CN1057675A - 借助游离基检测活生物体或潜在攻击剂之抗氧化性的方法 - Google Patents

Abstract

本发明系关于一种检测或评估活生物体或潜在 攻击剂之抗氧化活性的新颖方法，该方法包括使用游 离基作为诱使细胞溶解的工具，该方法的特征在于 (1)使游离基产生剂于适当液体生物学介质内与选自 下列之任一种细胞材料接触(a)人类，动物及植物细 胞，(b)所说之细胞的碎片，及(c)含有脂质体的合成 壁及其碎片，所说的细胞材料已首先污染了潜在攻击 剂。(2)诱使游离基从游离基产生剂中释放出来；及 (3)借助与含有未受污染之细胞材料之对照组的比较 来估测游离基对细胞材料的溶解作用。

Description

本发明涉及利用游离基检验或测定活生物体或潜在攻击剂之抗氧化性的新颖方法。

具体的说，本发明一方面涉及评估活生物体细胞的抗氧化状态的方法，另一方面涉及评估潜在攻击性化学剂或物理因子（亦即能够增加或加速或抑制或延迟被游离基诱导之细胞溶解作用的化学剂或物理因子）之氧化活性或抗氧化活性的方法。

已知游离基通常对生物体，特别是对该生物体的细胞具有不良影响。游离基以一定的速率攻击细胞壁，该速率系取决于细胞的酶及分子机制所提供的细胞抗性。当细胞壁受到游离基降解，穿孔或打开时，细胞内容物即散布于细胞壁外。具体参见下列文献：化学文摘107213235V，化学文摘107，232454g，化学文摘10099345j，生物学文摘72（n°9），5914页;摘要n°57169（1981）及生物学文摘73（n°12），8817页摘要n°84420（1982）。

文摘CA107，213235V，（参见M.MIKI等人，Arch.Biochem.Biophys.，258（n°2），373-380页（1987）），指出2-生育酚可使大鼠红血球免于遭受游离基导致的溶解作用。

根据上述文摘CA100，99345j（参见E.B.SPEKTOR等人，Lab.Delo（n°1），26-28页（1984）一文），样品（血浆或脊髓液）的总抗氧化活性系利用紫外灯诱导细胞材料（本特例为红血球细胞膜）之自由基后，经检测532nm吸光率而确定的。根据本发明，推荐一种新颖技术解决方案，借此（ⅰ）游离基不会于所说的细胞材料内产生，而是来源于加入细胞材料内的游离基引发剂，及（ⅱ）细胞材料已首先污染了潜在攻击剂。

根据本发明，推荐一种检定或估测活生物体或潜在攻击剂之抗氧化活性的新颖方法，该方法包括使用游离基作为诱导细胞溶解的工具材料，该方法的特征在于：

（1）使游离基产生剂于适当液体生物学介质内与选自下列之任一种细胞材料（Ⅰ）接触

（a）人类，动物及植物细胞，

（b）所说之细胞的碎片，及

（c）含有脂质体的合成壁及其碎片，

所说的细胞材料已首先沾染了潜在攻击剂（Ⅱ）;

（2）诱使游离基从游离基产生剂中释放出来;及

（3）被游离基所溶解之细胞材料借助与含有未受污染之细胞材料之对照组的比较来估测游离基对细胞材料的溶解作用。

本方法中，检定了细胞材料Ⅰ的氧化状态或潜在攻击剂Ⅱ对细胞材料Ⅰ的影响。

具体地说，可按照“动力学”〔以固定时间间隔检测游离基产生剂、细胞材料及适当待测试剂Ⅱ之液体试验介质的样品（体积恒定）〕或以“非动力学”〔对含有细胞材料、必要时加有待测试剂Ⅱ，以及渐增等分游离基产生剂之液体试验介质的样品进行剂量-反应型检测〕方式估价细胞材料的溶解。

在进行动力学评估的情况下，细胞材料Ⅰ对游离基的抗性是以对应于50%细胞材料溶解的时间来表示的。

在进行剂量-反应评估的情况下，细胞材料Ⅰ对游离基的抗性是以可诱使50%细胞材料溶解之游离基产生剂的浓度来表示的。

可释放游离基及常用于产生大分子之聚合反应的产物均特别适于作为本发明的游离基产生剂。此类产物中，特别值得提到的是：氧化性游离基产生剂如过氧化苯甲酰，C₁-C₈且较好为C₃-C₄烷基过苯甲酸酯（特别是正丁基，叔丁基，异丙基及正丙基过苯甲酸酯），其中烷基为含有1至8个碳原子且较好为3至4个碳原子的二烷基过氧基二碳酸酯（特别是二异丙基过氧基二碳酸酯），羟基过氧化枯烯，偶氮-双（异丁腈），2，2'-偶氮-双（2，4-二甲基戊腈），2，2'-偶氮-双（2-脒基丙烷），和它们的加成盐如盐酸盐，及其类似物。

