力搅拌器的搅拌下，将白藜芦醇纳米脂质体逐滴加到壳聚糖溶液中，混合溶液在室温孵育2～5h，即得到壳聚糖修饰的白藜芦醇脂质体。本发明所用原料均为食品级，且反应条件温和、操作简单、所制备的脂质体形貌可控、可重复性高，生物相容性好，可生物降解并能有效地提高该功能因子的生物利用度。

Description

一种食品级的壳聚糖修饰的白藜芦醇脂质体的制备方法
技术领域
本发明涉及一种食品级纳米脂质体的制备方法。
背景技术
白藜芦醇(resveratrol,简称Res)是含有芪类结构的非黄酮类多酚化合物，主要来源于葡萄、虎杖、决明子和花生等天然植物或果实中。研究表明，白藜芦醇具有抗癌、抗动脉粥样硬化、抗凝血、抗氧化、抗菌、免疫调节及神经保护等多种药理学作用，可广泛地应用于医药、保健品、食品、化妆品等领域。由于白藜芦醇水溶性较差、在光和氧化剂的作用下容易被氧化降解，摄入体内会被人体免疫***清除，这些问题已经成为白藜芦醇进一步开发应用的瓶颈，在一定程度上限制了其生物利用度的发挥。
脂质体由于具有生物相容性好、生物可降解性和无毒性等良好特性，已成为纳米递送***中最受关注的热点，并已开发出临床应用的药物。且大量研究表明脂质体作为功能因子载体，具有提高功能因子生物利用度、增强其稳定性、延长功能因子在体内的循环时间和实现缓释等优点。但传统的脂质体目前还存在靶向性低、易被网状内皮***捕获以及稳定性差等缺点。通过对脂质体的修饰可以赋予其更加优越的功能，例如靶向性、控释性和免疫逃避等。
传统的白藜芦醇脂质体制备原料为磷脂和胆固醇，但高胆固醇会引发动脉粥样硬化、冠心病等心血管疾病，随着人们对健康食品的要求提高，低胆固醇食品的需求也不断增大，传统脂质体在医药、食品等领域中的应用受到了很大限制。β-谷甾醇(Sito)作为一种植物甾醇，具有与胆固醇相似的结构，用它取代胆固醇作为脂质体膜材可以促进脂质体在不同应用领域尤其是在食品、医药以及功能性食品等领域的发展。
发明内容
本发明的目的在于提供一种反应条件温和、操作简单、所制备的脂质体形貌可控、稳定性好、可生物降解的食品级的壳聚糖修饰的白藜芦醇脂质体的制备方法。本发明主要是以大豆卵磷脂和β-谷甾醇为膜材，采用乙醇注入法制备白藜芦醇纳米脂质体，之后将壳聚糖按特定比例修饰脂质体，得到一种食品级的纳米微囊结构的白藜芦醇脂质体。
本发明的壳聚糖修饰的白藜芦醇脂质体，它是一种脂质体呈规则的球形，带正电荷，粒径在100～200nm之间的食品级的脂质体。
上述白藜芦醇脂质体的制备方法如下：
(1)原料：白藜芦醇、大豆卵磷脂、β-谷甾醇、壳聚糖；
(2)将β-谷甾醇、白藜芦醇和大豆卵磷脂按0.1～0.3:0.02～0.1:1的质量比混合，按每毫升无水乙醇中加入14～17.5mg上述三种物质的混合物的比例，在磁力搅拌器上溶解于无水乙醇中，得到脂质乙醇溶液；
(3)按脂质乙醇溶液与超纯水的体积比为1：2～4的比例，利用磁力搅拌器对脂质乙醇溶液与超纯水进行缓慢搅拌，将步骤(2)得到的脂质乙醇溶液逐滴滴入35～55℃的超纯水中，得到白藜芦醇脂质体悬液；
(4)将步骤(3)的白藜芦醇脂质体悬液搅拌1～3h，去除无水乙醇，得到白藜芦醇纳米脂质体溶液，4℃保存备用；
