CN105461370A - 一种专门用于茭白生态种植的微生物生长促进剂及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种专门用于茭白生态种植的微生物生长促进剂的制备方法，包括：1)从茭白种植土壤中分别初步筛选出假单胞菌、原褐固氮菌、枯草芽孢杆菌、甲基单胞菌以及链霉菌，并通过进一步筛选分别得到生长速度快的菌种；2)将步骤1)中得到的菌种在液体培养基中进行混合培养，得到混合菌液；3)将所述混合菌液在固体扩大培养基中进行固体扩大培养，得到发酵初产品；4)将所述发酵初产品进行干燥、添加基质载体、过筛、分装，得到所述微生物生长促进剂。申请发明人对现有茭白种植方法进行改进，根据茭白生长过程中对肥料的需求规律，设计种植方法以及肥料的使用，从而获得了更高的产量和优质的果实，提高了种植的经济收益。

Description

一种专门用于茭白生态种植的微生物生长促进剂及其制备方法
技术领域
本发明涉及微生物领域，具体涉及一种微生物生长促进剂，尤其涉及一种专门用于茭白生态种植的微生物生长促进剂及其制备方法。
背景技术
茭白是一种无性繁殖的水生宿根禾本科作物，俗称：茭笋、茭瓜，其肉质茎含糖4％，蛋白质1.5％，而且还富含多种维生素，因此，深受消费者的喜爱。茭白原产中国及东南亚，是一种较为常见的水生蔬菜，为禾本科植物菰的嫩茎杆被菰黑粉菌刺激而形成的纺锤形肥大部分。目前，把茭白作为蔬菜栽培的只有中国和越南，其中又以中国栽培最早。茭白分布于我国南北各地，河北、江苏、浙江、安徽、江西、福建、台湾、香港、河南、湖南、湖北、海南、广东、广西、四川、云南、黑龙江等地均有种植。其中，余姚茭白以河姆渡镇最为闻名，现年产茭白5万吨，河姆渡镇万亩无公害茭白基地先后被列为宁波市二级蔬菜基地、上海蔬菜集团茭白供应基地、浙江省优质高效农业示范基地。
茭白的生育期较长、适应性强、不择土壤，因此，一般的水田、低洼地、浅水塘、沟河边有水的地方皆可种植。尽管茭白对土质要求不高，但不宜连作，而且最好以耕作层深、富含有机质的粘土和粘质土壤种植。进一步地，由于茭白植株高大、生长期长、需肥量大，因此，还需要多施基肥，分次追肥，要求有充足的氮肥和适当的磷钾肥。另外，在茭白的生长发育过程中，温暖湿润的生长发育环境也是必要条件。
本申请发明人发现，由于茭白的根系发达、需水量多，因此适宜水源充足、灌水方便、土层深厚松软、土壤肥沃、富含有机质、保水保肥能力强的黏壤土或壤土。但是在茭白传统的种植方法中，由于人们大量使用化学肥料，从而导致土壤结块、板结等问题格外严重，进而导致土壤土质恶化、茭白产量低、经济效益差等问题的产生。事实上，土壤通气的好坏直接影响到根部的生长与养分的吸收。与大气比较，土壤中的空气特点是含氧量较低，一氧化碳含量高，据报道，土壤表层的含氧量比大气中少1-2％，而二氧化碳则比大气中高6-30倍，这是由蔬菜根系呼吸和土壤微生生物活动所致。
进一步地通过研究，本申请发明人发现，蔬菜根系的正常生命活动，要求土壤空气中含氧量大于10％，当含氧量低于10％时，生长量就急剧下降，养分吸收也受到影响；而且，蔬菜对氮、磷、钾的吸收也与土壤含氧量有关系，当土壤空气中含氧量在10-20％时，氮、磷、钾的吸收几乎没有差异，而当土壤含氧量降到5％时，氮、磷、钾的吸收也急剧下降，其吸收量甚至下降到2％。
发明内容
基于上述的现有技术以及本申请发明人的研究发现，本发明提供了一种专门用于茭白生态种植的微生物生长促进剂及其制备方法。其中，以茭白废弃物为主要原料，就地全量还田，是一种养分含量高的高效生物有机肥，其特殊的基质载体可以保证土壤透气疏松，便于有益菌生长，而且可以抑制土传病害，改善土壤其它交换及形成稳定的有益菌生态土壤***等，从而全面地解决或预防土壤连作难题，是一种新型微生物农业技术产品。
