CN105641001B - 灵芝氨基酸提取物及其制备方法与用途 - Google Patents

灵芝氨基酸提取物及其制备方法与用途 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种灵芝氨基酸提取物，其按如下方法制备得到：取灵芝粉末，按液料比为10～30：1加入4～10mol/L盐酸溶液中，加热回流4～12h，抽滤得水解液，将其减压蒸干，剩余物加水溶解，并调节pH至2～4，得粗提液；粗提液用活性炭脱色后，滤除活性炭，将滤液减压浓缩后加入无水乙醇，调节pH至2～4，静置后离心分离，收集固体沉淀，干燥至恒重，得到所述的灵芝氨基酸提取物；本发明首次公开灵芝氨基酸的提取工艺，且所得灵芝氨基酸提取物可应用于制备降血糖及抗氧化的保健品和药品等；本发明工艺流程短，方法简单，操作便捷，具有较好的经济效益和社会效益。

Description

灵芝氨基酸提取物及其制备方法与用途
(一)技术领域
本发明涉及一种灵芝氨基酸提取物及其制备方法，所述灵芝氨基酸提取物可应用于制备降血糖和抗氧化相关保健品及药品。
(二)背景技术
灵芝(Ganoderma Lucidum Karst)为多孔菌科真菌赤芝或紫芝的干燥子实体，是我国传统的药用真菌，据《神农本草经》记载，灵芝具有补中益气、滋补强壮、扶正固本、延年益寿等功效，而在《本草纲目》中灵芝亦被列为上品，2000年版《中国药典》中首次承认灵芝的药用价值，作为我国法定中药材。现代医学证明，灵芝含有多种生理活性物质，包括多糖类、三萜类、甾醇类、生物碱类、呋喃衍生物、氨基多肽类、无机元素、脂肪酸等。灵芝能够调节、增强人体免疫力，对神经衰弱、风湿性关节炎、冠心病、高血压、肝炎、糖尿病、肿瘤等有良好的协同治疗作用。我国消费者普遍相信灵芝类保健品有抗癌、降糖、提高免疫力等功效，2014年全国灵芝类保健产品总销售额约20亿元人民币，发展势头较好。
灵芝中含有18种氨基酸，其中人体必需氨基酸的相对含量高于50％，比一般食用菌高40％。相关文献报道了泰山地区的五种灵芝成品的氨基酸含量，除色氨酸被水解破坏而未检出外，其它17种氨基酸含量丰富，其氨基酸的总含量最高为12.87％，并含有7种人体必需氨基酸，值得深度开发利用。氨基酸是生物体内构成蛋白质分子的基本单位，与生物的生命活动有着密切的关系，是生物体内不可缺少的营养成分之一。人体缺乏任何一种必需氨基酸，就可导致生理功能异常，影响抗体代谢的正常进行，最后导致疾病。同样，如果人体内缺乏某些非必需氨基酸，会产生抗体代谢障碍。例如精氨酸和瓜氨酸对形成尿素十分重要；胱氨酸摄入不足会引起胰岛素减少，血糖升高。目前关于灵芝化学成分分析的研究报道偏重于多糖及三萜类成分，对灵芝氨基酸及其提取分离的研究报道较少。
灵芝化学成分复杂，提取灵芝氨基酸需要优化的条件比较多，所以本发明选择响应面法。响应面法利用合理的试验设计方法，并通过试验得到一定的数据，采用多元二次回归方程拟合因素与响应值之间的函数关系，通过对回归方程的分析寻求最优工艺参数，是解决多变量问题的一种统计方法。响应面的主要优势在于可以减少试验次数，评价多个参数间的相互作用关系。
本发明以灵芝为原料，用盐酸水解法提取灵芝氨基酸，并通过响应面法优化提取灵芝氨基酸的液料比、提取时间以及盐酸浓度的工艺，并通过活性炭脱色、乙醇沉淀、离心烘干得到纯化的灵芝氨基酸提取物，为灵芝氨基酸的工业化生产提供价值指导。本发明同时还发现该灵芝氨基酸提取物具有降糖和抗氧化能力，为灵芝氨基酸在保健品和药品方面的应用提供科学依据。
