CN105477628B - 抗癌组合物及其用途 - Google Patents

Abstract

本申请提供了一种抗癌组合物，其包含抗癌有效成分以及药学上可接受的载体，其中所述抗癌有效成分包含胶原酶Ⅱ、胶原酶Ⅳ或其组合，优选为胶原酶Ⅱ。本申请还提供了抗癌组合物在制备用于治疗癌症的药物中的用途。本发明的抗癌组合物适用于癌灶内注射或植入、癌周注射或植入、癌症手术后瘤腔内注射或植入。该抗癌组合物可制成各种药物剂型，优选为注射剂。

Description

抗癌组合物及其用途

技术领域

本申请涉及一种抗癌组合物以及治疗癌症的方法，具体地，涉及一种包含胶原酶的抗癌组合物以及其在制备治疗癌症的药物中的用途。

背景技术

据中国新闻周刊报道(2013年04月07日)，全国每6分钟就有一人被确诊为癌症，每天有8550人成为癌症患者，每七到八人中就有一人死于癌症。未来10年，中国的癌症发病率与死亡率仍将持续攀升。

癌症扩散转移是导致癌症患者治疗失败的主要原因。癌症的转移是一个复杂的多因素参与的过程，其中基质金属蛋白酶(Matrix Metalloproteinases，MMPs)在此过程中起到重要作用(Kumar A,Collins HM,Scholefield JH,Watson SA:Increased type-IVcollagenase(MMP-2and MMP-9)activity following preoperative radiotherapy inrectal cancer.Br J Cancer 82:960–965,2000)。MMPs不仅介导肿瘤细胞对宿主的包括基底膜在内的细胞外基质(extracellular matrix,ECM)降解，还调控肿瘤新生血管生长、影响细胞粘连分子的功能并在肿瘤发生发展、浸润、扩散、转移方面起着重要的作用。因此多年来，科学家一直试图通过抑制或降低MMPs活性或表达来实现***的目的，如使用各种MMPs抑制剂、抗MMPs单抗等。然而，到目前为止此类尝试尚未见临床成功的先例。另外，也有研究试图通过激活或促进细胞外基质降解以实现***的目的，但均未能取得理想疗效。

胶原酶为MMP的一个亚型，其种类繁多，功能尚不清楚；而且不同胶原酶之间的关系也不清楚，与其它MMPs的关系更有待探讨。粗制的胶原酶还含有其它水解酶，因此容易产生其它意想不到的副作用。

寻求一种有效的抗癌组合物是治疗癌症的关键，也是目前研究的焦点。

发明内容

一方面，本申请提供了一种抗癌组合物，其包含抗癌有效成分以及药学上可接受的载体，其中所述抗癌有效成分包含胶原酶Ⅱ、胶原酶Ⅳ或其组合。

在优选的实施方案中，抗癌组合物中的有效成分选自胶原酶Ⅱ和胶原酶Ⅳ或其组合。在更优选的实施方案中，抗癌组合物中的有效成分为胶原酶Ⅱ。

在某些实施方案中，上述抗癌组合物被配制成药学上可接受的剂型，优选为注射剂或植入剂。在一些实施方案中，胶原酶Ⅱ浓度为0.5-250,000U/ml，优选为25-25,000U/ml，更优选为50-25,000U/ml，最优选为500-10,000U/ml。

另一方面，提供了上述抗癌组合物在治疗癌症中的用途。

在某些实施方案中，所述癌症可以是原发性癌症，也可以是转移癌，优选地，所述癌症选自肝癌、肺癌、直肠癌、甲状腺癌或其转移癌。

另一方面，提供了本发明的抗癌组合物在制备用于治疗癌症的药物中的用途。

在某些实施方案中，包含本发明抗癌有效成分的药物以注射、灌注或植入的方式给药，优选地，所述药物经局部给药。在优选的实施方案中，所述药物经癌灶内注射、癌周注射或癌症手术后瘤腔内注射给药，优选地经癌灶内注射给药。在另一实施方案中，所述药物经癌灶内植入、癌周植入或癌症手术后瘤腔内植入给药，优选地经癌灶内植入给药。

在一些实施方案中，本发明的抗癌有效成分，优选为胶原酶Ⅱ的给药剂量为每千克个体体重给予0.01到5,000,000U，优选为10到500,000U，更优选为10到100,000U，最优选为10-50,000U。

