CN105920067A - 一种含多糖、黄酮和生物碱的葵花盘提取物及其制备方法 - Google Patents

一种含多糖、黄酮和生物碱的葵花盘提取物及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种含多糖、黄酮和生物碱的葵花盘提取物及其制备方法，葵花盘为纯天然中药或药食同源材料，经科学提取制成抗痛风，治疗高尿酸血症，提高免疫力，降血糖血脂，保肾护肝，消肿抗炎止痛的功能性保健药食同源保健品，能够溶解尿酸石，降低血尿酸浓度，消肿抗炎，调整嘌呤和尿酸代谢，平衡体内酸碱，平衡体内激素的功效；产品安全、无副作用，具有显著保健功效，可长期服用，具有很好的市场开发前景。

Description

一种含多糖、黄酮和生物碱的葵花盘提取物及其制备方法
技术领域
本发明属于中药领域，具体涉及一种葵花盘提取物，其包含多糖、总黄酮和总生物碱，同时还提供了其制备方法。
背景技术
向日葵作为一种重要的油料植物，在全世界范围内广泛种植。葵花盘为除葵花子后的向日葵盘，传统的应用方法是将除葵花子后的葵花盘作为牲畜饲料喂养牲畜或作为烧材取暖做饭，没有发挥出其更大的经济效益和医疗作用。我国中医理论认为：向日葵花盘，药性甘、寒，归肝经，功用清热平肝，止痛止血；主治高血压病、头痛头晕、耳鸣、痛经、子宫出血、疮疹。《河北中草药》曰：“葵花盘清热燥湿，舒气散结。治头痛、头晕、风火牙痛，目赤云翳，颈前腹痛，外用于蜂窝织炎”，具有明显消炎、利尿、降压的作用。我国是向日葵的种植大国，葵花盘的资源丰富，从葵花盘中提取和制备具有药理活性的成分不仅能提供更多的临床用药，而且还能废物利用、变废为宝，起到非常好的环保作用，并且药物为纯天然来源，污染少，毒副作用小。
因此，需要进一步研究葵花盘的活性成分，以开发更多的应用价值。
发明内容
为了改善现有技术中葵花盘应用单一、资源浪费的问题，本发明对葵花盘中的活性成分做了具体研究，并意外地发现经葵花盘提取得到的提取物具有较好的治疗痛风的技术效果。本发明是通过以下的技术方案来实现的。
本发明的目的之一是提供一种葵花盘提取物，其特征在于由葵花盘用乙醇提取得到。在所得到的葵花盘提取物中，含有葵花盘多糖、葵花盘总黄酮和葵花盘总生物碱。
申请人发现，葵花盘生物碱可以特异性结合尿酸形成葵花碱尿酸复合物，复合物可以经肝脏代谢排出体外。同时抑制炎性细胞的趋化和减少炎症因子释放，对于急性发作的痛风关节炎具有独特的抗炎消肿效用。葵花盘总黄酮是一种很强的抗氧剂，可有效清除体内的氧自由基，阻止核酸的氧化，起到降低嘌呤含量的作用；黄酮还可以降低血糖和甘油三酯，降低毛细血管脆性，增加通透性可以减轻肾脏细胞压力，透过更多尿酸。同时可以稳定肾蛋白小管，有利于肾脏代谢尿酸；黄酮可以抑制炎性生物酶的渗出，可以止痛。葵花盘多糖是多糖一种，多糖是由多个单糖分子缩合、失水而成，是一类分子结构复杂且庞大的糖类物质。具有增强人体免疫功能，对肾小球蛋白可以起到调控作用，还具有抗氧化的作用，多糖可以促进骨组织的再生和愈合，有降血糖和血脂作用。
为了达到更好的治疗痛风的效果，在本发明的葵花盘提取物中，葵花盘多糖的含量以葡萄糖计为42.9%-56.4%，葵花盘总黄酮的含量以芦丁计为58.3%-74.0%，葵花盘总生物碱的含量以甲基葵花碱计为72.0%-81.5%。
进一步地，所述的葵花盘提取物通过包括如下步骤的方法制备得到：
1）将葵花盘粉碎，加入4-10质量倍的50%-95%乙醇，加热回流提取1-3 次，每次1-3 小时，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩至药材质量的0.5-2倍，得醇提液；
2）将步骤1）所得的醇提液过滤，取滤液；
3）将步骤2）所得的滤液经强酸性阳离子交换树脂充分吸附后，先用蒸馏水以4- 6BV/h的流速洗去水溶性杂质，再用5-10质量倍的50%-95%乙醇以1-3BV/h 的流速进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，干燥，即得葵花盘总黄酮；
4）将步骤3）中已进行洗脱的强酸性阳离子交换树脂用含氨水1%-5% 的50%-95%乙醇溶液以1-3BV/h 的流速进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，干燥，即得葵花盘总生物碱；
