CN105586395A - 一种人体对日常饮食反应的检测试剂盒和方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了人体对日常饮食反应的基因检测试剂盒,该试剂盒包括盒体及盒体内单独存放的试剂,试剂包括:(1)针对10个基因SNP多态位点的PCR反应引物组(2)PCR扩增试剂(3)琼脂糖凝胶电泳分析试剂。本发明通过PCR引物的设计使多个PCR扩增反应可在同一台PCR仪上同步进行,对受测者的相关基因进行检测,并实现检测的高效性、特异性,分析得到不同营养元素对身体影响的基因基础,从而为受测者获得一个合适的饮食管理方案,评估相应健康风险,采取相应的策略避免对其无效甚至是有害的方法。同时可以辅助专业教练员对运动员的饮食管理。
Description
技术领域
本发明涉及基因检测,具体涉及人体对日常饮食反应的基因检测试剂盒。
背景技术
营养是保证人体健康长寿的物质基础,人体器官的功能和组织的正常代谢依赖着必需的营养,而这些营养物质又通过合理膳食而获得。1997年修改制定的《中国居民膳食指南》,提出了合理膳食的8条要求,即1,食物要多样,以谷类为主;2,多吃蔬菜、水果和薯类;3,常吃奶类、豆类及其制品;4,经常吃适量鱼、禽、蛋、瘦肉,少吃肥肉和荤油;5,食量与体力活动要平衡,保持适宜体重;6,吃清淡少盐的膳食;7,如饮酒应限量;8,吃清洁卫生、不变质的食物。大面积的营养学调查表明,我国居民有不少方面都未能达到这一合理饮食的要求。这将是新世纪营养水平改观的基本要求。对于不同从事健身运动的人群来说,营养需要还有它们各自的特点,要通过更高水准的饮食改善来满足他们各自的需要。
然而,即使人们注重营养平衡,由于对自身体质状况的不了解,会导致不科学饮食的发生,不仅不能促进健康,反而会危害到健康。人体作为一个复杂的有机体,对外来饮食中的营养成分会产生不同的反应,不同的代谢能力,甚至会因为体内基因缺陷,对特定的成分无法消化。在这种情况下,如果我们还报以传统的饮食观念,无疑将会加重健康风险。因此,了解自身基因,明确对营养成分的反应,是健康饮食的科学基础。
发明内容
有鉴于此,本发明提供了一种日常饮食反应基因检测试剂盒,该试剂盒对受测者的相关基因进行检测,分析得到不同营养元素对身体影响的基因基础,从而为受测者获得一个合适的饮食管理方案,评估相应健康风险,采取相应的策略避免对其无效甚至是有害的方法。同时可以辅助专业教练员对运动员的饮食管理。且PCR扩增反应在同一台PCR仪上同步进行并具备检测的高效性、特异性。
一种日常饮食反应基因检测试剂盒,包括盒体及盒体内单独存放的试剂,存放的试剂包括:
(1)针对10个基因SNP多态位点的PCR反应引物组(以下引物序列方向均为5’端至3’端):
针对SNPRS671的引物组:
1CTGCAGGCATACACTA
2CACAGTTTTCACTTC
3CCAAGAGTGATTTCTGC
4GCAGGTCCTGAACTTCCAG
针对SNPRS2187668的引物组:
1GGCAGCTGAGAGTAAA
2CCACATGGTCCTCAC
3GTGAAGCTATATCTGTAATAG
4GAAGTGTCATTCTC
针对SNPRS762551的引物组:
1GTGAGCTCTGTGGGCA
2CATCTACCATGCGTCCTGG
3GCATGCATGCTGTGCCAG
4GACTGGGACAATGCCATC
针对SNPRS4988235的引物组:
1CAGATAAGATAATGTAGC
2GTTCCTTTGAGGCCAGGGA
3GAGACGATCACGTCATAG
4CAAACCCCCTTTTCAAAG
针对SNPRS713598的引物组:
1CAATCACTGTTGCTCAGTGC
2GTAGTGAAGAGGCAGC
3GACTCTAACTCGCATC
4GGAAGGTGTGAGAGAAAC
针对SNPRS1800544的引物组:
1CTGCTCCGTCGGCCCC
2GTTGGCCATGCAGCTCC
