CN105497055B - 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸在制备防治皮肤辐射损伤药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了烟酰胺腺嘌呤二核苷酸在制备预防或治疗皮肤辐射损伤药物中的应用。通过现代药理学实验证明，大鼠皮肤涂抹NAD⁺在预防或治疗X射线诱导的皮肤损伤具有明显的保护作用，提示预防性给药可防治皮肤辐射损伤。

Description

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸在制备防治皮肤辐射损伤药物中的 应用

技术领域

本发明涉及烟酰胺腺嘌呤二核苷酸在药学领域中的应用。更具体地说是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide adenine dinucleotide,简称NAD⁺）在制备预防或治疗皮肤辐射损伤药物中的应用。

背景技术

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的化学结构式是：

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的制备方法主要是以酵母为原料，酵母经沸水提取，醋酸铅酸化沉淀得粗品，经甲酸型阳离子交换树脂柱处理，精制而得。

本发明人在实验中首次发现：烟酰胺腺嘌呤二核苷酸在防治皮肤辐射损伤中具有明显的保护作用。基于上述发现经过进一步实验从而完成了本发明。

发明内容

在实验中首次发现：烟酰胺腺嘌呤二核苷酸在防治X射线诱导的皮肤损伤中的应用。该药物具有明显的保护作用。

本发明的目的是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸作为活性成分在制备预防或治疗皮肤辐射损伤中的应用。

进一步的，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸作为唯一活性成分在制备预防或治疗皮肤辐射损伤中的应用。

进一步的，上述其辐射，主要是指X射线、紫外线、γ射线等较高能量的电磁辐射。

进一步的，上述皮肤辐射损伤，为皮肤厚度变薄，皮肤毛囊总数减少，毛囊层数减少，皮肤角质层异常增生以及皮肤细胞凋亡增多。

进一步的，所述的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸制备的药物剂型是各种外用涂抹制剂，片剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸剂、混悬剂、糖浆剂、各种肠溶制剂或注射剂。

附图说明

图1 皮肤组织HE染色，NAD⁺对X射线诱导的皮肤厚度变薄、毛囊总数减少、毛囊层数减少有保护作用。

图2 皮肤厚度量化统计，NAD⁺对X射线诱导的皮肤厚度变薄有保护作用。

图3 皮肤毛囊层数量化统计，NAD⁺对X射线诱导的皮肤毛囊层数减少有保护作用。

图4 皮肤组织HE染色，NAD⁺对X射线诱导的皮肤角质层异常增生有保护作用。

图5 皮肤组织TUNEL染色图，NAD⁺对X射线诱导的皮肤细胞凋亡增加有保护作用。

具体实施方式

本发明对烟酰胺腺嘌呤二核苷酸在制备防治皮肤辐射损伤药物中的应用的实验内容主要包括以下几个方面：

1. NAD⁺对X射线诱导的毛囊总数减少有保护作用。

2. NAD⁺对X射线诱导的皮肤厚度变薄有保护作用。

3. NAD⁺对X射线诱导的皮肤毛囊层数减少有保护作用。

4. NAD⁺对X射线诱导的皮肤角质层异常增生有保护作用。

5. NAD⁺对X射线诱导的皮肤细胞凋亡（TUNEL信号）增加有保护作用。

下面通过药效学实验进一步说明NAD⁺在防治皮肤辐射损伤中具有明显的治疗作用。

一、实验方法

1、动物操作

研究使用大鼠，实验动物饲养在上海交通大学MED-X研究院进行动物实验，辐射实验在上海光源进行,辐射光源使用第三代同步辐射光源产生的同步辐射X射线。所有的操作流程均符合上海交通大学实验室动物保护和使用守则。麻醉剂选用7%水合氯醛，麻醉方式为腹腔注射，剂量1mL /100g 。麻醉后对大鼠腿部皮肤进行剃毛，皮肤表面涂布给药，涂布后30min对涂布药物的腿部区域进行局部同步辐射X射线照射。药物溶剂使用甘油与去离子水按一定比例混合。对照组涂抹一定量溶剂，实验组涂抹等体积500 mM NAD⁺溶液。辐射完成后，大鼠在动物房中进行饲养，条件为22-24℃，12小时的明/暗循环，并可自由进食取水。5天后牺牲大鼠，取腿部皮肤。

2、皮肤组织的储存

皮肤取出后，取出适量组织浸泡于4%多聚甲醛，用于制作石蜡切片。剩余组织用铝箔纸包裹好，使用液氮冷冻，之后转移到-80℃冰箱长期保存。

3、皮肤组织石蜡切片

将皮肤组织浸泡4%多聚甲醛溶液24h，然后依照石蜡切片的制作方法依次浸自来水、蒸馏水、梯度酒精、二甲苯、石蜡，制作成石蜡切片。

4、皮肤石蜡切片的HE染色

将石蜡切片浸二甲苯脱蜡，然后依次浸于梯度酒精、蒸馏水，苏木素染色10分钟，自来水流水冲洗30min，蒸馏水浸泡30s，95%乙醇10s，伊红复染30s，70%酒精洗涤2次，依次浸梯度酒精、二甲苯，中性树脂封片。实验步骤参考碧云天公司苏木素&伊红染色试剂盒。

