CN105535942B - 一种赖脯胰岛素硫酸鱼精蛋白制剂的制备方法及其制备的赖脯胰岛素硫酸鱼精蛋白制剂 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种赖脯胰岛素硫酸鱼精蛋白制剂的制备方法，所述赖脯胰岛素硫酸鱼精蛋白制剂包含的组分及其浓度为：赖脯胰岛素3.47mg/ml，硫酸鱼精蛋白0.095～0.28mg/ml，锌0.025～0.05mg/ml，苯酚0.5～1.0mg/ml，间甲酚1.5～2.5mg/ml，甘油16mg/ml，磷酸氢二钠2‑4mg/ml；所述制备方法包括将赖脯胰岛素酸性溶液与硫酸鱼精蛋白碱性溶液溶液混合后进行结晶，将间甲酚甘油溶液加入结晶完全的结晶液中，混合均匀，即得。该制备方法耗时短，得到的产品质量稳定。

Description

一种赖脯胰岛素硫酸鱼精蛋白制剂的制备方法及其制备的赖 脯胰岛素硫酸鱼精蛋白制剂
技术领域
本发明属于生物医药和制剂学领域，具体涉及一种赖脯胰岛素硫酸鱼精蛋白制剂的制备方法及其制备的赖脯胰岛素硫酸鱼精蛋白制剂。
背景技术
糖尿病(Diabetes Mellitus)是一种因胰岛素绝对或相对不足或靶细胞对胰岛素敏感性减低引起的以糖代谢紊乱为主的慢性综合性疾病，其严重影响患者的健康和生活质量。随着经济水平提高和物质条件改善，糖尿病发病率呈持续上升趋势。据国际糖病联盟(International Diabetes Federation,IDF)统计，20世纪90年代全球糖尿病患者约为1.00亿人，2007年该数字已经迅速增长到2.46亿人。预计2015年全球约有4.15亿糖尿病患者，到2040年糖尿病患者将升至6.42亿。胰岛素及胰岛素类似物制剂成为糖尿病治疗的主要手段。
糖尿病治疗常用的胰岛素制剂从成分上分，包括普通胰岛素，低精蛋白胰岛素，胰岛素锌悬浮液，精蛋白锌胰岛素等。按照作用时间长短，胰岛素制剂则可分为速效胰岛素、中效胰岛素、长效胰岛素和超长效胰岛素。快速作用的胰岛素制剂通常为胰岛素溶液，而缓慢作用的胰岛素可以为混悬液，其含有通过单独加入锌盐或加入精蛋白或加入两者的组合所析出的晶状或无定性形式的胰岛素。
由于糖尿病患者使用胰岛素治疗需要十几年甚至几十年，对胰岛素及胰岛素类似物制剂的安全和质量提出了更高的要求。
赖脯胰岛素是将人胰岛素B28位与B29位氨基酸互换而得。赖脯胰岛素属于速效胰岛素类似物，皮下注射后迅速解离为单体入血，比内源性人胰岛素起效更快、达峰更早，作用时间更短，更加接近人体生理胰岛素的分泌，特别适合糖尿病病人餐后血糖的控制。赖脯胰岛素硫酸鱼精蛋白制剂是主要由赖脯胰岛素和锌盐、硫酸鱼精蛋白等组成的混悬液，其中赖脯胰岛素以溶解和结晶沉淀的形式同时存在。因此，该制剂经皮下注射后，赖脯胰岛素离解释放较单体溶液制剂缓慢，具有作用更为持久的优势。
公开号CN101035557A的中国发明专利申请(公开日2007年9月12日)公开了另一种胰岛素类似物——门冬胰岛素的硫酸鱼精蛋白混悬液及其制备方法。该混悬液制剂包含了门冬胰岛素、硫酸鱼精蛋白、锌盐、间甲酚、苯酚、氯化钠、甘油，通过如下方法制备：1)将计算量的磷酸氢二钠和氯化钠溶液于水中，加入苯酚、间甲酚、甘油和氢氧化钠，调溶液的pH约为9，定容得到溶液I；2)将计算量的氯化钠、间甲酚、苯酚和甘油溶于水，然后加入计算量的硫酸精蛋白溶液及门冬胰岛素，定容得到溶液II；3)将溶液I和溶液II混合，调节pH至约7.2，定容。上述制剂的组分和制备方法与本发明不同。