(三)发明内容
本发明提供了一种灵芝氨基酸提取物及其制备方法，所述的灵芝氨基酸提取物具有降血糖和抗氧化能力，可应用于制备降血糖和抗氧化相关保健品及药品。
本发明通过响应面法优化提取灵芝氨基酸的方法，利用design expert软件，根据Box-Behnken设计原则对液料比、提取时间以及盐酸浓度这些影响灵芝氨基酸提取的因素进行优化，从而提高灵芝氨基酸的提取率，缩短提取时间，降低能耗和产品成本。
本发明采用如下技术方案：
一种灵芝氨基酸提取物，所述的灵芝氨基酸提取物按如下方法制备得到：
(1)酸水解：取灵芝粉末，按液料比为10～30：1(mL/g)加入4～10mol/L盐酸溶液中，加热回流4～12h，抽滤得水解液，将所得水解液减压蒸干，剩余物加水溶解，并调节pH至2～4，得粗提液；
(2)提纯：向步骤(1)所得粗提液中加入活性炭，在50～90℃下脱色15～55min，抽滤除去活性炭，将滤液减压浓缩后加入无水乙醇，调节pH至2～4，于2～6℃静置20～24h，之后在2000～3000r/min的转速下离心分离10～15min，除去上层清液，收集固体沉淀，于50～70℃烘箱内恒温干燥至恒重，得到所述的灵芝氨基酸提取物。
本发明通过响应面法优化提取灵芝氨基酸的方法，利用design expert软件，根据Box-Behnken设计原则对液料比、提取时间以及盐酸浓度这些影响灵芝氨基酸提取的因素进行优化，得出所述步骤(1)中，酸水解的最优条件为：液料比为20：1(mL/g)，盐酸溶液浓度为7.0mol/L，加热回流时间为9.5h。
步骤(1)中，所述的灵芝粉末是将灵芝置于60～80℃下烘干至恒重，粉碎至5～10目获得。
步骤(1)中，所述加热回流的温度通常为100～110℃。
步骤(1)中，推荐所述的剩余物加6～9质量倍的水溶解。
步骤(2)中，推荐所述活性炭的质量用量为步骤(1)中所述灵芝粉末质量的5％～25％，优选15％。所述活性炭脱色的最优条件为：在80℃下脱色45min。
步骤(2)中，推荐所述滤液减压浓缩至初始体积的1/6～1/10，可观察到有晶体析出。推荐在浓缩后的滤液中加入1～3倍体积量的无水乙醇，优选2倍。
步骤(1)或步骤(2)中，pH的调节通常使用氢氧化钠和/或盐酸，优选调节pH至3。
本发明以PNPG为底物，以96孔板为反应载体，测定所述的灵芝氨基酸提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制率，实验证明，本发明灵芝氨基酸提取物在制备降血糖保健品及药品方面具有应用前景。
本发明以DPPH为底物，以96孔板为反应载体，测定所述的灵芝氨基酸提取物对DPPH自由基的清除能力及添加灵芝氨基酸提取物后DPPH自由基的残留率，实验证明，本发明灵芝氨基酸提取物在制备抗氧化保健品及药品方面同样具有应用前景。
本发明突出的有益效果和优点在于：
1、本发明采用的Box-Behnken(BBD)中心组合设计模型是响应面法，与正交法相比该方法可以减少试验次数，同时评价多个参数间的相互作用关系；通过响应面法得到最优提取条件：液料比为20：1，提取时间为9.5h，盐酸浓度7.0moL/L；最终所得纯化的灵芝氨基酸提取物其氨基酸含量高达17.78％；
2、本发明首次公开灵芝氨基酸的提取工艺，且所得灵芝氨基酸提取物可应用于制备降血糖及抗氧化的保健品和药品等；本发明工艺流程短，方法简单，操作便捷，具有较好的经济效益和社会效益，为灵芝氨基酸的保健品和药品的开发提供了一定的理论和实践依据。
