CN105548422B - 一种聚乙二醇含量的检测方法 - Google Patents

一种聚乙二醇含量的检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种聚乙二醇含量的检测方法。该检测方法利用样品中各组分流体力学体积大小的不同，通过优化色谱条件，选择合适的色谱柱填料的粒径和孔径大小的体积排阻色谱柱实现优质的分离，通过实验室常规的通用检测器，鉴别聚乙二醇的色谱峰，并通过外标法回归，进而定量样品中聚乙二醇的绝对含量。本发明的检测方法解决了常规方法中分离度不佳，微量含量测试准确度不高，测试结果只能以百分含量表达等的限制，特别适合于检测药品或载药医疗器械、食品、保健品及其他生物制品中聚乙二醇含量或聚乙二醇残留量。

Description

一种聚乙二醇含量的检测方法
技术领域
本发明属于药物制剂的含量测定方法领域，涉及一种载药医疗器械药物涂层的分析方法，具体涉及一种聚乙二醇含量的检测方法。
背景技术
聚乙二醇(简称：PEG)由环氧乙烷与水缩聚而成，分子式为HO(CH2CH2O)nH，n代表氧乙烯基的平均数，其CAS登记号为25322-68-3，为白色蜡状固体薄片或颗粒状粉末，略有特臭。聚乙二醇溶于水、乙醇及许多有机溶剂，在***中不溶，对热、酸、碱稳定，与许多化学品不起作用。
聚乙二醇具有无毒、无刺激、免疫原性低等特点，其生物相容性好、可通过肾排出体外，在体内不会有积累。此外，聚乙二醇具有一定的化学惰性，与其他药物和载体的配伍性好。基于这些优点，聚乙二醇被中国、美国、英国等许多国家药典收载作为药用辅料，被广泛应用于各种药物制剂中。
聚乙二醇在生物医药领域的应用主要在以下几个方面：(一)作为药用辅料：聚乙二醇可用作注射用的复合溶剂，作为难溶于水药物的溶媒，也可作为栓剂基质、软膏基质、助悬剂、增粘剂和增塑剂等，还可用作固体分散体的载体，制备一些难溶性药物的低共熔物以加速药物的溶解和吸收，在注射剂、眼用制剂、口服和直肠用制剂等剂型中应用广泛；(二)对多肽和蛋白类药物进行结构修饰，可改善药物的以下性质同时最大限度地保留其生物活性：增加稳定性，降低酶降解作用；改善药物动力学性质，如延长血浆半衰期、降低最大血药浓度、血药浓度波动减小等；降低免疫原性、抗原性和毒副作用；改善体内药物分布，增强靶向性；(三)作为生物医用材料的表面改性材料：通过化学接枝或本体共聚等方法，将聚乙二醇接枝或富集到材料表面，能防止与血液接触时，血液中的血小板在材料表面沉积，改善与血液接触的医用高分子材料的生物相容性。
药物与器械组合治疗***是指含有药物和器械的二个元件通过某种方式组合为单一的产品，其目的在于补充现有的给药***的不足，或补充现有的医疗器械的不足，或增加新的医疗用途等。药物洗脱球囊和药物洗脱支架均属于药物与器械组合治疗***，其中的药物洗脱球囊(简称：DEB)是在球囊扩张术或球囊成形术等介入技术基础上发展起来的新型治疗性球囊药物释放技术，其原理在于将抗增生性的药物如紫杉醇，通过某些特殊的工艺涂覆于球囊表面，通过介入手术将球囊输送到病变血管部位，随后球囊被充压撑开，在与血管壁内膜接触时，球囊表面的药物被快速释放、转移至局部血管壁上，继而发挥药效，起到抗血管内膜增生的作用，从而预防血管介入术后的血管再狭窄。
将紫杉醇药物直接涂覆在球囊表面，并不能达到理想的治疗效果。存在的问题主要表现在：涂覆后药物涂层外观不均匀，药物涂层与球囊的结合力太弱，涂层过于松散，在施行介入手术过程中，药物受到血流的快速冲刷，极易发生脱落。这种输送过程中的损失会导致在到达靶病变血管及球囊扩张前，可供释放转移的药物总量过少，药物转载率过低，不能获得理想的疗效。因此，必须通过采用合适的赋形剂品种及组合，才能获得较好的治疗效果，而原料药与辅料的搭配比例，也是影响药物洗脱球囊疗效的重要因素。
