CN105510486A - 液态奶中低聚果糖含量的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种液态奶中低聚果糖含量的检测方法,采用与样品中添加的低聚果糖的品牌号相同的低聚果糖作为标准物,配制成不同浓度的标准工作液;称取两份相同质量的样品,一份加入标准物,加水溶解后配成加标液,另一份直接加水配成相同体积的样品液,将加标液和样品液经预处理后连同工作液依次加至离子色谱仪中进行梯度洗脱,并分别得到色谱图;将加标液和样品液的色谱图进行对比后筛选出用于定量的特异峰,根据特异峰进行定量计算,得到液态奶中低聚果糖含量。该方法简便快捷,无需复杂的操作,最大程度减少了不确定因素带来的误差,结果准确性大幅度提高。
Description
技术领域
本发明涉及奶制品领域,具体而言,涉及液态奶中低聚果糖含量的检测方法。
背景技术
低聚果糖又名寡果糖或蔗果三糖族低聚糖,天然低聚果糖存在于多种植物或水果中,如菊苣、菊芋、香蕉、洋葱及蜂蜜等,工业上利用果糖基转化酶转化、精制、浓缩而成。
低聚果糖的生理功能主要是双向调节体内菌群,润肠通便,调节血脂,降低胆固醇,促进人体内B族维生素的合成,促进食物中钙、铁、锌等矿物质和蛋白质的消化吸收,防止肥胖,防止龋齿等。
由于低聚果糖具有优越的生理功能,因此,低聚果糖被广泛应用于各类液态奶中。
生产厂家在生产液态奶的过程中,将低聚果糖原料按照一定的比例添加至原料中制得成品。在出厂检验时,为了确保成品中低聚果糖的含量符合添加要求,需要对其含量进行检测,符合低聚果糖添加标准的产品方可作为成品进行销售。因此,液态奶中低聚果糖含量的检测结果是否准确至关重要。
有鉴于此,特提出本发明。
发明内容
本发明的目的在于提供一种可准确、方便地对液态奶中的低聚果糖含量进行检测的方法。该方法选择与液态奶中添加的低聚果糖的品牌号相同的低聚果糖作为标准物添加至样品中配成定标液,与样品液经过相同的处理后得到色谱峰,将两者的色谱峰进行对比,选择保留时间和峰形相同且加标液峰面积大于样品液峰面积的色谱峰为特异峰进行相应的计算。由于本发明提供的检测方法是直接通过确定低聚果糖的色谱峰而进行定量计算,因此,本发明的检测方法简便快捷,无需复杂的操作,最大程度地减少了检测过程中的不确定因素带来的误差,使得检测结果的准确性大幅度提高。
为了实现本发明的上述目的,特采用以下技术方案:
一种液态奶中低聚果糖含量的检测方法,包括如下步骤:
(1)采用与样品中添加的低聚果糖的品牌号相同的低聚果糖作为标准物,配制成不同浓度的标准工作液;
(2)称取两份相同质量的样品,一份加入所述标准物,加水溶解后配成加标液,另一份直接加水配成相同体积的样品液,将所述加标液和所述样品液经预处理后连同所述工作液依次加至离子色谱仪中进行梯度洗脱,并分别得到色谱图;
(3)将所述加标液和所述样品液的色谱图进行对比后筛选出用于定量的特异峰,拟合得到所述工作液的标准曲线,再根据样品液色谱图中特异峰的峰面积找出所述标准曲线上对应的浓度,得到液态奶中低聚果糖含量。
本发明提供的检测方法的检测原理如下:
选择与液态奶中添加的低聚果糖的品牌号相同的低聚果糖作为标准物,配制成不同浓度的工作液。由于所用的标准物与液态奶中的低聚果糖出自同一生产厂家,确保标准物在色谱检测过程中和液态奶中的低聚果糖具有相同的色谱行为和响应特性。
其次,在样品液中添加一定量的标准物作为加标液,将加标液和样品液经过相同的处理后进样至离子色谱仪中进行检测。由于加标液中的样品质量和样品液中的样品质量相同,且加标液和样品液均经过相同的处理,从而使得两者的色谱图在相同保留时间处具有峰形相同的色谱峰,这一色谱峰既包含低聚果糖的色谱峰也包含液态奶中其它组分的色谱峰,但由于加标液中低聚果糖的含量大于样品液,而其他组分的含量均相同,因此,加标液中低聚果糖生成的色谱峰虽然和样品液中的低聚果糖生成的色谱峰具有相同的保留时间和峰形,但前者的峰高一定大于后者,即前者的峰面积一定大于后者。因此,通过这一对比,筛选出液态奶中低聚果糖生成的特异峰,将其用作含量测定。根据不同浓度工作液的特异峰的峰面积得到标准曲线,后根据所述样品液中特异峰的峰面积,找出所述标准曲线上对应的浓度,得到所述样品液中低聚果糖的浓度,计算得到液态奶中低聚果糖含量。