公开号CN1266371A的中国发明专利申请(公开日2000年9月13日)公开了一种赖脯胰岛素硫酸鱼精蛋白混悬液的配制方法，该混悬液包含了赖脯胰岛素、硫酸鱼精蛋白、氧化锌、苯酚、间甲酚、磷酸氢二钠和甘油。所述配制方法的操作为：1)先将计算量的赖脯锌胰岛素结晶悬浮于含有苯酚、间甲酚、甘油和氧化锌的水溶液中，并调pH至2.8-3.0，搅拌使胰岛素结晶溶解；然后将该溶液的pH调至7.4-7.7，加入pH＝7.2的磷酸氢二钠溶液，调溶液的pH至7.4，得到赖脯胰岛素溶液。2)将计算量的鱼精蛋白硫酸盐溶解于含有苯酚、间甲酚和甘油的水溶液中，加入计算量的固体磷酸氢二钠，调溶液的pH至7.4，得到鱼精蛋白溶液。3)在15℃下，将鱼精蛋白溶液加入到赖脯胰岛素溶液中，15℃下、未扰乱下孵育24小时，得到赖脯胰岛素鱼精蛋白混合液。4)将赖脯胰岛素鱼精蛋白混合液与赖脯胰岛素溶液按一定的比例混合均匀，得到赖脯胰岛素鱼精蛋白制剂。该方法配制过程繁琐，结晶时间长，配置周期也相应延长。另外，该申请还披露，以磷酸氢二钠为缓冲剂的赖脯胰岛素悬浮制剂的稳定性不及以TRIP(2-氨基-2-羟基甲基-1,3-丙二醇和它药学上课接受的盐)为缓冲剂的悬浮制剂。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供一种稳定的赖脯胰岛素硫酸鱼精蛋白制剂的制备方法。该方法操作简便、快捷，从而缩短配制周期、减少工业能耗。通过该方法制备得到的赖脯胰岛素硫酸鱼精蛋白制剂稳定性好，保证患者的用药安全。
为了实现上述发明目的，本发明采用了如下的技术方案：
一种赖脯胰岛素硫酸鱼精蛋白制剂的制备方法，所述赖脯胰岛素硫酸鱼精蛋白制剂包含的组分及其浓度为：
赖脯胰岛素3.47mg/ml，硫酸鱼精蛋白0.095～0.28mg/ml，锌0.025～0.05mg/ml，苯酚0.5～1.0mg/ml，间甲酚1.5～2.5mg/ml，甘油16mg/ml，磷酸氢二钠2～4mg/ml；
所述制备方法包括如下步骤：
1)配制准备液：称取计算量的氧化锌、苯酚和磷酸氢二钠；将氧化锌用尽量少的0.1mol/L盐酸溶解，得到锌准备液；将磷酸氢二钠用尽量少的水溶解，得到磷酸氢二钠准备液；将苯酚用尽量少的水溶解，得到苯酚准备液；
2)配制赖脯胰岛素酸性溶液：称取计算量的赖脯胰岛素，加水制成混悬液，加入0.1mol/L的盐酸使溶液澄清，加入所述锌准备液，搅拌，调pH＝3～4，定容至制剂总体积的25％～37.5％，得到赖脯胰岛素酸性溶液；
3)配制硫酸鱼精蛋白碱性溶液：称取计算量的硫酸鱼精蛋白，加水溶胀，加入所述磷酸氢二钠准备液和苯酚准备液，调pH＝8.0～9.0，定容至制剂总体积的25％～37.5％，得到硫酸鱼精蛋白碱性溶液；
4)将所述硫酸鱼精蛋白碱性溶液加入所述赖脯胰岛素酸性溶液中，搅拌均匀，调pH≈7.4，得到结晶液，置于20℃～30℃下搅拌结晶3～6h；