优选的氧化性游离基产生剂为具有零级动力学或反应速率者（游离基的释放相对于时间为恒定的），或较好有1级动力学或反应速率者（游离基的释放相对于时间为线性的）。根据本发明的优选氧化性游离基产生剂可以是2，2'-偶氮-双（2-脒基丙烷）二盐酸盐，其可于含水介质内呈现1级动力学;也可以是2，2'-偶氮-双（2，4-二甲基戊腈），其可于油性或有机液体介质内呈现1级动力学。从游离基产生剂中释放游离基可根据已知方法进行，例如利用热、光（特别为可见光谱的光或紫外光）、质子、电子或X-射线;此种释放最好借助质子或热来发动。例如，可将2，2'-偶氮-双（2-脒基丙烷）二盐酸盐的水溶液加热至37℃，即足以根据如下反应诱发氧化性游离基的释放

根据本发明的细胞材料Ⅰ包含人类、动物、植物或合成来源的细胞或细胞碎片，如细胞壁。

可有利地使用含有能在游离基作用下释放之显色标记或螢光标记的材料Ⅰ。

适用于本发明的细胞材料Ⅰ中，特别有用的是有色素的人、动物或植物来源的活细胞，亦即含有色素或着色剂如血红蛋白、叶绿素、叶黄素、胡萝卜素及花色素苷的活细胞，在细胞溶解之时特别适于用分光光度计测量光密度的改变来检测上述色素或着色剂的释放。推荐使用之活细胞为动物来源的红血球，较好为取自温血动物如哺乳动物，特别是人的红血球。可基于下列各因素来选择红血球：

-血细胞如红血球具有相当短之半寿期（人体来源之红血球为80天）;

-红血球具有所有对抗游离基的保护性分子及酶，因此可考虑作为生物体其他细胞的代表：及

-红血球的广泛可利用性和易得性，特别是以采取少至数毫升之简单采血方式即可利用。

当使用游离基对从血浆中分离的红血球进行氧化型攻击时，红血球将其所有酶及分子用来对抗攻击，直到细胞壁或细胞膜被改变以致使细胞内容物放出为止。以红血球为例，此种内容物之释放很容易利用分光光谱仪检测进入生物学介质内的血红蛋白量来确定。受试红血球族群的抗性是以释放50%W/W红血球内所含之血红蛋白的时间表示（动力学估测）或以引发50%溶血所需之游离基产生剂的浓度（CH50%）表示的。（剂量-反应估测）

细胞材料也可由细胞特别是含有色素之细胞的细胞壁或其碎片所组成。最适合的细胞壁为含有足量色素或着色剂且可于受到游离基溶解时释放者。

细胞材料也可由合成的细胞壁所组成。优选的合成细胞壁为含脂质体的物质，其中能受游离基溶解而释放的显色标记物可被包被、固定或固相化。含有脂质体及此种显色标记物的膜物质特别有利，原因在于如此可不必寻找健康人、动物或植物个体作对照试验，从而确保根据本发明的检测方法更为标准化。

根据本发明所用的细胞材料较好由红血球所组成，且最好由遮盖、包被，固定或固相化了显色标记物的且可被游离基溶解释放的脂质体所组成。此种情况下，对受试游离基的抗性系50%溶解时间（亦即放出50%W/W显色标记物所需时间）表示，（动力学检测）或以可诱发50%溶解之游离基产生剂的浓度表示。（剂量-反应检测）

“被潜在攻击剂Ⅱ污染细胞材料”一词系代表如上所定义之细胞材料Ⅰ于进行该方法之前已经与潜在攻击剂Ⅱ至少接触0.5小时，或于进行本发明方法前至少已经受到潜在攻击剂Ⅱ作用0.5小时者。

使细胞材料Ⅰ与所说的攻击剂Ⅱ接触的方法包括将攻击剂Ⅱ引进活生物体内，然后回收被潜在攻击剂Ⅱ污染的含色素细胞以进行本发明的方法。也包括依据已知技术将所说的潜在攻击剂Ⅱ掺入细胞材料Ⅰ的细胞内，如使用注射（根据与体外授精的相关技术）或渗透方法。

