CN105949337A

CN105949337A - 一种促双歧杆菌增殖的鲜银耳多糖提取方法

Info

Publication number: CN105949337A
Application number: CN201610314827.9A
Authority: CN
Inventors: 林少玲; 孔令华; 朱子瑶; 王佩瑶; 郑宝东
Original assignee: Fujian Agriculture and Forestry University
Current assignee: Fujian Agriculture and Forestry University
Priority date: 2016-05-13
Filing date: 2016-05-13
Publication date: 2016-09-21

Abstract

本发明提供了一种促双歧杆菌增殖的鲜银耳多糖提取方法，研究了鲜银耳多糖浸提的最佳工艺条件。本发明属于功能性食品技术领域，具体是银耳多糖的应用。本发明所采用的鲜银耳不仅来源丰富，生产成本低，同时也是高纤维食物，银耳多糖具有明显促进益生菌生长的效果，可应用于功能性食品添加剂和营养保健品。

Description

一种促双歧杆菌增殖的鲜银耳多糖提取方法

技术领域

本发明涉及功能性食品技术领域，尤其涉及一种促双歧杆菌增殖的鲜银耳多糖提取方法。

背景技术

多糖是长链单糖通过糖苷键相连组成的高分子碳水化合物分子，其水解生成单糖或寡糖，从不同植物中分离出的多糖已确定为可以促进或活化某个或某些寄居肠道的细菌益生元，从而有利于宿主的身体健康。例如，据报道，海藻多糖有改善肠道细菌紊乱和炎症的功能，同时使免疫***和新陈代谢状态正常化。中国台湾金线莲中提取的多糖有降低盲肠pH值和增加钙吸收水平和***物中双歧杆菌含量的益生元作用。除此之外，蘑菇类因其含有丰富的多糖，如甲壳素、纤维素、α-和β-葡聚糖、甘露聚糖、木聚糖、半乳糖等，也被视作益生元的主要来源。

作为中国最受欢迎的食用和医用真菌，银耳使用商业栽培的养殖方法。天然银耳的子实体呈水白色的凝胶叶片状，直径可达7.5 cm，而人工养殖的品种会更大。银耳由薄而竖起的，海藻状的分层的叶片组成，通常叶片的边缘是卷曲的。传统上，银耳通常用作营养食品，同时也是一味传统中药。

先前研究分析表明，新鲜银耳含有6.7-10 %蛋白质、65-71.2 %碳水化合物、0.6-12.8 %脂肪、2.4-2.75 %粗纤维、4.0-5.4 %无机盐、15.2-18.76 %水和少量B族维生素。由于含有丰富的营养物质，银耳也有一系列的生物活性。作为一种富含天然植物胶的真菌，银耳有皮肤保湿、抑制皱纹形成和促进伤口愈合的功效。银耳也是高纤维食物，可以促进胃肠蠕动，降低脂肪吸收率。此外，文献也表明，多糖是银耳的主要生物活性成分，可以抗氧化、抗肿瘤、抗糖尿病、抗炎症和免疫调节。然而，由于目前贮藏技术的限制，银耳通常以干制品形式存在。在干燥的过程中，大量的水溶性维生素、银耳胶质、碳水化合物和其他银耳中的营养物质都会流失，大大降低了银耳的营养价值。

因此，本发明旨在从新鲜银耳中提取有效促进青春双歧杆菌增殖的多糖。通过单因素法找出最优提取条件，并衡量其促进青春双歧杆菌生长的能力，评估银耳多糖作为促进肠道健康的饮食的潜力。

发明内容

本发明的目的在于提供一种促双歧杆菌增殖的鲜银耳多糖提取方法，本发明所采用的鲜银耳不仅来源丰富，生产成本低，同时也是多糖含量极高的食物，具有明显的促益生菌生长作用。

