CN105995044A - 一种固态发酵生产棕榈仁粕蛋白饲料的方法 - Google Patents

一种固态发酵生产棕榈仁粕蛋白饲料的方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种固态发酵生产棕榈仁粕蛋白饲料的方法，该方法棕榈仁粕为原料，该方法采用微生物混合菌种经过固态发酵来降解棕榈仁粕，最终得到棕榈仁粕蛋白饲料；所述的微生物混合菌种为芽孢杆菌、产元假丝酵母菌和黑曲霉菌的混合菌种。本发明采用多菌种混合培养，把霉菌和酵母菌对培养基进行混合培养，霉菌可利分解纤维素和淀粉，而酵母菌主要利用糖源，利用菌种的协同作用提高对底物的利用效率，提高产品的蛋白质含量和营养功能。混菌培养可多达4～5种，可扩大对原料底物的适应性和防杂菌的能力。

Description

一种固态发酵生产棕榈仁粕蛋白饲料的方法
技术领域
本发明属于饲料制备技术领域，涉及棕榈仁粕蛋白饲料，具体涉及一种固态发酵生产棕榈仁粕蛋白饲料的方法。
背景技术
棕榈仁粕是棕榈籽经榨油后的废渣经分析，棕榈仁粕中还含有丰富的营养成分，其形状、颜色与菜子粕相似，略有巧克力气味。棕榈仁粕视其脱壳程度和加工工艺的不同，品质相差很大。其纤维含量高，粗蛋白含量低，赖氨酸、蛋氨酸以色氨酸均缺乏。
表1棕榈仁粕的主要组成成分
营养成分 含量％ 营养成分 含量％
水分 7.70 粗纤维 20.35
粗蛋白 15.41 钙 0.31
粗脂肪 11.50 磷 0.48
粗灰分 4.39 无氮浸出物 50.72
棕榈仁粕价格低廉，无霉性和副作用，因其粗脂肪含量较高，在具体使用中可将其归为能量饲料，可按一定的比例替代部分玉米或麸皮，特别适用于反刍动物如牛、羊、马、鹿等的饲料。使用棕榈仁粕替代部分玉米或豆粕等饲料，最直接的表现是：饲料成本大幅降低，但饲养效果不变，从而使饲料企业、畜牧企业的经济效益显著提高，在同行中的竞争力大大增强。
虽然棕榈仁粕已经在规模化运作的欧洲、韩国等地区广为使用，但由于原产国用户对棕榈仁粕发酵产品相对还不熟悉，目前还较少使用，这也说明棕榈仁粕在马国具有很大的商业开发价值。
影响棕榈仁粕作为饲料使用的原因不仅仅在于其粗纤维含量较高，更主要的是因为棕榈仁粕中含有大量的木质素和抗营养因子：～甘露聚糖。～甘露聚糖包括甘露聚糖、半乳甘露聚糖、葡甘聚糖等。如何采用有效的方法来降解甘露聚糖并使之转为可为动物利用的营养物质，已成为饲料行业一个亟待解决的问题。
目前，主要通过物理、化学和生物学途径来钝化和灭活饲料中的抗营养因子，这些方法都能在一定程度上降低木质素等抗营养因子的含量。相比物理和化学法，采用生物技术方法处理原料中的抗营养因子已越来越受到人们的重视，不仅使用效果好，而且成本低，已经成为该领域的研究重点。
发明内容
基于现有技术中存在的问题，本发明提出了一种固态发酵生产棕榈仁粕蛋白饲料的方法，解决棕榈仁粕作为饲料使用含有大量的抗营养因子的问题，以及木质素含量高(14.6％)的问题，提高棕榈仁粕作为饲料的营养价值，不产生大量废弃物的利用微生物固态发酵处理棕榈仁粕的方法，适用于规模化生产。
为了解决上述技术问题，本申请采用如下技术方案予以实现：
一种固态发酵生产棕榈仁粕蛋白饲料的方法，该方法棕榈仁粕为原料，该方法采用微生物混合菌种经过固态发酵来降解棕榈仁粕，最终得到棕榈仁粕蛋白饲料；
所述的微生物混合菌种为芽孢杆菌、产元假丝酵母菌和黑曲霉菌的混合菌种。
本发明还具有如下区别技术特征：
该方法采用微生物混合菌种经过固态发酵来降解棕榈仁粕中的木质素和抗营养因子。所述的抗营养因子为-甘露聚糖。所述的-甘露聚糖包括甘露聚糖、半乳甘露聚糖和葡甘聚糖。
如上所述的方法，该方法具体包括以下步骤：
步骤一，种子液制备：