本发明的技术方案包括一种专门用于茭白生态种植的微生物生长促进剂的制备方法，其特征在于，包括：
1)从茭白种植土壤中分别初步筛选出假单胞菌、原褐固氮菌、枯草芽孢杆菌、甲基单胞菌以及链霉菌，并通过进一步筛选分别得到生长速度快的菌种；
2)将步骤1)中得到的菌种在液体培养基中进行混合培养，得到混合菌液；
3)将步骤2)得到的混合菌液在固体扩大培养基中进行固体扩大培养，得到发酵初产品；
4)将步骤3)得到的发酵初产品进行干燥、添加基质载体、过筛、分装，得到所述微生物生长促进剂。
在本发明的一个实施例中，所述初步筛选的具体步骤为：用无菌水浸泡茭白种植土壤得到浸出液；从浸出液中分别用光合细菌培养基筛选出假单胞菌，用固氮培养基筛选出原褐固氮菌，用牛肉膏蛋白胨琼脂培养基筛选出枯草芽孢杆菌、甲基单胞菌，用马铃薯蔗糖琼脂培养基筛选出链霉菌，从而分别得到所述的假单胞菌、原褐固氮菌、枯草芽孢杆菌、甲基单胞菌以及链霉菌。
更加优选地，选用生长良好的种植土壤，并采用常规方法进行微生物灭菌，将灭菌后的土壤中加入其10倍重量份的无菌水浸泡24-26小时，在浸出液中分别用光合细菌培养基筛选出假单胞菌，用固氮培养基筛选出原褐固氮菌，用牛肉膏蛋白胨琼脂培养基筛选出枯草芽孢杆菌、甲基单胞菌，用马铃薯蔗糖琼脂培养基筛选出链霉菌，从而分别得到所述的假单胞菌、原褐固氮菌、枯草芽孢杆菌、甲基单胞菌以及链霉菌。
在本发明的一个优选实施例中，所述进一步筛选具体为：将初步筛选得到的所述菌种分别稀释至10-5-10-7，然后分别在营养琼脂平板中倒置培养，选出生长速度快的菌落，然后分别进行摇瓶实验，筛选出生长速度更快的菌种；进一步地，然后将各个菌种分别转接入装有营养琼脂培养基的茄子瓶进行培养，待茄子瓶表面菌苔布满并白中带黄时，取出待用。
更加优选地是，将初步筛选得到的所述菌种分别用质量浓度为0.9％的生理盐水稀释至10-5-10-7，得到的菌悬液分别在营养琼脂平板中于35℃条件下倒置培养48小时，选出生长速度快的菌落，然后进行摇瓶实验，观察菌种生长速度，筛选出数量高于50亿/ml的菌种；将假单胞菌、原褐固氮菌、枯草芽孢杆菌、甲基单胞菌、链霉菌分别转接入装有营养琼脂培养基的茄子瓶中，在35-40℃条件下培养45-50小时，待茄子瓶表面菌苔布满并白中带黄时，即可取出，然后放入2-6℃的冰箱中保存，待用。
其中，筛选得到的所述假单胞菌为荧光假单胞菌。
进一步地，在一个实施例中，步骤2)中的所述混合培养具体为：将步骤1)中得到的菌种在液体培养基中进行混合培养，当活菌总数达到50亿/ml，pH值达到7.5-8.0时停止发酵，得到发酵初产品。
更加优选的是，按以下重量配比称取各菌种：假单胞菌10-13份、原褐固氮菌20-23份、枯草芽孢杆菌30-33份、甲基单胞菌10-13份、链霉菌18-30份；进一步地，所述混合培养是将称取的以上菌种的混合菌苔按照1：25-30的重量比例接种于经过120-130℃、30-40min高温灭菌的液体培养基中，在发酵罐中搅拌培养，其转速为220-240r/min,发酵通气量维持在1：1，温度为30-32℃；发酵24小时后每隔2小时监测发酵液pH值和活菌总数，当活菌总数达到50亿/ml，pH值达到7.5-8.0时停止发酵。
在另一个实施例中，步骤3)中的所述固体扩大培养为将步骤2)中的所述混合菌液接入固体扩大培养基中进行密封发酵培养，待水分为30-40％，pH值为7—8.5时停止发酵。
