CN105556306A - 用于监测多发性硬化(ms)的方法和预后试剂盒 - Google Patents

用于监测多发性硬化(ms)的方法和预后试剂盒 Download PDF

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Abstract

方法和预后试剂盒，其用于在患有MS之对象中评价MS的严重程度，或者用于在患有MS之对象中监测MS的进展，或者用于监测施用于患有MS之对象的治疗的效果。在所述方法和预后试剂盒两者中，将所述患有MS之对象的组织或体液中一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的水平与所述一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的参考值进行比较。

Description

用于监测多发性硬化(MS)的方法和预后试剂盒
技术领域
本发明涉及用于在患有MS之对象中评价多发性硬化(multiplesclerosis，MS)的严重程度的方法。本发明还涉及用于在患有MS之对象中监测MS进展的方法，并且涉及用于监测施用于患有MS之对象的治疗的效果的方法。
在一些优选实施方案中，本发明涉及用于在患有MS之对象中评价多发性硬化(MS)的严重程度的预后试剂盒。所述预后试剂盒还可在患有MS之对象中监测MS的进展，以及监测施用于患有MS之对象的治疗的效果。
背景技术
多发性硬化(MS)是慢性神经性疾病，其侵袭世界范围内近250万人。MS的临床亚型和严重程度各不相同，并且已经一般分为三类或三种亚型：复发-缓解型MS(relapsing-remittingMS，RRMS)、继发进展型MS(secondaryprogressiveMS，SPMS)和原发进展型MS(primaryprogressiveMS，PPMS)。复发缓解型MS表示该疾病的早期，并且以导致不同程度失能的恶化以及随后的缓解期为特征。约60％至80％患有RRMS之患者逐渐进展为SPMS，其中缓解期变短并且逐渐消失。PPMS，即MS亚型中最为严重的形式，呈现类似于SPMS的临床表现但并非从RRMS进展而来。患有PPMS之患者从该疾病发作开始经历该疾病的持续恶化而无任何缓解期。
评价MS(包括MS的亚型)的严重程度是重要的，因为对用于MS的治疗方法的选择通常取决于疾病的阶段和类型。此外，能够评价MS的严重程度允许主治临床医生监测治疗方案，以确定特定治疗在治疗该疾病中是否有效。
然而，用于确定MS严重程度或监测MS进展的现有技术方法需要使用脑的磁共振成像，并结合诸如神经学测试的测试。磁共振成像设备昂贵，并且可对在一些情况下可能严重失能的患者带来不便。
所需要的是用于在患有MS之对象中评价MS的严重程度并监测其进展的方便且可靠的方法。
发明简述
在第一方面，本发明提供了方法，其用于在患有MS之对象中评价MS的严重程度，或者用于在患有MS之对象中监测MS的进展，或者用于监测施用于患有MS之对象的治疗的效果，所述方法包括将患有MS之对象的组织或体液中(例如，血清或脑脊液(cerebrospinalfluid，CSF)中)一种或更多种犬尿氨酸途径(kynureninepathway)化合物的水平与所述一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的参考值进行比较。
通常，从对象获得组织或体液的样品，并将该样品中一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的水平与参考值进行比较。通常，所述样品为体液样品。通常，所述体液样品为血清样品。
在第二方面，本发明提供了这样的方法，其用于在患有MS之对象中评价MS的严重程度，或者用于在患有MS之对象中监测MS的进展，或者用于监测施用于患有MS之对象的治疗的效果，所述方法包括将从患有MS之对象获得的样品中一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的水平与所述一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的参考值进行比较。
在第三方面，本发明提供了用于在患有MS之对象中评价MS严重程度的方法，其包括将从患有MS之对象获得的样品中一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的水平与所述一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的参考值进行比较。
在第四方面，本发明提供了用于在患有MS之对象中监测MS进展的方法，其包括将从患有MS之对象获得的样品中一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的水平与所述一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的参考值进行比较。
在第五方面，本发明提供了用于监测施用于患有MS之对象的治疗的效果的方法，其包括将从患有MS之对象获得的样品中一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的水平与所述一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的参考值进行比较。
附图简述
图1A为示出了来自对象的血清样品中色氨酸浓度的图，所述对象未患MS(对照)，或者患有RRMA、SPMA或PPMS(如所示)。
图1B为示出了来自对象的血清样品中犬尿氨酸浓度与色氨酸浓度之比率的图，所述对象未患MS(对照)，或者患有RRMA、SPMA或PPMS(如所示)。
图1C为示出了来自对象的血清样品中色氨酸浓度、犬尿氨酸浓度和K/T比的图，所述对象未患MS(对照)，或者患有RRMS、SPMS-活动性(复发)或SPMS-非活动性(缓解)(如所示)。
图1D为示出了来自对象的CSF样品中色氨酸浓度、犬尿氨酸浓度和K/T比的图，所述对象未患MS(对照)，或者患有RRMS、SPMS-活动性(复发)或SPMS-非活动性(缓解)(如所示)。
图2A为示出了来自对象的血清样品中喹啉酸浓度的图，所述对象未患MS(对照)，或者患有RRMA、SPMA或PPMS(如所示)。
图2B为来自对象的血清样品中喹啉酸浓度的条形图，所述对象未患MS(对照)，或者患有RRMS、SPMS-活动性(复发)或SPMS-非活动性(缓解)(如所示)。
图2C为来自对象的CSF样品中喹啉酸浓度的条形图，所述对象未患MS(对照)，或者患有RRMS、SPMS-活动性(复发)或SPMS-非活动性(缓解)(如所示)。
图3示出了分别对(A)髓鞘(卢克斯固蓝染剂(LaxalFastBluestain))，(B)活化的小神经胶质细胞(HLA-DR)，和(C)-(D)神经毒素QUIN及其同种型对照的免疫组织化学染色。
图4示出了显示慢性斑块(A)、急性斑块(B)、对照(C)以及正常组织中基础水平(D)的QUIN表达的免疫组织化学染色。
图5A为示出了来自对象的血清样品中3-羟基犬尿氨酸浓度的图，所述对象未患MS(对照)，或者患有RRMS、SPMS或PPMS(如所示)。
图5B为来自对象的血清样品中3-羟基犬尿氨酸浓度的条形图，所述对象未患MS(对照)，或者患有RRMS、SPMS-活动性(复发)或SPMS-非活动性(缓解)(如所示)。
图6为多种KP代谢物的浓度比的图，其示出了疾病亚型之间的变化。
发明详述
本发明在一方面涉及用于在患有MS之对象中评价MS严重程度的方法。所述方法可以用于评价对象所患有的MS的亚型(例如进展型MS(SPMS或PPMS)相比较于RRMS，或者PPMS相比较于SPMS)以及特定亚型的MS严重程度。如下评价MS的严重程度：将患有MS之对象中一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的水平与该一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的参考值进行比较。