聚乙二醇是最常用的水溶性药物载体之一。但是其分子量的大小及用量会显著影响药物涂层的有效性和安全性。因此，准确监控药物涂层中聚乙二醇的含量，对生产工艺和产品的质量控制有着重要的意义。
由于聚乙二醇是由环氧乙烷和水缩聚而成的混合物，因此不易准确测定其含量。在中国药典2015年版二部聚乙二醇系列品种项下，未制订其含量测定项目。美国药典34版(简称：USP34)、英国药典2011年版(简称：BP2011)和中国药典2015年版(简称：ChP2015)均采用毛细管黏度计测定其运动黏度，计算样品的相对分子质量。
目前通用的国际标准方法是采用二相萃取的Weibull法，其原理是非离子加成物和聚乙二醇都溶于乙酸乙酯，但聚乙二醇还可以溶于氯化钠溶液，非离子加成物则不溶。该方法的缺点是操作繁琐，温度控制要求严格，测定周期长(大约需8～10h)，并且灵敏度不高。
国家标准GB/T 17830-1999《聚乙氧基化非离子表面活性剂中聚乙二醇含量的测定高效液相色谱法》以C18硅胶键合相色谱柱，纯甲醇或甲醇/水混合溶剂做流动相，对聚醚型非离子表面活性剂进行反相高效液相色谱法分离，用示差折光检测器检测流出物，记录被分离组分的保留时间及其峰面积，并通过计算仪器的响应因子来求得分析样品中聚乙二醇的百分含量。该方法的局限性在于，只适用于测定聚乙氧基化脂肪醇和聚乙氧基化烷基酚中聚乙二醇的含量，不能将该方法推广到其他情形下聚乙二醇的含量测定，同时该方法需要计算仪器的响应因子，试验结果以百分含量计算，进一步限制了该方法的使用范围。
欧盟标准EN 12582-1999《表面活性剂用高效液相色谱-蒸发光散射检测器测定乙氧基非离子型表面活性剂中以摩尔质量表示的聚乙二醇含量》以C18硅胶键合相色谱柱，采用线性梯度洗脱，蒸发光散射检测器检测，并通过配制系列浓度的标准溶液制作出校准曲线，根据聚乙二醇峰面积确定样品中聚乙二醇的百分含量。
上述采用高效液相色谱(简称：HPLC)测定聚乙二醇含量的方法，均使用十八烷基硅烷键合硅胶填料的色谱柱进行反相洗脱，洗脱的流动相常使用甲醇、乙腈、水等。其原理是待分析物质按疏水性大小进行分离，极性越大、疏水性越小的物质，越不易与非极性的固定相结合，所以先被洗脱下来。聚乙二醇由于含有较多的羟基及氧孤对电子，使其具有较大的极性、较强的亲水性，易形成氢键，其与色谱柱填料的亲和力很弱，最先被洗脱出来，而且样品中的水分和其他溶剂，以及洗脱用溶剂也会干扰聚乙二醇的出峰，分离度欠佳，影响定量结果。
另外，上述测定方法的结果表达均为样品中所含有的聚乙二醇百分含量，无法直观地得到样品中的聚乙二醇的绝对含量。
发明内容
本发明的目的在于针对上述现有技术的不足，提供一种聚乙二醇含量的检测方法。本发明的检测方法利用样品中各组分流体力学体积大小的不同，通过优化色谱条件，使用体积排阻色谱柱，通过选择合适的色谱柱填料凝胶的粒径和孔径大小实现优质的分离，再通过实验室常规的通用检测器，如示差折光检测器鉴别聚乙二醇的色谱峰，并通过外标法回归，进而定量样品中聚乙二醇的绝对含量。本发明的检测方法解决了常规方法中分离度不佳，微量含量测试准确度不高，测试结果只能以百分含量表达等的限制。
本发明提供一种聚乙二醇含量的检测方法，主要包括以下步骤：
采用反相键合体积排阻色谱柱，将与样品中的待测聚乙二醇分子量相等、分散度相同或相似的聚乙二醇标准品，用流动相溶解并稀释，配制成一定浓度梯度的系列标准液；