更加优选地，将步骤2)中得到的混合培养的混合菌液按1：25—30的比例接入经过120-130℃，30-45min高温灭菌的固体扩大培养基中，搅拌30-45min至均匀，倒入消毒双层塑封袋中密封发酵，温度25-35℃，时间8-15天；发酵7天后每隔6小时取样，测定水分和pH值，待水分为30-40％，pH值为7—8.5时停止发酵。
在其中一个实施例中，所述干燥是在培养箱中干燥，温度控制在35-45℃，时间12-18小时，干燥完成的发酵初产品的水分控制在20％以下。
进一步地，添加基质载体，按照干燥后的发酵初产品45-50份、基质载体50-55份的重量比例进行混合，其中，所述基质载体为灭菌木屑与灭菌茭白废弃物。
进一步地，进行过筛并装入带有内袋的桶或者塑封袋中，扎紧袋口，系好标示牌，转入成品库中有序堆放。
优选地，所述制备方法还包括取样检测，主要检测参数为：水分≤11.8％，活菌数25-30亿/g，物理性状为棕色粉末状固体。
进一步地，优选地，所述液体培养基为无菌水再加玉米浆、大麦淀粉、硫酸氢铵、糖蜜、磷酸钾、硫酸钾、微量元素溶液中至少三种混合物的组合，优选地，其组分及其重量配比为玉米浆2-3份、大麦淀粉1-2份、硫酸氢铵0.1-0.3份、糖蜜10-14份、磷酸钾1.2-2份、硫酸钾0-0.8份、微量元素溶液0.3-0.5份、无菌水75-85份。
优选地，所述固体扩大培养基为无菌水再加清糠、豆粕粉、酵母粉、玉米粉、磷酸二氢钾、硫酸锰、大蒜汁中至少四种混合物的组合，优选地，其组分及其重量配比为：清糠40-40份、豆粕粉10-12份、酵母粉1-1.2份、玉米粉8-10份、磷酸二氢钾0.8-1份、硫酸锰0-0.4份、大蒜汁1-1.2份、无菌水32.3-39.2份。
进一步地，所述的基质由灭菌木屑、灭菌茭白废弃物组成，其重量配比为：木屑55-60、茭白废弃物40-45。
本发明的技术方案还包括一种上述所述的制备方法制备得到的微生物生长促进剂。
申请发明人对现有茭白种植方法进行改进，根据茭白生长过程中对肥料的需求规律，设计种植方法以及肥料的使用，从而获得了更高的产量和优质的果实，提高了种植的经济收益。具体地，采用以茭白废弃物为主要原料，配以畜禽粪便、清糠等成分，发酵腐熟而成。其中，发酵的菌种使用的是来自土壤并能够改善土壤的有益微生物菌群，经过研究发现其可长期持续地为作物提供生长养分，提高作物的产量。同时，由于基质载体是通过独有的固、液同步发酵工艺制备，从而保证了土壤的透气疏松，便于有益菌生长，也抑制了土传病害，改善了土壤其它交换并形成了稳定的有益菌生态土壤***。
具体实施方式
本发明提供了一种专门用于茭白生态种植的微生物生长促进剂的制备方法，其特征在于，包括：
1)从茭白种植土壤中分别初步筛选出假单胞菌、原褐固氮菌、枯草芽孢杆菌、甲基单胞菌以及链霉菌，并通过进一步筛选分别得到生长速度快的菌种；
2)将步骤1)中得到的菌种在液体培养基中进行混合培养，得到混合菌液；
3)将步骤2)得到的混合菌液在固体扩大培养基中进行固体扩大培养，得到发酵初产品；
4)将步骤3)得到的发酵初产品进行干燥、添加基质载体、过筛、分装，得到所述微生物生长促进剂。
在本发明的一个实施例中，所述初步筛选的具体步骤为：用无菌水浸泡茭白种植土壤得到浸出液；从浸出液中分别用光合细菌培养基筛选出假单胞菌，用固氮培养基筛选出原褐固氮菌，用牛肉膏蛋白胨琼脂培养基筛选出枯草芽孢杆菌、甲基单胞菌，用马铃薯蔗糖琼脂培养基筛选出链霉菌，从而分别得到所述的假单胞菌、原褐固氮菌、枯草芽孢杆菌、甲基单胞菌以及链霉菌。