本发明在另一方面涉及用于在患有MS之对象中评价MS严重程度的预后试剂盒。所述预后试剂盒可以用于评价对象所患有的MS的亚型(例如进展型MS(SPMS或PPMS)相比较于RRMS，或者PPMS相比较于SPMS)以及特定亚型的MS严重程度。如下评价MS的严重程度：将患有MS之对象中一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的水平与该一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的参考值进行比较。
本文中使用的表达“犬尿氨酸途径化合物”指为犬尿氨酸途径的底物、产物或代谢物的化合物。犬尿氨酸途径化合物包括色氨酸、犬尿氨酸(kynurenine)、犬尿酸(kynurenicacid)、3-羟基犬尿氨酸、3-羟基-氨茴酸(3-hydroxy-anthranilicacid)、吡啶甲酸(picolinicacid)和喹啉酸。在一种形式中，犬尿氨酸途径化合物可以是犬尿氨酸途径代谢物。该犬尿氨酸途径代谢物可以是神经毒性犬尿氨酸途径代谢物或神经保护性犬尿氨酸途径代谢物。神经毒性犬尿氨酸途径代谢物的一个实例为喹啉酸。神经保护性犬尿氨酸途径代谢物的实例包括犬尿酸和吡啶甲酸。在一个实施方案中，犬尿氨酸途径化合物为喹啉酸。在另一个实施方案中，犬尿氨酸途径化合物为吡啶甲酸。在又一个实施方案中，犬尿氨酸途径化合物为犬尿酸。
本文中使用的术语“对象”指人。人为唯一已知患有MS的物种。
发明人已经发现，在患有MS之对象中脑脊液(CSF)和血清中犬尿氨酸途径化合物的水平与MS的严重程度之间存在相关性。就此而言，发明人已经发现，犬尿氨酸途径化合物例如喹啉酸、3-羟基犬尿氨酸、犬尿酸和吡啶甲酸的水平在MS的进展期间显著变化，并且这些化合物的变化与MS的严重程度相关。
因此，通过确定患有MS之对象的CSF或血清中这些犬尿氨酸途径化合物的水平，可以在任何特定时间评价所述对象中MS的严重程度、监测MS的进展或者监测施用于所述对象的治疗的效果。
在本发明之前，对其中诱导实验性变应性脑脊髓炎(experimentalallergicencephalomyelitis，EAE)之大鼠中喹啉酸产生的研究显示在患有EAE的大鼠的CNS中喹啉酸水平增加(Flanagan等，(1995)JournalofEndocrinology，64：1192-1196)。然而，Flanagan等(1995)未检测到与未患EAE的大鼠相比来自患有EAE之大鼠的血清样品中喹啉酸水平的差异。此外，大鼠中的EAE模型未表现出与人中的MS相同的进展。因此，不能将EAE模型中化合物的水平与人中MS的疾病严重程度和进展相联系。
如本文中所述，发明人已经发现，相比较于未患MS之对象，在患有MS之对象的血清和CSF中犬尿氨酸途径化合物喹啉酸增加；并且喹啉酸水平随该疾病的严重程度增加而升高。因此，患有MS之对象的组织或体液中喹啉酸的水平可以用作标志，以在确定组织或体液中喹啉酸的水平时指示该对象所患MS的严重程度。
发明人已经进一步发现，相比较于未患MS之对象，在患有复发-缓解型MS(RRMS)之对象的血清和CSF中犬尿氨酸途径化合物犬尿酸和吡啶甲酸增加；并且犬尿酸和吡啶甲酸的水平随该疾病的严重程度增加而降低。因此，患有MS之对象的组织或体液中犬尿酸和/或吡啶甲酸的水平可以用作标志，以在确定组织或体液中犬尿酸和/或吡啶甲酸的水平时指示该对象所患MS的严重程度。
发明人已经进一步发现，相比于未患MS之对象，在患有复发-缓解型MS(RRMS)之对象的血清和CSF中犬尿氨酸途径化合物3-羟基犬尿氨酸增加；并且3-羟基犬尿氨酸的水平随该疾病的严重程度增加而升高。因此，患有MS之对象的组织或体液中3-羟基犬尿氨酸的水平可以用作标志，以在确定组织或体液中3-羟基犬尿氨酸的水平时指示该对象所患MS的严重程度。
升高的喹啉酸和3-羟基犬尿氨酸水平以及较低的犬尿酸和吡啶甲酸水平指示对象可能患有MS。然而，由于许多其他神经退行性疾病也表现出喹啉酸和3-羟基犬尿氨酸水平升高，以及犬尿酸和吡啶甲酸水平降低，所以来自对象的显示喹啉酸和3-羟基犬尿氨酸水平升高，以及犬尿氨酸和吡啶甲酸水平降低的样品本身不能决定MS的诊断。
在一个实施方案中，所述一种或更多种犬尿氨酸途径化合物为单一犬尿氨酸途径化合物，其通常选自喹啉酸、吡啶甲酸、犬尿酸和3-羟基犬尿氨酸。更通常地，所述一种或更多种犬尿氨酸途径化合物为喹啉酸。
在另一个实施方案中，所述一种或更多种犬尿氨酸途径化合物为选自以下的犬尿氨酸途径化合物的组合：喹啉酸、吡啶甲酸、犬尿酸、3-羟基犬尿氨酸和色氨酸。
患有MS之对象的组织或体液中一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的水平可以通过从患有MS之对象获得组织或体液样品进行评价或监测。通常，所述样品为体液样品。所述体液样品可以是，例如，CSF样品或血清样品。通常，所述样品为血清样品。就此而言，发明人已经发现，来自患有MS之对象的血清样品中犬尿氨酸途径化合物的水平可以用于评价该对象中MS的严重程度、用于监测MS的进展，或者用于监测施用于患有MS之对象的治疗的效果。
因此，犬尿氨酸途径化合物可以用作MS严重程度的血清标志物。使用血清样品的能力提供了在对象中评价或监测MS的相对方便且迅速的方式。如上所述，在本发明之前，没有可供用于评价MS严重程度或监测MS进展的方便方法。
发明人也已经发现，犬尿氨酸途径化合物的水平在不同种族的对象中有所不同。例如，相比较于高加索和非洲种族，亚洲血统对象的犬尿氨酸途径化合物的总体水平存在明显差异。然而，犬尿氨酸途径化合物水平的变化率在每个独立种族内是一致的，并且允许在患有MS之对象中进行预后分析以及评价严重程度和进展。
用于从对象获得样品(例如CSF样品和血清样品)的方法在本领域中是已知的。
一旦已经从患有MS之对象获得样品，将该样品中一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的水平与参考值进行比较。
术语“水平”指丰度的指示。因此，“一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的水平”指一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的丰度的指示。一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的水平可以是每单位重量或体积的一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的量的量度。一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的水平可以为比率，例如一种犬尿氨酸途径化合物的量相对于另一种犬尿氨酸途径化合物或者组织或体液中某些组分的量的比率。
在一个实施方案中，一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的水平为该一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的浓度。喹啉酸的浓度可以以适合测量组织或体液中(例如，CSF或血清样品中)喹啉酸浓度的任何方式测量。
合适方法的实例包括质谱和气相色谱，例如Smythe等，Concurrentquantificationofquinolinic，picolinic，andnicotinicacidsusingelectron-capturenegative-iongaschromatography-massspectrometry，Anal.Biochem.301(1)(2002年2月1日)，第21至26页中所述的那些；荧光分析，例如JournalofHealthScience(2009)55(2)：242-248中所述的那些。