由上述内容可以看出,本发明提供的检测方法是直接通过确定低聚果糖的色谱峰而进行定量计算的,由于不通过对各种低聚果糖成分进行分离和含量检测,使得检测方法简便快捷。
而且,本发明提供的检测方法只需借助离子色谱仪进行检测,对设备的要求较低。
本发明提供的检测方法步骤简单,无需复杂的操作,最大程度地减少了检测过程中的不确定因素带来的误差,使得检测结果的准确性大幅度提高。并且,本发明的检测方法中利用的离子色谱仪直接得到峰面积、拟合出标准曲线,得到样品待测液中低聚果糖的浓度,不但方便快捷,而且计算机操作也进一步保证了结果的准确性。
利用离子色谱仪进行检测过程中,多种因素均会对色谱图产生影响。为了保证加标液和样品液中的低聚果糖产生的色谱峰峰形好,不拖尾,优选地,步骤(2)中,所述梯度洗脱的步骤中,所用的流动相包括超纯水、500-520mmol/LNaOH溶液和970-980mmol/LCH3COONa溶液。
进一步优选地,步骤(2)中,所述梯度洗脱的步骤中,洗脱时间为60~65min,流动相的流速为0.40~0.45mL/min,且所述超纯水的体积分数为0-79.8%,所述NaOH溶液的体积分数为0-80%,所述CH3COONa溶液的体积分数为0-100%。
其梯度洗脱的具体条件如下表所示,在离子色谱检测过程中,可根据下表设置离子色谱仪流动相的各个参数。
表1离子色谱仪流动相的参数设置表
基于同样的考虑,优选地,步骤(2)中,所述离子色谱仪的分析柱为3mm×150mmDionexCarboPacPA20,保护柱为3mm×30mmDionexCarboPacPA20。
进一步优选地,所述分析柱的柱温为30-35℃。
优选地,步骤(2)中,所述预处理的步骤具体包括:
在所述加标液和所述样品液中加入相同体积的乙腈,混匀后经高速离心获得上清液,依次取相同体积的所述加标液和所述样品液的上清液,加入等量水稀释后再过滤,收集滤液。
上述预处理步骤中,通过水浴使得加标液和样品液充分溶解,再通过加入乙腈去除加标液和样品液中的蛋白质和脂肪等大分子物质,避免对色谱图的峰形和峰位置产生影响;通过高速离心和过滤进一步将大分子物质沉淀。
为了保证离心效果,优选地,所述高速离心的步骤中,离心温度为18-20℃,转速为8000-9000rpm,且离心时间为5-8分钟。
为了保证过滤效果,优选地,所述过滤的步骤具体包括:
将稀释后的上清液依次通过0.22μm的Nylon滤膜。
优选地,步骤(3)中,当存在1个以上的特异峰时,分别测得所述工作液在每个特异峰处的标准曲线,后根据所述样品待测液中相应特异峰的峰面积,一一找出相应标准曲线上对应的浓度,取所有浓度的平均值作为所述样品液中低聚果糖的浓度。
优选地,步骤(3)中,所述将所述加标液和所述样品液的色谱图进行对比后筛选出用于定量的特异峰的步骤具体包括:
所述加标液和所述样品液的色谱图进行对比,选择保留时间和峰形相同且所述加标液的峰面积大于所述样品液的峰面积的色谱峰作为定量的特异峰。
与现有技术相比,本发明的有益效果为:
(1)本发明提供的检测方法针对现有检测方法中存在的步骤繁琐,无法直接检测低聚果糖含量且对仪器设备要求较高的缺陷,选择与液态奶加的低聚果糖的品牌号相同的低聚果糖作为标准物添加至样品中配成定标液,与样品液经过相同的处理后得到色谱峰,将两者的色谱峰进行对比,选择保留时间和峰形相同且加标液峰面积大于样品液峰面积的色谱峰为特异峰进行相应的计算。由于本发明提供的检测方法是直接通过确定低聚果糖的色谱峰而进行定量计算,无需对低聚果糖中的成分进行分离和含量检测,因此,本发明的检测方法简便快捷。而且,本发明提供的检测方法只需借助离子色谱仪进行检测,对设备的要求较低。