将芽孢杆菌、产元假丝酵母菌和黑曲霉菌分别进行一级种子培养和二级种子扩培，一级种子培养的培养温度为30～40℃，培养时间为24h，转速为150～170r/min，二级种子扩培的培养温度为25～37℃，培养时间均为24～72h，转速均为150～170r/min，分别制备成芽孢杆菌种子液、酵母菌种子液和黑曲霉种子液；
步骤二，物料混合：
向粉碎的棕榈仁粕中加入水后于121℃灭菌15min，然后接入芽孢杆菌种子液、酵母菌种子液和黑曲霉种子液，芽孢杆菌种子液、酵母菌种子液和黑曲霉种子液的各自的接入量为棕榈仁粕质量的5～20％，充分混合均匀，得到混合物料，混合物料中的水分控制在30wt.～60wt.％，所述的芽孢杆菌种子液、酵母菌种子液和黑曲霉种子液的质量比为1：1：0.5；
步骤三，固态发酵：
将混合物料置于30～40℃的温度下进行发酵，pH控制在5～7，保温1天后，加入占混合物料总量0.5wt.％的尿素及占混合物料总量0.03wt.％的有机硒发酵10～12天，得到发酵产物，发酵产物干燥或湿法存储，即得棕榈仁粕蛋白饲料。
步骤一中，芽孢杆菌种子液的制备过程为：
步骤1.1，一级种子培养：从芽孢杆菌的斜面培养基上挑取一环菌体到装有10ml种子培养基的250ml三角瓶中，置于恒温调速摇床中进行菌体培养，转速为170r/min，30～40℃培养24小时；
步骤1.2，二级种子扩培：吸取5ml—级种子培养液到装有100ml种子培养基的500ml三角瓶中，置于恒温调速摇床中进行菌体培养，转速为150～170r/min，37℃培养24小时，备用。
所述的芽孢杆菌的斜面培养基为：牛肉膏3g/L，蛋白胨10g/L，氯化钠5g/L，琼脂20g/L，pH值7.0～7.2，121℃灭菌20min；所述的芽孢杆菌的种子培养基为：牛肉膏3g/L，蛋白胨10g/L,氯化钠5g/L，pH值7.0～7.2，121℃灭菌20min。
步骤一中，酵母菌种子液的制备过程为：
步骤2.1，一级种子培养：从酵母菌的斜面培养基上挑取一环菌体到装有10ml种子培养基的250ml三角瓶中，置于恒温调速摇床中进行菌体培养，转速为150r/min，30～40℃培养24小时；
步骤2.2，二级种子扩培：吸取5ml—级种子培养液到装有100ml种子培养基的500ml三角瓶中，置于恒温调速摇床中进行菌体培养，转速为150～170r/min，25～35℃培养24小时，备用。
所述的酵母菌的斜面培养基为：葡萄糖20g/L，蛋白胨10g/L，酵母膏5g/L，琼脂20g/L，121℃灭菌15min：所述的酵母菌的种子培养基为：葡萄糖20g/L，蛋白胨10g/L,酵母骨5g/L，121℃灭菌15min。
步骤一中，黑曲霉种子液的制备过程为：
步骤3.1，一级种子培养：从保藏的斜面黑曲霉的菌种挑取一环菌体到装有10ml种子培养基的250ml三角瓶中，置于恒温调速摇床中进行菌体培养，转速为150r/min，30～40℃培养24小时；
步骤3.2，二级种子扩培：吸取5ml—级种子培养液到装有100ml种子培养基的500ml三角瓶中，置于恒温调速摇床中进行菌体培养，转速为150～170r/min，30℃培养72小时，备用。
所述的黑曲霉菌的斜面培养基为：麦芽汁琼脂培养基，0.56kg/cm2，121℃灭菌30min，或察氏琼脂培养基，0.56kg/cm2，116℃高压灭菌20min；所述的黑曲霉菌的种子培养基为：麦芽汁琼脂培养基，0.56kg/cm2，121℃灭菌30min，或察氏琼脂培养基，0.56kg/cm2，116℃高压灭菌20min。
所述的黑曲霉菌为黑曲霉菌ASP-1。
步骤二中，所述的棕榈仁粕需要经过筛选核皮再粉碎至大小为3～4mm，以提高与菌种的接触面积，使发酵过程更加彻底，将原料与菌种混合。
本发明与现有技术相比，有益的技术效果是：