吡啶甲酸的浓度可以以适合测量组织或体液中(例如，CSF或血清样品中)吡啶甲酸浓度的任何方式测量。合适方法的实例包括质谱和气相色谱，例如Smythe等，Anal.Biochem.301(1)(2002年2月1日)，第21至26页中所述的那些。
犬尿酸的浓度可以以适合测量组织或体液中(例如，CSF或血清样品中)犬尿酸浓度的任何方式测量。合适方法的实例包括HPLC，例如TheJournalofNeuroscience，2007年11月21日，27(47)：12884-12892中所述的那些。
色氨酸的浓度可以以适合测量组织或体液中(例如，CSF或血清样品中)色氨酸浓度的任何方式测量。合适方法的实例包括HPLC，例如TheJournalofNeuroscience，2007年11月21日，27(47)：12884-12892中所述的那些。
3-羟基犬尿氨酸的浓度使用源自TheJournalofChromatographyB，1996，675：157-161的方法进行测量。详见第22页。然而，该方法只仅限于血清样品。
将患有MS之对象的组织或体液中一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的水平与一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的参考值进行比较。
在一个实施方案中，一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的参考值为这样的值，其代表来自未患MS或患有预定严重程度MS之对象的组织或体液(通常为同一组织或体液)中一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的水平。
所述参考值可为预订的标准值，或者可为特别获得用于进行比较的参考值。所述参考值可以是来自对象的参考样品中一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的水平，所述对象未患MS或者患有预定严重程度的MS。本文中使用的“患有预定严重程度MS之对象”为其中已知MS严重程度的患有MS之对象。
参考样品可来自未患MS之对象。通过将从患有MS之对象获得的样品中一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的水平与来自从未患MS之对象获得的参考样品的一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的水平进行比较，可以相对于未患疾病之对象评价该疾病的严重程度，或者监测该疾病的进展。
参考样品可来自患有预定严重程度的MS之对象。通过将从患有MS之对象获得的样品中一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的水平与来自从患有预定严重程度MS之对象获得的参考样品的一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的水平进行比较，可以相对于患有已知严重程度MS之对象评价该疾病的严重程度，或者可以监测该疾病的进展。
在另一些实施方案中，所述参考值代表在较早时间患有MS之对象的组织或体液中一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的水平。在这样的实施方案中，所述参考值通常为在较早时间从患有MS之对象获得的参考样品中一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的水平。通过将从患有MS之对象获得的样品中一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的水平与来自在较早时间从同一对象获得之参考样品的一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的水平进行比较，可以监测该疾病是否已经进展为更严重的形式。
MS的严重程度可以分类为复发-缓解型MS(RRMS)或进展型MS(PMS)。进展型MS可以进一步分类为继发进展型MS(SPMS)或原发进展型MS(PPMS)。本领域技术人员应理解，复发缓解型MS相比较于继发进展型而言是较不严重的MS形式，而继发进展型进而相比较于原发进展型MS而言是较不严重的MS形式。
在多种实施方案中：
(a)所述参考值代表未患MS之对象的组织或体液中吡啶甲酸或犬尿酸的水平，并且当患有MS之对象的组织或体液中吡啶甲酸或犬尿酸的水平相对于该参考值升高时，MS归类为复发-缓解型MS；
(b)第一参考值代表未患MS之对象的组织或体液中喹啉酸的水平，第二参考值代表来自患有继发进展型MS之患者的组织或体液中喹啉酸的水平，并且当患有MS之对象的组织或体液中喹啉酸的水平相对于第一参考值升高且相对于第二参考值降低时，该MS归类为复发-缓解型MS；
(c)所述参考值代表患有复发-缓解型MS之对象的组织或体液中吡啶甲酸或犬尿酸的水平，并且当患有MS之对象的组织或体液中吡啶甲酸或犬尿酸的水平相对于该参考值降低时，该MS归类为进展型；
(d)所述参考值代表患有复发-缓解型MS之对象的组织或体液中喹啉酸的水平，并且当患有MS之对象的组织或体液中喹啉酸的水平相对于该参考值升高时，MS归类为进展型；
(e)所述参考值代表患有继发进展型MS之对象或者未患MS之对象的组织或体液中吡啶甲酸或犬尿酸的水平，并且当患有MS之对象的组织或体液中吡啶甲酸或犬尿酸的水平相对于该参考值降低时，该MS归类为原发进展型MS(PPMS)；
(f)所述参考值代表患有继发进展型MS之对象的组织或体液中喹啉酸的水平，并且当患有MS之对象的组织或体液中喹啉酸的水平相对于该参考值升高时，该MS归类为原发进展型MS(PPMS)；
(g)第一参考值代表未患MS之对象的组织或体液中色氨酸的水平，第二参考值代表未患MS之对象的组织或体液中吡啶甲酸和/或犬尿酸的水平，并且当患有MS之对象的组织或体液中色氨酸的水平相对于第一参考值降低，并且患有MS之对象的组织或体液中吡啶甲酸和/或犬尿酸的水平相对于第二参考值降低时，该MS归类为继发进展型MS；
(h)所述参考值代表未患MS之对象的组织或体液中3-羟基犬尿氨酸的水平，并且当患有MS之对象的组织或体液中3-羟基犬尿氨酸的水平相对于该参考值升高时，该MS归类为复发-缓解型MS、继发进展型MS或原发进展型MS；
(i)第一参考值代表未患MS之对象的组织或体液中3-羟基犬尿氨酸的水平，第二参考值代表来自患有缓解期继发进展型MS(SPMS-NA)或复发-缓解型MS(RRMS)之患者的组织或体液中3-羟基犬尿氨酸的水平，第三参考值代表患有复发期继发进展型MS(SPMS-A)之对象的组织或体液中3-羟基犬尿氨酸的水平，并且当患有MS之对象的组织或体液中3-羟基犬尿氨酸的水平相对于第一参考值升高且相对于第二参考值降低时，将该MS归类为缓解期继发进展型MS(SPMS-NA)或复发-缓解型MS(RRMS)。
通常，在上述实施方案(a)至(i)中，患有MS之对象的组织或体液中一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的水平为患有MS之对象的组织或体液中一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的浓度。
通常，在上述实施方案(a)至(i)中，所述参考值代表未患MS或者患有SPMS或RRMS之对象的组织或体液中一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的浓度。