5)配制间甲酚甘油溶液：称取计算量的间甲酚和甘油，将间甲酚加入甘油中，搅拌溶解，加入水，调pH＝7.4，定容至溶液的体积与所述结晶液的体积总和为所述赖脯胰岛素硫酸鱼精蛋白制剂的总体积，得到间甲酚甘油溶液；
6)将所述间甲酚甘油溶液加入结晶完成后的结晶液中，搅拌均匀，分装，密封，即得。
优选的，所述赖脯胰岛素酸性溶液和所述硫酸鱼精蛋白碱性溶液体积相等。
优选的，所述步骤3)中，硫酸鱼精蛋白加30～40℃水溶胀。
通过上述制备方法制备得到的所述赖脯胰岛素硫酸鱼精蛋白制剂中，优选的：
硫酸鱼精蛋白的浓度为0.19～0.28mg/ml；
锌的浓度为0.025～0.0305mg/ml；
苯酚的浓度为0.715～0.890mg/ml；
间甲酚的浓度为1.76～2.20mg/ml；
磷酸氢二钠的浓度为2mg/ml。
作为一种优选的实施方式，本发明提供一种赖脯胰岛素硫酸鱼精蛋白制剂的制备方法，所述赖脯胰岛素硫酸鱼精蛋白制剂包含的组分及其浓度为：
赖脯胰岛素3.47mg/ml，硫酸鱼精蛋白0.19～0.28mg/ml，锌0.025～0.0305mg/ml，苯酚0.715～0.890mg/ml，间甲酚1.76～2.20mg/ml，甘油16mg/ml，磷酸氢二钠2mg/ml；
所述制备方法包括如下步骤：
1)配制准备液：称取计算量的氧化锌、苯酚、间甲酚、甘油和磷酸氢二钠；将氧化锌用尽量少的0.1mol/L盐酸溶解，得到锌准备液；将磷酸氢二钠加用尽量少的水溶解，得到磷酸氢二钠准备液；将苯酚用尽量少的水溶解，得到苯酚准备液；
2)配制赖脯胰岛素酸性溶液：称取计算量的赖脯胰岛素，加水制成混悬液，加入0.1mol/L的盐酸使溶液澄清，加入所述锌准备液，搅拌，调pH＝3～4，定容至制剂总体积的37.5％，得到赖脯胰岛素酸性溶液；
3)配制硫酸鱼精蛋白碱性溶液：称取计算量的硫酸鱼精蛋白，加30～40℃水溶胀，加入所述磷酸氢二钠准备液和苯酚准备液，调pH至8.0～9.0，定容至制剂总体积的37.5％，得到硫酸鱼精蛋白碱性溶液；
4)将所述硫酸鱼精蛋白碱性溶液加入所述赖脯胰岛素酸性溶液中，搅拌均匀，调pH≈7.4，得到结晶液，置于20℃～30℃下搅拌结晶3～6h；
5)配制间甲酚甘油溶液：称取计算量的间甲酚和甘油，将间甲酚加入甘油中，搅拌溶解，加入水，调pH＝7.4，定容至溶液的体积与所述结晶液的体积总和为所述赖脯胰岛素硫酸鱼精蛋白制剂的总体积，得到间甲酚甘油溶液；
6)将所述间甲酚甘油溶液加入结晶完成后的结晶液中，搅拌均匀，分装，密封，即得。
本发明的另一个目的在于提供一种赖脯胰岛素硫酸鱼精蛋白制剂，所述赖脯胰岛素硫酸鱼精蛋白制剂包含的组分及其浓度为：赖脯胰岛素3.47mg/ml，硫酸鱼精蛋白0.095～0.28mg/ml，锌0.025～0.05mg/ml，苯酚0.5～1.0mg/ml，间甲酚1.5～2.5mg/ml，甘油16mg/ml，磷酸氢二钠2～4mg/ml；所述赖脯胰岛素硫酸鱼精蛋白制剂通过上述制备方法制备得到。