(Ⅰ)本发明采用多菌种混合培养，把霉菌和酵母菌对培养基进行混合培养，霉菌可利分解纤维素和淀粉，而酵母菌主要利用糖源，利用菌种的协同作用提高对底物的利用效率，提高产品的蛋白质含量和营养功能。混菌培养可多达4～5种，可扩大对原料底物的适应性和防杂菌的能力。本发明采用产元假丝酵母、芽孢杆菌和黑曲霉进行混合培养，制备种子液时，各菌种单独培养，通过三角瓶液态菌种培养，将生产所需的菌种制备好，用于一次及二次发酵使用。
(Ⅱ)添加混菌制剂一方面可以使饲料中的抗营养因子失活，另一方面可以降解多种需要降解的底物(抗营养因子或营养成分)，将饲料中营养物质降解为小分子多肽，有利于动物机体吸收，能最大限度地提高饲料的营养价值；通过微生物(细菌和真菌)进行发酵，从而产生降解酶能使抗营养因子钝化或降低。
(Ⅲ)固体发酵法利用工业废弃物生产菌体蛋白饲料是投资少，耗能低,见效快，操作简便的生物转换技术。棕榈仁粕经固体二次发酵后生产的产品相对原料蛋白质含量大大提高,且产品具有特殊的香味，提高了其营养价值，是一种优良的饲料，具有较高的经济效益和社会效益。
(Ⅳ)本发明解决棕榈仁粕中含有大量的木质素及抗营养因子，影响棕榈仁粕作为饲料使用的问题，使用棕榈仁粕替代部分玉米或豆粕等饲料，降低饲料成本。缓解饲料工业对豆粕、鱼粉等饲料原料的依赖性，开辟了新的蛋白饲料资源，缓解对传统饲料原料短缺的担忧问题的有效途径，同时产生较大的经济效益。
(Ⅴ)本发明采用固态发酵能简化生产工艺，免去液体发酵需要脱水、收集和干燥的麻烦程序，有产量高，过程简易，投资低，能耗少等优点，对营养物质的损失较少，前景十分广阔。本发明生产过程中不产生大量废弃物，不污染环境。
附图说明
图1是本发明的混菌发酵工艺流程示意图。
以下结合附图和实施例对本发明的具体内容作进一步详细地说明。
具体实施方式
本发明是利用棕榈仁粕为固态碳源，选用黑曲霉、产元假丝酵母和白地霉作为发酵菌种，黑曲霉具有多种活性较强的酶系，如Cx酶、淀粉酶、酸性蛋白酶等。黑曲霉在以棕榈仁粕为基础碳源的培养基上生长时，产生的纤维素酶和果胶酶可将基料中的大分子化合物，如纤维素、果胶等，降解转化为动物易消化利用的养分，而黑曲霉、产元假丝酵母菌可以利用这些低分子糖为碳源产生大量菌体蛋白，从而提高发酵基料中蛋白质的含量。黑曲霉在分解纤维素、果胶的过程中，会受到其分解产物的阻遏或抑制作用，若加入酵母进行混菌发酵，酵母就可利用上述分解产物合成菌体蛋白，这就起到了解除阻遏或抑制的作用，而且使纤维素和果胶的分解总量增加。此外，混菌发酵还可以延迟霉菌生孢子的时间，这也提高了蛋白质的含量。从试验的结果可见，棕榈仁粕经混菌共生发酵后蛋白质含量达到34％以上，粗纤维含量降低8.12％。棕榈仁粕经混菌共生发酵后，蛋白质含量比玉米、小麦高许多，而且混菌发酵后，棕榈仁粕中粗纤维的含量大大降低，用作饲料非常有利于动物的消化吸收。
遵从上述技术方案，以下给出本发明的具体实施例，需要说明的是本发明并不局限于以下具体实施例，凡在本申请技术方案基础上做的等同变换均落入本发明的保护范围。下面结合实施例对本发明做进一步详细说明。
实施例1：
本实施例给出一种固态发酵生产棕榈仁粕蛋白饲料的方法，如图1所示，该方法具体包括以下步骤：
步骤一，种子液制备：
将芽孢杆菌、产元假丝酵母菌和黑曲霉菌分别进行一级种子培养和二级种子扩培，一级种子培养的培养温度为30～40℃，培养时间为24h，转速为150～170r/min，二级种子扩培的培养温度为25～37℃，培养时间均为24～72h，转速均为150～170r/min，分别制备成芽孢杆菌种子液、酵母菌种子液和黑曲霉种子液；
所述的黑曲霉菌为黑曲霉菌ASP-1。
步骤一中，芽孢杆菌种子液的制备过程为：
步骤1.1，一级种子培养：从芽孢杆菌的斜面培养基上挑取一环菌体到装有10ml种子培养基的250ml三角瓶中，置于恒温调速摇床中进行菌体培养，转速为170r/min，30～40℃培养24小时；所述的芽孢杆菌的斜面培养基为：牛肉膏3g/L，蛋白胨10g/L，氯化钠5g/L，琼脂20g/L，pH值7.0～7.2，121℃灭菌20min；所述的芽孢杆菌的种子培养基为：牛肉膏3g/L，蛋白胨10g/L,氯化钠5g/L，pH值7.0～7.2，121℃灭菌20min。