将所述系列标准液过滤后分别进样，记录检测器的峰信号，按外标法，以不同浓度的聚乙二醇标准溶液的峰面积与对应的标准溶液的浓度做线性回归，得出校准曲线，聚乙二醇的标准回归曲线方程为：
Y＝aX+b，
其中，a为标准回归曲线的斜率，b为标准回归曲线的截距，Y为聚乙二醇在检测器输出的信号峰面积，X为聚乙二醇浓度，单位为μg/mL；
将待测样品用定量的流动相溶解，过滤后进样，利用所述标准回归曲线方程以及样品中聚乙二醇的信号峰面积，计算样品中聚乙二醇的含量。
所述反相键合体积排阻色谱柱的载体为硅胶基质，固定相为硅胶填料。
所述外标法的外标物为聚乙二醇。所述用于外标法的外标物聚乙二醇的分子量及分散度与样品中待检测的聚乙二醇相同或相似。
所述硅胶填料的粒径范围为1～20μm，优选3μm或5μm。所述硅胶填料的孔径为或
所述硅胶填料的粒径范围优选3μm或5μm。
所述流动相为含离子对溶剂的乙腈水溶液。所述离子对溶剂为磷酸、三氟乙酸、甲酸、乙酸、高氯酸或甲基磺酸，优选磷酸或三氟乙酸。所述离子对溶剂用于调节流动相的PH值，使样品的疏水性增加，延长洗脱时间，提高分辨率和分离效果。
所述乙腈水溶液中乙腈的体积分数范围为5～95％，所述离子对溶剂在流动相中的体积分数范围为0.02～1％；所述乙腈和离子对溶剂均为色谱级溶剂，所述水为超纯水。
所述反相键合体积排阻色谱柱的色谱条件为：流动相流速范围为0.1～2mL/min，优选为0.5～1mL/min；柱温小于或者等于80℃，优选为10～30℃；进样量范围为5～100μL，优选为20～50μL。
所述检测器为示差折光检测器。
所述用流动相溶解时可以采用超声加速并确保溶解完全。所述过滤为采用0.2～1μm水系过滤膜过滤，优选0.45μm孔径，以除去颗粒和大多数微生物。
本发明还提供所述检测方法在检测药品或载药医疗器械、食品、保健品及其他生物制品中聚乙二醇含量或聚乙二醇残留量中的应用。
本发明所述的体积排阻色谱柱，在选择时，应根据待测样品的不同确定色谱柱的粒径和孔径，为获得较理想的出峰时间、峰形及分离度，当待测聚乙二醇的分子量小于2000道尔顿时，选择粒径和孔径稍小的色谱柱，如当待测聚乙二醇的分子量大于2000道尔顿时，选择粒径和孔径稍大的色谱柱，如
所述检测器为示差折光检测器，主要原因是聚乙二醇类物质没有紫外吸收。示差折光检测器为一种通用检测器，仪器价格便宜，维护费用低，然而受检测环境波动的影响较大，因此应该严格控制检测环境，本发明使用柱温箱严格控制仪器温度为30℃，同时控制液相色谱分析室的温度为20±5℃，湿度为小于70％RH。
本发明与现有技术相比，具有以下优点：
(1)本发明通过选择合适的色谱柱，优化色谱条件，可以延长聚乙二醇的洗脱时间，并提高聚乙二醇与样品中其他组分或溶剂的分离度，提高分析方法灵敏度，检出限低，特别适用于微量聚乙二醇的含量检测；
(2)本发明的检测方法对分析设备的要求低，仅需要使用普通的示差折光检测器；
(3)本发明的检测方法可以直观得出样品中含有的聚乙二醇的绝对量，以重量计，解决了其他方法以百分比表示的局限性；
(4)本发明的检测方法中，直接采用色谱流动相作为样品溶解、浸提所使用的溶剂，可有效消除样品中的溶剂对待测物质的干扰。
附图说明
图1为实施例1的低浓度聚乙二醇对照品的色谱图。
图2为实施例2的药物球囊产品表面药物涂层的色谱图。
图3为实施例3的聚乙二醇标准品的浓度-峰面积的校准曲线。
图4为实施例3的药物球囊产品表面药物涂层中聚乙二醇含量测定的色谱图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1
测定聚乙二醇标准物质的色谱图，该标准物质购自美国SIGMA-ALDRICH公司，分子量为1000，分散度为1.02。