更加优选地，选用生长良好的种植土壤，并采用常规方法进行微生物灭菌，将灭菌后的土壤中加入其10倍重量份的无菌水浸泡24-26小时，在浸出液中分别用光合细菌培养基筛选出假单胞菌，用固氮培养基筛选出原褐固氮菌，用牛肉膏蛋白胨琼脂培养基筛选出枯草芽孢杆菌、甲基单胞菌，用马铃薯蔗糖琼脂培养基筛选出链霉菌，从而分别得到所述的假单胞菌、原褐固氮菌、枯草芽孢杆菌、甲基单胞菌以及链霉菌。
在本发明的一个优选实施例中，所述进一步筛选具体为：将初步筛选得到的所述菌种分别稀释至10-5-10-7，然后分别在营养琼脂平板中倒置培养，选出生长速度快的菌落，然后分别进行摇瓶实验，筛选出生长速度更快的菌种；进一步地，然后将各个菌种分别转接入装有营养琼脂培养基的茄子瓶进行培养，待茄子瓶表面菌苔布满并白中带黄时，取出待用。
更加优选地是，将初步筛选得到的所述菌种分别用质量浓度为0.9％的生理盐水稀释至10-5-10-7，得到的菌悬液分别在营养琼脂平板中于35℃条件下倒置培养48小时，选出生长速度快的菌落，然后进行摇瓶实验，观察菌种生长速度，筛选出数量高于50亿/ml的菌种；将假单胞菌、原褐固氮菌、枯草芽孢杆菌、甲基单胞菌、链霉菌分别转接入装有营养琼脂培养基的茄子瓶中，在35-40℃条件下培养45-50小时，待茄子瓶表面菌苔布满并白中带黄时，即可取出，然后放入2-6℃的冰箱中保存，待用。
其中，筛选得到的所述假单胞菌为荧光假单胞菌。
进一步地，在一个实施例中，步骤2)中的所述混合培养具体为：将步骤1)中得到的菌种在液体培养基中进行混合培养，当活菌总数达到50亿/ml，pH值达到7.5-8.0时停止发酵，得到发酵初产品。
更加优选的是，按以下重量配比称取各菌种：假单胞菌10-13份、原褐固氮菌20-23份、枯草芽孢杆菌30-33份、甲基单胞菌10-13份、链霉菌18-30份；进一步地，所述混合培养是将称取的以上菌种的混合菌苔按照1：25-30的重量比例接种于经过120-130℃、30-40min高温灭菌的液体培养基中，在发酵罐中搅拌培养，其转速为220-240r/min,发酵通气量维持在1：1，温度为30-32℃；发酵24小时后每隔2小时监测发酵液pH值和活菌总数，当活菌总数达到50亿/ml，pH值达到7.5-8.0时停止发酵。
在另一个实施例中，步骤3)中的所述固体扩大培养为将步骤2)中的所述混合菌液接入固体扩大培养基中进行密封发酵培养，待水分为30-40％，pH值为7—8.5时停止发酵。
更加优选地，将步骤2)中得到的混合培养的混合菌液按1：25—30的比例接入经过120-130℃，30-45min高温灭菌的固体扩大培养基中，搅拌30-45min至均匀，倒入消毒双层塑封袋中密封发酵，温度25-35℃，时间8-15天；发酵7天后每隔6小时取样，测定水分和pH值，待水分为30-40％，pH值为7—8.5时停止发酵。
在其中一个实施例中，所述干燥是在培养箱中干燥，温度控制在35-45℃，时间12-18小时，干燥完成的发酵初产品的水分控制在20％以下。
进一步地，添加基质载体，按照干燥后的发酵初产品45-50份、基质载体50-55份的重量比例进行混合，其中，所述基质载体为灭菌木屑与灭菌茭白废弃物。
进一步地，进行过筛并装入带有内袋的桶或者塑封袋中，扎紧袋口，系好标示牌，转入成品库中有序堆放。
优选地，所述制备方法还包括取样检测，主要检测参数为：水分≤11.8％，活菌数25-30亿/g，物理性状为棕色粉末状固体。
进一步地，优选地，所述液体培养基为无菌水再加玉米浆、大麦淀粉、硫酸氢铵、糖蜜、磷酸钾、硫酸钾、微量元素溶液中至少三种混合物的组合，优选地，其组分及其重量配比为玉米浆2-3份、大麦淀粉1-2份、硫酸氢铵0.1-0.3份、糖蜜10-14份、磷酸钾1.2-2份、硫酸钾0-0.8份、微量元素溶液0.3-0.5份、无菌水75-85份。