再一方面，提供了治疗癌症，特别是实体肿瘤的方法，该方法包括将抗癌组合物给予患癌个体来治疗癌症。所述癌症可以是原发性癌症，也可以是转移癌，优选地，所述癌症选自肝癌、肺癌、直肠癌、甲状腺癌或其转移癌。

具体实施方式

本申请提供了一种抗癌组合物，其包含抗癌有效成分以及药学上可接受的载体，其中所述抗癌有效成分包含胶原酶Ⅱ、胶原酶Ⅳ或其组合。

在优选的实施方案中，上述抗癌组合物包含的抗癌有效成分选自胶原酶Ⅱ和胶原酶Ⅳ或其组合。在更优选的实施方案中，所述抗癌有效成分为胶原酶Ⅱ。

本发明所述的“胶原酶Ⅱ”和“胶原酶Ⅳ”是基质金属蛋白酶(MMPs)家族的成员。MMPs是一类对细胞外基质(ECM)有特殊降解作用的蛋白水解酶，能降解细胞外基质的多种成分。到目前为止，已有报道的MMPs有二十多种，根据其蛋白结构和作用底物的特异性可以分为5个亚型：(1)胶原酶、(2)明胶、(3)间质溶解素、(4)模型MTMMPs(MMP14,15,16,17,24,25)以及(5)其他亚群(MMP7,12,20,23)等。目前认为胶原酶至少有5种以上。胶原酶在其活性位点含有Zn²⁺，且与其底物的结合及形成完全催化活性所需的构型需要Ca²⁺。通过在三股螺旋上多个位点的水解，它将胶原降解成短肽。

胶原酶Ⅱ(又称MMP-8)作为一种金属蛋白酶，在体内少量蛋白水解酶存在的情况下便可以增加其活性，即所存在的蛋白酶的量不能高到蛋白酶将胶原酶消化到使其失活的程度。胶原酶Ⅱ不仅可以裂解多种胶原蛋白，还参与机体免疫及蛋白跨膜运动。除胶原蛋白外，胶原酶Ⅱ对其它细胞外间质及其中的巨噬细胞、免疫细胞、细胞生长因子、血管生长因子可能也有不同程度的直接或间接的降解作用。在本文中，胶原酶Ⅱ与MMP-8可互换使用。胶原酶Ⅳ包含至少7种蛋白酶成分，分子量从68KD到130KD不等，它能消化多种组织。

本发明人经过大量研究发现，单独应用胶原酶Ⅱ或胶原酶Ⅳ或其组合能够抑制癌症的生长，特别是单独应用胶原酶Ⅱ对癌症的生长具有明显的剂量依赖性抑制作用。本发明应用的外源性胶原酶Ⅱ可能在作用于癌细胞的同时，还会作用于细胞外间质，通过对间质的水解作用使肿瘤生长失去支撑和必要的营养，同时还可能诱发或激活一系列的抗肿瘤免疫反应，从而抑制肿瘤的生长和扩散。

本申请所述的“药学上可接受的载体”指不干扰活性成分的生物活性有效性的载体。本申请的药学上可接受的载体可以为固体或液体，包括药学上可接受的赋形剂、缓冲剂、乳化剂、稳定剂、防腐剂、稀释剂、封装剂、填充剂等。例如，药学上可接受的缓冲剂进一步包括磷酸盐、醋酸盐、柠檬酸盐、硼酸盐以及碳酸盐等。

本申请的药物组合物可以呈现为单位剂量形式，并且可以通过任一制药领域公知的方法制备。所有方法都包括将本申请的活性成分与一种或几种药学上可接受的载体结合的步骤。通常，通过将活性成分与液体载体、固体载体或二者结合来制备组合物，随后根据需要来定型制备的产物。例如，适于胃肠外给药的组合物可以是包含活性组分的无菌水性或非水性制剂。可以根据已知的方法，使用合适的分散剂或湿润剂以及悬浮剂制备上述制剂。在可接受的载体或溶剂中，可以使用水、林格氏液以及等渗的氯化钠溶液等。

在某些实施方案中，本发明所述的抗癌组合物被配制成药学上或临床上可接受的任一剂型。在优选的实施方案中，所述剂型为缓释剂。更优选地，配制的剂型为注射剂或植入剂。

本发明的“注射剂”是指由药物制成的供注入体内的溶液(包括乳浊液和混悬液)以及供临用前配成溶液或混悬液的粉末或溶液。所述注射剂包括但不限于水溶液注射剂、微球注射剂、凝胶型注射剂、脂质体注射剂、纳米粒注射剂、储库型控释注射剂、无针注射释药***等。