色谱设备：依利特EC2000液相色谱仪和SHODEX RI-201H示差折光检测器，依利特P230高压恒流泵，ZW色谱柱温箱，EC2000色谱数据工作站；
色谱柱：商品名为Zenix SEC的反相硅胶键合色谱柱(美国赛分科技有限公司)，规格为3μm7.8mm×300mm；
流动相：乙腈：色谱纯；纯水：纯度至少达到ISO 3696所规定的一级；三氟乙酸，色谱纯，纯度>99.9％。
(1)流动相制备：分别准确量取体积比为40:60的乙腈和纯化水混合均匀，按照体积比为0.1％加入三氟乙酸，混合均匀，用0.45μm的过滤膜抽滤，滤液超声排气10min，避免流动相的气泡进入色谱***，造成基线噪音大，鬼峰等；
(2)精确称量聚乙二醇标准物质，加入适量步骤(1)得到的流动相溶解，加盖超声10min保证溶解完全后，将所有溶液转移到10mL容量瓶内，用流动相定容到刻度线，摇匀，密封；
(3)用0.45μm的针筒式过滤器过滤溶液，HPLC进样测试，色谱条件为：
柱温：30℃，
流速：1.0mL/min，
进样量：20μL，
示差折光检测器：RI，检测池温度40℃
环境条件：温度：20±5℃，湿度：小于70％RH；
(4)按上述条件进样分析，记录色谱图，定性说明聚乙二醇纯物质在该色谱体系的出峰位置。
实施例1得到的色谱图如图1所示，聚乙二醇标准物质在8.33min出峰，该峰编号为1。
实施例2
待检测样品为带有药物涂层的球囊导管，该药物涂层中含有具有治疗作用的药物紫杉醇和辅料，辅料中包含一定量的聚乙二醇，分子量为1000，分散度与实施例1中聚乙二醇标准物质相近。
色谱设备：依利特EC2000液相色谱仪和SHODEX RI-201H示差折光检测器，依利特P230高压恒流泵，ZW色谱柱温箱，EC2000色谱数据工作站
色谱柱：商品名为Zenix SEC的反相硅胶键合色谱柱(美国赛分科技有限公司)，规格为3μm7.8mm×300mm；
流动相：乙腈：色谱纯；纯水：纯度至少达到ISO 3696所规定的一级；三氟乙酸色谱纯，纯度>99.9％。
(1)流动相制备：分别准确量取体积比为40:60的乙腈和纯化水混合均匀，按照体积比为0.1％加入三氟乙酸，混合均匀，用0.45μm的过滤膜抽滤，滤液超声排气10min；
(2)将药物球囊导管的球囊部分用流动相浸没，用球囊扩充压力泵充压以展开球囊，加盖超声浸提10min后，将所有溶液转移到10mL容量瓶内，用流动相定容到刻度线，摇匀，密封；
(3)用0.45μm的针筒式过滤器过滤溶液，HPLC进样测试，色谱条件为：
柱温：30℃，
流速：1.0mL/min，
进样量：20μL，
示差折光检测器：RI，检测池温度40℃
环境条件：温度：20±5℃，湿度：小于70％RH；
(4)按上述条件进样分析，记录色谱图，如图2所示。
请参阅图2，药物涂层中各物质的出峰编号分别为1、2、3、4，其中编号为1的物质出峰时间为8.36min，与图1聚乙二醇标准物质的出峰时间吻合，可定性说明药物涂层中含有聚乙二醇。实施例2药物涂层样品组分如下表1，组分1(即：聚乙二醇)峰拖尾因子0.94，组分1与涂层中其他组分临近峰的分离度为9.24，说明在该色谱***中，聚乙二醇出峰对称，且和组分中的其他物质实现了完美的分离。
表1.实施例2药物涂层样品组分表
组分名 保留时间(min) 拖尾因子 分离度
组分1(聚乙二醇) 8.36 0.94 9.24
组分2 18.40 1.24 18.06
组分3 22.49 1.30 9.19
组分4 25.79 1.06 6.54
实施例3
待检测样品为带有药物涂层的球囊导管，该药物涂层中含有具有治疗作用的药物紫杉醇和辅料，辅料中包含一定量的聚乙二醇，分子量为1000，分散度与实施例1中聚乙二醇标准物质相近。
