CN105851458A - 鲍内脏抗氧化肽的制备方法 - Google Patents

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吴靖娜
刘智禹
路海霞
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Abstract

本发明公开一种鲍内脏抗氧化肽的制备方法，该方法采用酶解法制备鲍内脏抗氧化肽，采用鼠尾藻粉对鲍内脏抗氧化肽进行脱除重金属处理，采用活性碳对鲍内脏抗氧化肽进行精制，经活性碳处理后，实现了酶解液的脱腥脱色；同时结合陶瓷膜和超滤膜分离技术对酶解产物进行初步分离纯化，实现了多肽和多糖的有效分离。将鲍内脏开发成为抗氧化活性肽功能食品，实现鲍内脏资源的高值化利用，既具有成本优势，还对综合利用蛋白质资源提供了一条有效途径。经超滤处理后其总糖含量降至3％左右，显著低于原液的40％，该工艺可制备高活性的抗氧化肽，适用于抗氧化肽的规模化生产。

Description

鲍内脏抗氧化肽的制备方法
技术领域
本发明涉及海产品副产物加工的技术领域。更具体地，涉及一种鲍内脏抗氧化肽的制备方法。
背景技术
近年来，鲍产业已成为福建省海水养殖的支柱产业之一，2013年，鲍养殖量达到8.8470万吨，约占全国鲍产量的80％。随着与日俱增的市场需求，鲍加工产业呈现蓬勃发展的趋势。
目前，在鲍鱼加工生产中，主要以生产鲜活鲍鱼、鲍鱼罐头和干鲍3种产品为主，鲍鱼的加工与食用大部分以腹足为主，在鲍鱼加工过程中，产生的大量的鲍内脏、鲍蒸煮液等副产物。虽然鲍鱼加工的脏器副产物中含有丰富的蛋白质、维生素等营养成分及一些生物活性物质，但是由于鲍鱼内脏利用技术的缺乏，导致占鲍鱼总重量1/4左右的鲍鱼内脏无法充分利用。
现有技术中，鲍鱼副产物可以用来生产饲料等低附加值产品；极少部分鲍鱼内脏用于加工成饲料，大部分鲍鱼内脏没有得到充分的利用。国内外有报道将鲍鱼内脏加工成鱼蛋白饲料粉、鱼油、鱼精蛋白与发酵成鱼露等；在学术研究方面，有学者从鲍鱼内脏中提取纤维素酶、制备鲍鱼多糖等，从鲍鱼壳中提取甲壳素等。但是，将鲍鱼内脏开发成为抗氧化活性肽功能的食品还未见报道。
因此，需要提供一种鲍内脏抗氧化肽的制备方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种鲍内脏抗氧化肽的制备方法，该方法解决下述两个问题：。
本发明要解决的第一个问题是对所提活性物质进行脱除重金属、脱色和脱腥处理。
本发明要解决的第二个问题是对所提活性物质进行初步分离纯化，实现了多肽和多糖的有效分离，该方法提取工艺简单，适合工业化生产。
为达到上述目的，本发明采用下述技术方案：
一种鲍内脏抗氧化肽的制备方法，所述鲍内脏抗氧化肽的制备方法包括以下步骤：
(1)预处理，将鲍内脏先初步粉碎后,再经胶体磨研磨成均匀颗粒的匀浆；
(2)动物蛋白酶酶解，将鲍内脏与水按质量比1:1(即料液比1/1)混合，用动物蛋白酶进行酶解；
(3)鼠尾藻粉脱除重金属：将鼠尾藻经低温30-45℃烘干，粉碎、过筛得到40-100目鼠尾藻粉，添加到步骤(2)的酶解液中，搅拌；
(4)活性碳脱色脱腥，将脱除重金属的酶解液在35℃的条件下采用活性碳进行脱色脱腥1h；
(5)陶瓷膜处理，将酶解液经陶瓷膜处理，滤除杂质，收集透过液；
(6)超滤处理，将陶瓷膜处理的透过液经超滤膜处理，收集分子量小于10kDa的组分，干燥，即可得到高活性的抗氧化肽粉。
优选地，步骤(2)所述酶解时间4.8h、酶添加量3000U/g，酶解温度54℃；
优选地，步骤(3)所述的鼠尾藻粉添加量为酶解液的0.5-3wt％，搅拌时间为1-3小时。
优选地，步骤(4)所述活性碳添加量为酶解液的1.0wt％。
优选地，步骤(5)所述陶瓷膜过滤的操作压力1.5-2.5Mpa，陶瓷膜孔径为200nm。
优选地，步骤(6)所述超滤膜过滤的操作压力2.0-4.0Mpa，超滤膜为截留相对分子质量MWCO 10kDa的超滤膜。
本发明的有益效果如下：
本发明采用酶解法制备鲍内脏抗氧化肽，采用鼠尾藻粉对鲍内脏抗氧化肽进行脱除重金属处理，采用活性碳对鲍内脏抗氧化肽进行精制，经活性碳处理后，实现了肽粉的脱腥脱色；同时结合陶瓷膜和超滤膜分离技术对酶解产物进行初步分离纯化，实现了多肽和多糖的有效分离。将鲍内脏开发成为抗氧化活性肽功能食品，实现鲍内脏资源的高值化利用，既具有成本优势，还对综合利用蛋白质资源提供了一条有效途径。经超滤处理后其总糖含量降至3％左右，显著低于原液的40％，该工艺可制备高活性的抗氧化肽，适用于抗氧化肽的规模化生产。
具体实施方式
为了更清楚地说明本发明，下面结合优选实施例对本发明做进一步的说明。本领域技术人员应当理解，下面所具体描述的内容是说明性的而非限制性的，不应以此限制本发明的保护范围。
实施例1
一种鲍内脏抗氧化肽的制备方法，所述鲍内脏抗氧化肽的制备方法包括以下步骤：
(1)预处理，将1000克(湿重)鲍内脏先初步粉碎后，再经胶体磨研磨成均匀颗粒的匀浆；