(四)附图说明
图1a为实施例1中茚三酮比色法测定氨基酸含量的标准曲线图；
图1b为实施例1中液料比对灵芝氨基酸得率的影响图；
图1c为实施例1中提取时间对灵芝氨基酸得率的影响图；
图1d为实施例1中盐酸浓度对灵芝氨基酸得率的影响图；
图2a为实施例1中液料比与提取时间对灵芝氨基酸提取得率影响的响应面三维图；
图2b为实施例1中液料比与盐酸浓度对灵芝氨基酸提取得率影响的响应面三维图；
图2c为实施例1中提取时间与盐酸浓度对灵芝氨基酸提取得率影响的响应面三维图；
图3a为实施例5中灵芝氨基酸提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制率图；
图3b为实施例5中阿卡波糖对α-葡萄糖苷酶的抑制率图；
图4a为实施例5中灵芝氨基酸提取物对DPPH自由基的清除能力图；
图4b为实施例5中维生素C对DPPH自由基的清除能力图；
图5a为实施例5中不同浓度的灵芝氨基酸提取物清除DPPH自由基曲线图；
图5b为实施例5中不同浓度的维生素C清除DPPH自由基曲线图。
(五)具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明作进一步的说明，但本发明的保护范围并不仅限于此。
实施例1
灵芝氨基酸最优提取条件的确定
一种响应面法优化提取灵芝氨基酸的方法，利用design expert软件，根据Box-Behnken设计原则对液料比、提取时间以及盐酸浓度这些影响灵芝氨基酸提取的因素进行优化，该方法包括以下步骤：
(一)样品准备
(1)预处理：将灵芝80.0g置于60～80℃下烘干至恒重，粉碎，得灵芝粉末76.4g；
(2)酸水解：取步骤(1)所得灵芝粉末2.0g，按液料比为10～30：1(mL/g)加入4～10mol/L的盐酸溶液中，加热回流4～12h，抽滤，得氨基酸粗提取液；
(3)调pH：用氢氧化钠溶液调节步骤(2)所得的氨基酸粗提取液的pH至3；
(4)定容：将步骤(3)所得的氨基酸粗提取液定容至50mL，得到灵芝氨基酸样品液备用。
(二)茚三酮比色法测定灵芝氨基酸含量
(1)氨基酸标准曲线的制备
分别量取0μL、100μL、150μL、200μL、250μL、300μL、350μL、400μL、450μL、500μL的甘氨酸溶液于试管中，用磷酸盐缓冲液补至体积为1500μL，分别加入1mL茚三酮溶液，震荡，100℃下反应15min，常温下冷却10min，用50％乙醇定容至10mL，570nm波长下检测吸光度(X)，每个组设置三个平行组。以吸光度(X)为横坐标，氨基酸重量(Y)为纵坐标，绘制氨基酸标准曲线，茚三酮比色法测定氨基酸含量的标准曲线见图1a。其线性回归方程为Y＝0.1201X+0.0209，R2＝0.9989。
(2)灵芝氨基酸的含量测定
分别取一定浓度的灵芝氨基酸样品液100μL于试管中，用磷酸盐缓冲液补至体积为1500μL，分别加入1mL茚三酮溶液，震荡，100℃下反应15min，常温下冷却10min，用50％乙醇定容至10mL，570nm波长下检测吸光度，每个组设置三个平行组。通过氨基酸标准曲线计算样品液中氨基酸的含量。灵芝氨基酸得率＝氨基酸含量/灵芝重量×100％。
(三)试验设计与统计分析
1、单因素试验
改变液料比、提取时间以及盐酸浓度这些影响灵芝氨基酸提取的因素进行单因素试验。
(1)液料比的变化对灵芝氨基酸提取得率的影响：