(2)本发明提供的检测方法中通过对离子色谱检测过程中的梯度洗脱条件、色谱柱条件进行优选,保证加标液和样品液中的低聚果糖产生的色谱峰峰形好,不拖尾。
(3)本发明提供的检测方法中在预处理过程中,通过水浴使得加标液和样品液充分溶解,再通过加入乙腈去除加标液和样品液中的蛋白质和脂肪等大分子物质,避免对色谱图的峰形和峰位置产生影响;通过高速离心和过滤进一步将大分子物质沉淀。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案,以下将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1为某品牌液态奶的样品液和加标液的色谱图;
图2为不同浓度的标准工作液的色谱图。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述,但是本领域技术人员将会理解,下列实施例仅用于说明本发明,而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者,按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者,均为可以通过市售购买获得的常规产品。
本实施例中所用到的试剂和仪器的详细情况如下:
超纯水:电阻率达到18.2Ω;氢氧化钠:色谱纯,购于ACRORGANICS;醋酸钠:色谱纯,购于SIGMA;乙腈:色谱纯,购于SIGMA;氦气:设备级,纯度:99.996%。
离子色谱仪:ICS5000+,配备四元梯度泵,脱气装置,微量进样泵,脉冲电子检测器(1.0mm直径的金工作电极和DionexpH-Ag/AgCl参考电极,电池体作为返电极)以脉冲电流测定模式工作(PAD)。
检测器程序:波形选择标准糖四电位波形。
进样量:10μL。
称量天平:感量为1mg,恒温振荡水浴箱,高速冷冻离心机。
洗脱液的制备:
A为超纯水
准备3000mL超纯水,使用溶剂过滤器配合0.22μmPES滤纸抽滤二次,转移2000mL已抽滤的超纯水至淋洗瓶A中备用。完成后连接色谱仪,通入氦气后轻柔摇匀。
B为500mmol/L氢氧化钠溶液
转移900mL已抽滤的超纯水至淋洗瓶B中,吸取26mL50%氢氧化钠溶液到900mL已抽滤的超纯水中,再使用已抽滤的超纯水定容到1000mL。完成后连接色谱仪,通入氦气后轻柔摇匀。
C为980mmol/L醋酸钠溶液
准备800mL超纯水至淋洗瓶C中,称取80.36±0.01g醋酸钠到800mL超纯水中定容到1000mL,超声10min使醋酸钠完全溶解,使用溶剂过滤器配合0.22μmPES滤纸抽滤二次。完成后连接色谱仪,通入氦气后轻柔摇匀。
低聚果糖标准工作液的制备:
对某品牌液态奶中低聚果糖含量进行检测,已知其低聚果糖含量为0.50%。
选择与待测样品中添加的低聚果糖的品牌号相同的低聚果糖原料作为标准物质。精密称取含有0.5g有效低聚果糖成分的低聚果糖原料,加水溶解至500mL容量瓶,定容至刻度,此为含低聚果糖1000mg/L的储备液。
精密量取储备液1.25mL、2.5mL、3.75mL、5.0mL、7.5mL,分别移至25mL容量瓶,加水定容至刻度,分别配成低聚果糖浓度为50mg/L、100mg/L、150mg/L、200mg/L、300mg/L的标准工作液。
精密称取两份样品,每份样品的质量均为1.0g(精确至0.0001g),分别置于10mL容量瓶中,一份加水3mL,振摇使溶解,作为样品液,标记为A,另一份再加入低聚果糖有效质量为0.003g的低聚果糖原料,加水使其体积达到3mL,作为加标液,标记为B。
将A和B冷却至室温,加乙腈定容至10mL,振摇使均匀。
完成定容后,A和B移至离心管,进行高速离心。离心机条件:温度为20摄氏度,转速为8000rpm,持续时间为5分钟。
完成离心后,取A和B上清液4mL,加水稀释至10mL,摇匀,过0.22μmNylon滤膜,取滤液备用。
