CN105349613A - 一种食醋中耐高温产气嗜酸菌的检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种食醋中耐高温产气嗜酸菌的检测方法，具体步骤如下：(1)将待测样品稀释并摇匀；(2)取稀释后溶液继续进行梯度稀释，稀释液样品用于微生物实验；(3)菌群静止培养，进行染色并用显微镜观察确定染菌的种类，最后对其理化指标进行检测；所述检测方法通过最简单且有效的方法检测出酿造食醋发生产气嗜酸现象的菌种，且适用于酿造食醋的大曲、原辅料以及罐装密封所需的瓶和盖子的检测，有利于污染源和污染情况的判断，使污染范围降低且减少企业的损失，适合规模化工业生产的需求。

Description

一种食醋中耐高温产气嗜酸菌的检测方法
技术领域
本发明涉及酿造食醋检测技术领域，尤其是一种食醋中耐高温产气嗜酸菌的检测方法。
背景技术
食醋是以粮食为原料，通过微生物制曲、糖化、酒精发酵、醋酸发酵等工艺和各种氨基酸、酶制剂的结合酿制而成的。在成品醋生产过程中会有微生物的存在，例如：霉菌、酵母菌、一定数量的细菌以及放线菌。根据食醋属于调味性食品的属并综合其风味，其灭菌条件为：60-80℃恒温20-30min或者醋液加温到100℃维持5min，若无特殊污染，上述条件可以将食醋在酿造过程中的菌杀死，且符合现如今酿造食醋的卫生标准GB2719-2003所制定的微生物要求：大肠菌群少于3MPN/100mL，菌落总数不得超过10000cfu/mL，不得检出致病菌，灌装密封后不会出现产气嗜酸现象。若其出现产气嗜酸现象则说明被其他菌污染，上述灭菌条件则不能将其杀死，则不能符合酿造食醋卫生标准中的大肠菌群和菌落总数(指在一定条件下(如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等)每克(每毫升)检样所生长出来的细菌菌落总数)的要求。因此，简单且快速检测出造成酿造食醋产气嗜酸现象的菌种类和位置尤为关键。
食品微生物检测指标有三个：大肠菌群、菌落总数以及致病菌。常见微生物检测方法有：培养膜法、螺旋平板计数法、滤膜法、ATP生物荧光法、电阻抗法、颜色变化法、流式细胞仪技术以及激光扫描技术等，这些技术成本高，不适于工业化生产的公司进行微生物检测。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于提供一种具有降压功效的组合物。
本发明所要解决的另一技术问题在于提供上述具有降压功效的组合物的制备方法。
为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：
一种食醋中耐高温产气嗜酸菌的检测方法，具体步骤如下：
(1)按重量体积比g/ml或按体积比计将待测样品以1：10的比例稀释并摇匀(样品为固体时，10g样品放入含有100mL蒸馏水且一起灭菌的三角瓶；样品为液体时，10mL样品放入含有100mL蒸馏水且一起灭菌的三角瓶)；
(2)取稀释后溶液继续进行梯度稀释，将步骤(1)中稀释溶液和每个梯度的稀释液样品各取6mL用于微生物实验，其中，每个试管1mL，共两个试管用于检测大肠菌群；每个平板各1mL，共四个平板——两个平板检测菌落总数，另外两个平板检测霉菌；
(3)菌群静止培养，其中，
大肠菌群37℃静置培养24h±2h；
菌落总数37℃静置培养48h±2h；
霉菌以及酵母菌28℃静置培养5-7d±2h，计数观察过后，利用伊红美蓝培养基检测具有会发生产气嗜酸现象的菌，进行挑菌划线，划线后37℃静止培养24h±2h，培养过后，进行染色并用显微镜观察确定染菌。
对于染菌的种类以及最后对其理化指标进行检测可利用BIOLOG鉴定***。
