CN105557513A - 一种姜黄组织培养快速繁殖方法 - Google Patents

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Abstract

一种姜黄组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：取姜黄地下块茎作为外植体，清洗、消毒、再清洗，并吸去块茎表面水，将外植体置于MS发芽培养基中诱导发芽，得到无菌试管苗；将所述试管苗置于MS丛芽培养基中繁殖培养，获得丛生芽；将所述丛生芽置于MS壮苗培养基中培养，获得健壮植株；将所述健壮植株移到1/2MS生根培养基中生根培养，得到完整带根苗；将完整带根苗炼苗6-10d后，先移植于沙床生长27-33d，再移栽到大田。采用本发明所述的培养方法得到丛生芽的增殖系数为10～15倍，获得组培苗生根率100％，移栽苗床成活率95％以上，有效解决了姜黄工厂化育苗的问题。

Description

一种姜黄组织培养快速繁殖方法
技术领域
本发明涉及一种植物繁殖方法，特别是一种姜黄组织培养快速繁殖方法。
背景技术
药材姜黄又名宝鼎香、黄姜，为姜科植物，姜黄(CurcumalongaL.)的干燥根茎，具有破血、行气、通经、止痛的功效，用于治疗风湿、肩臂酸痛、胸胁疼痛、痛经以及损伤瘀痛等。
现代研究表明，姜黄根茎以姜黄素类为主，含有倍半萜类化合物、酸性多糖、挥发油类、菜油甾醇厚等多种复杂成分，具有保护免疫***(抗炎、创伤愈合等)、消化***(抗溃疡、解痉)、心血管***(降压、降血脂、抗血凝)和保肝利胆作用，以及兴奋子宫、抗生育、抗氧化、抗突变、抗肿瘤、抗艾滋病、抗老年痴呆、抗病原微生物及原虫等广泛药理活性，且无毒副作用。
我国己经开发出多种以姜黄为主要原料的中成药，如：马应龙麝香痔疮膏、舒肝片、珊瑚癣净等。美国国立肿瘤研究所将姜黄素列为第三代癌化学预防药。除了用于临床中药配方、作为多种传统中成药和抗菌消炎、抗肿瘤类新药开发的重要原料外，姜黄色素还被广泛用作食品添加剂、饮料原料、染料添加剂，以及香水等日化用品，出口东南亚和欧美等国家，表现广阔的开发潜力和市场前景。因此，随着规模开发利用的需求，姜黄的种植面积不断扩大。
植物姜黄主要分布于四川、福建、江西、在广西、湖北、陕西、台湾、云南等地也有栽培。但是，姜黄开花很少，大多数种子不充实，栽培上主要利用根茎繁殖，称为“种姜”，即“老母姜”，但不能使用老母姜作种，要待子姜繁殖出的长成后的母姜，即“二母姜”才行，因此，姜黄和繁殖速度慢、效率低下。迄今尚无姜黄组织培养研究的报道。
发明内容
本发明通过以下技术方案达到上述目的，一种姜黄组织培养快速繁殖方法，包括如下步骤：
(1)外植体的选择与消毒：取姜黄地下块茎作外为植体，先用2v/v％的洗洁***溶液浸泡20min，线状自来水冲洗15-20min，再用添加了2-3滴吐温-20的0.1m/v％的升汞消毒10-15min，无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸吸去除外植体表面水份，其中，无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水；
(2)块茎发芽培养和获得无菌试管苗：将步骤(1)中获得的外植体接种到MS发芽培养基中培养得到无菌试管苗，其中MS发芽培养基中添加IAA0.1-0.5mg/L、6-BA0.5-2.0mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂5mg/L，pH值5.8；
(3)试管苗快速繁殖和获得丛生芽：将步骤(2)中得到的试管苗接种至MS丛芽培养基中培养25-30d，获得丛生芽，其中，MS丛芽培养基中添加ZT0.1-1.0mg/L、IBA0.1-1.0mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂5mg/L，pH值5.8；
(4)丛生芽壮苗培养：将步骤(3)中得到的丛生芽转接至MS壮苗培养基中培养25-35d，得到健壮植株，其中MS壮苗培养基中添加6-BA0.5-1.5mg/L、NAA0.1-0.5mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂5mg/L，pH值5.8；
(5)生根培养：将步骤(4)中得到的健壮植株转接至1/2MS生根培养基中培养25-35d，得到带根完整植株，其中1/2MS培养基中添加NAA0.1-1.0mg/L、IBA0.1-0.5mg/L、蔗糖15mg/L、琼脂5mg/L，pH值5.8；
(6)炼苗与移栽：室温下打开组培瓶盖，加入少量自来水，炼苗7天；待培养基表面形成角质后，取出幼苗，洗净根部培养基，移栽到沙床中；在沙床中生长27-33d，移栽到大田。
本发明突出的优点在于：
(1)通过姜黄组织培养，在短时间内培育出大量适合移栽的姜黄种苗，显著提高姜黄种苗的增殖系数和种苗质量，实现规模化生产，满足市场需求。
在MS发芽诱导培养基中添加6-BA0.5-2.0mg/L，可显著促使芽萌动，添加IAA0.1-0.5mg/L，可促使芽伸展，从而产生大量丛生芽；在MS壮苗培养基添加NAA0.1-0.5mg/L可促进丛生芽长高和展叶。
(2)采用本发明培养所得到的组培苗增殖系数达到10-15倍，获得组培苗生根率在98％以上，移栽苗床成活率在95％以上，有效解决了姜黄工厂化育苗的问题。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的技术方案进一步说明,
实施例1
本发明所述的姜黄组织培养快速繁殖方法的一个实例，包括如下步骤：
(1)外植体的选择与消毒：取姜黄地下块茎作外植体，依次用2v/v％洗洁***溶液浸泡20分钟，用毛刷仔细刷掉块茎上的泥土，用解剖刀切取带芽的块茎，用线状自来水冲洗15-20分钟，添加了2-3滴吐温-20的0.1m/v％升汞消毒10-15分钟，无菌水冲洗3-5次，在超净工作台上用无菌解剖刀切取芽点，剥去芽点外层，最后用消毒滤纸去除表面水份，得到外植体。其中，无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水。
(2)芽点萌发，获得无菌试管苗：将步骤(1)中获得的外植体接种到MS培养基中，在温度为22-26℃，光照强度1500lux，光照时间8-10h/d的条件下培养30d，获得无菌试管苗。其中，MS培养基中添加NAA0.1-0.5mg/L、6-BA0.5-2.0mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂5mg/L，培养基pH值5.8。