本发明的“植入剂”指将药物与辅料制成的小块状或条状供植入体内的无菌固体制剂。植入剂可采用特制的注射器植入，也可用手术切开植入。本发明的植入剂还包括以液体形式注射于人体、在生理条件下转变为固体或半固体药物贮库的植入剂形式，即注射型原位形成植入剂(injectable in situ forming implants)。

在优选的实施方案中，将本发明的抗癌组合物制备成局部应用的水溶液。优选地，将所述组合物制备成在相对小体积中胶原酶Ⅱ浓度较高的水溶液。可选地，也可以将本发明的抗癌组合物先冷冻干燥，装在安剖瓶中，临用前将其配制成适用于注射入肿瘤内的药学上可接受的水溶液。

优选地，用新鲜蒸馏的去离子无菌水来制备用于可注射用溶液的缓冲液。可以使用任何合适的缓冲溶液如磷酸缓冲液、Ringers缓冲液或Tris缓冲液来配制抗癌组合物。优选的缓冲液的pH范围约为6.0到8.0，优选为6.5到7.5。例如，可以使用浓度为0.1-0.25mol/L、优选0.15-0.2mol/L的氯化钠来溶解或稀释组合物。再例如，使用的磷酸缓冲液的浓度为0.02-0.2mol/L，优选为0.05-0.15mol/L。

在某些实施方案中，本发明的抗癌活性成分胶原酶Ⅱ在注射剂中的浓度为0.5-250,000U/ml，优选为25-25,000U/ml，更优选为50-25,000U/ml，最优选为500-10,000U/ml。

本发明所用的胶原酶Ⅱ可以自制，也可以商购。可以是重组的蛋白，也可以是从人及动物组织细胞分离纯化的。在一优选实施方案中，胶原酶Ⅱ从Life Technologies公司购得，冷冻干燥的胶原酶Ⅱ的酶活力为16800U/100mg/支，用无热原的盐水重新溶解至所需的浓度。所有酶的活性都以每mg国际单位表示。一个单位胶原酶活性的定义为在钙离子存在时，在温度为37℃以及pH为7.4的条件下，5小时内能从天然胶原释放肽(相当于茚三酮颜色)成1微摩尔L-亮氨酸的胶原酶量。可以按本领域已知的方法确定胶原酶和其它酶的活性。

另一方面，提供了上述抗癌组合物在治疗癌症中的用途。

本文所用的“治疗”包括抑制、治愈和减轻癌症或其症状以及预防或延缓原发癌的转移。

在某些实施方案中，所述癌症可以是原发性癌症，也可以是转移癌，优选地，所述癌症选自肝癌、肺癌、直肠癌、甲状腺癌或其转移癌。

另一方面，提供了本发明的抗癌组合物在制备用于治疗癌症的药物中的用途。在优选的实施方案中，所述药物的有效成分为胶原酶Ⅱ、胶原酶Ⅳ或其组合。在更优选的实施方案中，所述抗癌有效成分为胶原酶Ⅱ。

在优选的实施方案中，本发明的抗癌有效成分、优选为胶原酶Ⅱ的给药剂量为每千克个体体重给予0.01到5,000,000U，优选为10到500,000U，更优选为10到100,000U，最优选为10-50,000U，例如10-1,000U。胶原酶Ⅱ的剂量在实际应用时可以按照医生的要求选用。

给药剂量可以按患者的年龄、病症的特性、肿瘤体积、组合物的效力及给药途径变化。例如，对小于3g的肿瘤，可以应用单次灌输的剂量。灌输剂量可以为0.01-5ml，优选地含有25-25,000U/ml胶原酶Ⅱ。缓慢地将药物注射入肿瘤，如约5-10分钟。当肿瘤为5到10g时，在第一次注射剂量后还可以再次施用较大剂量的抗癌组合物。例如，第一次施用5ml灌注剂量。然后，缓慢地施用第二份20-40ml的相同组合物，例如给药时间为10-20分钟。如果需要可以顺序给药，但一般不超过80ml总体积。例如，可以再次应用这种治疗，如每周或每月给药一次。对于大于10到15g的肿瘤，第一次给药的灌注剂量可以至多为60ml，随后可以应用更大的剂量，但一般不超过100ml的总体积。