3CTCCAGACGTAACTCACAC
4CAAGCGTTGCTGAG
针对SNPRS5400的引物组:
1GCAGTTGGTGGAATGAC
2CCAAAGAATGATGCAA
3TGGATGACCGAAAAG
4ATGCGCATAGGGTCATG
针对SNPRS1726866的引物组:
1GTGATATCATCCTGTGC
2CACAGAGATGAAGGCAA
3CTCTTCTGCTATCTGTG
4AAGAGGCATTTCATGT
针对SNPRS16983422的引物组:
1GTGTAAGATGATGTAAA
2GTCTAAATTATGTTC
3GTTATTTGGATAGACATAG
4TTTCTCAGCATGTGC
针对SNPRS11674786的引物组:
1CATAAAACCTAGCTCA
2GAACTCAAGACAGAAG
3CTGTGGAACATGAAG
4TTTGATGCCAAAATGC
(2)PCR扩增试剂;
(3)琼脂糖凝胶电泳分析试剂。
本发明提供的日常饮食反应基因检测试剂盒的有益效果是:通过PCR引物的设计使多个PCR扩增反应在同一台PCR仪上同步进行,对受测者的相关基因进行检测,并实现检测的高效性、特异性,分析得到不同营养元素对身体影响的基因基础,从而为受测者获得一个合适的饮食管理方案,评估相应健康风险,采取相应的策略避免对其无效甚至是有害的方法。同时可以辅助专业教练员对运动员的饮食管理。附图说明
图1是反应产物琼脂糖凝胶电泳图。
具体实施方式
日常饮食反应基因检测试剂盒,包括盒体及盒体内单独存放的试剂,存放的试剂包括:
(1)针对10个基因SNP多态位点的PCR反应引物组(以下引物序列方向均为5’端至3’端):
针对SNPRS671的引物组:
1CTGCAGGCATACACTA
2CACAGTTTTCACTTC
3CCAAGAGTGATTTCTGC
4GCAGGTCCTGAACTTCCAG
针对SNPRS2187668的引物组:
1GGCAGCTGAGAGTAAA
2CCACATGGTCCTCAC
3GTGAAGCTATATCTGTAATAG
4GAAGTGTCATTCTC
针对SNPRS762551的引物组:
1GTGAGCTCTGTGGGCA
2CATCTACCATGCGTCCTGG
3GCATGCATGCTGTGCCAG
4GACTGGGACAATGCCATC
针对SNPRS4988235的引物组:
1CAGATAAGATAATGTAGC
2GTTCCTTTGAGGCCAGGGA
3GAGACGATCACGTCATAG
4CAAACCCCCTTTTCAAAG
针对SNPRS713598的引物组:
1CAATCACTGTTGCTCAGTGC
2GTAGTGAAGAGGCAGC
3GACTCTAACTCGCATC
4GGAAGGTGTGAGAGAAAC
针对SNPRS1800544的引物组:
1CTGCTCCGTCGGCCCC
2GTTGGCCATGCAGCTCC
3CTCCAGACGTAACTCACAC
4CAAGCGTTGCTGAG
针对SNPRS5400的引物组:
1GCAGTTGGTGGAATGAC
2CCAAAGAATGATGCAA
3TGGATGACCGAAAAG
4ATGCGCATAGGGTCATG
针对SNPRS1726866的引物组:
1GTGATATCATCCTGTGC
2CACAGAGATGAAGGCAA
3CTCTTCTGCTATCTGTG
4AAGAGGCATTTCATGT
针对SNPRS16983422的引物组:
1GTGTAAGATGATGTAAA
2GTCTAAATTATGTTC
3GTTATTTGGATAGACATAG
4TTTCTCAGCATGTGC
针对SNPRS11674786的引物组:
1CATAAAACCTAGCTCA
2GAACTCAAGACAGAAG
3CTGTGGAACATGAAG
4TTTGATGCCAAAATGC
(2)PCR扩增试剂;
(3)琼脂糖凝胶电泳分析试剂。