优选地，所述固体扩大培养基为无菌水再加清糠、豆粕粉、酵母粉、玉米粉、磷酸二氢钾、硫酸锰、大蒜汁中至少四种混合物的组合，优选地，其组分及其重量配比为：清糠40-40份、豆粕粉10-12份、酵母粉1-1.2份、玉米粉8-10份、磷酸二氢钾0.8-1份、硫酸锰0-0.4份、大蒜汁1-1.2份、无菌水32.3-39.2份。
进一步地，所述的基质由灭菌木屑、灭菌茭白废弃物组成，其重量配比为：木屑55-60、茭白废弃物40-45。
本发明还提供了一种上述所述的制备方法制备得到的微生物生长促进剂。其中，需要说明的是，本发明中涉及的配比及含量，在没有特殊说明的情况下，是指重量配比或重量含量。
根据本发明的上述技术方案，现通过以下具体实施例对本发明的内容作进一步地解释和说明。
实施例1
一种专门用于茭白生态种植的微生物生长促进剂的制备方法，具体地：
第一步：发酵菌株选育
a.菌种筛选：选用生长良好的种植土壤，将土壤加入10倍重量份的无菌水浸泡24小时，在浸出液中用光合细菌培养基筛选出红假单胞菌，用固氮培养基筛选原褐固氮菌，用牛肉膏蛋白胨琼脂培养基筛选枯草芽孢杆菌、甲基单胞菌，用马铃薯蔗糖琼脂培养基筛选链霉菌；
b.摇瓶计数筛选：将筛选到的以上菌种用浓度为0.9％的生理盐水稀释至10-5后的菌悬液在营养琼脂平板中35℃倒置培养48H，选出生长速度快的菌落进行摇瓶实验，观察菌种生长速度，筛选数量高于50亿/ml的菌种；
c.生产菌种的制作：荧光假单胞菌、原褐固氮菌、枯草芽孢杆菌、甲基单胞菌、链霉菌分别转接入装有营养琼脂培养基的茄子瓶中，在35℃温度下培养45小时，待茄子瓶表面菌苔布满，并白中带黄时即可取出，然后放入2℃的冰箱中保存；
第二步：有益菌株的液体培养
a.按以下重量配比称取各菌种：荧光假单胞菌10份、原褐固氮菌20份、枯草芽孢杆菌30份、甲基单胞菌10份、链霉菌18份；
b.菌种的液体培养：将称取以上菌种的混合菌苔按照1：25的比例接种于经过120℃、30min高温灭菌的液体培养基中，在发酵罐中搅拌培养，其转速为220r/min,发酵通气量维持在1：1，温度30℃；
c.发酵24小时后每隔2小时监测发酵液pH值和活菌总数，当活菌总数达到50亿/ml，pH值达到7.5时停止发酵；
第三步：菌种的固体扩大培养
a.将步骤2混合培养的混合菌液混合后按1：25的比例接入经过120℃，30min高温灭菌的固体扩大培养基中，搅拌30min至均匀，倒入消毒双层塑封袋中密封发酵，温度25℃，时间8天；
b.发酵7天后每隔6小时取样，测定水分和pH值，测定水分为30％，pH值为7时停止发酵；
第四步：粉碎添加基质载体
a.干燥：将步骤3发酵完全的初产品按时间先后放入培养箱干燥，温度控制在35℃，时间12小时，干燥完成的物料水分控制在20％以下；
b.添加基质载体：将干燥后的发酵初产品按照：发酵初产品45份、基质载体50-55份的比例混合添加，基质载体为灭菌木屑与灭菌茭白废弃物；
c.过筛后装入带有内袋的桶或者塑封袋中，扎紧袋口，系好标示牌，转入成品库有序堆放；取样检测，主要参数：水分≤11.8％，活菌熟25亿/g，物理性状为棕色粉末状固体；
其中，所述的步骤2中的液体培养基的组分的重量配比为玉米浆2份，大麦淀粉1份，硫酸氢铵0.1份、糖蜜10份、磷酸钾1.2份、硫酸钾0份、微量元素溶液0.3份、无菌水75份；
所述的步骤3中的固体扩大培养基的组分的重量配比为：清糠40份、豆粕粉10份、酵母粉1份、玉米粉8份、磷酸二氢钾0.8份、硫酸锰0份、大蒜汁1份、无菌水32.3份；
所述的基质由无菌木屑、无菌茭白废弃物组成，其重量配比为：木屑55、茭白废弃物为40。
实施例2
一种专门用于茭白生态种植的微生物生长促进剂的制备方法,具体地：
