CN105557513A - 一种姜黄组织培养快速繁殖方法 - Google Patents
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Abstract
一种姜黄组织培养快速繁殖方法,包括以下步骤:取姜黄地下块茎作为外植体,清洗、消毒、再清洗,并吸去块茎表面水,将外植体置于MS发芽培养基中诱导发芽,得到无菌试管苗;将所述试管苗置于MS丛芽培养基中繁殖培养,获得丛生芽;将所述丛生芽置于MS壮苗培养基中培养,获得健壮植株;将所述健壮植株移到1/2MS生根培养基中生根培养,得到完整带根苗;将完整带根苗炼苗6-10d后,先移植于沙床生长27-33d,再移栽到大田。采用本发明所述的培养方法得到丛生芽的增殖系数为10~15倍,获得组培苗生根率100%,移栽苗床成活率95%以上,有效解决了姜黄工厂化育苗的问题。
Description
技术领域
本发明涉及一种植物繁殖方法,特别是一种姜黄组织培养快速繁殖方法。
背景技术
药材姜黄又名宝鼎香、黄姜,为姜科植物,姜黄(CurcumalongaL.)的干燥根茎,具有破血、行气、通经、止痛的功效,用于治疗风湿、肩臂酸痛、胸胁疼痛、痛经以及损伤瘀痛等。
现代研究表明,姜黄根茎以姜黄素类为主,含有倍半萜类化合物、酸性多糖、挥发油类、菜油甾醇厚等多种复杂成分,具有保护免疫***(抗炎、创伤愈合等)、消化***(抗溃疡、解痉)、心血管***(降压、降血脂、抗血凝)和保肝利胆作用,以及兴奋子宫、抗生育、抗氧化、抗突变、抗肿瘤、抗艾滋病、抗老年痴呆、抗病原微生物及原虫等广泛药理活性,且无毒副作用。
我国己经开发出多种以姜黄为主要原料的中成药,如:马应龙麝香痔疮膏、舒肝片、珊瑚癣净等。美国国立肿瘤研究所将姜黄素列为第三代癌化学预防药。除了用于临床中药配方、作为多种传统中成药和抗菌消炎、抗肿瘤类新药开发的重要原料外,姜黄色素还被广泛用作食品添加剂、饮料原料、染料添加剂,以及香水等日化用品,出口东南亚和欧美等国家,表现广阔的开发潜力和市场前景。因此,随着规模开发利用的需求,姜黄的种植面积不断扩大。
植物姜黄主要分布于四川、福建、江西、在广西、湖北、陕西、台湾、云南等地也有栽培。但是,姜黄开花很少,大多数种子不充实,栽培上主要利用根茎繁殖,称为“种姜”,即“老母姜”,但不能使用老母姜作种,要待子姜繁殖出的长成后的母姜,即“二母姜”才行,因此,姜黄和繁殖速度慢、效率低下。迄今尚无姜黄组织培养研究的报道。
发明内容
本发明通过以下技术方案达到上述目的,一种姜黄组织培养快速繁殖方法,包括如下步骤:
(1)外植体的选择与消毒:取姜黄地下块茎作外为植体,先用2v/v%的洗洁***溶液浸泡20min,线状自来水冲洗15-20min,再用添加了2-3滴吐温-20的0.1m/v%的升汞消毒10-15min,无菌水冲洗3-5次,最后用消毒滤纸吸去除外植体表面水份,其中,无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水;
(2)块茎发芽培养和获得无菌试管苗:将步骤(1)中获得的外植体接种到MS发芽培养基中培养得到无菌试管苗,其中MS发芽培养基中添加IAA0.1-0.5mg/L、6-BA0.5-2.0mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂5mg/L,pH值5.8;
(3)试管苗快速繁殖和获得丛生芽:将步骤(2)中得到的试管苗接种至MS丛芽培养基中培养25-30d,获得丛生芽,其中,MS丛芽培养基中添加ZT0.1-1.0mg/L、IBA0.1-1.0mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂5mg/L,pH值5.8;
(4)丛生芽壮苗培养:将步骤(3)中得到的丛生芽转接至MS壮苗培养基中培养25-35d,得到健壮植株,其中MS壮苗培养基中添加6-BA0.5-1.5mg/L、NAA0.1-0.5mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂5mg/L,pH值5.8;
(5)生根培养:将步骤(4)中得到的健壮植株转接至1/2MS生根培养基中培养25-35d,得到带根完整植株,其中1/2MS培养基中添加NAA0.1-1.0mg/L、IBA0.1-0.5mg/L、蔗糖15mg/L、琼脂5mg/L,pH值5.8;
(6)炼苗与移栽:室温下打开组培瓶盖,加入少量自来水,炼苗7天;待培养基表面形成角质后,取出幼苗,洗净根部培养基,移栽到沙床中;在沙床中生长27-33d,移栽到大田。
本发明突出的优点在于:
(1)通过姜黄组织培养,在短时间内培育出大量适合移栽的姜黄种苗,显著提高姜黄种苗的增殖系数和种苗质量,实现规模化生产,满足市场需求。
在MS发芽诱导培养基中添加6-BA0.5-2.0mg/L,可显著促使芽萌动,添加IAA0.1-0.5mg/L,可促使芽伸展,从而产生大量丛生芽;在MS壮苗培养基添加NAA0.1-0.5mg/L可促进丛生芽长高和展叶。
(2)采用本发明培养所得到的组培苗增殖系数达到10-15倍,获得组培苗生根率在98%以上,移栽苗床成活率在95%以上,有效解决了姜黄工厂化育苗的问题。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的技术方案进一步说明,