本申请说明书中如果没有特殊说明，“水”是经过纯化处理的符合注射剂要求的水。“≈”表示pH数值变化范围在±0.1，即“pH≈7.4”表示调节pH在7.3～7.5之间都是可以接受的。在制备氧化锌、苯酚和磷酸氢二钠准备液时，加入“尽可能少”溶剂是指能够使上述溶质溶解的最少的溶剂量。
本发明所述的赖脯胰岛素硫酸鱼精蛋白制剂的制备方法中，pH调节可以采用本领域常规的酸或碱的水溶液，如盐酸、氢氧化钠、氢氧化钾或氨水。
公开号CN1266371A的中国发明专利申请记载的现有技术，以含有甘油、苯酚和间甲酚的水溶液来分别制备赖脯胰岛素溶液和鱼精蛋白溶液，再将两者混合得到结晶液，结晶时间长到24小时。经过发明人的大量研究发现，甘油会降低结晶形成的速度。分析原因，可能是由于甘油增加胰岛素类似物的溶解度，使得赖脯胰岛素在溶液中难以饱和，析出结晶较为缓慢。但间甲酚难溶于水，需要借助甘油进行溶解，所以甘油的加入方式为与间甲酚混合后一起加入到结晶完成后的溶液中。这样，既可以调节渗透压又不干扰晶体的形成。因此，本发明相较现有技术，结晶时间由24小时缩短到3～6小时。显微镜下观察，本发明制备得到的制剂中，赖脯胰岛素呈棒状晶体。另外，本发明所述制备方法中，各组分的准备液配制过程简单，操作简便。
公开号CN1266371A的专利申请中还披露采用磷酸氢二钠为缓冲剂，不利于制剂的稳定性。但是本发明的试验例结果表明，磷酸氢二钠的浓度对结晶的形成较为关键，低浓度磷酸氢二钠不利于结晶的形成。
附图说明
以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：
图1显示了实施例1结晶液在显微镜下400倍放大照片。
图2显示了实施例2结晶液在显微镜下400倍放大照片。
图3显示了实施例3结晶液在显微镜下400倍放大照片。
图4显示了实施例4结晶液在显微镜下400倍放大照片。
图5显示了实施例5结晶液在显微镜下400倍放大照片。
图6显示了试验例1的结晶液结晶开始后不同时间在显微镜下400倍的放大照片。其中，6A是3h时的结晶液放大照片，6B是6h时的结晶液放大照片，6C是12h时的结晶液放大照片，6D是24h时的结晶液放大照片。
具体实施方式
以下参照具体的实施例来说明本发明。本领域技术人员能够理解，这些实施例仅用于说明本发明，其不以任何方式限制本发明的范围。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的药材原料、试剂材料等，如无特殊说明，均为市售购买产品。其中，部分试剂和原料购买情况如下：
赖脯胰岛素：自制
氧化锌：四川金山制药有限公司
甘油：湖南尔康制药股份有限公司
间甲酚：斯百全化学(上海)有限公司
苯酚：斯百全化学(上海)有限公司
磷酸氢二钠：湖南九典制药股份有限公司
硫酸鱼精蛋白：斯百全化学(上海)有限公司
氢氧化钠：成都华邑药用辅料制造有限责任公司
盐酸：成都华邑药用辅料制造有限责任公司
水：自制注射用水
实施例1一种赖脯胰岛素硫酸鱼精蛋白制剂(25R)的制备方法
所述制剂共1000ml，包含：赖脯胰岛素：3.47mg/ml，硫酸鱼精蛋白：0.28mg/ml、锌：0.025mg/ml、苯酚：0.715mg/ml、间甲酚：1.76mg/ml、甘油：16mg/ml、磷酸氢二钠：2.0mg/ml，其余为水；通过如下方法制备：