潜在攻击剂Ⅱ可具有物理性质（以X-射线、β-射线，质子等照射）或化学性质（试验物质或参比物质，代谢产物等）或物理化学性质（烟草的烟，特别包括借助热解释放游离基）。

生物试验介质为含水液体介质或有机液体介质，其包括事先以潜在攻击剂Ⅱ污染的细胞材料Ⅰ，游离基产生剂以及必要时还含有细胞培养及生物检定领域惯用的一种或多种添加剂，特别是防腐剂。将构成液体试验介质部分的潜在攻击剂Ⅱ于触发游离基释放前至少0.5小时引进含细胞材料及游离基产生剂的生物介质内;或于污染后方便地与细胞材料结合。污染可因（蓄意或意外地）将所说的潜在攻击剂Ⅱ（或其一种前体）投予将由之采取细胞的生物体或因细胞膜于体外吸附潜在攻击剂Ⅱ而造成的。

在经投予途径污染活细胞的情况下，细胞将污染物或其至少一种代谢产物携带于它们的内容物及/或细胞膜上。在通过吸附污染活细胞或合成细胞的情况下，细胞壁内及/或细胞壁上可见有大量固定的污染物。借吸附方式污染可有利地应用于亲脂性污染物。在细胞壁上吸附可借助于适当介质中并于适当温度下保温细胞材料及污染物而进行，所说的污染物事先已于选择的溶剂内稀释;依据保温时间及所用细胞材料的浓度，保温介质内的所有或（更常见）仅一部分污染物通过吸附于天然或合成细胞壁上而被固定。

如潜在攻击剂Ⅱ为化学物质，则可以是任一种试验物质，特别是氧化物质、抗氧化物质、产物的组成物或结合物或其他代谢产物。可被试验及/或检定的物质中，也可为色素（特别是类黄素），蛋白质、酶、肽、氨基酸、抗体及抗原，且通常是可由之产生抗体的任何产物。在这些能被试验或检定的物质中，特别应提到的是那些作用于生物体和/或细胞的产物或攻击剂。

为了进行本发明的检定方法，将已分离洗涤的细胞材料悬浮于最好为等张液体生物学介质内。于10至60℃，较好于15至40℃，最好于37℃之温度范围，于游离基产生剂存在下进行保温，游离基产生剂之使用比例对10至20%W/V细胞材料浓度而言为50至200mmol/l。

完成本发明方法的最佳方式包括将由红血球或含脂质体及可释放之呈色标记物的合成壁碎片所组成的细胞材料悬浮于被缓冲的等张生理血清内，并在37℃下于2，2'-偶氮-双（2-脒基丙烷）二盐酸盐以浓度100mM（相对于最终体积2ml（较好）之含水液体生物介质而言）存在下保温该悬浮液;或于对有机生物液体介质而言为相等比例的2，2′-偶氮-双（2，4-二甲戊腈）存在下进行保温。较好借助质子，且最好借助热震荡（该特定情况下为加热至37℃）从游离基产生剂放出游离基。以固定时间间隔（例如每20分钟）采样（0.02ml），直到细胞残渣取完为止（通常在150至600分钟内，且特别是在200-300分钟内）;各样品以1ml生理血清稀释并离心〔例如以3000-9000g，较好以3000-6000g离心10-60秒（过度激烈离心，特别是高于9000g时可能会由于机械作用产生溶解而干扰测定结果）〕;然后将所得上清液整分（0.2ml）转移到微量滴定板之凹槽或一组微孔内，利用分光光谱术读出光密度（特别是于350-600nm，而不考虑含色素细胞或合成壁的来源;当细胞材料含有红血球时，则于405-410及540nm处测定）。

实践中，光密度变化的结果是以相对于细胞材料最大溶解（100%）的百分率表示的。于实验点调整理论曲线，从而特别得到对应于50%溶解的时间（该时间越长，红血球或合成壁于前述操作条件下对体外试验中所施加之氧化性应力的抗性越好），即峰与潜伏时间之S形曲线的斜率（根据相对于该S形曲线反折点的切线测定）。

可由剂量-反应型估测法取代前述动力学估测。

根据本发明检定方法极其容易进行，且可以检测药盒的形式在市场上出售，或供诊断目的用或对多种分子及其代谢产物进行筛检研究，即一方面研究具有氧化或抗氧化活性的分子，另一方面则研究具有长期作用的分子。检定方法用于检定人或动物血浆，以便估测该分子对该血浆的影响，随后于此种检定中确定潜在攻击剂Ⅱ。