(5)按每毫升0.1～0.3M的冰醋酸或苯甲酸或乳酸加入0.0005～0.002g壳聚糖的比例，使壳聚糖在冰醋酸或苯甲酸或乳酸溶液中溶解，得到壳聚糖溶液；
(6)按步骤(5)的壳聚糖溶液与步骤(4)的白藜芦醇纳米脂质体溶液的体积比为1:0.5～2.5的比例，在磁力搅拌器的搅拌下，将白藜芦醇纳米脂质体逐滴加到壳聚糖溶液中，混合溶液在室温孵育2～5h，得到壳聚糖修饰的白藜芦醇脂质体。
本发明与现有技术相比具有如下优点：
1、解决了白藜芦醇溶解度低和稳定性差的问题，大大增加了其溶解度和在体内的循环时间，提高了白藜芦醇的生物利用度。
2、选用的原料来源广泛、生物相容性好，产品可用于食品、保健品以及药物等领域。
3、制备的壳聚糖修饰的白藜芦醇脂质体稳定性好、可控制功能因子的释放且具有缓释的功能。
4、反应条件温和、操作简单、所制备的脂质体形貌可控、可重复性高。
附图说明
图1是本发明实施例1制得的壳聚糖修饰的白藜芦醇脂质体透射电镜图；
图2是本发明实施例1制得的壳聚糖修饰的白藜芦醇脂质体的粒径分布图；
图3是本发明实施例1制得的壳聚糖修饰的白藜芦醇脂质体的电位图；
图4是本发明实施例2制得的壳聚糖修饰的白藜芦醇脂质体透射电镜图；
图5是本发明实施例2制得的壳聚糖修饰的白藜芦醇脂质体的粒径分布图；
图6是本发明实施例2制得的壳聚糖修饰的白藜芦醇脂质体的电位图；
图7是本发明实施例3制得的壳聚糖修饰的白藜芦醇脂质体透射电镜图；
图8是本发明实施例3制得的壳聚糖修饰的白藜芦醇脂质体的粒径分布图；
图9是本发明实施例3制得的壳聚糖修饰的白藜芦醇脂质体的电位图。
具体实施方式
实施例1
取β-谷甾醇(购自上海源叶生物科技有限公司)5mg、白藜芦醇(购自南京泽朗生物科技有限公司)1mg、大豆卵磷脂(购自沈阳天峰生物制药有限公司)50mg，通过磁力搅拌器搅拌，溶解在4mL无水乙醇中，即得到均一的脂质乙醇溶液。将脂质乙醇溶液匀速缓慢逐滴滴入到35℃的8mL超纯水中，在整个滴加过程中使用磁力搅拌器缓慢搅拌，之后继续搅拌1h除去无水乙醇，得到白藜芦醇脂质体溶液，4℃保存备用；
将0.005g壳聚糖溶解在10ml浓度为0.1M的冰醋酸溶液中，得到壳聚糖溶液；按壳聚糖溶液与白藜芦醇纳米脂质体溶液的体积比为1:0.5，在磁力搅拌器的搅拌下，将白藜芦醇纳米脂质体逐滴加到壳聚糖溶液中，混合溶液在室温孵育2h，即得到壳聚糖修饰的白藜芦醇脂质体；
应用透射电子显微镜对壳聚糖修饰的白藜芦醇脂质体进行形貌表征，如图1所示，纳米脂质体呈规则的球形。利用激光粒度仪检测壳聚糖修饰的白藜芦醇脂质体的粒径分布以及带电荷状态，如图2和图3所示，从图中可以看出纳米脂质体粒径在100～200nm之间，且带正电荷。
实施例2
取β-谷甾醇(购自上海源叶生物科技有限公司)10mg、白藜芦醇(购自南京泽朗生物科技有限公司)3mg、大豆卵磷脂(购自沈阳天峰生物制药有限公司)50mg，通过磁力搅拌器搅拌，溶解在4mL无水乙醇中，即得到均一的脂质乙醇溶液。将脂质乙醇溶液匀速缓慢逐滴滴入到45℃的12mL超纯水中，在整个滴加过程中使用磁力搅拌器缓慢搅拌，之后继续搅拌2h除去无水乙醇，得到白藜芦醇脂质体溶液，4℃保存备用；