1)配制准备液：称取0.715g苯酚、2g磷酸氢二钠和计算量的氧化锌；将氧化锌用尽量少的0.1mol/L盐酸溶解，得到锌准备液；将磷酸氢二钠用尽量少的水溶解，得到磷酸氢二钠准备液；将苯酚用尽量少的水溶解，得到苯酚准备液；
2)配制赖脯胰岛素酸性溶液：称取3.47g的赖脯胰岛素，加水制成混悬液，加入0.1mol/L的盐酸使溶液澄清，加入所述锌准备液，搅拌，加水至约300ml，调pH＝3～4，用水定容至375ml，得到赖脯胰岛素酸性溶液；
3))配制硫酸鱼精蛋白碱性溶液：称0.28g的硫酸鱼精蛋白，加30～40℃水溶胀，加入所述磷酸氢二钠准备液和苯酚准备液，加水至约300ml，调pH至8.0～9.0，用水定容至375ml，得到硫酸鱼精蛋白碱性溶液；
4)将所述硫酸鱼精蛋白碱性溶液加入所述赖脯胰岛素酸性溶液中，搅拌均匀，调pH≈7.4，得到结晶液，结晶液体积为702ml，置于20℃环境中，搅拌结晶3h；显微镜检视其结晶情况，见图1；
5)配制间甲酚甘油溶液：称取1.76g间甲酚和16g甘油，将间甲酚加入甘油中，搅拌溶解，加水至约250ml，调pH＝7.4，用水定容至298ml，得到间甲酚甘油溶液；
6)将所述间甲酚甘油溶液加入结晶完成的结晶液中，搅拌均匀，分装，密封，即得。
实施例2一种赖脯胰岛素硫酸鱼精蛋白制剂(50R)的制备方法
所述制剂共1000ml，包含：赖脯胰岛素：3.47mg/ml，硫酸鱼精蛋白：0.19mg/ml、锌：0.0305mg/ml、苯酚：0.89mg/ml、间甲酚：2.20mg/ml、甘油：16mg/ml、磷酸氢二钠：2.0mg/ml，其余为水；通过如下方法制备：
1)配制准备液：称取0.89g苯酚、2g磷酸氢二钠和计算量的氧化锌；将氧化锌用尽量少的0.1mol/L盐酸溶解，得到锌准备液；将磷酸氢二钠用尽量少的水溶解，得到磷酸氢二钠准备液；将苯酚用尽量少的水溶解，得到苯酚准备液；
2)配制赖脯胰岛素酸性溶液：称取3.47g的赖脯胰岛素，加水制成混悬液，加入0.1mol/L的盐酸使溶液澄清，加入所述锌准备液，搅拌，加水至约200ml，调pH＝3～4，用水定容至250ml，得到赖脯胰岛素酸性溶液；
3)配制硫酸鱼精蛋白碱性溶液：称0.19g的硫酸鱼精蛋白，加30～40℃水溶胀，加入所述磷酸氢二钠准备液和苯酚准备液，加水至约200ml，调pH至8.0～9.0，用水定容至250ml，得到硫酸鱼精蛋白碱性溶液；
4)将所述硫酸鱼精蛋白碱性溶液加入所述赖脯胰岛素酸性溶液中，搅拌均匀，测定pH≈7.4，得到结晶液，结晶液体积为500ml，置于30℃环境中，搅拌结晶6h；显微镜检视其结晶情况，见图2；
5)配制间甲酚甘油溶液：称取2.20g间甲酚和16g甘油，将间甲酚加入甘油中，搅拌溶解，加水至约400ml，调pH＝7.5，用水定容至500ml，得到间甲酚甘油溶液；
6)将所述间甲酚甘油溶液加入结晶完成的结晶液中，搅拌均匀，分装，密封，即得。
实施例3一种赖脯胰岛素硫酸鱼精蛋白制剂(75R)的制备方法