本发明方法特别适用于（1）检定抗疟剂，它们通常可降低红血球及脂质体对游离基之抗性，（Ⅱ）诊断糖尿病，由于此病会于生物体内产生氧化作用过低效应，及（Ⅲ）评价食品或食品添加剂特别是着色剂对生物体的影响。

该检定法的优点在于可于很短时间内完成，特别是可在或等于5小时的时间内完成。

如果是使用脂质体作为本发明的细胞材料，则推荐使用下述脂质体制剂：

制剂A：

含有脂质体、可在游离基作用下释放出的显色或萤光标记物以及可确保各粒子得以粘附之粘合材料的颗粒。

制剂B：

由脂质体可在游离基作用下释放出的显色或萤光标记物，及可确保基质粘附之粘合材料组成的脂质体基质。

制剂C：

其上粘合可由上述制剂B的基质构成之脂质体层的惰性载体。

制剂D：

惰性载体，其至少一面上具有至少一个包被了能在游离基作用下可释放出之有色或萤光标记物的区带，所说的面和所说的区带是由被含脂质体和粘合物的层包被的，所说的粘合物则旨在确保所说的层得以粘附;此处脂质体层遮盖了由显色或萤光标记物包被的区带。

制剂E：

含有可于游离基作用下释放出来，且已通过浸渍而引入之显色或萤光标记物的多孔惰性载体，该载体上包被了类似制剂D之脂质体层以遮盖所说的标记物。

制剂F：

根据制剂D的脂质体基质，于其表面上利用显色肽底物领域中已知的某类型的显色标记物敏化（特别参见专利文献EPA-O  280，610）;于游离基作用下，含该标记物的脂质体碎片或碎片段与基质分开，从基体上分离出这些片段或碎片并借过滤及离心收集之，然后将所说的片段或碎片再次悬浮于可以根据已知技术显色的生物学介质内（参见上述专利文献EP-A-O  280，610）。

如上所述的制剂D-E中，可在游离基作用下释放出来的显色或萤光标记物由脂质体基质物理遮盖，该脂质体基质的厚度必须相当小，以便在游离基作用下容易接近标记物。制剂A-C中，可以对能在游离基作用下被释放出来的显色或萤光标记物作纯物理性遮盖，或可使标记物与脂质体有更为精细地结合，例如固定，固相化或阻隔。

最后，推荐可包括下列组分的试验药盒：（Ⅰ）根据本发明的细胞材料及（Ⅱ）游离基产生剂和/或液体生物学稀释介质。

对本发明的其他优点及特点，将会从下述实施例中得以更清楚地了解。总的说来，这些资料仅旨在进一步阐明而不是限定本发明。实施例1-9系涉及动力学检定法，实施例10-15则涉及剂量-反应型检定法。

实施例1

为了以本发明的方法进行定量分析，研究2，2′-偶氮-双（2-脒基丙烷）二盐酸盐之浓度对大鼠红血球的影响。

大鼠红血球取出及洗涤后，悬浮（血容15%W/V）于等张生理血清内。使这些红血球与2，2′-偶氮-双（2-脒基丙烷）二盐酸盐以OmM（对照），25mM，50mM及100mM剂量接触，含水液体生物学介质之终体积为2ml。将反应介质加热至37℃而起始游离基的释放。每20分钟采取0.02ml样品经历200-240分钟，各样品于1ml生理血清内稀释并离心（15秒;4000g）。将整分的上清液（0.2ml）移到微平板凹槽内用分光光谱仪读出光密度（特别于540nm处）。

图1所示结果以相应于达50%溶血率（t50%）的时间（分钟）来表示。曲线（a）系有关100mM浓度之2，2′-偶氮-双（2-脒基丙烷）二盐酸盐，并给出t50%值为158分钟;曲线（b）系有关50mM浓度之2，2′-偶氮-双（2-脒基丙烷）二盐酸盐，并给出t50%值为176分钟;曲线（c）系有关25mM浓度之2，2′-偶氮-双（2-脒基丙烷）二盐酸盐，并给出t50%值为214分钟;曲线（d）则涉及对照试验，亦即于不存在2，2′-偶氮-双（2-脒基丙烷）二盐酸盐情况下进行的试验。