5）将步骤1）醇提后的药渣晾干，挥尽乙醇后，再用蒸馏水回流提取1-3次，每次1-3 小时，每次所用蒸馏水的质量为药渣质量的4-10倍，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩至药材质量的0.5-2 倍，得水煎液；
6）将步骤5）所得的水煎液经澄清剂处理，离心，上清液加入3-5质量倍的95%乙醇，搅匀，离心，所得沉淀物真空干燥，即得葵花盘多糖；
7） 将步骤3）所得的葵花盘总黄酮、步骤4）所得的葵花盘总生物碱和步骤6）所得的葵花盘多糖混合均匀，即得葵花盘提取物。
其中，所述的强酸性阳离子交换树脂优选为732型或HZ002型，所述的澄清剂优选为壳聚糖。
本发明的葵花盘提取物作为活性成分可被广泛应用于药品和/或保健品中。因此，本发明的另一个目的是提供一种药物组合物，其特征在于含有上述的葵花盘提取物和任选地药学上可接受的辅料。所述药物组合物的剂型可以为片剂、胶囊剂、滴丸剂、颗粒剂、散剂、微丸、溶液剂、糖浆剂、乳剂或注射剂。
另一方面，本发明还涉及所述葵花盘提取物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
1）将葵花盘粉碎，加入4-10质量倍的50%-95%乙醇，加热回流提取1-3 次，每次1-3 小时，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩至药材质量的0.5-2倍，得醇提液；
2）将步骤1）所得的醇提液过滤，取滤液；
3）将步骤2）所得的滤液经强酸性阳离子交换树脂充分吸附后，先用蒸馏水以4- 6BV/h的流速洗去水溶性杂质，再用5-10质量倍的50%-95%乙醇以1-3BV/h 的流速进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，干燥，即得葵花盘总黄酮；
4）将步骤3）中已进行洗脱的强酸性阳离子交换树脂用含氨水1%-5% 的50%-95%乙醇溶液以1-3BV/h 的流速进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，干燥，即得葵花盘总生物碱；
5）将步骤1）醇提后的药渣晾干，挥尽乙醇后，再用蒸馏水回流提取1-3次，每次1-3 小时，每次所用蒸馏水的质量为药渣质量的4-10倍，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩至药材质量的0.5-2 倍，得水煎液；
6）将步骤5）所得的水煎液经澄清剂处理，离心，上清液加入3-5质量倍的95%乙醇，搅匀，离心，所得沉淀物真空干燥，即得葵花盘多糖；
7） 将步骤3）所得的葵花盘总黄酮、步骤4）所得的葵花盘总生物碱和步骤6）所得的葵花盘多糖混合均匀，即得葵花盘提取物。
其中，所述的强酸性阳离子交换树脂优选为732型或HZ002型，所述的澄清剂优选为壳聚糖。
本发明还涉及所述的葵花盘提取物或药物组合物在制备抗痛风药物中的用途。
本发明的积极效果在于：利用具体的制备方法从葵花盘中提取得到含有葵花盘多糖、总黄酮和总生物碱产物等有效活性成分的提取物，该提取物为天然来源，毒副作用小，安全性高，并且经试验证明，对痛风具有很好的治疗效果，临床医疗效果显著。另外，提取分离工艺简单，易于操作，无需特殊设备，成本低廉，所用的试剂对环境无污染，适合于大规模的工业化生产。
具体实施方式
通过以下实施例进一步举例描述本发明，并不以任何方式限制本发明，在不背离本发明的技术解决方案的前提下，对本发明所作的本领域普通技术人员容易实现的任何改动或改变都将落入本发明的权利要求范围之内。
实施例1
葵花盘提取物的制备步骤：
1）、取葵花盘1kg粉碎后加4质量倍数的50%乙醇加热回流提取1 次，每次1小时，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩至药材质量的0.5倍，得醇提液；
2）、步骤1）所得的醇提液过滤，取滤液；
3）、将步骤2）所得的滤液经732型强酸性阳离子交换树脂充分吸附后，先用蒸馏水以4BV/h的流速洗去水溶性杂质，再用5质量倍数的50%%乙醇以1BV/h 的流速进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，干燥，即得葵花盘总黄酮；其含量以芦丁计为61.4%；