实施例1
本发明所述的姜黄组织培养快速繁殖方法的一个实例,包括如下步骤:
(1)外植体的选择与消毒:取姜黄地下块茎作外植体,依次用2v/v%洗洁***溶液浸泡20分钟,用毛刷仔细刷掉块茎上的泥土,用解剖刀切取带芽的块茎,用线状自来水冲洗15-20分钟,添加了2-3滴吐温-20的0.1m/v%升汞消毒10-15分钟,无菌水冲洗3-5次,在超净工作台上用无菌解剖刀切取芽点,剥去芽点外层,最后用消毒滤纸去除表面水份,得到外植体。其中,无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水。
(2)芽点萌发,获得无菌试管苗:将步骤(1)中获得的外植体接种到MS培养基中,在温度为22-26℃,光照强度1500lux,光照时间8-10h/d的条件下培养30d,获得无菌试管苗。其中,MS培养基中添加NAA0.1-0.5mg/L、6-BA0.5-2.0mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂5mg/L,培养基pH值5.8。
(3)试管苗丛生芽快速地繁殖培养:将步骤(2)中得到的试管苗置于MS繁殖培养基中,在温度为22-26℃,光照强度1500lux,光照时间8-10h/d的条件下培养30d,获得无菌试管苗丛生芽。其中,MS繁殖培养基中添加ZT0.5-2.0mg/LIBA0.2-1.0mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂5mg/L,培养基pH为5.8。
(4)丛生芽壮苗培养:将步骤(3)中得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中,在温度为22-26℃,光照强度1500lux,光照时间8-10h/d的条件下培养30d,得到健壮植株。其中,MS壮苗培养基中添加6-BA0.5-1.5mg/L、NAA0.1-0.5mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂5mg/L,培养基pH为5.8。
(5)健壮植株生根培养:将步骤(4)中得到的健壮植株置于1/2MS生根培养基中,在温度为22-26℃,光照强度1500lux,光照时间8-10h/d的条件下培养30d,得到带根完整植株。其中,1/2MS生根培养基中添加NAA0.1-1.0mg/L、IBA0.1-0.5mg/L、蔗糖15mg/L、琼脂5mg/L,培养基pH为5.8。
(6)炼苗与移栽:在室温下打开瓶盖,瓶中加入少量自来水,炼苗7天,待表面角质形成后,取出幼苗,洗净根部培养基,立即移栽到沙床中,在沙床中生长一个月后移栽到大田。
实施例2
本发明所述的姜黄组织培养快速繁殖方法的另一个实例,包括如下步骤:
(1)外植体的选择与消毒:取姜黄地下块茎作外植体,依次用2v/v%洗洁***溶液浸泡20min,用毛刷仔细刷掉块茎上的泥土,线状自来水冲洗15-20min,用添加了2-3滴吐温-20的0.1m/v%升汞消毒10-15min,无菌水冲洗3-5次,在超净工作台上用无菌解剖刀切取芽点,剥去掉芽点外层,最后用消毒滤纸去除表面水份,得到外植体。其中,无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水。
(2)块茎萌发获得无菌试管苗:将步骤(1)中获得的外植体接种到MS培养基中,在温度为22-26度,光照强度1500lux,光照时间8-10h/d的条件下培养25d,获得无菌试管苗。其中,MS培养基中添加NAA0.1-0.5mg/L、6-BA0.5-2.0mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂5mg/L,pH值5.8。
(3)试管苗丛生芽快速地繁殖培养:将步骤(2)中得到的试管苗置于MS繁殖培养基中,在温度为22-26℃,光照强度1500lux,光照时间8-10h/d的条件下培养30d,获得无菌试管苗丛生芽。其中,MS繁殖培养基中添加ZT0.1-1.0mg/L、IBA0.1-1.0mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂5mg/L,pH值5.8。
(4)丛生芽壮苗培养:将步骤(3)中得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中,在温度22-26℃,光照强度1500lux,光照时间8-10h/d的条件下培养30d,得到健壮植株。其中,MS壮苗培养基中添加6-BA0.5-1.5mg/L、NAA0.1-0.5mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂5mg/L,pH值5.8。
(5)健壮植株生根培养,将步骤(4)中得到的健壮植株置于1/2MS生根培养基中,在温度为22-26度,光照强度1500lux,光照时间8-10h/d的条件下培养30d,得到带根完整植株。其中,1/2MS生根培养基中添加NAA0.1-1.0mg/L、IBA0.1-0.5mg/L、蔗糖15mg/L、琼脂5mg/L,pH值5.8。