5、皮肤组织凋亡信号检测（TUNEL）

参照默克密理博公司的TUNEL检测试剂盒，对皮肤石蜡切片进行TUNEL染色。

6、对染色结果拍照、量化

对上述两种染色进行拍照。并针对毛囊层数、皮肤厚度等指标进行量化。

7、统计分析

所有数据按照平均值+标准差的方式给出。数据使用单因素方差分析进行评估，然后使用Student-Newman-Keuls post hoc test。P值小于0.05认为是统计学显著的。

二、实验结果和讨论

1、NAD⁺对X射线诱导的皮肤毛囊总数减少、皮肤厚度减少、毛囊层数减少具有保护作用。

对照组大鼠皮肤涂布溶剂，并对该处腿部皮肤进行X射线照射，辐射剂量为8 Gy，发现皮肤毛囊总数减少、皮肤厚度减少、毛囊层数减少，而实验组大鼠皮肤涂布等体积500mM NAD⁺溶液则可以有效阻止上述损伤。代表性H&E染色结果见图1（50倍放大），皮肤厚度、毛囊层数的量化结果分别见图2、图3。

2、NAD⁺对X射线诱导的皮肤角质层异常增生具有防护作用。

对照组大鼠皮肤涂布溶剂，并对该处腿部皮肤进行X射线照射，辐射剂量为8 Gy，发现皮肤角质层异常增生，而实验组大鼠皮肤涂布等体积NAD⁺溶液则可以有效减少皮肤角质层的异常增生。代表性H&E染色结果见图4（200倍放大）。

3、NAD⁺对X射线诱导的皮肤细胞凋亡增加具有保护作用。

对照组大鼠皮肤涂布溶剂，并对该处腿部皮肤进行X射线照射，辐射剂量为8 Gy，会引起皮肤细胞凋亡信号的增加，而实验组大鼠皮肤涂布等体积500mM NAD⁺溶液则可以有效减少凋亡信号的增加。TUNEL染色结果见图5（第一排图片200倍放大，第二排图片1000倍放大）。

根据以上结果表明，NAD⁺可以保护X射线诱导的皮肤损伤，其标志包括皮肤厚度变薄，皮肤毛囊总数减少，毛囊层数减少，角质层异常增生以及皮肤细胞凋亡增多。较高能量的电磁辐射如X射线、紫外线、γ射线等，产生皮肤辐射损伤的机制具有一些共同的机制，包括DNA损伤和氧化应激反应，因此以上结果提示NAD⁺在制备防治皮肤辐射损伤药物中有重要应用价值。

本发明与现有技术相比所具有的积极效果在于：

较高能量的电磁辐射如X射线、紫外线、γ射线可以引起皮肤组织的氧化应激反应和DNA损伤，而对于这些损伤，目前没有特别有效的手段进行保护、治疗。而本发明可以有效保护皮肤辐射损伤，为以后制作以NAD⁺为主要成分的抗皮肤辐射损伤的药物以及以NAD⁺为主要成分的药物在预防、治疗紫外线皮肤损伤、X射线成像、放射治疗造成的皮肤损伤的临床应用提供了重要的科学依据。

Claims (5)

1.烟酰胺腺嘌呤二核苷酸在制备防治皮肤辐射损伤药物中的应用,所述烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的化学结构式如下：

；

所述的辐射是X射线的电磁辐射。

2.根据权利要求1烟酰胺腺嘌呤二核苷酸在制备防治皮肤辐射损伤药物中的应用，其特征在于，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸作为活性成分在制备防治皮肤辐射损伤药物中的应用。

3.根据权利要求1烟酰胺腺嘌呤二核苷酸在制备防治皮肤辐射损伤药物中的应用，其特征在于，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸作为唯一活性成分在制备防治皮肤辐射损伤药物中的应用。

4.根据权利要求1或2或3所述的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸在制备防治皮肤辐射损伤药物中的应用，其特征在于，所述皮肤辐射损伤，为皮肤厚度变薄，皮肤毛囊总数减少，毛囊层数减少，皮肤角质层异常增生以及皮肤细胞凋亡增多。

5.根据权利要求1或2或3所述的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸在制备防治皮肤辐射损伤药物中的应用，其特征在于，所述制备的药物剂型外用涂抹制剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸剂、混悬剂、糖浆剂、肠溶制剂及注射剂。