图1的结果显示了就游离基产生分子来说，剂量与对细胞溶解之影响间的关系。

实施例2

本例涉及抗氧化剂之影响，其中使用的抗氧化剂为抗坏血酸。操作程序遵照实施例1所述，但使用含大鼠红血球之含水液体生物介质（生理血清）;100mmol/l  2，2′-偶氮-双（2-脒基丙烷）二盐酸盐及0（没有抗氧化剂）或0.1mmol/l抗坏血酸，游离基的释放系于抗坏血酸已经与红血球及游离基产生剂接触后0.5小时后开始。

图2所示结果表明，在没有抗坏血酸〔曲线（a）〕的情况下，t50%值等于158分钟;及有0.1mmol/l抗坏血酸共存时〔曲线（b）〕，t50%值等于244分钟。换言之，有抗氧化剂如抗坏血酸共存时会减慢游离基所引发的细胞溶解作用。

实施例3

本例涉及抗氧化剂掺入大鼠红血球膜的影响，其中使用的抗氧化剂为丁羟基甲苯〔缩写为BHT;***命名：2，6-二（1，1-二甲基乙基）-4-甲基苯酚〕。

遵照实施例1所述的操作程序，但使用了健康大鼠红血球（对照）及事先于37℃、在BHT及其溶剂即乙醇（将BHT吸附于红血球细胞膜上之用）共存之下保温0.5小时的红血球，然后重新制成悬浮液进行检测。将此方式处理之红血球置于实施例1的生理血清内，使之与100mmol/l  2，2′-偶氮-双（2-脒基丙烷）二盐酸盐接触，然后将所得反应介质加热至37℃。

结果如图3所示。对照曲线（a）给出t50%为163分钟。曲线（b）涉及事先已与BHT之溶剂亦即乙醇于37℃以0.5W/V浓度保温0.5小时的健康大鼠血清，得到t50%值为157分钟。曲线（c）系涉及与曲线（b）相同的红血球，但事先已于相同条件下与BHT及乙醇（试验介质含有0.03mmol/l  BHT及0.5%W/V乙醇）预保温得到t50%值为193分钟。比较曲线（c）与曲线（a）及（b），显示BHT可提供对抗细胞溶解的保护作用。换言之，此处所用的抗氧化剂可减慢由游离基所引起的细胞溶解。

实施例4

本例涉及对来自两个不同个体之红血球的比较。经分离并洗涤后，将红血球以相同浓度重新悬浮，并使之接受来自游离基产生剂之游离基的作用，本特例中使用了浓度为100mmol/l的2，2′-偶氮-双（2-脒基丙烷）二盐酸盐。

结果如图4所述。曲线（a）显示成年吸烟者之红血球的百分溶血率，并给出t50%为84.4分钟。曲线（b）显示不吸烟成人的百分溶血率，并给出t50%值为93.3分钟。比较曲线（a）及（b）显示吸烟者对游离基攻击的正常抗性比不抽烟者低。

实施例5

本例涉及使用植物细胞估测照射对氧化状态的影响。将黄金菊（Camomile）细胞分成两批，其中一批使用3.7×10⁶B_q（100微居里）的放射源照射，将照射及未照射部分均于惰性气体（氮或氩）下贮存7个月。然后将两批细胞悬浮于含水液体生物学介质内并与游离基产生剂亦即2，2′-偶氮-双（2-脒基丙烷）二盐酸盐于15℃下接触0.5小时。经加热至37-40℃开始释放游离基，然后按照实施例1中所述的程序采样并分析之。对细胞材料溶解的动力学研究显示，事先接受照射的细胞对游离基的抗性比未经照射的细胞低。相应曲线类似于图3所示的曲线（受照射细胞的溶解动力学及未受照射细胞的溶解动力学曲线的形状分别相似于图3所示的曲线a及b或c）。

实施例6

用3.7×10⁶Bq的放射源照射一批黄金菊种子，此批种子与未受照射的种子一起于惰性气体下贮存8个月。然后将受照射及未经照射的种子碾碎，并使所得磨碎产物与大鼠红血球悬浮液（在生理血清中）15℃下接触1小时。然后引进游离基产生剂亦即2，2′-偶氮-双（2-脒基丙烷）二盐酸盐并按照实施例1所示程序进行分析。在经照射及未经照射之黄金菊种子粉末共存之下研究红血球溶解的动力学，结果得到分别相似于图3所示曲线a及b或c的曲线。如此证明种子的酶分子已经被修饰，具体地说是因照射而受到破坏。