4）、将步骤3）中已进行洗脱的732型强酸性阳离子交换树脂再用含氨水5% 的50% 乙醇溶液以1BV/h 的流速进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，干燥，即得葵花盘总生物碱。其含量以甲基葵花碱计含量为75.8% ；
5）、将步骤1）醇提后的药渣晾干，挥尽乙醇后，再用蒸馏水回流提取1次，每次1 小时，每次所用蒸馏水的质量为药渣质量的4倍，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩至药材质量的0.5倍，得水煎液；
6）、将步骤5）所得的水煎液经壳聚糖处理，离心，上清液加入3质量倍量的95%乙醇，搅匀，离心，所得沉淀物真空干燥，即得葵花盘多糖；按蒽酮-硫酸法测得其含量以葡萄糖计为45.2%；
7） 将步骤3）所得的葵花盘总黄酮、步骤4）所得的葵花盘总生物碱和步骤6）所得的葵花盘多糖混合均匀，即得葵花盘提取物。
实施例2
葵花盘提取物的制备步骤：
1）、取葵花盘1kg粉碎后加6质量倍数的75%乙醇加热回流提取2 次，每次2 小时，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩至药材质量的1倍，得醇提液；
2）、步骤1）所得的醇提液过滤，取滤液；
3）、将步骤2）所得的滤液经HZ002型强酸性阳离子交换树脂充分吸附后，先用蒸馏水以5BV/h的流速洗去水溶性杂质，再用8质量倍数的75%乙醇以2BV/h 的流速进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，干燥，即得葵花盘总黄酮；其含量以芦丁计为66.4%；
4）、将步骤3）中已进行洗脱的HZ002型强酸性阳离子交换树脂再用含氨水3% 的体积百分浓度为75% 乙醇溶液以2BV/h 的流速进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，干燥，即得葵花盘总生物碱，其含量以甲基葵花碱计含量为76.8% ；
5）、将步骤1）醇提后的药渣晾干，挥尽乙醇后，再用蒸馏水回流提取2次，每次2小时，每次所用蒸馏水的质量为药渣质量的8倍，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩至药材质量的1倍，得水煎液；
6）、将步骤5）所得的水煎液经壳聚糖处理，离心，上清液加入4质量倍量的95%乙醇，搅匀，离心，所得沉淀物真空干燥，即得葵花盘多糖；按蒽酮-硫酸法测得其含量以葡萄糖计为49.8%；
7）、将步骤3）所得的葵花盘总黄酮、步骤4）所得的葵花盘总生物碱和步骤6）所得的葵花盘多糖混合均匀，即得葵花盘提取物。
实施例3
葵花盘提取物的制备步骤：
1）、将葵花盘1kg粉碎加10质量倍数的75%乙醇加热回流提取3次，每次3小时，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩至药材质量的2倍，得醇提液；
2）、步骤1）所得的醇提液过滤，取滤液；
3）、将步骤2）所得的滤液经HZ002型强酸性阳离子交换树脂充分吸附后，先用蒸馏水以6BV/h的流速洗去水溶性杂质，再用10质量倍数、浓度为95%乙醇以3BV/h 的流速进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，干燥，即得葵花盘总黄酮；其含量以芦丁计为70.5%；
4）、将步骤3）中已进行洗脱的HZ002型强酸性阳离子交换树脂再用含氨水5% 的95% 乙醇溶液以3BV/h 的流速进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，干燥，即得葵花盘总生物碱，其含量以甲基葵花碱计含量为77.6% ；
5）、将步骤1）醇提后的药渣晾干，挥尽乙醇后，再用蒸馏水回流提取3次，每次3 小时，每次所用蒸馏水的质量为药渣质量的10倍，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩至药材质量的2倍，得水煎液；
6）、将步骤5）所得的水煎液经壳聚糖处理，离心，上清液加入5倍量95%乙醇，搅匀，离心，所得沉淀物真空干燥，即得葵花盘多糖；按蒽酮-硫酸法测得其含量以葡萄糖计为53.7%；
7）、将步骤3）所得的葵花盘总黄酮、步骤4）所得的葵花盘总生物碱和步骤6）所得的葵花盘多糖混合均匀，即得葵花盘提取物。