优选的，上述食醋中耐高温产气嗜酸菌的检测方法，所述步骤(2)中梯度稀释的方法为1mL稀释液加入含有9mL蒸馏水且一起灭过菌的试管中，一次稀释2次。
优选的，上述食醋中耐高温产气嗜酸菌的检测方法，所述步骤(3)中使用伊红美蓝培养基对引起产气嗜酸菌进行检测，所述伊红美蓝培养基的组方为每升培养基中：蛋白胨10g；乳糖10g；磷酸氢二钾2g；琼脂20-30g；2％伊红水溶液20ml；0.5％美蓝水溶液13ml；其余为水(蒸馏水或去离子水)；搅拌至完全溶解，121℃高压灭菌15min即得。
原理：当大肠杆菌分解乳糖产酸时细菌带正电荷被染成红色，再与美蓝结合形成紫黑色菌落，并带有绿色金属光泽。而产气杆菌则形成呈棕色的大菌落；在碱性环境中不分解乳糖产酸的细菌不着色，伊红和美蓝不能结合，故沙门氏菌等为无色或琥珀色半透明菌落。金葡菌在此培养基上不生长。
优选的，上述食醋中耐高温产气嗜酸菌的检测方法，所述步骤(3)中：
大肠菌群的检测，使用乳糖胆盐培养基，所述乳糖胆盐培养基的组方为每升培养基中：胨20.0g；乳糖5.0g；氯化钠5.0g；磷酸氢二钾4.0g；磷酸二氢钾1.3g；去氧胆酸钠/牛胆盐0.5g(去氧胆酸钠)/2.0g(牛胆盐)；其余为水(蒸馏水或去离子水)；最终pH＝7.4±0.2；
使用方法：在烧杯中称取上述各组分加入蒸馏水或去离子水，搅拌加热煮沸至完全溶解，115℃灭菌15min，待冷至常温后，备用；
原理：胨提供碳氮源；乳糖是可发酵的糖类；氯化钠维持均衡的渗透压；磷酸氢二钠和磷酸二氢钾为缓冲剂；牛胆盐和去氧胆酸钠为选择性抑菌剂；
菌落总数的检测，使用平板计数培养基，所述平板计数培养基的组方为每升培养基中：胰蛋白胨：5.0g；酵母浸粉：2.5g；葡萄糖：1.0g；琼脂：15.0g；其余为水(蒸馏水或去离子水)；pH7.0士0.2；
使用方法：在烧杯中称取上述各组分加入蒸馏水或去离子水，搅拌至完全溶解，121℃高压灭菌15min，备用；
原理：胰蛋白胨提供碳源和氮源；酵母膏粉提供B族维生素；葡萄糖提供能源；琼脂是培养基的凝固剂；
霉菌以及酵母菌的检测，使用孟加拉红培养基，所述孟加拉红培养基的组方为每升培养基中：蛋白胨5g；葡萄糖10g；磷酸二氢钾1g；硫酸镁0.5g；琼脂15g；孟加拉红0.03g；氯霉素0.1g；其余为水(蒸馏水或去离子水)；最终pH＝7.2±0.2；
使用方法：在烧杯中称取上述各组分加入蒸馏水或去离子水，搅拌至完全溶解，121℃高压灭菌20min，备用；
原理：蛋白胨提供碳源和氮源；葡萄糖提供能源；磷酸二氢钾为缓冲剂；硫酸镁提供必须的微量元素；琼脂是培养基的凝固剂；氯霉素可抑制细菌的生长；孟加拉红作为选择性抑菌剂可抑制细菌的生长，并可减缓某些霉菌因生长过快而导致菌落漫延生长。
本发明的有益效果：
上述食醋中耐高温产气嗜酸菌的检测方法，通过最简单且有效的方法检测出酿造食醋发生产气嗜酸现象的菌种，且适用于酿造食醋的大曲、原辅料以及罐装密封所需的瓶和盖子的检测，有利于污染源和污染情况的判断，使污染范围降低且减少企业的损失，适合规模化工业生产的需求。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明所述技术方案作进一步的说明。
实施例1
一种食醋中耐高温产气嗜酸菌的检测方法，具体步骤如下：
(1)将液体食醋按体积比1：10的比例稀释并摇匀，即10mL样品放入含有100mL蒸馏水且一起灭菌的三角瓶；
(2)取稀释后溶液继续进行梯度稀释，梯度稀释的方法为1mL稀释液加入含有9mL蒸馏水且一起灭过菌的试管中，一次稀释2次，将步骤(1)中稀释溶液和步骤(2)中每个梯度的稀释液样品各取6mL用于微生物实验，其中，每个试管1mL，共两个试管用于检测大肠菌群；每个平板各1mL，共四个平板——两个平板检测菌落总数，另外两个平板检测霉菌；
(3)菌群静止培养，其中，
大肠菌群37℃静置培养24h；