所述制剂共1000ml，包含：赖脯胰岛素：3.47mg/ml，硫酸鱼精蛋白：0.10mg/ml、锌：0.025mg/ml、苯酚：0.5mg/ml、间甲酚：2.5mg/ml、甘油：16mg/ml、磷酸氢二钠：2.5mg/ml，其余为水；通过如下方法制备：
1)配制准备液：称取0.5g苯酚、2.5g磷酸氢二钠和计算量的氧化锌；将氧化锌用尽量少的0.1mol/L盐酸溶解，得到锌准备液；将磷酸氢二钠用尽量少的水溶解，得到磷酸氢二钠准备液；将苯酚用尽量少的水溶解，得到苯酚准备液；
2)配制赖脯胰岛素酸性溶液：称取3.47g的赖脯胰岛素，加水制成混悬液，加入0.1mol/L的盐酸使溶液澄清，加入所述锌准备液，搅拌，加水至约200ml，调pH＝3～4，用水定容至250ml，得到赖脯胰岛素酸性溶液；
3)配制硫酸鱼精蛋白碱性溶液：称0.1g的硫酸鱼精蛋白，加30～40℃水溶胀，加入所述磷酸氢二钠准备液和苯酚准备液，加水至约200ml，调pH至8.0～9.0，用水定容至250ml，得到硫酸鱼精蛋白碱性溶液；
4)将所述硫酸鱼精蛋白碱性溶液加入所述赖脯胰岛素酸性溶液中，搅拌均匀，调pH≈7.4，得到结晶液，结晶液的体积为503ml，置于25℃环境中，搅拌结晶4h；显微镜检视其结晶情况，见图3；
5)配制间甲酚甘油溶液：称取2.5g间甲酚和16g甘油，将间甲酚加入甘油中，搅拌溶解，加水至约400ml，调pH＝7.5，用水定容至497ml，得到间甲酚甘油溶液；
6)将所述间甲酚甘油溶液加入结晶完成的结晶液中，搅拌均匀，分装，密封，即得。
实施例4一种赖脯胰岛素硫酸鱼精蛋白制剂的制备方法
所述制剂共1000ml，包含：赖脯胰岛素：3.47mg/ml，硫酸鱼精蛋白：0.20mg/ml、锌：0.0305mg/ml、苯酚：0.9mg/ml、间甲酚：2.20mg/ml、甘油：16mg/ml、磷酸氢二钠：3.78mg/ml，其余为水；通过如下方法制备：
1)配制准备液：称取0.9g苯酚、3.78g磷酸氢二钠和计算量的氧化锌；将氧化锌用尽量少的0.1mol/L盐酸溶解，得到锌准备液；将磷酸氢二钠用尽量少的水溶解，得到磷酸氢二钠准备液；将苯酚用尽量少的水溶解，得到苯酚准备液；
2)配制赖脯胰岛素酸性溶液：称取3.47g的赖脯胰岛素，加水制成混悬液，加入0.1mol/L的盐酸使溶液澄清，加入所述锌准备液，搅拌，加水至约200ml，调pH＝3～4，定容至250ml，得到赖脯胰岛素酸性溶液；
3)配制硫酸鱼精蛋白碱性溶液：称0.2g的硫酸鱼精蛋白，加30～40℃水溶胀，加入所述磷酸氢二钠准备液和苯酚准备液，加水至约250ml，调pH至8.0～9.0，用水定容至300ml，得到硫酸鱼精蛋白碱性溶液；
4)将所述硫酸鱼精蛋白碱性溶液加入所述赖脯胰岛素酸性溶液中，搅拌均匀，调pH≈7.4，得到结晶液，结晶液的体积为553ml，置于20℃环境中，搅拌结晶3h；显微镜检视其结晶情况，见图4；
5)配制间甲酚甘油溶液：称取2.2g间甲酚和16g甘油，将间甲酚加入甘油中，搅拌溶解，加水至约350ml，调pH＝7.5，用水定容至447ml，得到间甲酚甘油溶液；
6)将所述间甲酚甘油溶液加入所述结晶液中，搅拌均匀，分装，密封，即得。
实施例5一种赖脯胰岛素硫酸鱼精蛋白制剂的制备方法
