CN105712844A - 杜松烷型倍半萜Salicifoliusin A及其制备方法和应用 - Google Patents

杜松烷型倍半萜Salicifoliusin A及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种式(I)所示的杜松烷型倍半萜Salicifoliusin A及其制备方法，本发明所述杜松烷型倍半萜Salicifoliusin A的提取、分离、纯化方法简单，免疫活性明确，具有潜在的工业化制备和开发为免疫调节药物的价值，该化合物化学结构及其绝对构型经过波谱学数据和X?射线单晶衍射分析得到确认，不存在光学异构体，可以避免光学异构体潜在的风险；

Description

杜松烷型倍半萜Salicifoliusin A及其制备方法和应用
(一)技术领域
本发明涉及一种杜松烷型倍半萜Salicifoliusin A及其制备方法和应用。
(二)背景技术
蜡梅在我国已有1000多年的栽培历史，作为一种香花植物，其叶和花具有挥发性的芳香油，香气怡人，常作为花卉盆景和鲜切花来观赏，因此是我国著名观赏植物之一。作为观赏植物，蜡梅不仅可以在公园、花地等地方孤植或者丛植，也可以栽培在建筑物前、草坪中或者道路两旁，还可作为盆景，栽培于室内。
蜡梅属植物除了观赏价值外还具有药用价值。《贵阳民间药草》中记载，显示蜡梅花可冲泡为茶，作为一种治疗咳嗽的药茶，因此蜡梅也是一种中药材，广泛被人们利用，在苏南民间就是用蜡梅花来治疗感冒咳嗽。蜡梅不仅可治疗感冒咳嗽，还可以治疗因风寒引起的腹痛、腹胀、消化不良，也可以治疗伤食引起的胃炎、胃痛、泛酸。
柳叶蜡梅(学名：Chimonanthus salicifolius S.Y.Hu)又名山蜡梅、亮叶蜡梅、毛山茶、岩马桑、香风茶、石凉茶等，为蜡梅科蜡梅属常绿灌木，是中国特有的属、种，主要产于安徽、江西、浙江。柳叶蜡梅也被应用于医药研究，表明其具有抗病毒、止咳化痰、抗菌等疗效。其提取物对人***HELA和人胃癌SGC-7901的生长有抑制作用。柳叶蜡梅叶具有浓郁的香味，其精油成分不仅有镇痛、镇咳、祛痰作用，还能抑制食欲，明显减缓小鼠体重增长，起到减肥作用。该药使用历史悠久、疗效确切、副作用较少，是值得研究开发的药茶多用品种。经国家有关科研单位测定，柳叶蜡梅含挥发油、槲皮素、碱、黄酮类等多种有效性成分，铁、钙、锌、镁、硒等微量元素及维生素B1、维生素B2、维生素C等含量丰富，并含18种氨基酸。
本发明以柳叶蜡梅枝干等器官为研究对象，进行提取、分离、纯化、结构鉴定得到8α-羟基-T-muurolol(命名为：Salicifoliusin A)，属于倍半萜类化合物，该化合物具有明显的免疫活性。
(三)发明内容
本发明旨在提供一种杜松烷型倍半萜Salicifoliusin A及其制备方法和应用。
本发明的技术方案为：
一种式(I)所示的杜松烷型倍半萜Salicifoliusin A：
一种式(I)所示的杜松烷型倍半萜Salicifoliusin A的制备方法，所述的制备方法按如下步骤进行：
(1)将柳叶蜡梅的枝干进行粉碎干燥后，用乙醇浸提提取，之后过滤除去不溶物，取滤液减压浓缩得到乙醇浸膏；
(2)将步骤(1)所得乙醇浸膏分散于水中，得到悬浮液，再将所得悬浮液用石油醚进行萃取，得到石油醚萃取液，减压浓缩后得到石油醚浸膏；
(3)用200～300目柱层析硅胶对步骤(2)所得石油醚浸膏进行柱层析分离，以石油醚/乙酸乙酯体积比为9：1～1：9的混合液为洗脱剂进行梯度洗脱，收集含目标化合物的洗脱液，减压浓缩后合并得粗品，所得粗品依次经洗涤、重结晶，得到所述的杜松烷型倍半萜Salicifoliusin A；所述粗品的洗涤采用石油醚、乙酸乙酯中的一种或两者以任意比例的混合液；所述粗品的重结晶采用甲醇作为重结晶溶剂。
本发明所述的制备方法，步骤(1)中，推荐用于浸提提取的乙醇为体积分数95％的乙醇；所述乙醇浸提提取的具体操作方法为：将粉碎干燥后的柳叶蜡梅枝干与乙醇以料液质量比1：0.8～1混合，常温(20～30℃)浸提5～10天，过滤得到乙醇浸提提取液，重复浸提2～4次，合并每次所得乙醇浸提提取液，50℃减压旋蒸回收乙醇，得到乙醇浸膏(粘稠状，无醇味)。