在某些实施方案中，上述药物以注射、灌注或植入的方式给药，优选地，所述药物经局部给药。将此组合物局部应用于癌症治疗。局部给药包括将药物应用于脏器和/或癌细胞或肿瘤内或其附近，优选为肿瘤内。局部给药还包括用药物包围癌性肿瘤或将药物应用于癌性肿瘤的表面。在一实施方案中，将药物通过直接的肿瘤内注射或灌注给药于癌症局部。例如，小容量如约2ml或更少的药物通过注射给药。而较大的容量如8ml以上的药物则通过缓慢灌注约10-30分钟给药。

在优选的实施方案中，所述药物经癌灶内注射、癌周注射或癌症手术后瘤腔内注射给药，优选地经癌灶内注射给药。在其他优选的实施方案中，所述药物经癌灶内植入、癌周植入或癌症手术后瘤腔内植入给药，优选地经癌灶内植入给药。

可选地，可以通过任意其他方式，将酶特异性导向癌内或癌周围。可以选用的方式例如利用不同的载体***将组合物送递到所需的部位。可以应用缓释组合物，例如可以用缓释植入法提供这种制剂，或以微胶囊或吸附于生物可降解聚合物提供这种制剂。其它载体***文献已有描述，例如将酶制剂包埋在生物可降解小泡中的方法，以保护酶的活性且有利于特异性送递。例如可以将酶包埋在脂质体或其它生物可降解微胶囊中，与用于特异性定位的组织特异性单克隆抗体相连。各种形式的酶包埋技术可用于包埋酶，包括但不限于活细胞空胞、合成的聚合物微胶囊以及由胆固醇、卵磷脂和磷脂酸构成的脂类小泡(脂质体)等。用受体本身的红细胞送递活性酶可以避免由潜在的在合成载体(如脂质体和微胶囊)中应用酶所引起的免疫和生理问题。将聚乙二醇(PEG)共价连接于酶可以使这些蛋白质无免疫原性，延长它们的循环半衰期，从而逃避天然酶抑制剂的抑制作用，而且可以在减少自体溶解的情况下提高酶活性。PEG与蛋白质的连接可以采用本领域公知的方法来实现，此外通过超滤纯化可以得到均匀的反应产物。

本发明的抗癌活性成分、或包含该活性成分的抗癌组合物或药物可以治疗的癌症包括但不限于：鳞癌、腺癌、间皮瘤、中枢神经***肿瘤、胶质瘤、呼吸***肿瘤、肺癌、泌尿生殖***肿瘤、肾癌、膀胱癌、消化***肿瘤、肝癌、胆囊癌、食管癌、胃癌、胰腺癌、直结肠癌、头颈部肿瘤、口腔肿瘤、甲状腺癌、皮肤癌、血管瘤、骨肿瘤、淋巴瘤、骨肉瘤、乳腺癌、视网膜肿瘤、鼻咽癌、子***、卵巢癌、子宫内膜癌、***癌等。可以治疗的癌症还包括上述原发癌症的转移瘤，例如结直肠癌的肝转移，乳腺癌的骨转移、全身肿瘤的脑转移等。优选地，所述癌症选自肝癌、肺癌、直肠癌、甲状腺癌或其转移癌。

在一实施方案中，本发明的组合物含有胶原酶Ⅱ，用于治疗肝癌。例如，通过肝内局部注射组合物治疗肝癌。可以通过经皮穿刺路径给药，所应用的组合物的给药体积为0.001ml到80ml，优选含有0.5到250,000U/ml的胶原酶Ⅱ；更优选地，含有50到25,000U/ml的胶原酶Ⅱ。

在一实施方案中，本发明的组合物含有胶原酶Ⅱ，用于肺癌的治疗。例如，通过肺内局部注射组合物来治疗肺癌。可以通过经皮穿刺路径给药，所应用的组合物的给药体积为0.001ml到80ml，优选含有0.5到250,000U/ml胶原酶Ⅱ；更优选地，含有50到25,000U/ml的胶原酶Ⅱ。