试验例1：用动物模型证明治疗痛风疾病的药理作用
一、试验材料
1. 动物：昆明种小鼠，体重（20g±2g），由吉林大学临床动物研究中心提供。
2. 给药样品：空白对照组（蒸馏水），本发明组（实施例1、2、3制备得到的葵花盘提取物）
二、试验方法
1.镇痛实验
取雄性小鼠40只，随机分为空白对照组，葵花盘提取物组（实施例1，实施例2，实施例3），每组10只。按120mg kg-1给药，1次一天，空白对照组给予等量蒸馏水，连续给药5天，于末次给药1小时后，每组各取10只小鼠腹腔注射0.7%醋酸0.1ml g-1，记录各组小鼠20min内扭体次数。
表1. 对醋酸所致小鼠扭体反应的影响
与空白对照组比较，*P<0.05，**P<0.01
2.小鼠血尿酸（UA）、黄嘌呤氧化酶（XOD）及尿素氮（BUN）
取雄性小鼠100只，随机分为正常组、模型组、本发明葵花盘提取物组（实施例1，实施例2，实施例3），每组20只。除正常组外，每组均以酵母30g·kg-1灌胃，连续一周。从第3天开始本发明组灌胃，按120mg kg-1给药，连续给药5d。小鼠摘除眼球法取血，分离血清，在波长690nm、530nm和640nm处测定UA、XOD和BUN值。
表2.对酵母膏致高尿酸血症小鼠血清UA、XOD及BUN的影响
与正常组比较*P<0.05，**P<0.01;与模型组比较*P<0.05，**P<0.01 n=20
三、试验结果
上述表1和表2的试验结果表明，本发明的葵花盘提取物能显著减轻化学物质产生的疼痛，说明本发明的葵花盘提取物具有镇痛作用。另外，本发明的葵花盘提取物能显著抑制黄嘌呤氧化酶活性，减少尿酸的生成，表明能明显降低血中尿素氮，改善肾功能。
试验例2：典型临床病例
病例1：
李某，男，48岁，患者6年前在一次饮酒后，突然发生左足背，大拇指肿痛，难以入睡，局部灼热红肿。在当地服用消炎阵痛药后，一周后疼痛缓解。以后，每遇饮酒或感冒后即易发作，每遇发作，自服***等药。近一年来服用上药效果不佳。疼痛固定于左足背及左拇指。
治疗：服用本发明实施例1制备的葵花盘提取物2疗程后，症状消失，行走自如，无跛行。为巩固疗效嘱继续服用3个疗程。随访半年，未复发。
病例2：
某女，67岁，曾经有关节疼痛病史亦未在意，未作治疗，近两年来由于饮食海鲜，症状加重，全身各个关节基本全部受累.医院诊断为痛风性关节炎.
治疗：服用本发明实施例1制备的葵花盘提取物1疗程后，症状消失，正常行走活动没有影响，各项指标正常，饮食习惯已经基本改过来了，为巩固疗效嘱继续服用3个疗程。随访2年，未复发。
病例3：
赵某，男，59岁，因连续夜间足跖趾疼痛影响睡眠而心烦，伴有脘腹痞满、大便干结，查舌质暗红，苔白稍厚，脉弦滑。血液检查提示，血脂偏高，血尿酸554umol/L。患者形体丰满，工作应酬多，生活无规律，偏食肥厚重味，嗜饮啤酒及可乐饮品。
服用本发明实施例1制备的葵花盘提取物，服用疼痛即有减轻，2个疗程后肿胀疼痛基本消随访1年，未复发。
病例4：
王某，男45岁现病史：自2013年开始，患痛风3年，每年发作3-4次。既往最高尿酸值680umol/L，发作时右脚部跖趾关节明显疼痛，伴有红肿现象。疼痛难忍时，应用过双氯芬酸钠止痛。个人史：喜食海鲜、肉类，食用鸡蛋、豆制品居多。服用情况：2015年12月29日，医院内静脉血测得尿酸值517.37umol/L，肌酐：101.69umol/L甘油三酯：1.89mmol/L丙氨酸氨转化酶：59.46IU/L。2016年2月21日医院测得尿酸值497.50umol/L。
自2016年1月4号开始服用本发明实施例1的葵花盘提取物，服用方法：10g/次/日，晨起空腹服用。1月15日，脚部疼痛，疼痛程度患者可忍受，未服用任何止痛药物，三天后基本好转；2月29日，测得指尖血460umol/L，在此期间痛风发作，因工作原因，服用双氯芬酸钠止痛，2天疼痛缓解；3月5日，患者崴脚，未诱发痛风；3月19-20日，患者左脚脚背出现疼痛，疼痛程度患者难以忍受，因患者胃部不适，建议服用依托考昔，但患者始终没有用药，2-3天症状缓解。目前患者感受良好，仍在继续服用。

Claims (10)

1.一种葵花盘提取物，其特征在于由葵花盘用乙醇提取得到。
2.如权利要求1所述的葵花盘提取物，其特征在于含有葵花盘多糖、葵花盘总黄酮和葵花盘总生物碱。