(3)试管苗丛生芽快速地繁殖培养：将步骤(2)中得到的试管苗置于MS繁殖培养基中，在温度为22-26℃，光照强度1500lux，光照时间8-10h/d的条件下培养30d，获得无菌试管苗丛生芽。其中，MS繁殖培养基中添加ZT0.5-2.0mg/LIBA0.2-1.0mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂5mg/L，培养基pH为5.8。
(4)丛生芽壮苗培养：将步骤(3)中得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中，在温度为22-26℃，光照强度1500lux，光照时间8-10h/d的条件下培养30d，得到健壮植株。其中，MS壮苗培养基中添加6-BA0.5-1.5mg/L、NAA0.1-0.5mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂5mg/L，培养基pH为5.8。
(5)健壮植株生根培养：将步骤(4)中得到的健壮植株置于1/2MS生根培养基中，在温度为22-26℃，光照强度1500lux，光照时间8-10h/d的条件下培养30d，得到带根完整植株。其中，1/2MS生根培养基中添加NAA0.1-1.0mg/L、IBA0.1-0.5mg/L、蔗糖15mg/L、琼脂5mg/L，培养基pH为5.8。
(6)炼苗与移栽：在室温下打开瓶盖，瓶中加入少量自来水，炼苗7天，待表面角质形成后，取出幼苗，洗净根部培养基，立即移栽到沙床中，在沙床中生长一个月后移栽到大田。
实施例2
本发明所述的姜黄组织培养快速繁殖方法的另一个实例，包括如下步骤：
(1)外植体的选择与消毒：取姜黄地下块茎作外植体，依次用2v/v％洗洁***溶液浸泡20min，用毛刷仔细刷掉块茎上的泥土，线状自来水冲洗15-20min，用添加了2-3滴吐温-20的0.1m/v％升汞消毒10-15min，无菌水冲洗3-5次，在超净工作台上用无菌解剖刀切取芽点，剥去掉芽点外层，最后用消毒滤纸去除表面水份，得到外植体。其中，无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水。
(2)块茎萌发获得无菌试管苗：将步骤(1)中获得的外植体接种到MS培养基中，在温度为22-26度，光照强度1500lux，光照时间8-10h/d的条件下培养25d，获得无菌试管苗。其中，MS培养基中添加NAA0.1-0.5mg/L、6-BA0.5-2.0mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂5mg/L，pH值5.8。
(3)试管苗丛生芽快速地繁殖培养：将步骤(2)中得到的试管苗置于MS繁殖培养基中，在温度为22-26℃，光照强度1500lux，光照时间8-10h/d的条件下培养30d，获得无菌试管苗丛生芽。其中，MS繁殖培养基中添加ZT0.1-1.0mg/L、IBA0.1-1.0mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂5mg/L，pH值5.8。
(4)丛生芽壮苗培养：将步骤(3)中得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中，在温度22-26℃，光照强度1500lux，光照时间8-10h/d的条件下培养30d，得到健壮植株。其中，MS壮苗培养基中添加6-BA0.5-1.5mg/L、NAA0.1-0.5mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂5mg/L，pH值5.8。
(5)健壮植株生根培养，将步骤(4)中得到的健壮植株置于1/2MS生根培养基中，在温度为22-26度，光照强度1500lux，光照时间8-10h/d的条件下培养30d，得到带根完整植株。其中，1/2MS生根培养基中添加NAA0.1-1.0mg/L、IBA0.1-0.5mg/L、蔗糖15mg/L、琼脂5mg/L，pH值5.8。
(6)炼苗与移栽：向组培瓶中加入少量自来水，炼苗7天，待表面角质形成后，取出幼苗，洗净根部培养基，立即移栽到沙床中，生长1个月后移栽到大田。
实施例3
本发明所述的姜黄组织培养快速繁殖方法的再一个实例，包括如下步骤：
(1)外植体的选择与消毒：取姜黄地下块茎作外植体，依次用2v/v％洗洁***溶液浸泡20min，用毛刷仔细刷掉块茎上的泥土，线状自来水冲洗15-20min，添加了2-3滴吐温-20的0.1m/v％升汞消毒10-15min，无菌水冲洗3-5次，在超净工作台上用无菌解剖刀切取芽点，剥去芽点外层，最后用消毒滤纸去除表面水份，得到外植体。其中，无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水。
(2)块茎萌发获得无菌试管苗：将步骤(1)中获得的外植体接种到MS培养基中，在温度为22-26℃，光照强度1500lux，光照时间8-10h/d的条件下培养25d，获得无菌试管苗。其中，MS培养基中添加NAA0.1-0.5mg/L、6-BA0.5-2.0mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂5mg/L，pH值5.8。
(3)试管苗丛生芽快速繁殖培养：将步骤(2)中得到的试管苗置于MS繁殖培养基中，在温度为22-26度，光照强度1500lux，光照时间8-10h/d的条件下培养30d，获得无菌试管苗丛生芽。其中，MS繁殖培养基中添加ZT0.1-1.0mg/LNAA0.1-1.0mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂5mg/L，pH值5.8。
(4)丛生芽壮苗培养：将步骤(3)中得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中，在温度为22-26℃，光照强度1500lux，光照时间8-10h/d的条件下培养30d，得到健壮植株。其中，MS壮苗培养基中添加6-BA0.5-1.5mg/L、NAA0.1-0.5mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂5mg/L，pH值5.8。
(5)健壮植株生根培养：将步骤(4)中得到的健壮植株置于1/2MS生根培养基中，在温度为22-26℃，光照强度1500lux，光照时间8-10h/d的条件下培养30d，得到带根完整植株。其中，1/2MS生根培养基中添加0.1-1.0mg/L、NAA0.1-0.5mg/L、IBA15mg/L、蔗糖15mg/L、琼脂5mg/L，pH值5.8。
(6)炼苗与移栽：向组培瓶中加入少量自来水，炼苗7天，待表面角质形成后，取出幼苗，洗净根部培养基，立即移栽到沙床中，生长1个月后移栽到大田。