利用该发明检测样品生产后及储存期间聚乙二醇的具体含量，含量以绝对量表达，该方法也作为聚乙二醇来料检验，药物球囊导管出厂检验，以及稳定性试验检验质控样品的方法。
色谱设备：依利特EC2000液相色谱仪和SHODEX RI-201H示差折光检测器，依利特P230高压恒流泵，ZW色谱柱温箱，EC2000色谱数据工作站。
色谱柱：商品名为Zenix SEC的反相硅胶键合色谱柱(美国赛分科技有限公司)，规格为3μm7.8mm×300mm；
聚乙二醇标准物质：购自美国SIGMA-ALDRICH公司，分子量与分散度与样品中预定量的聚乙二醇相同。
流动相：乙腈：色谱纯；纯水：纯度至少达到ISO 3696所规定的一级；三氟乙酸色谱纯，纯度>99.9％
(1)流动相制备：分别准确量取体积比为40:60的乙腈和纯化水混合均匀，按照体积比为0.1％加入三氟乙酸，混合均匀，用0.45μm的过滤膜抽滤，滤液超声排气10min；
(2)系列标准溶液配制：精确称量聚乙二醇标准物质，加入适量流动相溶解，加盖超声10min后，将所有溶液转移到10mL容量瓶内，用流动相定容到刻度线，摇匀，密封，得到浓度约为1000μg/mL的标准储备液。利用逐步稀释法将标准储备液稀释成六个系列浓度的标准工作溶液，浓度分别为25μg/mL、50μg/mL、80g/mL、100μg/mL、130μg/mL、160μg/mL。
(3)用0.45μm的针筒式过滤器分别过滤步骤(2)得到的系列标准溶液，分别进行HPLC进样测试，色谱条件为：
柱温：30℃，
流速：1.0mL/min，
进样量：20μL，
示差折光检测器：RI，检测池温度40℃，
环境条件：温度：20±5℃；湿度：小于70％RH；
(4)以不同浓度的聚乙二醇标准溶液的峰面积与对应的标准溶液的浓度绘制标准曲线，如图3所示，聚乙二醇的标准回归曲线方程为：
Y＝0.796×X+3.791，R＝0.9986，
其中，Y为聚乙二醇在示差折光检测器输出信号峰面积，X为聚乙二醇浓度，单位为μg/mL，R为相关系数；
(5)将药物球囊导管的球囊部分用流动相浸没，用球囊扩充压力泵充压以展开球囊，加盖超声浸提10min后，将所有溶液转移到5mL容量瓶内，用流动相定容到刻度线，摇匀，密封，用0.45μm的针筒式过滤器过滤溶液，HPLC进样测试，记录色谱图，如图4所示。
请参阅图4，查看谱图组分表，出峰时间为8.39min处的峰为聚乙二醇峰，峰面积为28.24mv.sec，将Y＝28.24带入上述标准回归方程中，得到测试样品的聚乙二醇浓度值X＝30.71，再乘以样品定容的体积即得出药物球囊导管的药物涂层中聚乙二醇的绝对含量。本实施例中，样品中聚乙二醇的含量约为153.57μg。
实施例4
根据《中国药典2015年版附录XIX A药品质量标准分析方法验证指导原则》，考察本发明的测定方法的准确度。
具体步骤为：待检测样品为6份浓度均为53.79μg/mL的标准聚乙二醇工作溶液，先重复实施例3的步骤(1)～(4)，再将待测的6份标准聚乙二醇工作溶液分别进样测试，用步骤(4)得到的标准回归曲线计算待测溶液的浓度。
测试数据如下表2所示：
表2 准确度测试数据
计算公式：
由表1可知，本发明的方法平均回收率为103.3％，即测定准确度达103.3％中国药典对方法确认中回收率的要求为80～120％，说明本发明的检测方法具有良好的测定准确度。
实施例5
根据《中国药典2015年版附录XIX A药品质量标准分析方法验证指导原则》，考察本发明的测试方法的重复性和再现性。
方法是：在相同条件下，由两个分析人员，对浓度为107.58μg/mL的标准溶液，分别在两天进行6次测定。