第一步：发酵菌株选育
a.菌种筛选：选用生长良好的种植土壤，将土壤加入10倍重量份的无菌水浸泡26小时，在浸出液中用光合细菌培养基筛选出红假单胞菌，用固氮培养基筛选原褐固氮菌，用牛肉膏蛋白胨琼脂培养基筛选枯草芽孢杆菌、甲基单胞菌，用马铃薯蔗糖琼脂培养基筛选链霉菌；
b.摇瓶计数筛选：将筛选到的以上菌种用浓度为0.9％的生理盐水稀释至10-7后的菌悬液在营养琼脂平板中35℃倒置培养48H，选出生长速度快的菌落进行摇瓶实验，观察菌种生长速度，筛选数量高于50亿/ml的菌种；
c.生产菌种的制作：荧光假单胞菌、原褐固氮菌、枯草芽孢杆菌、甲基单胞菌、链霉菌分别转接入装有营养琼脂培养基的茄子瓶中，在40℃温度下培养50小时，待茄子瓶表面菌苔布满，并白中带黄时即可取出，然后放入6℃的冰箱中保存；
第二步：有益菌株的液体培养
a.按以下重量配比称取各菌种：荧光假单胞菌13份、原褐固氮菌23份、枯草芽孢杆菌33份、甲基单胞菌13份、链霉菌30份；
b.菌种的液体培养：将称取以上菌种的混合菌苔按照1：30的比例接种于经过130℃、40min高温灭菌的液体培养基中，在发酵罐中搅拌培养，其转速240r/min,发酵通气量维持在1：1，温度32℃；
c.发酵24小时后每隔2小时监测发酵液pH值和活菌总数，当活菌总数达到50亿/ml，pH值达到7.5-8.0时停止发酵；
第三步：菌种的固体扩大培养
a.将步骤2混合培养的混合菌液混合后按1：30的比例接入经过130℃，45min高温灭菌的固体扩大培养基中，搅拌45min至均匀，倒入消毒双层塑封袋中密封发酵，温度35℃，时间15天；
b.发酵7天后每隔6小时取样，测定水分和pH值，测定水分为40％，pH值为8.5时停止发酵；
第四步：粉碎添加基质载体
a.干燥：将步骤3发酵完全的初产品按时间先后放入培养箱中干燥，温度控制在45℃，时间18小时，干燥完成的物料水分控制在20％以下；
b.添加基质载体：将干燥后的发酵初产品按照：发酵初产品50份、基质载体55份的比例混合添加，基质载体为灭菌木屑与灭菌茭白废弃物；
c.过筛后装入带有内袋的桶或者塑封袋中，扎紧袋口，系好标示牌，转入成品库有序堆放；取样检测，主要参数：水分≤11.8％，活菌熟30亿/g，物理性状为棕色粉末状固体；
其中，所述的步骤2中的液体培养基的组分的重量配比为玉米浆3份，大麦淀粉2份，硫酸氢铵0.3份、糖蜜14份、磷酸钾2份、硫酸钾0.8份、微量元素溶液0.5份、无菌水85份；
所述的步骤3中的固体扩大培养基的组分的重量配比为：清糠40份、豆粕粉12份、酵母粉1.2份、玉米粉8-10份、磷酸二氢钾1份、硫酸锰0.4份、大蒜汁1.2份、无菌水39.2份；
所述的基质由无菌木屑、无菌茭白废弃物组成，其重量配比为：木屑60、茭白废弃物为45。
以上对本发明的具体实施例进行了详细描述，但其只是作为范例，本发明并不限制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对本发明进行的等同修改和替代也都在本发明的范畴之中。因此，在不脱离本发明的精神和范围下所作的均等变换和修改，都应涵盖在本发明的范围内。

Claims (10)

1.一种专门用于茭白生态种植的微生物生长促进剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)从茭白种植土壤中分别初步筛选出假单胞菌、原褐固氮菌、枯草芽孢杆菌、甲基单胞菌以及链霉菌，并通过进一步筛选分别得到生长速度快的菌种；
2)将步骤1)中得到的菌种在液体培养基中进行混合培养，得到混合菌液；