本发明提供一种促双歧杆菌增殖的鲜银耳多糖的提取方法，其使用蒸馏水为提取剂，分别以不同的料液比、提取温度和提取时间，判断鲜银耳多糖提取率。

所述方法具体为：新鲜银耳和蒸馏水的料液比采用1:10-1:40 g/mL；浸提温度采用50- 80 ℃；浸提时间采用1-4 h，进行反应并记录多糖提取率。

其中，最佳反应条件参数为：料液比为30 mL/g，浸提温度为80 ℃，浸提时间为3h。

本发明的有益效果：

此采用本具体实施方式提供的技术方案，具有如下的技术效果：

鲜银耳多糖提取率为5 %，该提取物多糖和蛋白含量分别为0.38±0.02 g/g 和41.70±0.17 mg/g，证实该提取物主要成分为多糖。而所得鲜银耳多糖提取物具有显著的促益生菌（青春双歧杆菌）生长的作用。

附图说明

图1料液比对鲜银耳多糖提取率的影响。

图2提取温度对鲜银耳多糖提取率的影响。

图3提取时间对鲜银耳多糖提取率的影响。

图4不同浓度银耳多糖对双歧杆菌增殖效应的影响。

具体实施方式

所述鲜银耳多糖的提取方法进一步包括：

第一步：将新鲜采收的银耳用剪刀剪碎，并与蒸馏水混合；

第二步：将混合后的样品置于不同提取温度和提取时间下进行均质提取；

第三步：将提取后的样品进行离心和过滤，并用旋转蒸发仪进行浓缩；

第四步：将浓缩后的样品，采用乙醇溶液进行沉降，之后再次离心；

第五步：离心之后弃上清液，取沉淀为多糖提取液，之后冷冻干燥得到新鲜银耳多糖提取物（TOS），并计算得率。

第六步：通过苯酚-硫酸法和考马斯亮蓝法检测鲜银耳提取物的多糖和蛋白含量；

所述第一步中鲜银耳的重量为5 g，料液比为1:10, 1:20, 1:30和1:40 g/mL。

所述第二步中提取温度为50，60，70 和 80 ℃，提取时间为1，2，3和 4 h。

所述第三步中过滤使用新华中速滤纸。

所述第四步中乙醇浓度为95 %，离心参数为3100 g，20 min。

所述第五步中TOS得率计算公式为；TOS(w/w)= 干燥后的多糖提取物重量/新鲜银耳的重量× 100 %。

所述第五步中多糖和蛋白含量计算公式为；TOS(w/w)= 多糖或蛋白重量/提取物的重量× 100 %。

最佳反应条件参数为：料液比为30 mL/g，浸提温度为80 ℃，浸提时间为3 h，鲜银耳多糖提取率为5 %，该提取物多糖和蛋白含量分别为0.38±0.02 g/g and 41.70±0.17mg/g，证实该提取物主要成分为多糖。

银耳（tremella）是含有丰富的营养物质和生物活性的真菌，不仅来源丰富，生产成本低，同时也是高纤维食物，具有促进胃肠蠕动，减少脂肪吸收的功能，具有明显的促益生菌生长作用。从银耳中提取的多糖有抗氧化、抗肿瘤、抗糖尿病、抗炎症和免疫调节的作用。

本发明旨在发明一种促双歧杆菌增殖的鲜银耳多糖的提取方法，通过单因素法找出最优提取条件。并衡量其促进青春双歧杆菌生长的能力，评估银耳多糖作为促进健康的饮食的潜力。

本发明经过大量的试验，发现在料液比为15 mL/g、提取温度为80 ℃，提取时间为3 h，可以得到多糖提取率为5 %，而在其他条件下则很难达到如此良好的提取效果。

以下采用实施例来详细说明本发明的实施方式，借此对本发明如何应用技术手段来解决技术问题，达成技术效果的实现过程进行充分解释，并据以实施。

实施例1：料液比实验

将新鲜的银耳5 g与蒸馏水混合，料液比为1:10, 1:20, 1:30和1:40 g/mL，固定温度为80 ℃和提取时间为1 h，然后进行离心、过滤、旋蒸、95 %乙醇沉降、再离心，去上清液冻干后称重测量TOS的得率，即考察不同料液比对TOS提取率的影响。