Claims (1)

1.一种姜黄组织培养快速繁殖方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
(1)外植体的选择与消毒：取姜黄地下块茎作外为植体，先用2v/v％的洗洁***溶液浸泡20min，线状自来水冲洗15-20min，再用添加了2-3滴吐温-20的0.1m/v％的升汞消毒10-15min，无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸吸去除外植体表面水分，其中，无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水；
(2)块茎发芽培养和获得无菌试管苗：将步骤(1)中获得的外植体接种到MS发芽培养基中培养得到无菌试管苗，其中MS发芽培养基中添加IAA0.1-0.5mg/L、6-BA0.5-2.0mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂5mg/L，pH值5.8；
(3)试管苗快速繁殖和获得丛生芽：将步骤(2)中得到的试管苗接种至MS丛芽培养基中培养25-30d，获得丛生芽，其中，MS丛芽培养基中添加ZT0.1-1.0mg/L、IBA0.1-1.0mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂5mg/L，pH值5.8；
(4)丛生芽壮苗培养：将步骤(3)中得到的丛生芽转接至MS壮苗培养基中培养25-35d，得到健壮植株，其中MS壮苗培养基中添加6-BA0.5-1.5mg/L、NAA0.1-0.5mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂5mg/L，pH值5.8；
(5)生根培养：将步骤(4)中得到的健壮植株转接至1/2MS生根培养基中培养25-35d，得到带根完整植株，其中1/2MS培养基中添加NAA0.1-1.0mg/L、IBA0.1-0.5mg/L、蔗糖15mg/L、琼脂5mg/L，pH值5.8；
(6)炼苗与移栽：室温下打开组培瓶盖，加入少量自来水，炼苗7天；待培养基表面形成角质后，取出幼苗，洗净根部培养基，移栽到沙床中；在沙床中生长27-33d，移栽到大田。
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