步骤1.2，二级种子扩培：吸取5ml—级种子培养液到装有100ml种子培养基的500ml三角瓶中，置于恒温调速摇床中进行菌体培养，转速为150～170r/min，37℃培养24小时，备用。
步骤一中，酵母菌种子液的制备过程为：
步骤2.1，一级种子培养：从酵母菌的斜面培养基上挑取一环菌体到装有10ml种子培养基的250ml三角瓶中，置于恒温调速摇床中进行菌体培养，转速为150r/min，30～40℃培养24小时；所述的酵母菌的斜面培养基为：葡萄糖20g/L，蛋白胨10g/L，酵母膏5g/L，琼脂20g/L，121℃灭菌15min；所述的酵母菌的种子培养基为：葡萄糖20g/L，蛋白胨10g/L,酵母骨5g/L，121℃灭菌15min。
步骤2.2，二级种子扩培：吸取5ml—级种子培养液到装有100ml种子培养基的500ml三角瓶中，置于恒温调速摇床中进行菌体培养，转速为150～170r/min，25～35℃培养24小时，备用。
步骤一中，黑曲霉种子液的制备过程为：
步骤3.1，一级种子培养：从保藏的斜面黑曲霉的菌种挑取一环菌体到装有10ml种子培养基的250ml三角瓶中，置于恒温调速摇床中进行菌体培养，转速为150r/min，30～40℃培养24小时；所述的黑曲霉菌的斜面培养基为：麦芽汁琼脂培养基，0.56kg/cm2，121℃灭菌30min，或察氏琼脂培养基，0.56kg/cm2，116℃高压灭菌20min；所述的黑曲霉菌的种子培养基为：麦芽汁琼脂培养基，0.56kg/cm2，121℃灭菌30min，或察氏琼脂培养基，0.56kg/cm2，116℃高压灭菌20min。
步骤3.2，二级种子扩培：吸取5ml—级种子培养液到装有100ml种子培养基的500ml三角瓶中，置于恒温调速摇床中进行菌体培养，转速为150～170r/min，30℃培养72小时，备用。
步骤二，物料混合：
原料采用棕榈仁粕，先将棕榈仁粕粉碎，棕榈仁粕需要经过筛选核皮再粉碎至大小为3～4mm，以提高与菌种的接触面积，使发酵过程更加彻底，将原料与菌种混合。准备棕榈仁粕原料300g，向粉碎的棕榈仁粕中加入90mL水后搅拌均匀，并于121℃灭菌15min，然后分别接入芽孢杆菌二级种子培养液30g和产元假丝酵母菌二级种子培养液30g，黑曲霉二级种子液15g充分混合均勻，制成混合物料,混合物料中的水分控制在30wt.～60wt.％。
步骤三，固态发酵：
将混合物料物料置于30℃的温度下进行发酵，pH控制在7，保温1天后，加入占混合物料总量0.5wt.％的尿素及占混合物料总量0.03wt.％的有机硒发酵12天，得到发酵产物，发酵产物干燥或湿法存储，即得棕榈仁粕蛋白饲料。
实施例2：
本实施例给出一种固态发酵生产棕榈仁粕蛋白饲料的方法，如图1所示，该方法具体包括以下步骤：
步骤一，种子液制备：与实施例1相同。
步骤二，物料混合：
原料采用棕榈仁粕，先将棕榈仁粕粉碎，棕榈仁粕需要经过筛选核皮再粉碎至大小为3～4mm，以提高与菌种的接触面积，使发酵过程更加彻底，将原料与菌种混合。准备棕榈仁粕原料100kg，向粉碎的棕榈仁粕中加入30L水后搅拌均匀，并于121℃灭菌15min，然后分别接入芽孢杆菌二级种子培养液10kg和产元假丝酵母菌二级种子培养液10kg，黑曲霉二级种子液5kg充分混合均勻，制成混合物料,混合物料中的水分控制在30wt.～60wt.％。
步骤三，固态发酵：
将混合物料置于40℃的温度下进行发酵，pH控制在5，保温1天后，加入占混合物料总量0.5wt.％的尿素及占混合物料总量0.03wt.％的有机硒发酵10天，得到发酵产物，发酵产物干燥或湿法存储，即得棕榈仁粕蛋白饲料。