如图1所示，不同料液比对TOS提取有一定影响。在料液比较低时，TOS提取率随料液比增大而提高，当料液比为30:1 mL/g时，TOS提取量达到最大值。料液比超过30:1 mL/g后，TOS提取量急剧下降。

实施例2：提取温度试验

将新鲜的银耳5 g与蒸馏水混合，料液比为30:1 mL/g，提取温度为50，60，70 和 80 ℃和提取时间为1 h，然后进行离心、过滤、旋蒸、95%乙醇沉降、再离心，去上清液冻干后称重测量TOS的得率，即考察不同提取温度对TOS提取率的影响。

如图2所示，不同浸提温度对TOS提取有一定影响。当所选定的提取温度范围内，TOS提取率随着温度的升高而升高。

实施例3：提取时间试验

将新鲜的银耳5 g与蒸馏水混合，料液比为30:1 mL/g，提取温度为80 ℃和提取时间为1，2，3和 4 h，然后进行离心、过滤、旋蒸、95 %乙醇沉降、再离心，去上清液冻干后称重测量TOS的得率，即考察不同提取时间对TOS提取率的影响。

如图3所示，浸提时间在3 h内，TOS提取率随着浸提时间的延长而升高。当浸提时间超过3 h，TOS提取率稍有下降。

实施例4：不同浓度的新鲜银耳多糖对双歧杆菌增殖的影响

所有发酵实验都在发酵培养基(pH 6.8±0.2)中进行，其中发酵培养基的配方为：10g/L牛肉膏、3 g/L酵母粉、1 g/L可溶性淀粉、3 g/L NaAc、0.02 g/L多粘菌素B、5 g/L的碳水化合物、5 g/L蛋白胨、5 g/L氯化钠、0.5 g/L半胱氨酸盐。其中碳水化合物为葡萄糖,FOS或新鲜银耳多糖提取物(TOS)。

细菌原液接种到以葡萄糖、FOS或TOS作为碳源的发酵培养基上，在不同浓度碳源(0.5，1.0，2.0，4.0，8.0和16.0 g/L)下，37 ℃厌氧培养48 h。通过测量青春双歧杆菌在600nm的吸光度(OD)，来判断TOS对双歧杆菌的促增长率。试验重复3次，取平均值。

由图4可看出，当浓度为0.5-16 g/L时，随着碳源浓度的增加，各培养基中双歧杆菌OD（600）值不断增长。但当FOS、TOS添加量达到8 g/L时，菌体浓度趋于平缓，表明菌体几乎不再生长。结果表明，培养基中的碳源添加量并非越多越好，当浓度达到8 g/L以上时，多糖对双歧杆菌的生长具有抑制作用，这可能是由于高渗透压有脱水作用，导致细胞破裂，反而抑制了菌体生长。因此作为双歧杆菌体外培养的碳源时添加量要适宜，8 g/L的添加浓度即可达到很好的增殖效果。

所有上述的首要实施这一知识产权，并没有设定限制其他形式的实施这种新产品和/或新方法。本领域技术人员将利用这一重要信息，上述内容修改，以实现类似的执行情况。但是，所有修改或改造基于本发明新产品属于保留的权利。

以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。

Claims

1. 一种促双歧杆菌增殖的鲜银耳多糖提取方法，其特征在于：使用蒸馏水为提取剂，分别以不同的料液比、提取温度和提取时间，确定鲜银耳多糖提取率；新鲜银耳和蒸馏水的料液比1:10-1:40 g/mL；浸提温度50- 80 ℃；浸提时间1-4 h。

2. 根据权利要求1所述的一种促双歧杆菌增殖的鲜银耳多糖提取方法，其特征在于：料液比为30 mL/g，浸提温度为80 ℃，浸提时间为3 h。