在提取温度100℃，提取时间8h，盐酸浓度为6moL/L的条件下，将液料比设定为10:1、15:1、20:1、25:1、30:1的五个变化值。液料比的变化对灵芝氨基酸提取得率的影响结果如图1b所示。
经检测，当液料比为15:1时，灵芝氨基酸得率为4.417％，随着料液比的增加，氨基酸得率反而下降，因此，料液比取15:1较为合适。
(2)提取时间对灵芝氨基酸提取得率的影响：
在提取温度100℃，液料比为15:1，盐酸浓度为6moL/L的条件下，将提取时间设定为4h、8h、12h、16h、20h五个变化值。提取时间对灵芝氨基酸提取得率的影响结果如图1c所示。
经检测，当提取时间为8h时，灵芝氨基酸得率为4.324％，随着提取时间的增加，氨基酸得率反而下降，因此，提取时间取8h较为合适。
(3)盐酸浓度对灵芝氨基酸提取得率的影响：
在提取温度100℃，液料比为15:1，提取时间8h的条件下，将盐酸浓度设定为2moL/L、4moL/L、6moL/L、8moL/L、10moL/L五个变化值。盐酸浓度对灵芝氨基酸提取得率的影响结果如图1d所示。
经检测，当盐酸浓度为6moL/L时，灵芝氨基酸得率为4.384％，随着盐酸浓度的增加，氨基酸得率反而下降，因此，盐酸浓度取6moL/L较为合适。
2、相响应面法优化提取灵芝氨基酸的方法
(1)响应面法设计优化
根据单因素试验结果，选取对灵芝氨基酸提取影响较为显著的液料比、提取时间以及盐酸浓度这三个因素，利用design expert软件，根据Box-Behnken设计原则设计试验，每个因素设计三个水平，设定结果见表1。
表1：响应面分析因素及水平表
按照响应面分析因素及水平表，以液料比(A)、提取时间(B)以及盐酸浓度(C)为自变量，以灵芝氨基酸得率为响应值(Y)，响应面试验方案及响应值见表2。
表2：响应面试验方案及响应值
(2)模型的建立和统计分析
根据所得数据进行二次多元回归分析，得到相应变量(液料比A、提取时间B以及盐酸浓度C)与响应值(氨基酸得率Y)之间的多元二次回归方程。
多元二次回归方程：Y＝－4.62331+0.51495A+0.48688B+0.73299C－2.71750×10-3AB+0.013705AB+6.80938×10-3BC－0.016624A2－0.025543B2－0.076071C2
对二次多元回归方程各项进行方差分析及显著性检验结果见表3。结果表明，该回归模型的显著性检验P<0.0001，表明该模型具有统计学意义，回归模型的校正系数R2＝0.9743，变异系数C.V.％＝3.2％，失拟项P＝0.073>0.005，失拟性检验结果不显著，说明该模型与数据拟合程度较高，实验误差小，可以用该模型分析和预测盐酸水解法提取灵芝氨基酸的结果。
表3：方差分析及显著性检验结果
(3)试验结果分析与优化
利用Design Expert软件，根据回归方程进行绘图分析，得到回归方程的响应面三维图。液料比、提取时间、盐酸浓度对灵芝氨基酸得率影响的响应面三维图如图2a～2c所示。
由Design Expert软件得到的盐酸水解法提取灵芝氨基酸的最佳提取条件为：液料比为20:1，提取时间为9.41h，盐酸浓度7.04moL/L，在此条件下灵芝氨基酸得率为4.60％。为了操作的简便性，实际操作的最优条件为：液料比为20:1，提取时间为9.5h，盐酸浓度7.0moL/L，在此条件下灵芝氨基酸得率为4.78％。
实施例2
灵芝氨基酸提取物的制备及其氨基酸含量测定：
(1)预处理：将灵芝40g置于70℃下烘干至恒重，粉碎，得灵芝粉末38.3g；