将收集到的A和B的滤液分别进样至离子色谱仪中,后再按高至低浓度将低聚果糖标准工作液进样至离子色谱仪中进行梯度洗脱,得到样品液、加标液和工作液的色谱图。
将样品待测液和加标液的色谱图进行对比,保留时间和峰形相同且所述加标液的峰面积大于所述样品液的峰面积的色谱峰为特异峰。
测得不同浓度的工作液在特异峰处的峰面积,以峰面积为纵坐标,以工作液的浓度为横坐标,拟合得到标准曲线。
测得样品液中特异峰的峰面积,找出在标准曲线上对应的浓度,得到样品液中低聚果糖的浓度,计算得到液态奶中低聚果糖含量。
所述计算的方法为:
式中,n为样品液到进样时稀释的倍数;C为样品待测液中低聚果糖的浓度,单位为mg/mL;V为样品待测液的体积,单位为mL;m为所述样品的的质量,单位为g。
当存在1个以上的特异峰时,分别测得工作液在每个特异峰处的标准曲线,后根据样品液中相应特异峰的峰面积,一一找出相应标准曲线上对应的浓度,取所有浓度的平均值作为样品液中低聚果糖的浓度。
在梯度洗脱的步骤中,其梯度洗脱的具体条件为:
所用离子色谱仪的分析柱为3mm×150mmDionexCarboPacPA20,保护柱为3mm×30mmDionexCarboPacPA20。
柱温控制在30℃。
检测结果:
如图1所示,线1为样品液的色谱图,线2为加标液的色谱图,两者对比后,选择1-1,1-2这2组峰为特异峰组,将其用作定量计算。
如图2所示,不同浓度的标准曲线工作液在选出的2个峰位处具有相应的色谱峰,且峰面积随着浓度的升高而增大。利用软件,以工作液浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,分别拟合得到2组峰处工作液的标准曲线,如表1所示。
表12组峰处分别拟合得到的标准曲线
根据得到的不同峰处的标准曲线以及图1中样品液的色谱图在相应特异峰处的峰面积,得到样品液中低聚果糖的浓度。如表2所示。再根据换算公式得到液态奶中低聚果糖的含量。
表2样品液中低聚果糖的浓度
此外,本发明还验证了该方法的准确性和精确性,对某品牌液态奶中低聚果糖含量进行重复性检测。其检测结果如表3所示。
表3重复性检测的对比结果
尽管已用具体实施例来说明和描述了本发明,然而应意识到,在不背离本发明的精神和范围的情况下可以作出许多其它的更改和修改。因此,这意味着在所附权利要求中包括属于本发明范围内的所有这些变化和修改。
Claims (10)
1.液态奶中低聚果糖含量的检测方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)采用与样品中添加的低聚果糖的品牌号相同的低聚果糖作为标准物,配制成不同浓度的标准工作液;
(2)称取两份相同质量的样品,一份加入所述标准物,加水溶解后配成加标液,另一份直接加水配成相同体积的样品液,将所述加标液和所述样品液经预处理后连同所述工作液依次加至离子色谱仪中进行梯度洗脱,并分别得到色谱图;
(3)将所述加标液和所述样品液的色谱图进行对比后筛选出用于定量的特异峰,拟合得到所述工作液的标准曲线,再根据样品液色谱图中特异峰的峰面积找出所述标准曲线上对应的浓度,得到液态奶中低聚果糖含量。
2.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,步骤(2)中,所述梯度洗脱的步骤中,所用的流动相包括超纯水、500-520mmol/LNaOH溶液和970-980mmol/LCH3COONa溶液。
3.根据权利要求2所述的检测方法,其特征在于,步骤(2)中,所述梯度洗脱的步骤中,洗脱时间为60~65min,流动相的流速为0.40~0.45mL/min,且所述超纯水的体积分数为0-79.8%,所述NaOH溶液的体积分数为0-80%,所述CH3COONa溶液的体积分数为0-100%。