3.如权利要求2所述的葵花盘提取物，其特征在于葵花盘多糖的含量以葡萄糖计为42.9%-56.4%，葵花盘总黄酮的含量以芦丁计为58.3%-74.0%，葵花盘总生物碱的含量以甲基葵花碱计为72.0%-81.5%。
4.如权利要求1-3之一所述的葵花盘提取物，其特征在于所述提取物的制备方法包括如下步骤：
1）将葵花盘粉碎，加入4-10质量倍的50%-95%乙醇，加热回流提取1-3 次，每次1-3 小时，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩至药材质量的0.5-2倍，得醇提液；
2）将步骤1）所得的醇提液过滤，取滤液；
3）将步骤2）所得的滤液经强酸性阳离子交换树脂充分吸附后，先用蒸馏水以4- 6BV/h的流速洗去水溶性杂质，再用5-10质量倍的50%-95%乙醇以1-3BV/h 的流速进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，干燥，即得葵花盘总黄酮；
4）将步骤3）中已进行洗脱的强酸性阳离子交换树脂用含氨水1%-5% 的50%-95%乙醇溶液以1-3BV/h 的流速进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，干燥，即得葵花盘总生物碱；
5）将步骤1）醇提后的药渣晾干，挥尽乙醇后，再用蒸馏水回流提取1-3次，每次1-3 小时，每次所用蒸馏水的质量为药渣质量的4-10倍，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩至药材质量的0.5-2 倍，得水煎液；
6）将步骤5）所得的水煎液经澄清剂处理，离心，上清液加入3-5质量倍的95%乙醇，搅匀，离心，所得沉淀物真空干燥，即得葵花盘多糖；
7） 将步骤3）所得的葵花盘总黄酮、步骤4）所得的葵花盘总生物碱和步骤6）所得的葵花盘多糖混合均匀，即得葵花盘提取物。
5.如权利要求4所述的葵花盘提取物，其特征在于所述的强酸性阳离子交换树脂为732型或HZ002型，所述的澄清剂为壳聚糖。
6.一种药物组合物，其特征在于含有如权利要求1-5之一所述的葵花盘提取物和任选地药学上可接受的辅料。
7.如权利要求6所述的药物组合物，其特征在于为片剂、胶囊剂、滴丸剂、颗粒剂、散剂、微丸、溶液剂、糖浆剂、乳剂或注射剂。
8.如权利要求1-5之一所述的葵花盘提取物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
1）将葵花盘粉碎，加入4-10质量倍的50%-95%乙醇，加热回流提取1-3 次，每次1-3 小时，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩至药材质量的0.5-2倍，得醇提液；
2）将步骤1）所得的醇提液过滤，取滤液；
3）将步骤2）所得的滤液经强酸性阳离子交换树脂充分吸附后，先用蒸馏水以4- 6BV/h的流速洗去水溶性杂质，再用5-10质量倍的50%-95%乙醇以1-3BV/h 的流速进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，干燥，即得葵花盘总黄酮；
4）将步骤3）中已进行洗脱的强酸性阳离子交换树脂用含氨水1%-5% 的50%-95%乙醇溶液以1-3BV/h 的流速进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，干燥，即得葵花盘总生物碱；
5）将步骤1）醇提后的药渣晾干，挥尽乙醇后，再用蒸馏水回流提取1-3次，每次1-3 小时，每次所用蒸馏水的质量为药渣质量的4-10倍，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩至药材质量的0.5-2 倍，得水煎液；
6）将步骤5）所得的水煎液经澄清剂处理，离心，上清液加入3-5质量倍的95%乙醇，搅匀，离心，所得沉淀物真空干燥，即得葵花盘多糖；
7） 将步骤3）所得的葵花盘总黄酮、步骤4）所得的葵花盘总生物碱和步骤6）所得的葵花盘多糖混合均匀，即得葵花盘提取物。
9.如权利要求1-5之一所述的葵花盘提取物在制备抗痛风药物中的用途。
10.如权利要求6或7所述的药物组合物在制备抗痛风药物中的用途。
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