(2)酸水解：取步骤(1)所得灵芝粉末30.0g，按液料比为20:1(mL/g)加入600mL浓度为7.0moL/L的盐酸溶液中，在100℃下加热回流9.5h，抽滤得水解液，将所得水解液减压蒸干，加水15mL溶解浓缩产物，并用氢氧化钠调节pH至3，得粗提液；
(3)提纯：向步骤(2)所得粗提液中加入4.5g活性炭(活性炭的添加量是灵芝粉末质量的15％)，在80℃下脱色45min，抽滤除去活性炭，取滤液减压浓缩至初始体积的1/8，有晶体析出，加入2倍体积量无水乙醇，用氢氧化钠和盐酸调节pH至3，4℃静置22h，之后在3000r/min的转速下离心分离15min，除去上层清液，收集沉淀，于50℃烘箱内恒温干燥至恒重，得到纯化的灵芝氨基酸提取物1.6818g；
(4)氨基酸含量测定：将步骤(3)所得纯化的灵芝氨基提取物配成4mg/mL的样品液，通过茚三酮比色法测定氨基酸含量，计算灵芝氨基酸含量。灵芝氨基酸含量＝氨基酸含量/灵芝氨基酸提取物重量×100％。
经检测，本实施例所提取的纯化的灵芝氨基酸提取物的灵芝氨基酸含量为17.78％。
实施例3
灵芝氨基酸提取物的制备及其氨基酸含量测定：
(1)预处理：将灵芝40.0g置于60℃下烘干至恒重，粉碎，得灵芝粉末38.2g；
(2)酸水解：取步骤(1)所得灵芝粉末30.0g，按液料比为10:1(mL/g)加入300mL浓度为4.0moL/L的盐酸溶液中，在100℃下加热回流4h，抽滤得水解液，将所得水解液减压蒸干，加水15mL溶解浓缩产物，并用氢氧化钠调节pH至3，得粗提液；
(3)提纯：向步骤(2)所得粗提液中加入1.5g活性炭(活性炭的添加量是灵芝粉末质量的5％)，在50℃下脱色55min，抽滤除去活性炭，取滤液减压浓缩至初始体积的1/6，有晶体析出，加入1倍体积量无水乙醇，用氢氧化钠和盐酸调节pH至3，2℃静置20h，之后在3000r/min的转速下离心分离10min，除去上层清液，收集沉淀，于60℃烘箱内恒温干燥至恒重，得到纯化的灵芝氨基酸提取物1.3687g；
(4)氨基酸含量测定：将步骤(3)所得纯化的灵芝氨基提取物配成4mg/mL的样品液，通过茚三酮比色法测定氨基酸含量，计算灵芝氨基酸含量。灵芝氨基酸含量＝氨基酸含量/灵芝氨基酸提取物重量×100％。
经检测，本实施例所提取的纯化的灵芝氨基酸提取物的灵芝氨基酸含量为14.75％。
实施例4
灵芝氨基酸提取物的制备及其氨基酸含量测定：
(1)预处理：将灵芝40.0g置于60℃下烘干至恒重，粉碎，得灵芝粉末38.5g；
(2)酸水解：取步骤(1)所得灵芝粉末30.0g，按液料比为30:1(mL/g)加入900mL浓度为10moL/L的盐酸溶液中，在100℃下加热回12h，抽滤得水解液，将所得水解液减压蒸干，加水15mL溶解浓缩产物，并用氢氧化钠调节pH至3，得粗提液；
(3)提纯：向步骤(2)所得粗提液中加入1.5g活性炭(活性炭的添加量是灵芝粉末质量的5％)，在90℃下脱色15min，抽滤除去活性炭，取滤液减压浓缩至初始体积的1/10，有晶体析出，加入3倍体积量无水乙醇，用氢氧化钠和盐酸调节pH至3，6℃静置24h，之后在3000r/min的转速下离心分离15min，除去上层清液，收集沉淀，于70℃烘箱内恒温干燥至恒重，得到纯化的灵芝氨基酸提取物1.4881g；
(4)氨基酸含量测定：将步骤(3)所得纯化的灵芝氨基提取物配成4mg/mL的样品液，通过茚三酮比色法测定氨基酸含量，计算灵芝氨基酸含量。灵芝氨基酸含量＝氨基酸含量/灵芝氨基酸提取物重量×100％。