具体步骤为：
先重复实施例3的步骤(1)～(4)，再将待测的浓度为107.58μg/mL的标准聚乙二醇工作溶液，由两个分析人员，分别于两天进行连续6次测定，分别计算峰面积测量值的相对标准偏差，测试数据如下表3所示。
表3 重复性和再现性验证测试数据
分别计算其相对标准偏差，重复性分别为1.32％和1.84％，再现性为1.61％。
另外，验证结果显示仪器检出限(简称：IDL)为3.20μg/mL、方法检出限(简称：MDL)为4.33μg/mL，报告限为22.0μg/mL，均能满足微量聚乙二醇检测的要求。
实施例6
待检测样品为带有药物涂层的球囊导管，该药物涂层中含有具有治疗作用的药物紫杉醇和辅料，辅料中包含一定量的聚乙二醇，分子量为1500。
色谱设备：依利特EC2000液相色谱仪和SHODEX RI-201H示差折光检测器，依利特P230高压恒流泵，ZW色谱柱温箱，EC2000色谱数据工作站；
色谱柱：商品名为Zenix SEC的反相硅胶键合色谱柱(美国赛分科技有限公司)，规格为3μm7.8mm×300mm；
流动相：乙腈：色谱纯；纯水：纯度至少达到ISO 3696所规定的一级；三氟乙酸，色谱纯，纯度>99.9％。
(1)流动相制备：分别准确量取体积比为90:10的乙腈和纯化水混合均匀，按照体积比为0.5％加入三氟乙酸，混合均匀，用0.45μm的过滤膜抽滤，滤液超声排气10min；
(2)将药物球囊导管的球囊部分用步骤(1)得到的流动相浸没，用球囊扩充压力泵充压以展开球囊，加盖超声浸提10min后，将所有溶液转移到10mL容量瓶内，用步骤(1)得到的流动相定容到刻度线，摇匀，密封。
(3)用0.45μm的针筒式过滤器过滤溶液，HPLC进样测试，色谱条件为：
柱温：30℃，
流速：2.0mL/min，
进样量：50μL，
示差折光检测器：RI，检测池温度40℃
环境条件：温度：20±5℃，湿度：小于70％RH；
(4)按上述条件进样分析，记录色谱图，定性说明聚乙二醇纯物质在该色谱体系的出峰位置、峰形以及该药物涂层中各物质的分离状况。
实施例7
待检测样品为带有药物涂层的球囊导管，该药物涂层中含有具有治疗作用的药物紫杉醇和辅料，辅料中包含一定量的聚乙二醇以及硬脂酸，聚乙二醇的分子量为2000。
色谱设备：依利特EC2000液相色谱仪和SHODEX RI-201H示差折光检测器，依利特P230高压恒流泵，ZW色谱柱温箱，EC2000色谱数据工作站；
色谱柱：商品名为SRT SEC的反相硅胶键合色谱柱(美国赛分科技有限公司)，规格为5μm7.8mm×300mm；
流动相：乙腈：色谱纯；纯水：纯度至少达到ISO 3696所规定的一级；三氟乙酸，色谱纯，纯度>99.9％。
(1)流动相制备：分别准确量取体积比为10:90的乙腈和纯化水混合均匀，按照体积比为1％加入三氟乙酸，混合均匀，用0.45μm的过滤膜抽滤，滤液超声排气10min；
(2)将药物球囊导管的球囊部分用步骤(1)得到的流动相浸没，用球囊扩充压力泵充压以展开球囊，加盖超声浸提10min后，将所有溶液转移到10mL容量瓶内，用步骤(1)得到的流动相定容到刻度线，摇匀，密封。
(3)用0.45μm的针筒式过滤器过滤溶液，HPLC进样测试，色谱条件为：
柱温：30℃，
流速：0.5mL/min，
进样量：100μL，
示差折光检测器：RI，检测池温度40℃
环境条件：温度：20±5℃，湿度：小于70％RH；
(4)按上述条件进样分析，记录色谱图，定性说明聚乙二醇纯物质在该色谱体系的出峰位置。
实施例8