所述制剂共1000ml，包含：赖脯胰岛素：3.47mg/ml，硫酸鱼精蛋白：0.30mg/ml、锌：0.025mg/ml、苯酚：0.7mg/ml、间甲酚：1.8mg/ml、甘油：16mg/ml、磷酸氢二钠：3.78mg/ml，其余为水；通过如下方法制备：
1)配制准备液：称取0.7g苯酚、3.78g磷酸氢二钠和计算量的氧化锌；将氧化锌用尽量少的0.1mol/L盐酸溶解，得到锌准备液；将磷酸氢二钠用尽量少的水溶解，得到磷酸氢二钠准备液；将苯酚用尽量少的水溶解，得到苯酚准备液；
2)配制赖脯胰岛素酸性溶液：称取3.47g的赖脯胰岛素，加水制成混悬液，加入0.1mol/L的盐酸使溶液澄清，加入所述锌准备液，搅拌，加水至约280ml，调pH＝3～4，用水定容至350ml，得到赖脯胰岛素酸性溶液；
3)配制硫酸鱼精蛋白碱性溶液：称0.3g的硫酸鱼精蛋白，加30～40℃水溶胀，加入所述磷酸氢二钠准备液和苯酚准备液，加水至约280ml，调pH至8.0～9.0，用水定容至350ml，得到硫酸鱼精蛋白碱性溶液；
4)将所述硫酸鱼精蛋白碱性溶液加入所述赖脯胰岛素酸性溶液中，搅拌均匀，测得pH≈7.4，得到结晶液，结晶液的体积为700ml，置于30℃环境中，搅拌结晶3h；显微镜检视其结晶情况，见图5；
5)配制间甲酚甘油溶液：称取1.8g间甲酚和16g甘油，将间甲酚加入甘油中，搅拌溶解，加水至约240ml，调pH＝7.5，用水定容至300ml，得到间甲酚甘油溶液；
6)将所述间甲酚甘油溶液加入所述结晶完成后的结晶液中，搅拌均匀，分装，密封，即得。
对比例1一种赖脯胰岛素硫酸鱼精蛋白制剂的制备方法
所述制剂共1000ml，包含：赖脯胰岛素：3.47mg/ml，硫酸鱼精蛋白：0.28mg/ml、锌：0.025mg/ml、苯酚：0.715mg/ml、间甲酚：1.76mg/ml、甘油：16mg/ml、磷酸氢二钠：2.0mg/ml，其余为水；按照公开号CN1266371A的中国发明专利申请实施例6所述的方法制备。
在15℃下，静置结晶，分别在结晶开始后3h，6h，12h和24h取结晶液显微镜下观察结晶情况。结果见表1和图6A-6D。
表1对比例1不同结晶时间结晶情况
试验例实施例1和对比例1制备的赖脯胰岛素硫酸鱼精蛋白制剂稳定性考察
按照2015药典四部9001“原料药物与制剂稳定性试验指导原则”，对实施例1和对比例1制备的赖脯胰岛素硫酸鱼精蛋白制剂进行稳定性考察。考察其在40℃和4500±500LX条件下30天的稳定性情况，主要对含量、A21、其他有关物质、可溶性赖脯胰岛素、高分子蛋白进行了考察。
结果：见表2。
结论：
表2的数据表明，本发明实施例1和对比例1所得制剂稳定性良好，且无显著性差异。
通过试验例1和试验例2可知，与公开号CN1266371A的中国发明专利申请披露的方法比较，本发明所述的赖脯胰岛素硫酸鱼精蛋白制剂的制备方法操作更简便，耗时显著缩短；两种方法制备得到的制剂，稳定性相当。因此，与现有技术相较，本发明提供的制备方法在保证产品质量的前提下效率更高、成本更低。
表2稳定性考察结果
以上对本发明具体实施方式的描述并不限制本发明，本领域技术人员可以根据本发明作出各种改变或变形，只要不脱离本发明的精神，均应属于本发明所附权利要求的范围。