(2)动物蛋白酶酶解，将鲍内脏与水混合，鲍内脏与水质量比为1:1(即料液比1/1)、酶解时间4.8h、酶添加量3000U/g，酶解温度54℃；
(3)鼠尾藻粉脱除重金属，将40克鼠尾藻经低温40℃烘干，粉碎、过40目筛得到鼠尾藻粉，添加到步骤(2)所述的2000克的酶解液中，，搅拌2小时；
(4)活性碳脱色脱腥，将酶解液在35℃的条件下采用活性炭进行脱腥脱色1h，其中活性炭添加量为酶解液的1.0wt％。
(5)陶瓷膜处理，将酶解液经孔径为200nm的陶瓷膜处理，滤除大部分杂质，收集透过液；所述的陶瓷膜过滤的操作压力1.5Mpa；
(6)超滤处理，将陶瓷膜处理的透过液经超滤膜处理，所述的超滤膜过滤的操作压力2.0Mpa，收集分子量小于10kDa的组分，干燥，即可得到高活性的抗氧化肽粉99.25克(干重)；超滤后总糖含量为3.84％，原液的总糖含量为40.18％。
采用了鼠尾藻粉和活性碳对所制备的鲍内脏酶解液进行了脱除重金属和脱色脱腥处理。一般鲍内脏多糖都采用醇沉的方法进行糖与蛋白的分离，而本发明采用了超滤膜技术实现了多肽与多糖的有效分离，适用于抗氧化肽的规模化生产。
经体外抗氧化实验,测得鲍内脏抗氧化肽的DPPH自由基清除能力的IC50为0.87mg/mL，羟自由基清除能力的IC50为7.53mg/mL，超氧阴离子自由基清除能力的IC50为19.41mg/mL.经细胞实验表明，所制备的鲍内脏抗氧化肽对HepG2细胞无细胞毒作用，在HepG2细胞氧化应激模型中，鲍内脏抗氧化肽显著提高细胞存活率，减少H2O2对细胞的氧化损伤。同时，经动物实验验证表明，鲍内脏抗氧化肽在一定程度上能提高抗氧化酶类的活性、总抗氧化能力水平和降低丙二醛的含量，具有一定的抗氧化能力。
实施例2
一种鲍内脏抗氧化肽的制备方法，所述鲍内脏抗氧化肽的制备方法包括以下步骤：
(1)预处理，将1000克(湿重)鲍内脏先初步粉碎后，再经胶体磨研磨成均匀颗粒的匀浆；
(2)动物蛋白酶酶解，将鲍内脏与水混合，鲍内脏与水质量比为1:1(即料液比1/1)、酶解时间4.8h、酶添加量3000U/g，酶解温度54℃；
(3)鼠尾藻粉脱除重金属，将30份鼠尾藻经低温35℃烘干，粉碎、过100目筛得到鼠尾藻粉，加入到酶解液中，搅拌2小时；
(4)活性碳脱色脱腥，将酶解液在35℃的条件下采用活性炭进行脱腥脱色1h，其中活性炭添加量为1.0wt％。
(5)陶瓷膜处理，将酶解液经孔径为200nm的陶瓷膜处理，滤除大部分杂质，收集透过液；所述的陶瓷膜过滤的操作压力2.5Mpa；
(6)超滤处理，将陶瓷膜处理的透过液经超滤膜处理，所述的超滤膜过滤的操作压力4.0Mpa，收集分子量小于10kDa的组分，干燥，即可得到高活性的抗氧化肽粉99.74克(干重)；超滤后总糖含量为3.91％，原液的总糖含量为41.27％。
采用了鼠尾藻粉和活性碳对所制备的鲍内脏酶解液进行了脱除重金属和脱色脱腥处理。一般鲍内脏多糖都采用醇沉的方法进行糖与蛋白的分离，而本发明采用了超滤膜技术实现了多肽与多糖的有效分离，适用于抗氧化肽的规模化生产。
经动物实验验证表明，鲍内脏抗氧化肽在一定程度上能提高抗氧化酶类的活性、总抗氧化能力水平和降低丙二醛的含量，具有一定的抗氧化能力。
实施例3
一种鲍内脏抗氧化肽的制备方法，所述鲍内脏抗氧化肽的制备方法包括以下步骤：
(1)预处理，将1000克(湿重)鲍内脏先初步粉碎后，再经胶体磨研磨成均匀颗粒的匀浆；
(2)动物蛋白酶酶解，将鲍内脏与水混合，鲍内脏与水质量比为1:1(即料液比1/1)、酶解时间4.8h、酶添加量3000U/g，酶解温度54℃；
(3)鼠尾藻粉脱除重金属，将35份鼠尾藻经低温35℃烘干，粉碎、过80目筛得到鼠尾藻粉，加入到酶解液中，搅拌2小时；
(4)活性碳脱色脱腥，将酶解液在35℃的条件下采用活性炭进行脱腥脱色1h，其中活性炭添加量为1.0wt％。
(5)陶瓷膜处理，将酶解液经孔径为200nm的陶瓷膜处理，滤除大部分杂质，收集透过液；所述的陶瓷膜过滤的操作压力2.5Mpa；
(6)超滤处理，将陶瓷膜处理的透过液经超滤膜处理，所述的超滤膜过滤的操作压力4.0Mpa，收集分子量小于10kDa的组分，干燥，即可得到高活性的抗氧化肽粉99.74克(干重)；超滤后总糖含量为3.91％，原液的总糖含量为41.27％。
采用了鼠尾藻粉和活性碳对所制备的鲍内脏酶解液进行了脱除重金属和脱色脱腥处理。一般鲍内脏多糖都采用醇沉的方法进行糖与蛋白的分离，而本发明采用了超滤膜技术实现了多肽与多糖的有效分离，适用于抗氧化肽的规模化生产。
经动物实验验证表明，鲍内脏抗氧化肽在一定程度上能提高抗氧化酶类的活性、总抗氧化能力水平和降低丙二醛的含量，具有一定的抗氧化能力。
显然，本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定，对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动，这里无法对所有的实施方式予以穷举，凡是属于本发明的技术方案所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之列。