下面将结合实施例对本发明提供的方法予以进一步的说明。
本实施例对测试者采用日常饮食反应基因检测试剂盒同时检测10个基因的SNP多态位点,并根据基因分型结果,分析得到不同营养元素对身体影响的基因基础,从而为受测者获得一个合适的饮食管理方案,评估相应健康风险,采取相应的策略避免对其无效甚至是有害的方法。同时可以辅助专业教练员对运动员的饮食管理。
使用到的日常饮食反应基因检测试剂盒内试剂由以下组成:
(1)针对10个基因SNP多态位点的PCR反应引物组(以下引物序列方向均为5’端至3’端):
针对SNPRS671的引物组:
1CTGCAGGCATACACTA
2CACAGTTTTCACTTC
3CCAAGAGTGATTTCTGC
4GCAGGTCCTGAACTTCCAG
针对SNPRS2187668的引物组:
1GGCAGCTGAGAGTAAA
2CCACATGGTCCTCAC
3GTGAAGCTATATCTGTAATAG
4GAAGTGTCATTCTC
针对SNPRS762551的引物组:
1GTGAGCTCTGTGGGCA
2CATCTACCATGCGTCCTGG
3GCATGCATGCTGTGCCAG
4GACTGGGACAATGCCATC
针对SNPRS4988235的引物组:
1CAGATAAGATAATGTAGC
2GTTCCTTTGAGGCCAGGGA
3GAGACGATCACGTCATAG
4CAAACCCCCTTTTCAAAG
针对SNPRS713598的引物组:
1CAATCACTGTTGCTCAGTGC
2GTAGTGAAGAGGCAGC
3GACTCTAACTCGCATC
4GGAAGGTGTGAGAGAAAC
针对SNPRS1800544的引物组:
1CTGCTCCGTCGGCCCC
2GTTGGCCATGCAGCTCC
3CTCCAGACGTAACTCACAC
4CAAGCGTTGCTGAG
针对SNPRS5400的引物组:
1GCAGTTGGTGGAATGAC
2CCAAAGAATGATGCAA
3TGGATGACCGAAAAG
4ATGCGCATAGGGTCATG
针对SNPRS1726866的引物组:
1GTGATATCATCCTGTGC
2CACAGAGATGAAGGCAA
3CTCTTCTGCTATCTGTG
4AAGAGGCATTTCATGT
针对SNPRS16983422的引物组:
1GTGTAAGATGATGTAAA
2GTCTAAATTATGTTC
3GTTATTTGGATAGACATAG
4TTTCTCAGCATGTGC
针对SNPRS11674786的引物组:
1CATAAAACCTAGCTCA
2GAACTCAAGACAGAAG
3CTGTGGAACATGAAG
4TTTGATGCCAAAATGC
(2)PCR扩增试剂:10×PCR缓冲液,该PCR缓冲液为100mMTris-HClpH8.3,500mMKCl,15mMMgCl2;dNTPs混合物,该dNTPs混合物为三磷酸鸟嘌呤脱氧核苷酸dGTP,三磷酸腺嘌呤脱氧核苷酸dATP,三磷酸胸腺嘧啶脱氧核苷酸dTTP,三磷酸胞嘧啶脱氧核苷酸dCTP四种核苷酸,各组分浓度为2.5mM;5U/μl热启动Taq酶。
(3)琼脂糖凝胶电泳分析试剂:琼脂糖、TAE缓冲液、DNA分子量标准、Goldview染色液和DNA上样缓冲液,该缓冲液以溴酚蓝为指示剂稀释至1X后使用。
使用上述日常饮食反应基因检测试剂盒按如下步骤进行检测:
(1)提取样本基因组DNA。