更通常地，在上述实施方案(a)至(i)中，患有MS之对象的组织或体液中一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的水平为患有MS之对象的组织或体液中一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的浓度，并且所述参考值为未患MS或者患有SPMS或RRMS之对象的组织或体液中一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的浓度。
可以设想，上述方法可以用于监测MS的进展。就此而言，可以以多种时间间隔确定患有MS之对象的组织或体液中犬尿氨酸途径化合物的水平，并且可使用上述方法在每个时间间隔评价该疾病的严重程度以确定该疾病的严重程度是否增加。
在一种形式中，可如下监测MS的进展：将患有MS之对象的组织或体液中一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的水平与在较早时间该对象之组织或体液中该一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的水平进行比较。这样，可以根据该对象之组织或体液中一种或更多种犬尿氨酸途径代谢物的水平是否相对于先前确定的该对象之组织或体液中的水平升高或降低来监测MS的进展。
在一种形式中，所述方法包括如上所述在患有MS之对象中评价MS的严重程度，或者在患有MS之对象中监测MS的进展，或者监测施用于患有MS之对象的治疗的效果，以及根据所述评价或监测的结果选择用于治疗MS的治疗。
还设想了监测对患有MS之对象的治疗效果的方法。就此而言，本文中所述的方法可以用于监测在治疗之后MS的严重程度，以确定在用所述治疗进行治疗之后该疾病的严重程度是否降低或者该疾病严重程度的增加速率是否降低。
实施例
材料和方法
患者
用于分析研究的血清样品和CSF样品
该研究中所使用的样品获自美国的两个来源：(1)针对MS的加速治疗计划(AcceleratedcureprojectforMS，ACPMS)以及(2)人脑与脊髓液资源中心(HBSFRC(Humanbrainandspinalfluidresourcecenter)，UCLA)。由ACPMS提供的MS血清样品来自患有不同亚型的733名MS对象的资源库以及来自健康对象的50份对照血清，所述亚型包括复发-缓解型MS(RRMS)、继发进展型MS(SPMS)和原发进展型MS(PPMS)。已经根据由ACPMS库提供的扩展残疾状态量表(expandeddisabilitystatusscale，EDSS)和MRI扫描对MS的诊断进行了评价和评估。本研究中排除了针对已知影响犬尿氨酸途径的任何药物筛选的样品，或者从收集样品的当天之前的六个月中已经接受类固醇治疗的样品。根据选择标准本研究中使用了88份MS样品(详见表1)。
表1-ACPMS对象群体
表2-HBSFRC对象群体
来自具有匹配CSF的MS患者的血清样品获自HBSFRC。已经考虑在该疾病的MS阶段(MS的早期与进展型MS)和活动状态(活动性与非活动性)的差异之间进行进一步验证。该研究中使用每种MS亚型的10例作进一步说明，这10例由缓解期RRMS、SPMS-非活动性、SPMS-活动性和健康对象组成(详见表2)。
MS死后脑组织的神经病理学
该研究中使用来自患有疑似MS之49岁男性的脑和来自无显著神经病理学之48岁男性的对照脑。将两个脑在20％甲醛中悬浮4周，然后以冠状平面切片。从下列区域取得切片：额叶、颞叶以及枕叶皮质、小脑和脑干。
化学品
除非或另有说明，否则所有的化学品均获自Sigma-Aldrich(CastleHill，NewSouthWales，Australia)。在量化KP代谢物的应用中使用的酸、碱和乙腈为分析级，并且获自供应商(AjaxfineChem)。
KP代谢物的HPLC量化
样品和标准物制备
用于校准曲线的工作标准物用溶解在超纯水(BarnsteadEasypureII，ThermoScientific，NewSouthWales，Australia)中的储备溶液(1mM相应KP代谢物)制备。储备溶液以每周为基础来制备，而工作标准物以每天为基础新鲜制备。如下对血清样品进行脱蛋白质：添加等体积的10％三氯乙酸，混合，然后在4℃以12,000rpm离心5分钟。然后，收集上清液并将其用于分析。在量化之前，将所有标准物和样品通过注射器式过滤器(4mm，0.45μmPTFE，WatersCorporation，NewSouthWales，Australia)过滤。
色氨酸和犬尿氨酸检测
根据先前描述的Smythe等，Anal.Biochem.301(1)(2002年2月1日)，第21至26页的方法，使用附有荧光和多波长检测器的Agilent1200系列HPLC***(AgilentTechnologies，NewSouthWales，Australia)同时量化TRP和KYN。简言之，将标准物和样品以30μl的注射体积施加到AgilentZorbaxEclipseXDB-C18(5μm，250×4.6mmi.d.)柱(Biolab，Victoria，Australia)。流动相由pH4.65的0.1M乙酸铵(ammoniaacetate)组成，在使用之前将其通过过滤***(0.2μm尼龙膜，Milipore，NewSouthWales，Australia)过滤并将其以1ml/分钟的流速等度泵送。使用荧光检测在254nm的激发波长和404nm的发射波长处测量TRP，而KYN使用多波长UV检测在365nm处进行检测。
犬尿酸检测
如Smythe等，Anal.Biochem.301(1)(2002年2月1日)，第21至26页中所概述的并稍作修改，通过配备有荧光检测器的Agilent1200系列HPLC***(AgilentTechnologies，NewSouthWales，Australia)测定KYNA。简言之，将30μl的标准物和样品施加到AgilentZorbaxEclipseXDB-C18(5μm，150×4.6mmi.d.)柱。用流动相以0.8ml/分钟的流速等度洗脱KYNA，所述流动相由含有0.25M乙酸锌和2.25％(v/v)乙腈的50mM乙酸钠组成。流动相为新鲜制备，并且在使用前过滤。使用荧光检测器在344nm的激发波长和388nm的发射波长处检测KYNA。
使用HPLC检测的所有代谢物的测定内和测定间变异系数为5％至7％。
KP代谢物的GCMS量化
吡啶甲酸和犬尿酸检测
使用SmytheGA等，2002先前描述的气相色谱-质谱(GC/MS)同时测量PIC和QUIN。将标准物和样品(50μl)与等体积的内标物(d3-喹啉酸和d4-吡啶甲酸)一起添加至玻璃管(100×10mm，Biolab，Victoria，Australia)。将混合物干燥(SavantSpeedVac)，留下残余物，然后将其与三氟乙酸酐和六氟异丙醇(1∶1；120μl)混合。用Telfon内衬帽(Biolab，Victoria，Australia)密封管，并允许在60℃下衍生45分钟以产生相应酸(即PIC和QUIN)的六氟异丙酯。然后将溶解在甲苯中的衍生产物(终体积为250μl)在5％碳酸氢钠(1ml)和水(1ml)中不溶地洗涤，干燥，通过经硅烷(sailane)处理的装有无水硫酸钠(每份样品约50mg)的玻璃棉(Gracedavisondiscoverysciences，Victoria，Australia)过滤，并且在注(1μl)入GC/MS(AgilentTechnologies)之前转移至自动取样瓶。在电子捕获负离子化模式下操作光谱仪，其中对PIC衍生物、d4-PIC、QUIN衍生物和d3-QUIN的离子选择性分别为273、277、467、470。最后，根据样品内衍生物与其相应内标物的峰面积比由校准曲线确定样品中PIC和QUIN的浓度。在信噪比大于10∶1时，检测界限小于1fmol。
3-羟基犬尿氨酸检测