在一实施方案中，本发明的组合物用于治疗乳腺癌。例如，通过乳腺内局部注射组合物治疗乳腺癌。可以通过在指诊控制和/或超声波指导下，将一长的细针***乳腺内进行乳腺内注射。这种注射通常是在局部麻醉下进行的，且注射溶液可以用碘卡因稀释。在注射过程中，针可以不时地重定位，以使组合物得到能最好地分布。

在一实施方案中，本发明的组合物用于治疗***癌。例如，通过***内局部注射组合物来治疗***癌。***内注射可以经腹膜或经直肠路径，所应用的组合物的给药体积为0.001ml到80ml，优选含有0.5到25,000U/ml的胶原酶Ⅱ；更优选地，含有50到25,000U/ml的胶原酶Ⅱ。

在另一实施方案中，该组合物含有胶原酶Ⅱ和/或胶原酶IV，用于直肠癌治疗；在又一实施方案中，该组合物含有胶原酶Ⅱ和/或胶原酶IV，用于甲状腺癌治疗。

因此，在另一方面，本申请提供了利用抗癌组合物治疗癌症的方法，该方法包括给予患病个体治疗有效量的抗癌活性成分。优选地，该量足以降解肿瘤、肿瘤间质、间质内血管、肿瘤细胞及各种细胞因子，治愈或减轻癌症。优选地，所述抗癌活性成分为胶原酶Ⅱ、胶原酶Ⅳ或其组合。更优选地，所述抗癌活性成分为胶原酶Ⅱ。

在优选的实施方案中，本发明的抗癌有效成分、优选为胶原酶Ⅱ的给药剂量为每千克个体体重给予0.01到5,000,000U，优选为10到500,000U，更优选为10到100,000U，最优选为10-50,000U，例如10-1,000U。

本发明抗癌组合物中的有效成分较单一，疗效易于控制和确认；毒副作用小。而且，在一些实施方案中，抗癌有效成分以相当低的剂量就能够取得明显的抗癌功效，例如剂量为0.04-0.9mg/kg个体体重的胶原酶Ⅱ(约相当于10～308U/kg)能够显著抑制肿瘤的生长。

本申请所述的“个体”，是指哺乳动物，包括但不限于灵长类动物、牛、马、猪、绵羊、山羊、狗、猫以及诸如大鼠和小鼠的啮齿类动物。

本文中，有效成分、活性成分以及活性组分可以交替使用，除非另有所指。

本说明书和权利要求书中，词语“包括”、“包含”和“含有”意指“包括但不限于”，且并非意图排除其他部分、添加物、组分、或步骤。

应该理解，在本发明的特定方面、实施方案或实施例中描述的特征、特性、组分或步骤，可适用于本文所描述的任何其他的方面、实施方案或实施例，除非与之矛盾。

上述公开内容总体上描述了本发明，通过下面的实施例进一步示例本发明。描述这些实施例仅为说明本发明，而不是限制本发明的范围。尽管本文中使用了特殊的术语和值，这些术语和值同样被理解为示例性的，并不限定本发明的范围。除非特别指明，本说明书中的实验方法和技术为本领域技术人员所公知的方法和技术。

实施例

以下实施例中使用的实验动物为体重20-26g的雄性昆明小鼠，购自山东鲁抗医药集团中心实验动物室。注射的癌瘤细胞由山东省医学科学院提供。实验中使用的胶原酶Ⅱ、胶原酶Ⅳ以及MMP-7购自Life Technologies公司。

肿瘤体积的测量方法：用游标卡尺分别测量肿瘤的长径和短径，肿瘤体积的计算公式为：V＝(长径*短径²)/2。

统计学方法：结果以均值±标准误表示。两组数据间采用t-检验分析，多组结果比较采用单因素方差分析Tukey检验(One-way ANOVA Tukey's test)进行分析，P<0.05为差异有显著性。

实施例1 不同剂量的胶原酶对直肠肿瘤生长的影响

将2x10⁵个直肠癌瘤细胞皮下注射于小白鼠的季肋部，待肿瘤生长7天后将其分为以下10组(每组6只，见表1)。第1组为对照组，第2-4组为胶原酶Ⅱ治疗组，第5-7组为胶原酶Ⅳ治疗组，第8-10组为MMP-7治疗组。药物经瘤内注射，剂量按公斤体重(mg/kg)计算(具体剂量见表1)，每天给药一次，共3次。治疗后第15天测量肿瘤体积大小，比较各组的治疗效果(参见表1)。所用胶原酶Ⅱ的活力为342U/mg，胶原酶Ⅳ的活力为180U/mg，MMP-7的活力为186U/mg。其他实施例中的MMP-8(胶原酶Ⅱ)的活力也均为342U/mg。