采集该测试者唾液,向1-2ml唾液样品中加入500ul提取缓冲溶液,该DNA提取缓冲溶液溶剂为50mM的Tris-HClpH7.4、0.5mM的EDTA和50mM的NaCl,反复吹打混匀后,8000×g离心5分钟,弃去上清,此步骤重复一次;得到的沉淀中加入500ul裂解液,该裂解液溶剂为50mMTris-HClpH7.4,50mMTris-HClpH7.4,150mMNaCl,1mMEDTA,1%Tritonx-100,1%Sodiumdeoxycholate,0.1%SDS,蛋白酶K20mg/mL,彻底悬浮沉淀并充分混匀后,室温放置30分钟,期间来回颠倒离心管数次;得到的混合液中,加入浓度为10mg/mLRNA酶的水溶液10μL,37℃下静置10min;得到的上清液中,加入等体积苯酚-氯仿混合溶液,苯酚和氯仿体积比为1∶1,充分混匀,混合液4℃,12000×g离心5分钟,上清液移入干净离心管内;加入等体积苯氛-氯仿-异戊醇混合溶液,苯酚、氯仿和异戊醇体积比为25∶24∶1,充分混匀后,4℃,12000×g离心5分钟,上清液移入干净离心管内;加入等体积氯仿-异戊醇混合溶液,充分混匀后,4℃,12000×g离心5分钟,上清液移入干净离心管内;加入0.6倍体积的冰浴异丙醇溶液及0.1倍的3mol/L醋酸钠溶液,-20℃静置60分钟后,4℃,12000×g离心10分钟,弃上清液;得到的沉淀物中加入0.5mL70%乙醇清洗沉淀物,4℃,12000×g离心5分钟,弃上清液,此步骤重复一次;得到的沉淀物自然风干,加入20μL无菌超纯水回溶,电泳检测,-20℃保存。
(2)PCR扩增
本实施例同时检测RS671、RS2187668、RS762551、RS4988235、RS713598、RS1800544、RS5400、RS1726866、RS16983422和RS11674786。每个SNP的检测需要一对上下游引物、两条多态引物共4条PCR引物,共需要40条引物。每个SNP的检测需要做两管PCR扩增,为防止出现假阳性之类的反应,衡量PCR是否成功,加设一管阴性对照组,共做21管PCR,所述阴性对照组基因组模板及反应体系是一样的,但没有引物存在。
根据不同的检测位点,用相应的引物按如下比例分别配制PCR反应体系:2.5μl10×PCR缓冲液,2μldNTPs,0.5μl引物组,热启动Taq酶0.15μl,基因组模板80mg,添加超纯水至总体积为25μl。
将装有反应溶液的Eppendorf试管放入ABI9700PCR仪中,设置反应条件如下:预变性95℃3min;热循环94℃30s,60℃30s,72℃30s,35个循环;延伸72℃3min。反应结束后,取出试管。
由于21管PCR扩增反应是在同一台PCR仪上同步进行的,为了实现检测的高效性、特异性,要求40条PCR引物的Tm值相近,为此需要先进行大量的DNA序列软件分析来设计PCR引物,并通过大量的实验来进行Tm值的优化并确定设计的合理性,本试剂盒各基因SNP多态性的检测是既相对独立又相互联系的,不可分割。
(3)琼脂糖凝胶电泳检测
将扩增后的产物进行琼脂糖电泳检测,过程如下:3g琼脂糖,加入100mL去离子水,微波炉加热1min,冷却到60℃时加入5μLGoldview染色液,制成3%的琼脂糖凝胶。PCR产物10μL与6×TBE缓冲液0.8μL混合上样,电压100V电泳15min。紫外灯下读取结果并拍照,所得琼脂糖电泳检测图如图1所示。
检测得到10个基因分型结果如下:
以上所述仅为本发明的较佳实施例,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
核苷酸序列表
<110>武汉白原科技有限公司
<120>一种人体对日常饮食反应的检测试剂盒和方法
<130>1
<160>40
<170>PatentInversion3.3
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<213>人工序列
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ctgcaggcatacacta16
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cacagttttcacttc15
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<212>DNA
<213>人工序列
<400>40
tttgatgccaaaatgc16