如Hervé等，J.ChromatographyB.1996，675，第157至161页中所概述的并稍作修改，通过配备有UV检测器的Agilent1200系列HPLC***(AgilentTechnologies，NewSouthWales，Australia)测定3HK。简言之，将50μl的标准物和样品施加到AgilentZorbaxEclipseXDB-C18(3.5μm，150×4.6mmi.d.)柱。用由pH4.65的0.1M乙酸钠组成的流动相以0.5ml/分钟的流速等度洗脱3HK。流动相为新鲜制备，并且在使用前过滤。使用多波长UV检测器在365nm处检测3HK。
使用HPLC在10nM或更大检测界限内的3HK的测定内变异系数和测定间变异系数为5％至7％。
免疫组织化学
脑切片制备
使用下述抗体：HLA-DRmAb(1∶100稀释度，DAKO)、QUINmAb(IgG1，1∶100稀释度，ChemiconMillipore)。获得厚度为5μm的石蜡切片，并使其从38℃水浴(HDScientific)漂浮到SuperfrostUltraPlus(ThermoScientific)载玻片上。将切片在组织干燥箱(Medite)中于45℃干燥过夜。然后，经如下转移使切片水合：两次更换二甲苯然后两次更换无水醇，梯度醇浓度(分别为90％和70％)，然后更换为水。通过在室温下将切片置于3％过氧化氢(H2O2)/甲醇溶液中20分钟封闭内源性过氧化物酶。
HLA-DR染色
将用于HLA-DR抗体染色的切片置于pH6.0的柠檬酸缓冲液中，并且在高压釜(Siltex)中于120℃下诱导抗原性修复20分钟。然后，在室温下将切片在终浓度为3％、含有无菌马血清(Invitrogen)的pH7.6的0.1M三(羟甲基)氨基甲烷(TRIS)缓冲盐水中洗涤5分钟。用PAP笔(DAKOCytomation，Copenhagen，Denmark)圈出切片。然后，向切片施加抗体并在室温下孵育1小时。将抗体洗离切片，然后再在室温下置于pH6.0的TRIS缓冲液中5分钟。然后，向切片施加Envision(DAKO)连接聚合物，并在室温下孵育30分钟。如下使过氧化物酶标记可视化：在室温下将切片在含0.03％H2O2/0.05％3，3-二氨基联苯胺四氯化物(DAB，SigmaD5637)的0.1MpH7.6TRIS缓冲液中孵育2分钟，然后进行水漂洗。最后，将切片在Harris苏木精中对比染色2分钟，然后在1％酸醇中分化3秒并在Scott上蓝溶液中染成蓝色。然后，将切片脱水，在二甲苯中清洗，并且然后封固在Pertex封固介质(HDScientific)中。
QUIN染色
将用于QUIN抗体染色的切片短暂置于含10％无菌马血清的0.1MpH7.5Tris-HCl缓冲液、0.15MNaCl(TNB)，和0.5％封闭剂(PerkinElmer，Zaventem，Belgium)中。然后，将切片在0.1MpH7.5Tris-HCl缓冲液、0.3MNacl、0.05％Tween-20(TNT)中洗涤3次，每次洗3分钟。用PAP笔圈出切片并向每个载玻片添加两滴抗生物素蛋白溶液，持续15分钟，然后在TNT中洗涤两次，每次洗3分钟。向每个切片添加两滴生物素并孵育15分钟。将切片在TNT中洗涤两次，每次洗3分钟，然后在pH6.0柠檬酸缓冲液中于120℃下高压灭菌20分钟。继高压灭菌之后，使切片在修复溶液中冷却，然后在TNT中洗涤3次，每次3分钟。将切片置于含10％马血清的TNB中30分钟。将QUINN抗体以1∶100的稀释度施加到测试切片，而向同种型对照切片施加小鼠IgG1(在TNB中以1∶15稀释)，其蛋白质浓度与所使用的抗体相等。将马血清(在TNB中10％)倒出切片，并向合适的切片施加抗体或小鼠IgG1，保持1小时。然后，将切片在TNT中洗涤3分钟，进行3次。然后，在室温下向所有切片施加(1∶200稀释度)二抗(生物素化的抗小鼠抗体)，保持30。将切片洗涤3次，持续3分钟，施加抗生物素蛋白-生物素复合物(ABCelite，VectorLaboratories)，保持30分钟，并再次洗涤3分钟，进行3次。向切片施加BiotinylTramide(1∶50稀释度，Invitrogen)，保持10分钟，然后用TNT洗去3次，进行3分钟。然后，将切片在室温下于SA-HRP(1∶100稀释度，Invitrogen)中孵育30分钟，随后在DBA中于室温下显色3分钟。将切片在流动的自来水中洗涤20分钟，然后在Harris苏木精中对比染色30秒。将切片在水中洗涤并在酸醇(1％)中浸渍一次，然后在水中漂洗并染蓝(Scott上蓝溶液)持续1分钟，在水中洗涤，脱水至二甲苯，然后永久地封固在Fastmount中。
H&E染色
将切片置于自来水中，并在Harris苏木精中染色5分钟。然后，将切片在水中洗涤，并在1％酸醇中分化3秒。将切片在Scott上蓝溶液中染蓝，在自来水中再次洗涤，在醇中脱水，在二甲苯中清洗，并用Pertex封固。
卢克斯固蓝/甲酚紫染色
将切片置于水中，然后在95％醇中漂洗，并在经预热(60℃)的LFB工作溶液中染色2小时。然后，使切片在室温下冷却1小时。然后，将切片置于4℃、pH10.5的碳酸锂中并搅拌10分钟。在70％醇中使切片分化75秒。在流动的自来水中洗涤10分钟。在蒸馏水中漂洗，并用0.1％甲酚紫对比染色10分钟。将切片在自来水中快速洗涤，然后通过3次更换无水醇缓慢脱水以除去过量的甲酚紫，随后清洗并封固。
统计学分析
在本文通篇，所有数据均以具有标准差的中值表示。使用参数单因素方差分析(ANOVA)，然后通过事后Turkey比较分析对n＞15的组之间的差异显著性进行统计学比较。p值＜0.05被认为具有统计学显著性。对n＜15，使用非参数Kruskall-Wallis方差和Mann-Whitney比较分析。由于比较分析，我们使用p值＜0.01作为显著阈值，而使用p值＜0.05来展现趋势。使用GraphPadPrism5软件包示出图形图表，而使用SPSS版本17.0进行统计学分析。
结果
MS进展中的KP活化
已使用三个参数来评价来自MS患者的血清样品和CSF样品两者中的KP活化，即TRP、KYN和K/T比。发明人的数据表明，相比较于对照，TRP(即驱使KP的第一底物)在所有MS亚型的血清中均显著降低(图1)。发明人在来自血清样品和CSF样品的MS亚型内未发现TRP降解与疾病严重程度的相关性中存在任何差异。然而，统计学分析揭示，相比较于疾病早期，存在从进展型MS表现出TRP降低的趋势(图1A&C-p＜0.05)。该结果在匹配的CSF样品中进一步验证(图1D中的空心三角形)，其显示TRP浓度降低。此外，图1C&D(p＜0.05)中将SPMS的活动性形式与其非活动性形式进行比较，我们发现类似的TRP降低趋势。
在MS中TRP的直接代谢物KYN也增加。从HBSFRC获得的样品显示，来自血清样品的KYN具有增加趋势(p＜0.05)并且在MS的活动性形式中显著增加。KYN的这种增加在匹配的CSF样品中也是显著的(p＜0.01)。然而，与其匹配的血清样品相反，我们发现CSF中来自活动性SPMS的KYN降低。
在ACPMS样品中，除RRMS(p＜0.05，数据未示出)之外在MS亚型和对照之间均未观察到血清KYN的显著差异。
相较于对照，所得的描述KYN和TRP反比关系的K/T比在MS中增加。用于评价KP活化并且指示IDO活性的K/T比表明KP的确在MS中被活化。此外，在匹配的CSF样品中也观察到了显著高于其对照的相似趋势。然而，我们的数据显示K/T比的升高与疾病的严重程度无显著相关性。
MS进展中的神经保护性KP代谢物
下表3和4示出了获得的血清和CSF的神经保护性KP代谢物水平。
表3-来自ACPMS之MS患者血清中的色氨酸、犬尿氨酸和K/T比。
表4-来自HBSFRC之MS患者的色氨酸、犬尿氨酸和K/T比的血清和匹配的CSF。
KYNA浓度
发现神经保护性KP代谢物KYNA在RRMS患者的血清中升高。然而，随着疾病的进展，我们观察到SPMS和PPMS两者中的这种神经保护性代谢物均降低。此外，在SPMS血清和匹配的CSF中，相比较于其对应形式，在活动性形式中显示KYNA减少的趋势更显著(p＜0.05)。
PIC浓度