实施例3：
本实施例给出一种固态发酵生产棕榈仁粕蛋白饲料的方法，如图1所示，该方法具体包括以下步骤：
步骤一，种子液制备：与实施例1相同。
步骤二，物料混合：
原料采用棕榈仁粕，先将棕榈仁粕粉碎，棕榈仁粕需要经过筛选核皮再粉碎至大小为3～4mm，以提高与菌种的接触面积，使发酵过程更加彻底，将原料与菌种混合。准备棕榈仁粕原料100kg，向粉碎的棕榈仁粕中加入10L水后搅拌均匀，并于121℃灭菌15min，然后分别接入芽孢杆菌二级种子培养液20kg和产元假丝酵母菌二级种子培养液20kg，黑曲霉二级种子液10kg充分混合均勻，制成混合物料,混合物料中的水分控制在30wt.～60wt.％。
步骤三，固态发酵：
将混合物料置于40℃的温度下进行发酵，pH控制在5，保温1天后，加入占混合物料总量0.5wt.％的尿素及占混合物料总量0.03wt.％的有机硒发酵12天，得到发酵产物，发酵产物干燥或湿法存储，即得棕榈仁粕蛋白饲料。
实施例1至3所制备的发酵棕榈仁粕样品中粗蛋白的含量，参见表2。
表2棕榈仁粕固体发酵前后成分对比
本发明混菌发酵还可以延迟霉菌生孢子的时间，这也提高了蛋白质的含量。如表2所示，从试验的结果可见，棕榈仁粕经混菌共生发酵后蛋白质含量达到34.74％，粗纤维含量降低到8.12％。棕榈仁粕经混菌共生发酵后，蛋白质含量比玉米、小麦高许多，而且混菌发酵后，棕榈仁粕中粗纤维的含量大大降低，用作饲料非常有利于动物的消化吸收。
本发明采用混菌发酵较单菌发酵效果好，其优势在于多个菌种之间可以互相补偿自身的缺陷，进行协同发酵。
本发明采用固态发酵能简化生产工艺，免去液体发酵需要脱水、收集和干燥的麻烦程序，有产量高，过程简易，投资低，能耗少等优点，对营养物质的损失较少，前景十分广阔。
本发明由棕榈仁粕生产菌体蛋白，用二次发酵法高效经济。在一般设备条件下就可以进行生产，得到大量高纯度的产品以供饲料工业的需求。所选的黑曲霉、产元假丝酵母，芽孢杆菌生长繁殖快、无毒、蛋白含量高，发酵后收获容易，可进行工业化大生产。该蛋白除可作饲料外，亦可作为酶制剂的氮源。固态发酵生产的蛋白饲料全部被利用，后处理简单，成本低，无二次污染。
本发明固体发酵法具有投资少、效益高、工艺较简单、成本低,适合大规模生产等优点，为我国生产优质蛋白饲料提供了一个新的途径。

Claims (10)

1.一种固态发酵生产棕榈仁粕蛋白饲料的方法，该方法棕榈仁粕为原料，其特征在于：该方法采用微生物混合菌种经过固态发酵来降解棕榈仁粕，最终得到棕榈仁粕蛋白饲料；
所述的微生物混合菌种为芽孢杆菌、产元假丝酵母菌和黑曲霉菌的混合菌种。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：该方法具体包括以下步骤：
步骤一，种子液制备：
将芽孢杆菌、产元假丝酵母菌和黑曲霉菌分别进行一级种子培养和二级种子扩培，一级种子培养的培养温度为30～40℃，培养时间为24h，转速为150～170r/min，二级种子扩培的培养温度为25～37℃，培养时间均为24～72h，转速均为150～170r/min，分别制备成芽孢杆菌种子液、酵母菌种子液和黑曲霉种子液；
步骤二，物料混合：
向粉碎的棕榈仁粕中加入水后于121℃灭菌15min，然后接入芽孢杆菌种子液、酵母菌种子液和黑曲霉种子液，芽孢杆菌种子液、酵母菌种子液和黑曲霉种子液的各自的接入量为棕榈仁粕质量的5～20％，充分混合均匀，得到混合物料，混合物料中的水分控制在30wt.～60wt.％，所述的芽孢杆菌种子液、酵母菌种子液和黑曲霉种子液的质量比为1：1：0.5；
步骤三，固态发酵：
将混合物料置于30～40℃的温度下进行发酵，pH控制在5～7，保温1天后，加入占混合物料总量0.5wt.％的尿素及占混合物料总量0.03wt.％的有机硒发酵10～12天，得到发酵产物，发酵产物干燥或湿法存储，即得棕榈仁粕蛋白饲料。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤一中，芽孢杆菌种子液的制备过程为：