待检测样品为带有药物涂层的球囊导管，该药物涂层中含有具有治疗作用的药物紫杉醇和辅料，辅料中包含一定量的聚乙二醇，分子量为3000。
色谱设备：依利特EC2000液相色谱仪和SHODEX RI-201H示差折光检测器，依利特P230高压恒流泵，ZW色谱柱温箱，EC2000色谱数据工作站；
色谱柱：商品名为Zenix SEC的反相硅胶键合色谱柱(美国赛分科技有限公司)，规格为3μm7.8mm×300mm；
流动相：乙腈：色谱纯；纯水：纯度至少达到ISO 3696所规定的一级；磷酸，色谱纯，纯度>99.9％。
(1)流动相制备：分别准确量取体积比为95:5的乙腈和纯化水混合均匀，按照体积比为0.5％加入磷酸，混合均匀，用0.45μm的过滤膜抽滤，滤液超声排气10min；
(2)将药物球囊导管的球囊部分用步骤(1)得到的流动相浸没，用球囊扩充压力泵充压以展开球囊，加盖超声浸提10min后，将所有溶液转移到10mL容量瓶内，用步骤(1)得到的流动相定容到刻度线，摇匀，密封。
(3)用1.0μm的针筒式过滤器过滤溶液，HPLC进样测试，色谱条件为：
柱温：50℃，
流速：0.1mL/min，
进样量：5μL，
示差折光检测器：RI，检测池温度40℃
环境条件：温度：20±5℃，湿度：小于70％RH；
(4)按上述条件进样分析，记录色谱图，定性说明聚乙二醇纯物质在该色谱体系的出峰位置、峰形以及该药物涂层中各物质的分离状况。
实施例9
待检测样品为带有药物涂层的球囊导管，该药物涂层中含有具有治疗作用的药物紫杉醇和辅料，辅料中包含一定量的聚乙二醇以及硬脂酸镁，聚乙二醇的分子量为4000。
色谱设备：依利特EC2000液相色谱仪和SHODEX RI-201H示差折光检测器，依利特P230高压恒流泵，ZW色谱柱温箱，EC2000色谱数据工作站；
色谱柱：商品名为Zenix SEC的反相硅胶键合色谱柱(美国赛分科技有限公司)，规格为3μm7.8mm×300mm；
流动相：乙腈：色谱纯；纯水：纯度至少达到ISO 3696所规定的一级；甲酸，色谱纯，纯度>99.9％。
(1)流动相制备：分别准确量取体积比为50:50的乙腈和纯化水混合均匀，按照体积比为0.02％加入甲酸，混合均匀，用0.45μm的过滤膜抽滤，滤液超声排气10min；
(2)将药物球囊导管的球囊部分用步骤(1)得到的流动相浸没，用球囊扩充压力泵充压以展开球囊，加盖超声浸提10min后，将所有溶液转移到10mL容量瓶内，用步骤(1)得到的流动相定容到刻度线，摇匀，密封。
(3)用0.2μm的针筒式过滤器过滤溶液，HPLC进样测试，色谱条件为：
柱温：10℃，
流速：1.5mL/min，
进样量：80μL，
示差折光检测器：RI，检测池温度40℃
环境条件：温度：20±5℃，湿度：小于70％RH；
(4)按上述条件进样分析，记录色谱图，定性说明聚乙二醇纯物质在该色谱体系的出峰位置、峰形以及该药物涂层中各物质的分离状况。
实施例10
待检测样品为带有药物涂层的球囊导管，该药物涂层中含有具有治疗作用的药物紫杉醇和辅料，辅料中包含一定量的聚乙二醇，分子量为6000。
色谱设备：依利特EC2000液相色谱仪和SHODEX RI-201H示差折光检测器，依利特P230高压恒流泵，ZW色谱柱温箱，EC2000色谱数据工作站；
色谱柱：商品名为SRT SEC的反相硅胶键合色谱柱(美国赛分科技有限公司)，规格为5μm7.8mm×300mm；
流动相：乙腈：色谱纯；纯水：纯度至少达到ISO 3696所规定的一级；甲基磺酸，色谱纯，纯度>99.9％。
(1)流动相制备：分别准确量取体积比为5:95的乙腈和纯化水混合均匀，按照体积比为0.05％加入甲基磺酸，混合均匀，用0.45μm的过滤膜抽滤，滤液超声排气10min；