另一种神经保护性KP代谢物PIC遵循与KYNA相似的趋势。发现PIC在RRMS患者的血清中增加，但在SPMS患者和PPMS患者中降低。同样，相比较于其非活动性形式，PIC的降低进一步延伸至SPMS的活动性形式(p＜0.01)。
MS进展中的神经毒性QUIN产生
下表5和6及图2示出了来自具有不同MS严重程度的对象的血清和CSF中喹啉酸的水平。
表5-来自ACPMS之MS患者的血清中的神经保护性KP代谢物。
表6-来自HBSFRC之MS患者中神经保护性KP代谢物的血清和匹配的CSF
相比较于对照，QUIN浓度在所有MS亚型中均升高。血清中QUIN产生的增加也与疾病严重程度相关(p＜0.0001)。在匹配的CSF样品中也发现了QUIN的这种增加。此外，相比于较不严重的MS形式(即RRMS)，在进展型MS中似乎存在QUIN显著增加的趋势。
当与健康对照进行比较时，发明人发现3HK在所有MS亚型的血清中均显著增加。此外，相比较于RRMS，发明人发现在进展型MS中3HK具有增加趋势，但未达到统计学上显著(p＝0.045)。有趣的是，在另一组MS样品中，当与其缓解期(即SPMS-NA和RRMS)进行比较时，发明人发现在复发期SPMS(SPMS-A)样品的血清中3HK显著增加。这表明在疾病复发期间活化的KP可能倾向于3HK的产生，并且可能导致其他神经毒性QUIN的下游产生。
免疫组织化学研究
显微镜切片显示在整个大脑、脑干和小脑具有广泛的多发性脱髓鞘斑块。额叶、颞叶和枕叶皮质内的室周斑块显示完全脱髓鞘，并伴随有血管周淋巴细胞成套(cuffing)的存在，以及一定程度的反应性神经胶质增生。在一些区域，斑块似乎具有较长的寿命，显示无残留的血管周淋巴细胞。不存在其他的显著皮质病理学。基底神经节和间脑显示出血管周脱髓鞘斑块的病灶区域。对基底神经节的卢克斯固蓝染色和结晶紫染色显示出在MS情况下观察到的慢性斑块和急性斑块两者。相较于在右侧观察到的正常髓鞘形成，所述染色(参见图3)示出了左侧的广泛脱髓鞘。HLA-DR显示活化的小神经胶质细胞大量地浸润到急性斑块的脱髓鞘区域。然而，在慢性斑块中，如图3B所示，不存在广泛的小神经胶质细胞浸润。
QUIN也存在于MS脑切片中。在由存在血管周淋巴细胞成套限定的急性斑块中，在神经元细胞中观察到QUIN的细胞质表达(参见图3C)。此外，在显示急性斑块之脑区域中的脑实质中发现呈斑点图案的QUIN表达(图4A)，但在慢性斑块中未发现QUIN的染色(图4B)。急性斑块中的QUIN同种型对照(图3D)未显示出QUIN的任何神经元表达。此外，当与对照脑切片进行比较时(图4C)，在灰质和白质中均未观察到QUIN表达。然而，在正常脑组织的休眠小神经胶质细胞中QUIN以基础水平唯一且组成性地表达(图4D)。
表7-患有MS之对象的组织或体液中犬尿氨酸途径化合物的水平。
讨论
数据表明，神经保护性KP代谢物(即KYNA和PIC)在MS的早期增加，但在进展型MS中显著降低。
QUIN在所有MS亚型中均增加。该增加与MS的进展相关，尤其在CNS和血清中。在疾病的早期，相比较于对照，仅观察到QUIN的适度增加。在进展型MS中，数据表明QUIN显著升高。
相比较于健康对照，3-羟基犬尿氨酸在所有MS亚型中均升高。特别地，3-羟基犬尿氨酸水平在MS的复发期期间显著增加，当与MS缓解期(SPMS-非活动性)的3-羟基犬尿氨酸水平进行比较时，这样的增加在复发期(SPMS-活动性)期间3-羟基犬尿氨酸的升高水平中是明显的。
MS脑切片中的QUIN染色显示，在急性斑块形成的初始阶段，有QUIN释放到实质中。为了证明实质中的QUIN表达不是由背景染色引起，建立对QUIN染色的同种型对照，并证明在同种型对照中不存在QUIN染色。此外，据观察，QUIN在无显著神经病理学的对照例的白质或灰质中均不表达。
权利要求书(按照条约第19条的修改)
1.方法，其用于在患有MS之对象中评价MS的严重程度，或者用于在患有MS之对象中监测MS的进展，或者用于监测施用于患有MS之对象的治疗的效果，所述方法包括将所述患有MS之对象的组织或体液中一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的水平与所述一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的参考值进行比较，所述一种或更多种犬尿氨酸途径化合物选自色氨酸、犬尿酸、3-羟基犬尿氨酸、吡啶甲酸和喹啉酸，其中所述MS的严重程度分类为复发-缓解型MS(RRMS)或进展型MS，并且其中进展型MS进一步分类为继发进展型MS(SPMS)、复发期继发进展型MS(SPMS-A)、缓解期继发进展型MS(SPMS-NA)或原发进展型MS(PPMS)。
2.权利要求1所述的方法，其中所述参考值代表未患MS之对象的组织或体液中所述一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的水平。
3.权利要求1所述的方法，其中所述参考值代表患有预定严重程度MS之对象的组织或体液中所述一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的水平。
4.权利要求1所述的方法，其中所述参考值代表在较早时间所述患有MS之对象的组织或体液中所述一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的水平。
5.权利要求1所述的方法，其中第一参考值代表未患MS之对象的组织或体液中喹啉酸的水平，第二参考值代表来自患有继发进展型(SPMS)之患者的组织或体液中喹啉酸的水平，并且其中当所述患有MS之对象的组织或体液中喹啉酸的水平相对于所述第一参考值升高且相对于所述第二参考值降低时，所述MS归类为复发-缓解型MS(RRMS)。
6.权利要求1所述的方法，其中所述参考值代表未患MS之对象的组织或体液中吡啶甲酸或犬尿酸的水平，并且其中当所述患有MS之对象的组织或体液中吡啶甲酸或犬尿酸的水平相对于所述参考值升高时，所述MS归类为复发-缓解型MS(RRMS)。
7.权利要求1所述的方法，其中所述参考值代表未患MS之对象的组织或体液中3-羟基犬尿氨酸的水平，并且当所述患有MS之对象的组织或体液中3-羟基犬尿氨酸的水平相对于所述参考值升高时，所述MS归类为复发-缓解型MS(RRMS)、继发进展型MS(SPMS)或原发进展型MS(PPMS)。
8.权利要求1所述的方法，其中所述参考值代表患有复发-缓解型MS(RRMS)之对象的组织或体液中喹啉酸的水平，并且其中当所述患有MS之对象的组织或体液中喹啉酸的水平相对于所述参考值升高时，所述MS归类为进展型。
9.权利要求1所述的方法，其中所述参考值代表患有复发-缓解型MS(RRMS)之对象的组织或体液中吡啶甲酸或犬尿酸的水平，并且其中当所述患有MS之对象的组织或体液中吡啶甲酸或犬尿酸的水平相对于所述参考值降低时，所述MS归类为进展型MS。
10.权利要求1所述的方法，其中第一参考值代表未患MS之对象的组织或体液中3-羟基犬尿氨酸的水平，第二参考值代表来自患有缓解期继发进展型MS(SPMS-NA)或复发-缓解型MS(RRMS)之患者的组织或体液中3-羟基犬尿氨酸的水平，并且第三参考值代表患有复发期继发进展型MS(SPMS-A)之对象的组织或体液中3-羟基犬尿氨酸的水平，其中当所述患有MS之对象的组织或体液中3-羟基犬尿氨酸的水平相对于所述第一参考值升高且相对于所述第二参考值降低时，所述MS归类为缓解期继发进展型MS(SPMS-NA)或复发缓解型MS(RRMS)。
11.权利要求1所述的方法，其中所述患有MS之对象的组织或体液中所述一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的水平为下表中所示的比率：
12.权利要求1所述的方法，其中所述参考值代表患有SPMS之对象的组织或体液中喹啉酸的水平，并且其中当所述患有MS之对象的组织或体液中喹啉酸的水平相对于所述参考值升高时，所述MS归类为PPMS。