Claims (7)

1.一种赖脯胰岛素硫酸鱼精蛋白制剂的制备方法，所述赖脯胰岛素硫酸鱼精蛋白制剂包含的组分及其浓度为：
赖脯胰岛素3.47mg/ml，硫酸鱼精蛋白0.095～0.28mg/ml，锌0.025～0.05mg/ml，苯酚0.5～1.0mg/ml，间甲酚1.5～2.5mg/ml，甘油16mg/ml，磷酸氢二钠2～4mg/ml；
所述制备方法的步骤是：
1)配制准备液：称取计算量的氧化锌、苯酚和磷酸氢二钠；将氧化锌用尽量少的0.1mol/L盐酸溶解，得到锌准备液；将磷酸氢二钠用尽量少的水溶解，得到磷酸氢二钠准备液；将苯酚用尽量少的水溶解，得到苯酚准备液；
2)配制赖脯胰岛素酸性溶液：称取计算量的赖脯胰岛素，加水制成混悬液，加入0.1mol/L的盐酸使溶液澄清，加入所述锌准备液，搅拌，调pH＝3～4，定容至制剂总体积的25％～37.5％，得到赖脯胰岛素酸性溶液；
3)配制硫酸鱼精蛋白碱性溶液：称取计算量的硫酸鱼精蛋白，加水溶胀，加入所述磷酸氢二钠准备液和苯酚准备液，调pH＝8.0～9.0，定容至制剂总体积的25％～37.5％，得到硫酸鱼精蛋白碱性溶液；
4)将所述硫酸鱼精蛋白碱性溶液加入所述赖脯胰岛素酸性溶液中，搅拌均匀，调pH≈7.4，得到结晶液，置于20℃～30℃下搅拌结晶3～6h；所述赖脯胰岛素酸性溶液和所述硫酸鱼精蛋白碱性溶液体积相等；
5)配制间甲酚甘油溶液：称取计算量的间甲酚和甘油，将间甲酚加入甘油中，搅拌溶解，加入水，调pH＝7.4，定容至溶液的体积与所述结晶液的体积总和为所述赖脯胰岛素硫酸鱼精蛋白制剂的总体积，得到间甲酚甘油溶液；
6)将所述间甲酚甘油溶液加入结晶完成后的结晶液中，搅拌均匀，分装，密封，即得。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤3)中，硫酸鱼精蛋白加30～40℃水溶胀。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述赖脯胰岛素硫酸鱼精蛋白制剂中，硫酸鱼精蛋白的浓度为0.19～0.28mg/ml。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述赖脯胰岛素硫酸鱼精蛋白制剂中，锌的浓度为0.025～0.0305mg/ml。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述赖脯胰岛素硫酸鱼精蛋白制剂中，苯酚的浓度为0.715～0.890mg/ml。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述赖脯胰岛素硫酸鱼精蛋白制剂中，间甲酚的浓度为1.76～2.20mg/ml。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述赖脯胰岛素硫酸鱼精蛋白制剂中，磷酸氢二钠的浓度为2mg/ml。
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