本实施例6及上述实施例5说明使用本发明方法可估测动物和/或植物源食物的品质，得以确定被检食物在食用前是否已品质变差或达到了什么程度。

实施例7

实验程序基本与实施例3相同，但用酚噻嗪取代BHT。结果发现，就其可减慢由游离基所诱发之红血球溶解来说，酚噻嗪具有出人意料的抗氧化功效。

实施例8

实验程序基本同实施例7，但其中使用了包括上述制剂C之脂质体的合成细胞材料取代红血球。按实施例7中所述的相同方式观察酚噻嗪的抗氧化作用。

实施例9

用水（已事先煮沸）萃取干燥茶叶并冻干所得滤液而制得茶冻干品。实验组于冻晶前用离子射线（50kGy）照射，对照组则未照射。然后将各批于真空下贮存9个月。

随后按照实施例3所示程序进行，但用经照射的或未经照射的对照茶叶取代BHT。结果发现经照射的茶叶对游离基抗性比对照组低。

实施例10-15

下述实施例10-15举例说明于剂量-反应型检测条件下测定抗游离基活性。

将溶解于含水介质（水或生理血清）之渐增等分（20至300mmol）的游离基产生剂〔2，2′-偶氮-双（2-脒基丙烷）二盐酸盐〕置于试管中，然后冷冻干燥。将所述等分游离基产生剂再度溶解于恒定体积之试验生理血清（其中可含或不含所研究的物质）中后，加入恒定量之根据本发明的细胞材料。

将相应试验介质于37℃保温-预定时间（2.5小时）。然后根据细胞材料之溶解来估测游离基的效应。

实施例10系使用健康大鼠红血球进行的，发现可诱使50%红血球溶解之游离基产生剂的浓度（CH50%）为108.0±20mmol/l。

实施例11同样使用健康大鼠红血球进行，试验介质额外含有10mmol/l甘露糖醇。结果发现CH50%等于155.6±6.1mmol/l，经由与实施例10的CH50%值比较，证实了甘露糖醇之抗氧化效能。

实施例12同样使用如同实施例10的健康大鼠红血球进行，试验介质另外含有氧化媒介，即浓度为250mM的偶氮二羧酸双（二甲酰胺）（一种可氧化硫醇的化合物）。结果发现就消耗红血球内的谷胱甘肽效应来说，该过氧化剂可使红血球对游离基作用更为敏感，CH50%值降低（与实施例10的结果相比）至60.8±8.1mmol/l。

实施例13-15中，使用如上制剂c之含脂质体的合成细胞材料代替红血球，得到了相似实施例10-12的结果。

Claims (11)

1、一种检定或估测活生物体或潜在攻击剂之抗氧化活性的方法，该方法包括使用游离基作为诱使细胞溶解的工具，该方法之特点为

(1)使游离基产生剂于适当液体生物学介质内与选自下列之任一种细胞材料接触

(a)人类、动物及植物细胞，

(b)所说的细胞碎片段，及

(c)含有脂质体的合成壁及其碎片，

该细胞材料已首先被潜在攻击剂污染；

(2)诱使游离基从游离基产生剂中释放出来；及

(3)被游离基所溶解之细胞材料借助与含有未受污染之细胞材料之对照组的比较进行来估测游离基对细胞材料的溶解作用。

2、根据权利要求1的方法，其特点在于细胞材料系选自于人类，动物或植物来源的含色素细胞。

3、根据权利要求2的方法，其特征在于所说的色素细胞为人类或动物来源的红血球。

4、根据权利要求1的方法，其特征在于细胞材料为合成壁碎片。

5、根据权利要求4的方法，其特征在于细胞材料为脂质体材料。

6、根据权利要求1的方法，其特征在于游离基产生剂系选自于可根据1或2级动力学释放游离基的产物。

7、根据权利要求1的方法，其特征在于游离基产生剂系选自于可释放氧化性游离基的产物。

8、根据权利要求1，6及7项中任一项的方法，其特征在于所说的游离基产生剂为2，2′-偶氮-双（2-脒基丙烷）二盐酸盐。

9、根据权利要求1的方法，其特征在于使50至200mmol/l的游离基产生剂与浓度为10至20%W/V的细胞材料在含水生物学介质内接触。

10、根据权利要求1或9的方法，其特征在于游离基系借助于37℃下保温而产生的。

11、一种检测试剂盒，其特征在于包括（Ⅰ）如权利要求1中所述的细胞材料及必要时还包括（Ⅱ）游离基产生剂和/或液体生物学稀释介质。

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