13.权利要求1所述的方法，其中所述参考值代表患有SPMS之对象或未患MS之对象的组织或体液中吡啶甲酸或犬尿酸的水平，并且其中当所述患有MS之对象的组织或体液中吡啶甲酸或犬尿酸的水平相对于所述参考值降低时，所述MS归类为PPMS。
14.权利要求1所述的方法，其中所述参考值代表未患MS之对象的组织或体液中色氨酸的水平和吡啶甲酸或犬尿酸的水平，并且其中当所述患有MS之对象的组织或体液中色氨酸的水平和吡啶甲酸或犬尿酸的水平相对于所述参考值降低时，所述MS归类为SPMS。
15.权利要求1所述的方法，其中所述组织或体液中所述一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的水平如下确定：取得所述患有MS之对象的组织或体液的样品，并测定所述样品中所述一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的水平。
16.权利要求15所述的方法，其中所述样品为CSF或血清体液样品。
17.预后试剂盒，其用于在患有MS之对象中评价MS的严重程度，或者用于在患有MS之对象中监测MS的进展，或者用于监测施用于患有MS之对象的治疗的效果，包括将所述患有MS之对象的组织或体液中一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的水平与所述一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的参考值进行比较，所述一种或更多种犬尿氨酸途径化合物选自色氨酸、犬尿酸、3-羟基犬尿氨酸、吡啶甲酸和喹啉酸，其中所述MS的严重程度分类为复发-缓解型MS(RRMS)或进展型MS，并且其中进展型MS进一步分类为继发进展型MS(SPMS)、复发期继发进展型MS(SPMS-A)、缓解期继发进展型MS(SPMS-NA)或原发进展型MS(PPMS)。
18.权利要求17所述的预后试剂盒，其包含：
(a)用于测定患者的生物样品中一种或更多种犬尿氨酸途径化合物之水平的试剂；以及
(b)使所述一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的水平与一个或更多个参考值相关联以评价患有MS之对象中MS严重程度的信息。
19.权利要求18所述的预后试剂盒，其包括使用TRP、KYN、KYNA、3HK、PIC和QUIN单克隆抗体的酶联免疫吸附测定(ELISA)测试。

Claims (23)

1.方法，其用于在患有MS之对象中评价MS的严重程度，或者用于在患有MS之对象中监测MS的进展，或者用于监测施用于患有MS之对象的治疗的效果，所述方法包括将所述患有MS之对象的组织或体液中一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的水平与所述一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的参考值进行比较。
2.权利要求1所述的方法，其中所述参考值代表未患MS之对象的组织或体液中所述一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的水平。
3.权利要求1所述的方法，其中所述参考值代表患有预定严重程度MS之对象的组织或体液中所述一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的水平。
4.权利要求1所述的方法，其中所述参考值代表在较早时间所述患有MS之对象的组织或体液中所述一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的水平。
5.权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述一种或更多种犬尿氨酸途径化合物选自色氨酸、犬尿酸、3-羟基犬尿氨酸、吡啶甲酸和喹啉酸。
6.权利要求5所述的方法，其中所述一种或更多种犬尿氨酸途径化合物为喹啉酸，并且所述MS的严重程度分类为复发-缓解型MS(RRMS)或进展型MS，其中进展型MS进一步分类为继发进展型MS(SPMS)、复发期继发进展型MS(SPMS-A)、缓解期继发进展型MS(SPMS-NA)或原发进展型MS(PPMS)。
7.权利要求5所述的方法，其中一种或更多种犬尿氨酸途径化合物为吡啶甲酸和/或犬尿酸，并且所述MS的严重程度分类为复发-缓解型MS(RRMS)或进展型MS，其中进展型MS进一步分类为继发进展型MS(SPMS)、复发期继发进展型MS(SPMS-A)、缓解期继发进展型MS(SPMS-NA)或原发进展型MS(PPMS)。
8.权利要求5所述的方法，其中所述一种或更多种犬尿氨酸途径化合物为3-羟基犬尿氨酸，并且所述MS的严重程度分类为复发-缓解型MS(RRMS)或进展型MS，其中进展型MS进一步分类为继发进展型MS(SPMS)、复发期继发进展型MS(SPMS-A)、缓解期继发进展型MS(SPMS-NA)或原发进展型MS(PPMS)。
9.权利要求6所述的方法，其中第一参考值代表未患MS之对象的组织或体液中喹啉酸的水平，第二参考值代表来自患有继发进展型(SPMS)之患者的组织或体液中喹啉酸的水平，并且其中当所述患有MS之对象的组织或体液中喹啉酸的水平相对于所述第一参考值升高且相对于所述第二参考值降低时，所述MS归类为复发-缓解型MS(RRMS)。
10.权利要求7所述的方法，其中所述参考值代表未患MS之对象的组织或体液中吡啶甲酸或犬尿酸的水平，并且其中当所述患有MS之对象的组织或体液中吡啶甲酸或犬尿酸的水平相对于所述参考值升高时，所述MS归类为复发-缓解型MS(RRMS)。
11.权利要求8所述的方法，其中所述参考值代表未患MS之对象的组织或体液中3-羟基犬尿氨酸的水平，并且当所述患有MS之对象的组织或体液中3-羟基犬尿氨酸的水平相对于所述参考值升高时，所述MS归类为复发-缓解型MS(RRMS)、继发进展型MS(SPMS)或原发进展型MS(PPMS)。
12.权利要求6所述的方法，其中所述参考值代表患有复发-缓解型MS(RRMS)之对象的组织或体液中喹啉酸的水平，并且其中当所述患有MS之对象的组织或体液中喹啉酸的水平相对于所述参考值升高时，所述MS归类为进展型。
13.权利要求7所述的方法，其中所述参考值代表患有复发-缓解型MS(RRMS)之对象的组织或体液中吡啶甲酸或犬尿酸的水平，并且其中当所述患有MS之对象的组织或体液中吡啶甲酸或犬尿酸的水平相对于所述参考值降低时，所述MS归类为进展型MS。
14.权利要求8所述的方法，其中第一参考值代表未患MS之对象的组织或体液中3-羟基犬尿氨酸的水平，第二参考值代表来自患有缓解期继发进展型MS(SPMS-NA)或复发-缓解型MS(RRMS)之患者的组织或体液中3-羟基犬尿氨酸的水平，并且第三参考值代表患有复发期继发进展型MS(SPMS-A)之对象的组织或体液中3-羟基犬尿氨酸的水平，其中当所述患有MS之对象的组织或体液中3-羟基犬尿氨酸的水平相对于所述第一参考值升高且相对于所述第二参考值降低时，所述MS归类为缓解期继发进展型MS(SPMS-NA)或复发缓解型MS(RRMS)。
15.权利要求5所述的方法，其中所述患有MS之对象的组织或体液中所述一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的水平为下表中所示的比率：
16.权利要求6所述的方法，其中所述参考值代表患有SPMS之对象的组织或体液中喹啉酸的水平，并且其中当所述患有MS之对象的组织或体液中喹啉酸的水平相对于所述参考值升高时，所述MS归类为PPMS。
17.权利要求7所述的方法，其中所述参考值代表患有SPMS之对象或未患MS之对象的组织或体液中吡啶甲酸或犬尿酸的水平，并且其中当所述患有MS之对象的组织或体液中吡啶甲酸或犬尿酸的水平相对于所述参考值降低时，所述MS归类为PPMS。