步骤(2)中，将所述乙醇浸膏分散于水中时，推荐所述乙醇浸膏与水的质量比为1：2～4；所述悬浮液用石油醚进行萃取时，推荐所述悬浮液用等体积的石油醚萃取3次。
步骤(3)中，用200～300目柱层析硅胶对石油醚浸膏进行柱层析分离时，所述梯度洗脱的具体操作方法为：以石油醚/乙酸乙酯体积比分别为9：1、7：1、5：1、3.5：1、2：1、1：1、1：2、1：3.5、1：5、1：7、1：9的混合液为洗脱剂，进行梯度洗脱，洗脱剂的流速为5～7mL/min(优选6mL/min)，每种不同比例洗脱剂的洗脱时间为300min～400min，收集含目标化合物的洗脱液，减压浓缩后合并得粗品。
本发明中，所述的目标化合物(杜松烷型倍半萜Salicifoliusin A)进行薄层层析(TLC)时，通常以石油醚：乙酸乙酯＝1：1为展开剂，其Rf值为0.5。所述的制备方法步骤(3)中，可通过TLC检测收集含目标化合物的洗脱液。
本发明所述杜松烷型倍半萜Salicifoliusin A在制备免疫活性药物中具有应用前景。根据免疫活性测试实验，本发明杜松烷型倍半萜Salicifoliusin A与Con A对照组相比较，对小鼠脾细胞的增值表现出了明确的抑制作用，且具有剂量依赖性，显示了该化合物是潜在的降低免疫活性的药物。
本发明的有益效果在于：
本发明所述杜松烷型倍半萜Salicifoliusin A的提取、分离、纯化方法简单，免疫活性明确，具有潜在的工业化制备和开发为免疫调节药物的价值，该化合物化学结构及其绝对构型经过波谱学数据和X-射线单晶衍射分析得到确认，不存在光学异构体，可以避免光学异构体潜在的风险。
(四)附图说明
图1是实施例1得到的杜松烷型倍半萜Salicifoliusin A的单晶衍射图。
(五)具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明进行进一步的说明，但本发明的保护范围并不仅限于此。
实施例1：Salicifoliusin A的制备：
提取：将柳叶蜡梅的枝干进行粉碎干燥后，得到干燥的柳叶蜡梅枝干粉末879g，用1.2L95％乙醇常温浸提一周，过滤得到浸提液，重复浸提3次，合并每次所得浸提液，减压蒸馏得到乙醇浸膏765g，将所得乙醇浸膏分散于3000mL水中，得到悬浮液，再将所得悬浮液用等体积的石油醚萃取3次，合并得到石油醚萃取液，减压浓缩后得到石油醚浸膏187g。
分离：用200～300目柱层析硅胶(500g)对石油醚浸膏进行柱层析分离，以石油醚/乙酸乙酯体积比分别为9：1、7：1、5：1、3.5：1、2：1、1：1、1：2、1：3.5、1：5、1：7、1：9的混合液为洗脱剂，进行梯度洗脱，洗脱剂的流速为6mL/min，每种不同比例洗脱剂的洗脱时间为350min，收集含目标化合物的洗脱液，减压浓缩后得到粗品38.6g。
提纯：所得粗品用石油醚洗去杂质，然后用甲醇进行重结晶，得到无色晶体0.603g，即为所述的杜松烷型倍半萜Salicifoliusin A。
实施例2：Salicifoliusin A的制备：
提取：将柳叶蜡梅的枝干进行粉碎干燥后，得到干燥的柳叶蜡梅枝干粉末856g，用0.9L95％乙醇常温浸提一周，过滤得到浸提液，重复浸提3次，合并每次所得浸提液，减压蒸馏得到乙醇浸膏648g，将所得乙醇浸膏分散于2500mL水中，得到悬浮液，再将所得悬浮液用等体积的石油醚萃取3次，合并得到石油醚萃取液，减压浓缩后得到石油醚浸膏159g。
分离：用200～300目柱层析硅胶(500g)对石油醚浸膏进行柱层析分离，以石油醚/乙酸乙酯体积比分别为9：1、6：1、4：1、1：1、1：4、1：6、1：9的混合液为洗脱剂，进行梯度洗脱，洗脱剂的流速为5mL/min，每种不同比例洗脱剂的洗脱时间为400min，收集含目标化合物的洗脱液，减压浓缩后得到粗品33.5g。
提纯：所得粗品用石油醚：乙酸乙酯体积比1：1的混合液洗去杂质，然后用甲醇进行重结晶，得到无色晶体0.421g，即为所述的杜松烷型倍半萜Salicifoliusin A。
实施例3：Salicifoliusin A的制备：