3)将步骤2)得到的混合菌液在固体扩大培养基中进行固体扩大培养，得到发酵初产品；
4)将步骤3)得到的发酵初产品进行干燥、添加基质载体、过筛、分装，得到所述微生物生长促进剂。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述初步筛选的具体步骤为：用无菌水浸泡茭白种植土壤得到浸出液；从浸出液中分别用光合细菌培养基筛选出假单胞菌，用固氮培养基筛选出原褐固氮菌，用牛肉膏蛋白胨琼脂培养基筛选出枯草芽孢杆菌、甲基单胞菌，用马铃薯蔗糖琼脂培养基筛选出链霉菌。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述进一步筛选具体步骤为：将初步筛选得到的所述菌种分别稀释至10-5-10-7，然后在营养琼脂平板中倒置培养，选出生长速度快的菌落，然后分别进行摇瓶实验，筛选出生长速度更快的菌种；然后将各个菌种分别转接入装有营养琼脂培养基的茄子瓶进行培养，待茄子瓶表面菌苔布满并白中带黄时，取出待用。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤2)中的所述混合培养具体为：将步骤1)中得到的菌种在液体培养基中进行混合培养，当活菌总数达到50亿/ml，pH值达到7.5-8.0时停止发酵。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤3)中的所述固体扩大培养为将步骤2)中的所述混合菌液接入固体扩大培养基中进行密封发酵培养，待水分为30-40％，pH值为7—8.5时停止发酵，得到发酵初产品。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤4)中，所述干燥是在培养箱中干燥，温度控制在35-45℃，时间12-18小时，干燥完成的发酵初产品的水分控制在20％以下；所述添加基质载体是按照干燥后的发酵初产品45-50份、基质载体50-55份的重量比例进行混合，其中，所述基质载体为灭菌木屑与灭菌茭白废弃物，其重量配比为木屑55-60、茭白废弃物40-45；进一步地，进行过筛并装入带有内袋的桶或者塑封袋中，扎紧袋口，系好标示牌，转入成品库中有序堆放。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法还包括取样检测，主要检测参数为：水分≤11.8％，活菌数25-30亿/g，物理性状为棕色粉末状固体。
8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤2)中，所述液体培养基为无菌水再加玉米浆、大麦淀粉、硫酸氢铵、糖蜜、磷酸钾、硫酸钾、微量元素溶液的组合，其重量配比为玉米浆2-3份、大麦淀粉1-2份、硫酸氢铵0.1-0.3份、糖蜜10-14份、磷酸钾1.2-2份、硫酸钾0-0.8份、微量元素溶液0.3-0.5份、无菌水75-85份。
9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤3)中，所述固体扩大培养基为无菌水再加清糠、豆粕粉、酵母粉、玉米粉、磷酸二氢钾、硫、酸锰、大蒜汁的组合，其重量配比为：清糠40-40份、豆粕粉10-12份、酵母粉1-1.2份、玉米粉8-10份、磷酸二氢钾0.8-1份、硫酸锰0-0.4份、大蒜汁1-1.2份、无菌水32.3-39.2份。
10.一种如权利要求1-9中任意一项所述的制备方法制备得到的微生物生长促进剂。
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