将0.01g壳聚糖溶解在10ml浓度为0.2M的苯甲酸溶液中，得到壳聚糖溶液；按壳聚糖溶液与白藜芦醇纳米脂质体溶液的体积比为1:1.5，在磁力搅拌器的搅拌下，将白藜芦醇纳米脂质体逐滴加到壳聚糖溶液中，混合溶液在室温孵育3h，即得到壳聚糖修饰的白藜芦醇脂质体；
应用透射电子显微镜对壳聚糖修饰的白藜芦醇脂质体进行形貌表征，如图4所示，纳米脂质体呈规则的球形。利用激光粒度仪检测壳聚糖修饰的白藜芦醇脂质体的粒径分布以及带电荷状态，如图5和图6所示，从图中可以看出纳米脂质体粒径在100～200nm之间，且带正电荷。
实施例3
取β-谷甾醇(购自上海源叶生物科技有限公司)15mg、白藜芦醇(购自南京泽朗生物科技有限公司)5mg、大豆卵磷脂(购自沈阳天峰生物制药有限公司)50mg，通过磁力搅拌器搅拌，溶解在4mL无水乙醇中，即得到均一的脂质乙醇溶液。将脂质乙醇溶液匀速缓慢逐滴滴入到55℃的16mL超纯水中，在整个滴加过程中使用磁力搅拌器缓慢搅拌，之后继续搅拌3h除去无水乙醇，得到白藜芦醇脂质体溶液，4℃保存备用；
将0.02g壳聚糖溶解在10ml浓度为0.3M的乳酸溶液中，得到壳聚糖溶液；按壳聚糖溶液与白藜芦醇纳米脂质体溶液的体积比为1:2.5，在磁力搅拌器的搅拌下，将白藜芦醇纳米脂质体逐滴加到壳聚糖溶液中，混合溶液在室温孵育5h，即得到壳聚糖修饰的白藜芦醇脂质体；
应用透射电子显微镜对壳聚糖修饰的白藜芦醇脂质体进行形貌表征，如图7所示，纳米脂质体呈规则的球形。利用激光粒度仪检测壳聚糖修饰的白藜芦醇脂质体的粒径分布以及带电荷状态，如图8和图9所示，从图中可以看出纳米脂质体粒径在100～200nm之间，且带正电荷。

Claims (2)

1.一种壳聚糖修饰的白藜芦醇脂质体，其特征在于：它是一种脂质体呈规则的球形、带正电荷、粒径在100～200nm之间的食品级的脂质体。
2.权利要求1的壳聚糖修饰的白藜芦醇脂质体的制备方法，其特征在于：
(1)原料：白藜芦醇、大豆卵磷脂、β-谷甾醇、壳聚糖；
(2)将β-谷甾醇、白藜芦醇和大豆卵磷脂按0.1～0.3:0.02～0.1:1的质量比混合，按每毫升无水乙醇中加入14～17.5mg上述三种物质的混合物的比例，在磁力搅拌器上溶解于无水乙醇中，得到脂质乙醇溶液；
(3)按脂质乙醇溶液与超纯水的体积比为1：2～4的比例，利用磁力搅拌器对脂质乙醇溶液与超纯水进行缓慢搅拌，将步骤(2)得到的脂质乙醇溶液逐滴滴入35～55℃的超纯水中，得到白藜芦醇脂质体悬液；
(4)将步骤(3)的白藜芦醇脂质体悬液搅拌1～3h，去除无水乙醇，得到白藜芦醇纳米脂质体溶液，4℃保存备用；
(5)按每毫升浓度为0.1～0.3M的冰醋酸或苯甲酸或乳酸加入0.0005～0.002g壳聚糖的比例，使壳聚糖在冰醋酸或苯甲酸或乳酸溶液中溶解，得到壳聚糖溶液；
(6)按步骤(5)的壳聚糖溶液与步骤(4)的白藜芦醇纳米脂质体溶液的体积比为1:0.5～2.5的比例，在磁力搅拌器的搅拌下，将白藜芦醇纳米脂质体逐滴加到壳聚糖溶液中，混合溶液在室温孵育2～5h，得到壳聚糖修饰的白藜芦醇脂质体。
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