步骤1.1，一级种子培养：从芽孢杆菌的斜面培养基上挑取一环菌体到装有10ml种子培养基的250ml三角瓶中，置于恒温调速摇床中进行菌体培养，转速为170r/min，30～40℃培养24小时；
步骤1.2，二级种子扩培：吸取5ml—级种子培养液到装有100ml种子培养基的500ml三角瓶中，置于恒温调速摇床中进行菌体培养，转速为150～170r/min，37℃培养24小时，备用。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于：所述的芽孢杆菌的斜面培养基为：牛肉膏3g/L，蛋白胨10g/L，氯化钠5g/L，琼脂20g/L，pH值7.0～7.2，121℃灭菌20min；所述的芽孢杆菌的种子培养基为：牛肉膏3g/L，蛋白胨10g/L,氯化钠5g/L，pH值7.0～7.2，121℃灭菌20min。
5.如权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤一中，酵母菌种子液的制备过程为：
步骤2.1，一级种子培养：从酵母菌的斜面培养基上挑取一环菌体到装有10ml种子培养基的250ml三角瓶中，置于恒温调速摇床中进行菌体培养，转速为150r/min，30～40℃培养24小时；
步骤2.2，二级种子扩培：吸取5ml—级种子培养液到装有100ml种子培养基的500ml三角瓶中，置于恒温调速摇床中进行菌体培养，转速为150～170r/min，25～35℃培养24小时，备用。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于：所述的酵母菌的斜面培养基为：葡萄糖20g/L，蛋白胨10g/L，酵母膏5g/L，琼脂20g/L，121℃灭菌15min；所述的酵母菌的种子培养基为：葡萄糖20g/L，蛋白胨10g/L,酵母骨5g/L，121℃灭菌15min。
7.如权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤一中，黑曲霉种子液的制备过程为：
步骤3.1，一级种子培养：从保藏的斜面黑曲霉的菌种挑取一环菌体到装有10ml种子培养基的250ml三角瓶中，置于恒温调速摇床中进行菌体培养，转速为150r/min，30～40℃培养24小时；
步骤3.2，二级种子扩培：吸取5ml—级种子培养液到装有100ml种子培养基的500ml三角瓶中，置于恒温调速摇床中进行菌体培养，转速为150～170r/min，30℃培养72小时，备用。
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于：所述的黑曲霉菌的斜面培养基为：麦芽汁琼脂培养基，0.56kg/cm2，121℃灭菌30min，或察氏琼脂培养基，0.56kg/cm2，116℃高压灭菌20min；所述的黑曲霉菌的种子培养基为：麦芽汁琼脂培养基，0.56kg/cm2，121℃灭菌30min，或察氏琼脂培养基，0.56kg/cm2，116℃高压灭菌20min。
9.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的黑曲霉菌为黑曲霉菌ASP-1。
10.如权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤二中，所述的棕榈仁粕需要经过筛选核皮再粉碎至大小为3～4mm，以提高与菌种的接触面积，使发酵过程更加彻底，将原料与菌种混合。
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