4.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,步骤(2)中,所述离子色谱仪的分析柱为3mm×150mmDionexCarboPacPA20,保护柱为3mm×30mmDionexCarboPacPA20。
5.根据权利要求4所述的检测方法,其特征在于,所述分析柱的柱温为30-35℃。
6.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,步骤(2)中,所述预处理的步骤具体包括:
在所述加标液和所述样品液中加入相同体积的乙腈,混匀后经高速离心获得上清液,依次取相同体积的所述加标液和所述样品液的上清液,加入等量水稀释后再过滤,收集滤液。
7.根据权利要求6所述的检测方法,其特征在于,所述高速离心的步骤中,离心温度为18-20℃,转速为8000-9000rpm,且离心时间为5-8分钟。
8.根据权利要求6所述的检测方法,其特征在于,所述过滤的步骤具体包括:
将稀释后的上清液依次通过0.22μm的Nylon滤膜。
9.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,步骤(3)中,当存在1个以上的特异峰时,分别测得所述工作液在每个特异峰处的标准曲线,后根据所述样品液中相应特异峰的峰面积,一一找出相应标准曲线上对应的浓度,取所有浓度的平均值作为所述样品液中低聚果糖的浓度。
10.根据权利要求1~9任一项所述的检测方法,其特征在于,步骤(3)中,所述将所述加标液和所述样品液的色谱图进行对比后筛选出用于定量的特异峰的步骤具体包括:
所述加标液和所述样品液的色谱图进行对比,选择保留时间和峰形相同且所述加标液的峰面积大于所述样品液的峰面积的色谱峰作为定量的特异峰。
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CN102636608A (zh) * | 2012-04-10 | 2012-08-15 | 广东东泰乳业有限公司 | 婴幼儿配方奶米粉中低聚果糖含量的检测方法 |
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C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
CB02 | Change of applicant information | ||
CB02 | Change of applicant information |
Address after: 527300, Guangdong City, Yunfu Province peak double pit Bridge Industrial Zone (formerly Yunfu County peak distillery site) Applicant after: Yunfu Jinshan biological Polytron Technologies Inc Address before: 527300, Guangdong City, Yunfu Province peak double pit Bridge Industrial Zone (formerly Yunfu County peak distillery site) Applicant before: NEW FRANCISCO (YUNFU CITY) BIOTECHNOLOGY CORPORATION |
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RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
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Application publication date: 20160420 |