表1

组别(n＝6)	接受治疗	肿瘤体积(mm<sup>3</sup>)	P值
				1	对照	2000±401
2	胶原酶Ⅱ，0.04mg/kg	1429±192	<0.05
				3	胶原酶Ⅱ，0.08mg/kg	1086±94.3	<0.01
4	胶原酶Ⅱ,0.16mg/kg	514±54.3	<0.001
				5	胶原酶Ⅳ,0.10mg/kg	1886±291	>0.05
6	胶原酶Ⅳ,0.20mg/kg	1543±266	>0.05
				7	胶原酶Ⅳ,0.40mg/kg	1086±214	<0.01
8	MMP-7,0.10mg/kg	2086±414	>0.05
				9	MMP-7,0.20mg/kg	2057±340	>0.05
10	MMP-7,0.40mg/kg	2029±303	>0.05

如表1的结果所示，不同的MMP单独应用时对肿瘤生长的抑制作用差别很大。而且，不同的胶原酶单独应用时的抑瘤效果也有显著差异。例如，胶原酶Ⅱ在仅为0.04mg/kg时，就能够显著抑制肿瘤生长；而MMP-7在高达0.40mg/kg时仍无明显的抑瘤作用。胶原酶Ⅳ在0.10和0.20mg/kg不能有效地抑制肿瘤生长，当增加到0.40mg/kg时，对肿瘤产生了显著的抑制作用(P<0.01)，但仍明显低于0.16mg/kg的胶原酶Ⅱ的抑瘤效果(P<0.001)。

胶原酶Ⅱ能够显著抑制肿瘤生长，其作用表现出明显的量效关系。例如，0.04mg/kg胶原酶Ⅱ治疗组的肿瘤体积为1429±192mm³(P<0.05，相比于对照组的肿瘤体积2000±401mm³)；用0.08mg/kg胶原酶Ⅱ治疗时，肿瘤体积降到了1086±94.3mm³(P<0.01，相比于对照组的肿瘤体积2000±401mm³)；0.16mg/kg胶原酶Ⅱ治疗组的肿瘤体积则进一步降至514±54.3mm³(P<0.001，相比于对照组的肿瘤体积2000±401mm³)。

这些数据表明，胶原酶Ⅱ在剂量远远低于其他MMP时就能够产生显著的抑制肿瘤作用。而且，胶原酶Ⅱ以剂量依赖的方式对抗肿瘤生长。

实施例2 胶原酶Ⅱ经不同途径给药时对甲状腺癌的抑制效果比较

将8x10⁵个甲状腺癌瘤细胞经皮下注射于小白鼠季肋部，待肿瘤生长7天后将其分为以下10组(每组6只，见表2)，通过不同途径注射胶原酶Ⅱ。药物剂量按公斤体重(mg/kg)计算。给药方式分别为尾静脉注射(IV)、瘤内注射(IT)和腹腔注射(IP)。每天给药一次，共3次。治疗后第15天测量肿瘤体积大小，比较各组的治疗效果(见表2)。

表2

组别(n＝6)	接受治疗	肿瘤体积(mm<sup>3</sup>)	P值
				1	对照	2435±325
2	0.10mg/kg，IT	1542±160	<0.05
				3	0.30mg/kg，IT	812±142	<0.01
4	0.90mg/kg，IT	487±69.0	<0.001
				5	0.10mg/kg，IV	2354±459	>0.05
6	0.30mg/kg，IV	1786±303	>0.05
				7	0.90mg/kg，IV	1218±308	<0.05
8	0.10mg/kg，IP	2191±584	>0.05
				9	0.30mg/kg，IP	2029±519	>0.05
10	0.90mg/kg，IP	1380±402	<0.05

如表2的结果所示，胶原酶Ⅱ的给药途径不同，对肿瘤生长的抑制程度有显著差异。瘤内注射胶原酶Ⅱ(组2-4)抑制肿瘤生长的作用比静脉注射(组5-7)和腹腔注射(组8-10)至少强数倍。