18.权利要求5所述的方法，其中所述参考值代表未患MS之对象的组织或体液中色氨酸的水平和吡啶甲酸或犬尿酸的水平，并且其中当所述患有MS之对象的组织或体液中色氨酸的水平和吡啶甲酸或犬尿酸的水平相对于所述参考值降低时，所述MS归类为SPMS。
19.权利要求1所述的方法，其中所述组织或体液中所述一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的水平如下确定：取得所述患有MS之对象的组织或体液的样品，并测定所述样品中所述一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的水平。
20.权利要求19所述的方法，其中所述样品为CSF或血清体液样品。
21.预后试剂盒，其用于在患有MS之对象中评价MS的严重程度，或者用于在患有MS之对象中监测MS的进展，或者用于监测施用于患有MS之对象的治疗的效果，包括将所述患有MS之对象的组织或体液中一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的水平与所述一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的参考值进行比较。
22.权利要求21所述的预后试剂盒，其包含：
(a)用于测定患者的生物样品中一种或更多种犬尿氨酸途径化合物之水平的试剂；以及
(b)使所述一种或更多种犬尿氨酸途径化合物的水平与一个或更多个参考值相关联以评价患有MS之对象中MS严重程度的信息。
23.权利要求22所述的预后试剂盒，其包括使用TRP、KYN、KYNA、3HK、PIC和QUIN单克隆抗体的酶联免疫吸附测定(ELISA)测试。
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Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3373007A1 (en) * 2017-03-06 2018-09-12 Metabolomic Discoveries GmbH Biomarkers for diagnosis and progression of primary progressive multiple sclerosis (ppms)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101223446A (zh) * 2005-07-11 2008-07-16 阿斯利康(瑞典)有限公司 诊断多发性硬化的方法
US20100112618A1 (en) * 2007-03-27 2010-05-06 Halina Baran Measurement of the Activity of a Kynurenine-Converting Enzyme and/or a Kynurenic-Acid, Anthranilic-Acid and/or 3-Hydroxykynurenine-Producing Enzyme
WO2011067243A1 (en) * 2009-12-01 2011-06-09 Metanomics Health Gmbh Means and methods for diagnosing multiple sclerosis

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IL124444A0 (en) * 1998-05-12 1998-12-06 Svetlana Dolina Biochemical approach to diagnosis of predisposition to epilepsy and monitoring of antiepileptic treatment
HUP0700051A2 (en) * 2007-01-17 2008-09-29 Univ Szegedi Use of kynurenic acid and derivatives there of for treating of gastrointestinal disorders associated with enhanced motility and inflammation
GB201211120D0 (en) * 2012-06-22 2012-08-01 Bessede Alban Antagonist to an enzyme and/or a metabolite of the kynurenine pathway

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101223446A (zh) * 2005-07-11 2008-07-16 阿斯利康(瑞典)有限公司 诊断多发性硬化的方法
US20100112618A1 (en) * 2007-03-27 2010-05-06 Halina Baran Measurement of the Activity of a Kynurenine-Converting Enzyme and/or a Kynurenic-Acid, Anthranilic-Acid and/or 3-Hydroxykynurenine-Producing Enzyme
WO2011067243A1 (en) * 2009-12-01 2011-06-09 Metanomics Health Gmbh Means and methods for diagnosing multiple sclerosis

Non-Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHAI K.LIM ET AL: "Understanding the Roles of the Kynurenine pathway in Multiple sclerosis progression", 《INTERNATIONAL JOURNAL OF TRYPTOPHAN RESEARCH》 *
ERIK KWIDZINSKI ET AL: "Indolamine 2,3-dioxygenase is expressed in the CNS and down-regulates autoimmune inflammation", 《THE FASEB JOURNAL》 *
GAYATHRI SUNDARM: "The involvement of kynurenine pathway in multiple sclerosis mice model", 《 UNIVERSITY OF NEW SOUTH WALES 》 *
KENICHI SAKURAI ET AL: "Effect of indoleamine 2,3-dioxygenase on induction of experimental autoimmune encephalomyelitis", 《JOURNAL OF NEUROIMMUNOLOGY》 *
KONRAD REJDAK ET AL: "Decreased level of kynurenic acid in cerebrospinal fluid of relapsing-onset multiple sclerosis patients", 《NEUROSCIENCE LETTERS》 *
LÁSZLÓ VÉCSEI1 ET AL: "Kynurenines in the CNS: recent advances and new questions", 《NATURE REVIEWS》 *
王瑞 等: "健康国人血清犬尿氨酸和犬尿氨酸/色氨酸含量比值参考值范围的建立", 《中华检验医学杂志》 *

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