CN105925695A - 一种用于大果紫檀分子鉴定的标准基因及分子鉴定方法 - Google Patents
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Abstract
大果紫檀(Pterocarpus macarocarpus Kurz),其材质硬,密度高,被用作高级家具。因为心材生长速度慢,形成心材需要的时间较长,市场供不应求,市场价格不断攀升。在巨大的利益驱使下,大果紫檀的假冒品泛滥,如何准确鉴定大果紫檀成为大果紫檀交易市场上的最大难题。本发明提供一种用于大果紫檀分子鉴定的标准基因及分子鉴定方法,应用该方法来鉴定大果紫檀,具有快速、准确、对样品损伤小等特点。
Description
技术领域
本发明属于分子生物学领域,具体涉及植物分子鉴定的标准基因及分子鉴定方法。
背景技术
大果紫檀(Pterocarpus macarocarpus
Kurz),是蝶形花科紫檀属植物,主要产于缅甸、泰国和老挝。大果紫檀材质硬重,密度高,其心材一般呈桔红、砖红、***、黄色或浅黄色,常有深色条纹;最显著的特点就是有浓郁的果香味。通常用在建筑和细木工、高级家具、木地板、车轮子、船板、工具把手以及工艺品上。
因为心材生长速度慢,形成心材需要的时间较长,市场供不应求,其市场价格不断攀升。在巨大的利益驱使下,大果紫檀的假冒品泛滥,如何准确鉴定大果紫檀成为大果紫檀交易市场上的最大难题。现在大多采用形态观测来鉴定大果紫檀,其操作过程复杂,对样品损伤严重,而且随着造假技术的进步,这些方法的鉴定准确率也得不到保证。
发明内容
为解决上述问题,本发明提供一种用于大果紫檀分子鉴定的标准基因及分子鉴定方法,应用该方法来鉴定大果紫檀,具有快速、准确、对样品损伤小等特点,具体技术方案如下。
(1)获取用于大果紫檀分子鉴定的标准基因
根据DNA条形码技术原理,采用PCR扩增方法。测序结果通过手工校对、序列拼接,确保所得序列为标准序列。从采集的大果紫檀样品提取基因组DNA,参考植物条形码DNA片段选取原则,利用引物进行聚合酶链式反应(PCR),扩增出样品对应的psbK-psbI基因,将扩增产物测序后分析比对,优选引物序列扩增大果紫檀样品的psbK-psbI基因序列片段作为标准基因,基因序列为序列表所示(593个碱基)。
(2)用psbK-psbI基因序列鉴定大果紫檀的方法,分为四个步骤:
第一步,取样并提取DNA;
第二步,利用PCR反应扩增psbK-psbI基因序列;
第三步,对扩增产物进行测序;
第四步,将得到的序列与权利要求1中的psbK-psbI基因序列进行同源性比对,当同源性碱基比例小于95%时,排除该物种为大果紫檀的可能,当同源性碱基比例大于或等于95%时,该样本是大果紫檀的概率是×100%。
具体实施方式
实验中,用4个不同来源的大果紫檀样本,用TIANGENE公司DNA提取试剂盒提取样本DNA。采用的正向引物:TTAGCCTTTGTTTGGCAAG,反向引物:AGAGTTTGAGAGTAAGCAT,PCR扩增条件为94℃预变性4min,接下来94℃变性45s,50℃退火45 s,72℃延伸1.5min,一共进行35个循环,最后72℃延伸10min。获得产物经测序后比对,样本间的同源性都保持在99%以上,获得序列与其他物种通过在线比对,其同源性都在83%以下。
序列表:
AATTCCCCGAGCCTTACACTTAGATTTATTGGATTTGTTGCTAAAATATCGGTATTAAACCCGAAACTTCCGGCGGATGGCCAGTAACCCAAAGAAAGGAAAGAATCGGTTATATTTTTCATATGATCTCCTCTTATGGATAGACTAATTATCTTTCTACGATTCCGAATTTATTAGTATATATTACATATATATATATTATTGGTCGATTAATTGGATTGGAAGATTCCCCATAAGAATCATACTTATTAGAATTAGATACTAGTTCTTATGTCAATTGCAAAATCTCTAGTTGTTTTAAACGCTTTCCAAAAATTTTCTGAATGAAAAAAAGGGGGGGGGATTGGACTAAAAAGGGAAGGAATAAGGCAAGCAGTATGTTAATTTCTCACCTTAAATCAGTCCTTCCCCTGCCTTCCTGTACGAACGAATAAAAAATTGTAGGAGTGAAATCAAAATAATATAATTCGAAAAAGCAAGAGCAGCAAATCAAGTACACGGAAAAAGATATATGTATTTGTATTTTTCTATTTTTTTAGGGTTAAACAAAGGGATTCGCAAATAAAAGTGCTAATGCTACAACCAGCCCATAA。
序列表:
AATTCCCCGAGCCTTACACTTAGATTTATTGGATTTGTTGCTAAAATATCGGTATTAAACCCGAAACTTCCGGCGGATGGCCAGTAACCCAAAGAAAGGAAAGAATCGGTTATATTTTTCATATGATCTCCTCTTATGGATAGACTAATTATCTTTCTACGATTCCGAATTTATTAGTATATATTACATATATATATATTATTGGTCGATTAATTGGATTGGAAGATTCCCCATAAGAATCATACTTATTAGAATTAGATACTAGTTCTTATGTCAATTGCAAAATCTCTAGTTGTTTTAAACGCTTTCCAAAAATTTTCTGAATGAAAAAAAGGGGGGGGGATTGGACTAAAAAGGGAAGGAATAAGGCAAGCAGTATGTTAATTTCTCACCTTAAATCAGTCCTTCCCCTGCCTTCCTGTACGAACGAATAAAAAATTGTAGGAGTGAAATCAAAATAATATAATTCGAAAAAGCAAGAGCAGCAAATCAAGTACACGGAAAAAGATATATGTATTTGTATTTTTCTATTTTTTTAGGGTTAAACAAAGGGATTCGCAAATAAAAGTGCTAATGCTACAACCAGCCCATAA
Claims (2)
1.一种用于大果紫檀分子鉴定的标准基因,其特征在于其氨基酸序列为序列表中的序列。
2.一种用权利要求1中的标准基因鉴定大果紫檀的方法,分为四个步骤:
第一步,取样并提取DNA;
第二步,利用PCR反应扩增psbK-psbI基因序列,前后引物序列分别为:TTAGCCTTTGTTTGGCAAG、AGAGTTTGAGAGTAAGCAT;
第三步,对扩增产物进行测序;
第四步,将得到的序列与权利要求1中的psbK-psbI基因序列进行同源性比对,当同源性碱基比例小于95%时,排除该物种为大果紫檀的可能,当同源性碱基比例大于或等于95%时,该样本是大果紫檀的概率为×100%。
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CN110241243B (zh) * | 2019-06-14 | 2024-02-27 | 浙江省检验检疫科学技术研究院 | 奥氏黄檀的分子鉴定方法及其引物和探针 |
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