(2)将药物球囊导管的球囊部分用步骤(1)得到的流动相浸没，用球囊扩充压力泵充压以展开球囊，加盖超声浸提10min后，将所有溶液转移到10mL容量瓶内，用步骤(1)得到的流动相定容到刻度线，摇匀，密封。
(3)用1.0μm的针筒式过滤器过滤溶液，HPLC进样测试，色谱条件为：
柱温：80℃，
流速：0.4mL/min，
进样量：10μL，
示差折光检测器：RI，检测池温度40℃
环境条件：温度：20±5℃，湿度：小于70％RH；
(4)按上述条件进样分析，记录色谱图，定性说明聚乙二醇纯物质在该色谱体系的出峰位置、峰形以及该药物涂层中各物质的分离状况。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种聚乙二醇含量的检测方法，用于带有药物涂层的球囊导管中聚乙二醇含量的测定，所述药物涂层中包括具有治疗作用的药物紫杉醇和辅料，所述辅料包含聚乙二醇，其特征在于，主要包括以下步骤：
采用体积排阻色谱柱，将与样品中的待测聚乙二醇分子量相等、分散度相同的聚乙二醇标准品，用流动相溶解并稀释，配制成一定浓度梯度的系列标准液；
将所述系列标准液过滤后分别进样，记录检测器的峰信号，按外标法，以不同浓度的聚乙二醇标准溶液的峰面积与对应的标准溶液的浓度做线性回归，得出校准曲线，聚乙二醇的标准回归曲线方程为：
Y=aX＋b，
其中，a为校准曲线的斜率，b为校准曲线的截距，Y为聚乙二醇在检测器输出的信号峰面积，X为聚乙二醇浓度，单位为μg/mL；
将待测样品用流动相溶解，过滤后进样，利用所述标准回归曲线方程以及样品中聚乙二醇在检测器输出的信号峰面积，计算样品中聚乙二醇的含量；
所述流动相为含离子对溶剂的乙腈水溶液，所述乙腈水溶液中乙腈的体积分数为5~95%；所述离子对溶剂为磷酸、三氟乙酸、甲酸、乙酸、高氯酸或甲基磺酸，所述离子对溶剂在流动相中的体积分数为0.02~1%；所述流动相经过过滤和排气处理；
所述体积排阻色谱柱为Zenix SEC色谱柱或SRT SEC色谱柱，当所述体积排阻色谱柱为Zenix SEC色谱柱时，所述Zenix SEC色谱柱的填料的粒径为3μm，孔径为80Å、100Å或300Å；当所述体积排阻色谱柱为SRT SEC色谱柱时，所述SRT SEC色谱柱的填料的粒径为5μm，孔径为150Å或500Å。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述体积排阻色谱柱的色谱条件为：流动相流速范围为0.1～2mL/min；柱温小于或等于80℃；进样量范围为5～100μL。
3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述流动相流速范围为0.5～1mL/min；柱温范围为10～30℃；进样量范围为20～50μL。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述检测器为示差折光检测器。
5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述用流动相溶解时采用超声加速并确保溶解完全；
所述过滤为采用0.2～1μm水系过滤膜过滤。
6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述过滤为采用0.45μm水系过滤膜过滤。
7.权利要求1至6任一项所述的检测方法在检测药品或载药医疗器械中聚乙二醇含量中的应用。
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