提取：将柳叶蜡梅的枝干进行粉碎干燥后，得到干燥的柳叶蜡梅枝干粉末867g，用1.0L95％乙醇常温浸提一周，过滤得到浸提液，重复浸提3次，合并每次所得浸提液，减压蒸馏得到乙醇浸膏699g，将所得乙醇浸膏分散于3000mL水中，得到悬浮液，再将所得悬浮液用等体积的石油醚萃取3次，合并得到石油醚萃取液，减压浓缩后得到石油醚浸膏165g。
分离：用200～300目柱层析硅胶(400g)对石油醚浸膏进行柱层析分离，以石油醚/乙酸乙酯体积比分别为9：1、7：1、5：1、3：1、1：1、1：3、1：5、1：7、1：9的混合液为洗脱剂，进行梯度洗脱，洗脱剂的流速为7mL/min，每种不同比例洗脱剂的洗脱时间为300min，收集含目标化合物的洗脱液，减压浓缩后得到粗品36.5g。
提纯：所得粗品用乙酸乙酯洗去杂质，然后用甲醇进行重结晶，得到无色晶体0.071g，即为所述的杜松烷型倍半萜Salicifoliusin A。
实施例4：化合物测试
表1：实验所用仪器
试剂：溶剂均为分析纯试剂，未进行处理。
对实施例1，实施例2或实施例3制得的杜松烷型倍半萜Salicifoliusin A进行理化和波谱学分析，m.p.113-114℃，ESI-MS测定值m/z:239[M+H]+，237[M-H]-，HR-ESI-MS测定值m/z:261.1833[M+Na]+，计算值261.1825[C15H26O2Na+]，确定其分子式为C15H26O2，分子量为238，不饱和度为3，比旋光度为[α]D 20-81.5(c 0.22,CHCl3)。
表2：Salicifoliusin A的NMR数据(DMSO-d6)
实施例5：免疫活性测试
对实施例1制得的杜松烷型倍半萜Salicifoliusin A进行了体外抗肿瘤活性测试。
方法：用淋巴细胞增殖的方法，来检测制得的Salicifoliusin A是否具有免疫活性。首先制备小鼠脾细胞：雌性小鼠2只，体重为200g，将其处死，用70％乙醇的浸泡，在无菌的环境中取其脾脏，于蒸发皿中，研磨捣碎，加入3.5mL Hank's液，混合均匀，用尼龙绸布过滤，滤液放置于10mL离心管，再加入3.5mL Hank's液洗涤，合并洗涤液共7mL；用1800r/m的离心机将洗涤液离心5min，弃上清液，再用Hank's液洗一次，收集脾细胞。将收集的脾细胞加入到3mL含有10％小牛血清的RPMI 1640完全培养液中，混匀后过滤，取细胞悬液0.1mL，加3.9mL 1.5％冰醋酸，混匀，复2管，计数，细胞总数为1×108个；取全部细胞悬液加含有10％小牛血清的RPMI 1640完全培养液，调整浓度至5×106个/mL，4℃保存。然后取100μL处理好的小鼠脾细胞，加入96孔板中，后加Con A 50μL(终浓度为4μg/mL)和不同浓度的倍半萜各50μL，4复孔，倍半萜浓度梯度设置为：200、100、50、25、12.5μM。空白对照组设置为Con A 50μL和50μL 1640完全培养基，将96孔板放置于37℃的CO2孵育箱中培养，48小时后每孔中加入50μL MTT(2mg/mL)，培养4h后去上清液，加含1N HCl的DMSO溶液150μL/孔，振荡10min，使甲瓒充分溶解。用酶标仪测定490nm处的每孔内溶液的OD值。计算SI值，SI值＝刺激组的OD值/非刺激组的OD值。
结果：实施例1所制得的倍半萜Salicifoliusin A与Con A对照组相比较，对小鼠脾细胞的增值表现出了明确的抑制作用，且具有剂量依赖性。这提示该化合物可能是潜在的降低免疫活性的药物(如表3所示)。
表3：制得的倍半萜体外免疫活性

Claims (8)

1.一种式(I)所示的杜松烷型倍半萜Salicifoliusin A：
2.一种式(I)所示的杜松烷型倍半萜Salicifoliusin A的制备方法，其特征在于，所述的制备方法按如下步骤进行：
(1)将柳叶蜡梅的枝干进行粉碎干燥后，用乙醇浸提提取，之后过滤除去不溶物，取滤液减压浓缩得到乙醇浸膏；
(2)将步骤(1)所得乙醇浸膏分散于水中，得到悬浮液，再将所得悬浮液用石油醚进行萃取，得到石油醚萃取液，减压浓缩后得到石油醚浸膏；