(6)炼苗与移栽:向组培瓶中加入少量自来水,炼苗7天,待表面角质形成后,取出幼苗,洗净根部培养基,立即移栽到沙床中,生长1个月后移栽到大田。
实施例3
本发明所述的姜黄组织培养快速繁殖方法的再一个实例,包括如下步骤:
(1)外植体的选择与消毒:取姜黄地下块茎作外植体,依次用2v/v%洗洁***溶液浸泡20min,用毛刷仔细刷掉块茎上的泥土,线状自来水冲洗15-20min,添加了2-3滴吐温-20的0.1m/v%升汞消毒10-15min,无菌水冲洗3-5次,在超净工作台上用无菌解剖刀切取芽点,剥去芽点外层,最后用消毒滤纸去除表面水份,得到外植体。其中,无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水。
(2)块茎萌发获得无菌试管苗:将步骤(1)中获得的外植体接种到MS培养基中,在温度为22-26℃,光照强度1500lux,光照时间8-10h/d的条件下培养25d,获得无菌试管苗。其中,MS培养基中添加NAA0.1-0.5mg/L、6-BA0.5-2.0mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂5mg/L,pH值5.8。
(3)试管苗丛生芽快速繁殖培养:将步骤(2)中得到的试管苗置于MS繁殖培养基中,在温度为22-26度,光照强度1500lux,光照时间8-10h/d的条件下培养30d,获得无菌试管苗丛生芽。其中,MS繁殖培养基中添加ZT0.1-1.0mg/LNAA0.1-1.0mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂5mg/L,pH值5.8。
(4)丛生芽壮苗培养:将步骤(3)中得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中,在温度为22-26℃,光照强度1500lux,光照时间8-10h/d的条件下培养30d,得到健壮植株。其中,MS壮苗培养基中添加6-BA0.5-1.5mg/L、NAA0.1-0.5mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂5mg/L,pH值5.8。
(5)健壮植株生根培养:将步骤(4)中得到的健壮植株置于1/2MS生根培养基中,在温度为22-26℃,光照强度1500lux,光照时间8-10h/d的条件下培养30d,得到带根完整植株。其中,1/2MS生根培养基中添加0.1-1.0mg/L、NAA0.1-0.5mg/L、IBA15mg/L、蔗糖15mg/L、琼脂5mg/L,pH值5.8。
(6)炼苗与移栽:向组培瓶中加入少量自来水,炼苗7天,待表面角质形成后,取出幼苗,洗净根部培养基,立即移栽到沙床中,生长1个月后移栽到大田。
Claims (1)
1.一种姜黄组织培养快速繁殖方法,其特征在于,该方法包括以下步骤:
(1)外植体的选择与消毒:取姜黄地下块茎作外为植体,先用2v/v%的洗洁***溶液浸泡20min,线状自来水冲洗15-20min,再用添加了2-3滴吐温-20的0.1m/v%的升汞消毒10-15min,无菌水冲洗3-5次,最后用消毒滤纸吸去除外植体表面水分,其中,无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水;
(2)块茎发芽培养和获得无菌试管苗:将步骤(1)中获得的外植体接种到MS发芽培养基中培养得到无菌试管苗,其中MS发芽培养基中添加IAA0.1-0.5mg/L、6-BA0.5-2.0mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂5mg/L,pH值5.8;
(3)试管苗快速繁殖和获得丛生芽:将步骤(2)中得到的试管苗接种至MS丛芽培养基中培养25-30d,获得丛生芽,其中,MS丛芽培养基中添加ZT0.1-1.0mg/L、IBA0.1-1.0mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂5mg/L,pH值5.8;
(4)丛生芽壮苗培养:将步骤(3)中得到的丛生芽转接至MS壮苗培养基中培养25-35d,得到健壮植株,其中MS壮苗培养基中添加6-BA0.5-1.5mg/L、NAA0.1-0.5mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂5mg/L,pH值5.8;
(5)生根培养:将步骤(4)中得到的健壮植株转接至1/2MS生根培养基中培养25-35d,得到带根完整植株,其中1/2MS培养基中添加NAA0.1-1.0mg/L、IBA0.1-0.5mg/L、蔗糖15mg/L、琼脂5mg/L,pH值5.8;
(6)炼苗与移栽:室温下打开组培瓶盖,加入少量自来水,炼苗7天;待培养基表面形成角质后,取出幼苗,洗净根部培养基,移栽到沙床中;在沙床中生长27-33d,移栽到大田。
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