Claims (6)

1.一种鲍内脏抗氧化肽的制备方法，其特征在于，所述鲍内脏抗氧化肽的制备方法包括以下步骤：
(1)预处理，将鲍内脏先初步粉碎后,再经胶体磨研磨成均匀颗粒的匀浆；
(2)动物蛋白酶酶解，将经过预处理的鲍内脏与水按质量比1:1混合，用动物蛋白酶进行酶解得到酶解液；
(3)鼠尾藻粉脱除重金属：将鼠尾藻经低温30-45℃烘干，粉碎、过筛得到40-100目鼠尾藻粉，添加到步骤(2)的酶解液中，搅拌；
(4)活性碳脱色脱腥，将脱除重金属的酶解液在35℃的条件下采用活性碳进行脱色脱腥1h；
(5)陶瓷膜处理，将酶解液经陶瓷膜处理，滤除杂质，收集透过液；
(6)超滤处理，将陶瓷膜处理的透过液经超滤膜处理，收集分子量小于10kDa的组分，干燥，即可得到高活性的抗氧化肽粉。
2.根据权利要求1所述的鲍内脏抗氧化肽的制备方法，其特征在于：步骤(2)所述酶解时间为4.8h、酶添加量3000U/g，酶解温度54℃。
3.根据权利要求1所述的鲍内脏抗氧化肽的制备方法，其特征在于：步骤(3)所述的鼠尾藻粉添加量为酶解液的0.5-3wt％，搅拌时间为1-3小时。
4.根据权利要求1所述的鲍内脏抗氧化肽的制备方法，其特征在于：步骤(4)所述活性碳添加量为酶解液的1.0wt％。
5.根据权利要求1所述的鲍内脏抗氧化肽的制备方法，其特征在于：步骤(5)所述的陶瓷膜过滤的操作压力1.5-2.5Mpa，陶瓷膜孔径为200nm。
6.根据权利要求1所述的鲍内脏抗氧化肽的制备方法，其特征在于：步骤(6)所述的超滤膜过滤的操作压力2.0-4.0Mpa，超滤膜为截留相对分子质量MWCO 10kDa的超滤膜。
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