(3)用200～300目柱层析硅胶对步骤(2)所得石油醚浸膏进行柱层析分离，以石油醚/乙酸乙酯体积比为9：1～1：9的混合液为洗脱剂进行梯度洗脱，收集含目标化合物的洗脱液，减压浓缩后合并得粗品，所得粗品依次经洗涤、重结晶，得到所述的杜松烷型倍半萜Salicifoliusin A；所述粗品的洗涤采用石油醚、乙酸乙酯中的一种或两者以任意比例的混合液；所述粗品的重结晶采用甲醇作为重结晶溶剂。
3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，用于浸提提取的乙醇为体积分数95％的乙醇。
4.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述乙醇浸提提取的具体操作方法为：将粉碎干燥后的柳叶蜡梅枝干与乙醇以料液质量比1：0.8～1混合，常温浸提5～10天，过滤得到乙醇浸提提取液，重复浸提2～4次，合并每次所得乙醇浸提提取液，50℃减压旋蒸回收乙醇，得到乙醇浸膏。
5.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述乙醇浸膏与水的质量比为1：2～4。
6.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述悬浮液用等体积的石油醚萃取3次。
7.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述梯度洗脱的具体操作方法为：以石油醚/乙酸乙酯体积比分别为9：1、7：1、5：1、3.5：1、2：1、1：1、1：2、1：3.5、1：5、1：7、1：9的混合液为洗脱剂，进行梯度洗脱，洗脱剂的流速为5～7mL/min，每种不同比例洗脱剂的洗脱时间为300min～400min，收集含目标化合物的洗脱液，减压浓缩后合并得粗品。
8.如权利要求1所述的杜松烷型倍半萜Salicifoliusin A在制备免疫活性药物中的应用。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106831384A (zh) * 2017-02-06 2017-06-13 海南师范大学 一种杜松烷型倍半萜化合物及其制备方法与应用
CN110903269A (zh) * 2018-09-15 2020-03-24 深圳爱拓化学有限公司 一类杜松烷型倍半萜化合物及其制备方法
CN112811998A (zh) * 2021-01-19 2021-05-18 济南大学 两个杜松烷型和一个桉烷型倍半萜的制备方法及其在协同氟康唑抗耐药真菌中的应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DAN LI等: "Isolation and absolute configurations of diastereomers of 8α-hydroxy-T-muurolol and (1α,6β,7β)-cadinane-4-en-8a,10a-diol from Chimonanthus salicifolius", 《PHYTOCHEMISTRY》 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106831384A (zh) * 2017-02-06 2017-06-13 海南师范大学 一种杜松烷型倍半萜化合物及其制备方法与应用
CN110903269A (zh) * 2018-09-15 2020-03-24 深圳爱拓化学有限公司 一类杜松烷型倍半萜化合物及其制备方法
CN112811998A (zh) * 2021-01-19 2021-05-18 济南大学 两个杜松烷型和一个桉烷型倍半萜的制备方法及其在协同氟康唑抗耐药真菌中的应用
CN112811998B (zh) * 2021-01-19 2023-04-07 济南大学 两个杜松烷型和一个桉烷型倍半萜的制备方法及其在协同氟康唑抗耐药真菌中的应用

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