经检测，本实施例所提取的纯化的灵芝氨基酸提取物的灵芝氨基酸含量为15.44％。
实施例5
灵芝氨基酸提取物的降糖活性和抗氧化活性的考察(以实施例2制得的灵芝氨基酸提取物为测试样品)：
为考察本发明的灵芝氨基酸提取物的降糖活性和抗氧化活性，现进行以下实验：
1、灵芝氨基酸提取物的降糖活性测定：
以PNPG为底物，以96孔板为反应载体，测定灵芝氨基酸提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制率。
标准反应体系：将40μL一定浓度的灵芝氨基酸提取物溶液加入20μL 0.2U/mL的α-葡糖糖苷酶溶液中，于37℃下反应10min，加入20μL 6.5mmol/L PNPG溶液，于37℃下反应30min，用120μL 0.2mol/L Na2CO3溶液终止反应，用酶标仪在405nm波长处测定溶液的吸收值，每个组设置三个平行组。氨基酸浓度对α-葡萄糖苷酶的抑制率关系见表4。实验组灵芝氨基酸提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制率见图3a；阳性对照组阿卡波糖对α-葡萄糖苷酶的抑制率见图3b。
样品对酶活性的抑制率(％)：Inhibition rate(％)＝[(A0Blank－ABlank)－(A0－A)]/(A0Blank－ABlank)
A0Blank为只加入α-葡糖糖苷酶溶液和PNPG溶液的吸收值；ABlank为只加PNPG溶液的吸收值；A0为加入待测样品溶液，α-葡糖糖苷酶溶液和PNPG溶液的吸收值；A为只加待测样品溶液和PNPG溶液的吸收值。
表4：氨基酸浓度对α-葡萄糖苷酶的抑制率关系
由上表可知灵芝氨基酸提取物对α-葡糖糖苷酶具有一定的抑制作用，其IC50值为380.62mg/L。
2、灵芝氨基酸提取物的抗氧化活性测定：
(1)灵芝氨基酸提取物对DPPH自由基的清除能力
以DPPH为底物，以96孔板为反应载体，测定灵芝氨基酸提取物对DPPH自由基的清除能力。
取一定浓度的灵芝氨基酸提取物的溶液0μL、10μL、20μL、30μL、40μL、50μL、60μL、70μL于96孔板中，无水乙醇补至体积70μL，加DPPH溶液150μL，以乙醇替代DPPH溶液为空白对照。充分混合，静置30分钟后，用酶标仪在516nm处测A值，每个组设置三个平行组。氨基酸浓度与DPPH自由基的清除率关系见表5。实验组灵芝氨基酸提取物对DPPH自由基的清除能力见图4a；阳性对照组维生素C对DPPH自由基的清除能力见图4b。
自由基清除率的计算公式：清除率＝(A0－A)/A0×100％
表5：氨基酸浓度与DPPH自由基的清除率关系
由上表可知灵芝氨基酸提取物对DPPH具有一定的清除作用，其IC50值为484.54μg/mL。
(2)DPPH的标准曲线的制备
取DPPH溶液0uL、40uL、80uL、120uL、160uL、200uL于96孔板中，无水乙醇补至体积200uL，充分混合，用酶标仪在516nm处测吸光度，每个组设置三个平行组。以吸光度(Y)为纵坐标，以DPPH质量浓度ug/mL(X)为横纵标制作DPPH标准曲线，其线性回归方程为Y＝0.0192X－0.023，R2＝0.9941。
(3)添加灵芝氨基酸提取物后DPPH自由基的残留率