实施例3胶原酶Ⅱ经不同途径给药时对肝癌的抑制效果比较

将5x105个肝癌瘤细胞皮下注射于小白鼠的季肋部，待肿瘤生长7天后将其分为以下10组(每组6只，见表3)，通过不同途径注射胶原酶Ⅱ。第1组为对照，第2-4组为胶原酶Ⅱ瘤内注射(IT)组，第5-7组为胶原酶Ⅱ瘤周注射(PT)组，第8-10组为胶原酶Ⅱ皮下注射(SC，距离肿瘤边缘1-2厘米)组。药物的给药剂量按公斤体重(U/kg)计算，每毫升注射剂含1000U胶原酶Ⅱ。每天给药一次，共3次。治疗后第15天测量肿瘤体积大小，比较各组的治疗效果(见表3)。

表3

试验组(n＝6)	接受治疗	肿瘤体积(mm<sup>3</sup>)	P值
				1	对照	4500±1016
2	IT，100U/kg	1707±365	<0.05
				3	IT，300U/kg	1086±116	<0.01
4	IT，900U/kg	621±178	<0.001
				5	PT，100U/kg	3724±745	<0.05

6	PT，300U/kg	2638±442	<0.05
				7	PT，900U/kg	1551±481	<0.05
8	SC，100U/kg	4655±993	>0.05
				9	SC，300U/kg	3336±737	>0.05
10	SC，900U/kg	2405±613	<0.05

如表3的结果所示，胶原酶Ⅱ的给药途径不同，对肿瘤生长的抑制程度有明显差异。瘤内注射组(组2-4)和瘤周注射组(组5-7)在几个不同的剂量(100U/kg,300U/kg和900U/kg)均能显著抑制肿瘤生长，其中瘤内注射组的抑瘤作用最为明显，且呈现剂量依赖性。相比之下，皮下注射组(组8-10)在给药剂量为900U/kg才产生有统计学意义的抑瘤作用。

实施例4胶原酶Ⅱ对不同体积肿瘤的抑制作用比较

将相同性别、相近体重的小白鼠分为以下3组，分别将不同数量的肺癌瘤细胞经皮下注射于小白鼠季肋部，其中第1组皮下注射2x10⁵个瘤细胞，第2组皮下注射5x10⁵个瘤细胞，第3组皮下注射2x10⁶个瘤细胞。待肿瘤生长14天后测量瘤体大小，然后每组再随机分成两小组(n＝6)，其中一小组接受胶原酶Ⅱ瘤内注射，经瘤内一次注射0.02ml，每毫升注射剂含10000U胶原酶Ⅱ；另一小组注射0.02ml生理盐水。治疗后第10天再次测量肿瘤体积大小，比较肿瘤生长抑制率(见表4)。

表4

表4的数据表明，应用等量的胶原酶Ⅱ对不同体积的肿瘤生长抑制程度不同。肿瘤体积越大，实现相同的抑制效果需要的药物剂量越大。

可以理解，尽管本发明以某种形式被说明，但本发明并不局限于本说明书中所显示和描述的内容。对本领域的技术人员显而易见的是，在不偏离本发明的范围的前提下还可做出各种变化。这些变化都在本发明要求保护的范围内。

Claims (7)

1.抗癌组合物在制备用于治疗癌症的药物中的用途，所述抗癌组合物包含抗癌有效成分以及药学上可接受的载体，其中所述抗癌有效成分为胶原酶Ⅱ；以及其中所述癌症选自肝癌、直肠癌、甲状腺癌或其转移癌。

2.抗癌组合物在制备用于治疗癌症的药物中的用途，所述抗癌组合物包含抗癌有效成分以及药学上可接受的载体，其中所述抗癌有效成分为胶原酶Ⅳ；以及其中所述癌症选自直肠癌或其转移癌。

3.抗癌组合物在制备用于治疗癌症的药物中的用途，所述抗癌组合物包含抗癌有效成分以及药学上可接受的载体，其中所述抗癌有效成分为胶原酶Ⅱ和胶原酶Ⅳ；以及其中所述癌症选自直肠癌或其转移癌。

4.如权利要求1-3任一项所述的用途，其中所述抗癌组合物被配制成药学上可接受的剂型。

5.如权利要求1-3任一项所述的用途，其中所述抗癌组合物被配制成注射剂、植入剂或灌注剂。

6.如权利要求1-3任一项所述的用途，其中所述药物被配制成经局部给药的剂型。

7.如权利要求6所述的用途，其中所述局部为癌灶内、癌周或癌症手术后瘤腔内。