Claims (7)
1.日常饮食反应基因检测试剂盒,包括盒体及盒体内单独存放的试剂,其特征在于:存放的试剂包括:
(1)针对10个基因SNP多态位点的PCR反应引物组(以下引物序列方向均为5’端至3’端):
针对SNPRS671的引物组:
1CTGCAGGCATACACTA
2CACAGTTTTCACTTC
3CCAAGAGTGATTTCTGC
4GCAGGTCCTGAACTTCCAG
针对SNPRS2187668的引物组:
1GGCAGCTGAGAGTAAA
2CCACATGGTCCTCAC
3GTGAAGCTATATCTGTAATAG
4GAAGTGTCATTCTC
针对SNPRS762551的引物组:
1GTGAGCTCTGTGGGCA
2CATCTACCATGCGTCCTGG
3GCATGCATGCTGTGCCAG
4GACTGGGACAATGCCATC
针对SNPRS4988235的引物组:
1CAGATAAGATAATGTAGC
2GTTCCTTTGAGGCCAGGGA
3GAGACGATCACGTCATAG
4CAAACCCCCTTTTCAAAG
针对SNPRS713598的引物组:
1CAATCACTGTTGCTCAGTGC
2GTAGTGAAGAGGCAGC
3GACTCTAACTCGCATC
4GGAAGGTGTGAGAGAAAC
针对SNPRS1800544的引物组:
1CTGCTCCGTCGGCCCC
2GTTGGCCATGCAGCTCC
3CTCCAGACGTAACTCACAC
4CAAGCGTTGCTGAG
针对SNPRS5400的引物组:
1GCAGTTGGTGGAATGAC
2CCAAAGAATGATGCAA
3TGGATGACCGAAAAG
4ATGCGCATAGGGTCATG
针对SNPRS1726866的引物组:
1GTGATATCATCCTGTGC
2CACAGAGATGAAGGCAA
3CTCTTCTGCTATCTGTG
4AAGAGGCATTTCATGT
针对SNPRS16983422的引物组:
1GTGTAAGATGATGTAAA
2GTCTAAATTATGTTC
3GTTATTTGGATAGACATAG
4TTTCTCAGCATGTGC
针对SNPRS11674786的引物组:
1CATAAAACCTAGCTCA
2GAACTCAAGACAGAAG
3CTGTGGAACATGAAG
4TTTGATGCCAAAATGC
(2)PCR扩增试剂;
(3)琼脂糖凝胶电泳分析试剂。
2.根据权利要求1所述的日常饮食反应基因检测试剂盒,其特征在于:所述引物用量均为0.5-1.0μl。
3.根据权利要求1所述的日常饮食反应基因检测试剂盒,其特征在于:所述PCR扩增试剂包括:10×PCR缓冲液,dNTPs,热启动Taq酶,基因组模板。
4.根据权利要求3所述的日常饮食反应基因检测试剂盒,其特征在于:所述PCR缓冲液包含:100mMTris-HClpH8.3,500mMKCl,15mMMgCl2。
5.根据权利要求3所述的日常饮食反应基因检测试剂盒,其特征在于:所述PCR扩增试剂用量为:10×PCR缓冲液2.5μl,dNTPs2μl,热启动Taq酶0.1-0.2μl,基因组模板50-100ng。
6.根据权利要求1所述的日常饮食反应基因检测试剂盒,其特征在于:所述琼脂糖凝胶电泳分析试剂包括:琼脂糖、TAE缓冲液、DNA分子量标准、DNA无毒染料和DNA上样缓冲液。
7.根据权利要求6所述的日常饮食反应基因检测试剂盒,其特征在于:所述DNA无毒染料优选BiotiumGelred无毒染料。
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- 2014-11-17 CN CN201410651957.2A patent/CN105586395A/zh active Pending
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