以乙醇为溶剂，配制不同浓度的灵芝氨基酸提取物样品液，分别取各不同浓度样品液40uL于96孔板中，无水乙醇补至体积70uL，加DPPH溶液150uL，以乙醇替代DPPH溶液为空白对照。充分混合，快速用酶标仪在516nm处测定其不同时间的吸光度值。根据标准曲线换算成[DPPH.]的质量浓度，从而计算出[DPPH.]残留率。根据[DPPH.]残留率和相应的氨基酸浓度，绘制出灵芝氨基酸[DPPH.]自由基残留曲线图。实验组不同浓度的灵芝氨基酸提取物清除DPPH自由基曲线见图5a；阳性对照组不同浓度的维生素C清除DPPH自由基曲线见图5b。
[DPPH.]残留率的计算公式：[DPPH.]REM＝[DPPH.]T/[DPPH.]T＝0×100％
其中[DPPH.]T为自由基清除过程中某一时刻[DPPH.]的质量浓度，[DPPH.]T＝0为[DPPH.]的原始浓度。
由图5a可知灵芝氨基酸提取物对DPPH自由基清除能力与灵芝氨基酸提取物的浓度呈正相关。

Claims (8)

1.一种灵芝氨基酸提取物，其特征在于，所述的灵芝氨基酸提取物按如下方法制备得到：
(1)酸水解：取灵芝粉末加入盐酸溶液中，加热回流9.5h，抽滤得水解液，将所得水解液减压蒸干，剩余物加水溶解，并调节pH至2～4，得粗提液；所述盐酸溶液的浓度为7.0mol/L；所述盐酸溶液的体积用量为20mL/1g灵芝粉末；
(2)提纯：向步骤(1)所得粗提液中加入活性炭，在50～90℃下脱色15～55min，抽滤除去活性炭，将滤液减压浓缩后加入无水乙醇，调节pH至2～4，于2～6℃静置20～24h，之后在2000～3000r/min的转速下离心分离10～15min，除去上层清液，收集固体沉淀，于50～70℃烘箱内恒温干燥至恒重，得到所述的灵芝氨基酸提取物。
2.如权利要求1所述的灵芝氨基酸提取物，其特征在于，所述的灵芝粉末是将灵芝置于60～80℃下烘干至恒重，粉碎至5～10目获得。
3.如权利要求1所述的灵芝氨基酸提取物，其特征在于，步骤(1)中，所述的剩余物加6～9质量倍的水溶解。
4.如权利要求1所述的灵芝氨基酸提取物，其特征在于，步骤(2)中，所述活性炭的质量用量为步骤(1)中所述灵芝粉末质量的5％～25％。
5.如权利要求1所述的灵芝氨基酸提取物，其特征在于，步骤(2)中，所述滤液减压浓缩至初始体积的1/6～1/10。
6.如权利要求1所述的灵芝氨基酸提取物，其特征在于，步骤(2)中，在浓缩后的滤液中加入1～3倍体积量的无水乙醇。
7.如权利要求1所述的灵芝氨基酸提取物，其特征在于，步骤(1)或步骤(2)中，pH的调节使用氢氧化钠和/或盐酸。
8.一种如权利要求1所述的灵芝氨基酸提取物在制备降血糖、抗氧化的保健品及药品中的应用。
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反相高效液相色谱一紫外吸收法测定灵芝中氨基酸的含量;商振华等;《药物分析杂志》;19940430;第14卷(第4期);30页右栏第6段 *
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灵芝中有效降糖组分的提取分离、结构表征与性质研究;王晨栋;《中国优秀硕士学位论文全文数据库（医药卫生科技辑）》;20150315;第2015年卷(第03期);36页第3段 *
灵芝蛋白的提取、酶解及抗氧化性能研究;敖宏;《中国优秀硕士学位论文全文数据库（医药卫生科技辑）》;20110315;第2011年卷(第03期);摘要最后1段 *

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