菌落总数37℃静置培养48h；
霉菌以及酵母菌28℃静置培养7d，计数观察过后，大肠菌群的检测，使用乳糖胆盐培养基(见上述说明书技术方案部分)；菌落总数的检测，使用平板计数培养基(见上述说明书技术方案部分)；霉菌以及酵母菌的检测，使用孟加拉红培养基(见上述说明书技术方案部分)；利用伊红美蓝培养基(见上述说明书技术方案部分)检测具有会发生产气嗜酸现象的菌，进行挑菌划线，划线后37℃静止培养24h，培养过后，进行染色并用显微镜观察确定染菌。
通过实施例1所述方法分离纯化的菌种在染色过后，通过显微镜的观察具有革兰氏阳性且具有芽孢特性，经过理化试验证实具有其特征。
通过实施例1所述方法进行食醋检测，对于通过该方法发现具有革兰氏阳性且具有芽孢特性的染菌，将检测食醋一部分在135℃8s条件下灭菌，灭菌后重复实施例1检测方法，未再发现具有革兰氏阳性且具有芽孢特性的染菌，且灭菌后未发生产气嗜酸现象；另一部分检测食醋分别在121℃30min和130℃8s条件下灭菌，灭菌后重复实施例1检测方法，均再次发现具有革兰氏阳性且具有芽孢特性的染菌，且前者数量多于后者，食醋仍发生产气嗜酸现象。
综上，采用实施例1中所述方法进行检测的食醋在未达到其致死温度和时间(135℃8s)时，可以检测出污染菌种，食醋发生产气嗜酸现象，在超过135℃8s时，未检测到此污染菌种，且未发生产气嗜酸现象。
同时，在利用实施例1所述方法检测出引发食醋产气嗜酸现象的菌之后，利用高压瞬时灭菌法灭菌后，成品醋未发生产气嗜酸现象。而对于未被这种引发食醋产气嗜酸现象的菌污染的情况下，成品醋的灭菌条件是90℃灭菌20min，若存在大肠杆菌，它与较其他杆菌相比耐热性较强，但其在121℃下20min基本上可以被杀死；若存在一般的芽孢菌，其在121℃15min下也能被杀死，其他细菌、霉菌以及酵母在相同温度下都可以被杀死，实施例1所述方法对其进行检测，结果与现有检测方法结果一致。
上述参照实施例对该一种食醋中耐高温产气嗜酸菌的检测方法进行的详细描述，是说明性的而不是限定性的，可按照所限定范围列举出若干个实施例，因此在不脱离本发明总体构思下的变化和修改，应属本发明的保护范围之内。

Claims (4)

1.一种食醋中耐高温产气嗜酸菌的检测方法，其特征在于：具体步骤如下：
(1)按重量体积比g/ml或按体积比计将待测样品以1：10的比例稀释并摇匀；
(2)取稀释后溶液继续进行梯度稀释，将步骤(1)中稀释溶液和每个梯度的稀释液样品各取6mL用于微生物实验，其中，每个试管1mL，共两个试管用于检测大肠菌群；每个平板各1mL，共四个平板——两个平板检测菌落总数，另外两个平板检测霉菌；
(3)菌群静止培养，其中，
大肠菌群37℃静置培养24h±2h；
菌落总数37℃静置培养48h±2h；
霉菌以及酵母菌28℃静置培养5-7d±2h，计数观察过后，利用伊红美蓝培养基检测具有会发生产气嗜酸现象的菌，进行挑菌划线，划线后37℃静止培养24h±2h，培养过后，进行染色并用显微镜观察确定染菌。
2.根据权利要求1所述的食醋中耐高温产气嗜酸菌的检测方法，其特征在于：所述步骤(2)中梯度稀释的方法为1mL稀释液加入含有9mL蒸馏水且一起灭过菌的试管中，一次稀释2次。
3.根据权利要求1所述的食醋中耐高温产气嗜酸菌的检测方法，其特征在于：所述步骤(3)中使用伊红美蓝培养基对引起产气嗜酸菌进行检测，所述伊红美蓝培养基的组方为每升培养基中：蛋白胨10g；乳糖10g；磷酸氢二钾2g；琼脂20-30g；2％伊红水溶液20ml；0.5％美蓝水溶液13ml；其余为水。
4.根据权利要求1所述的食醋中耐高温产气嗜酸菌的检测方法，其特征在于：所述步骤(3)中：
大肠菌群的检测，使用乳糖胆盐培养基，所述乳糖胆盐培养基的组方为每升培养基中：胨20.0g；乳糖5.0g；氯化钠5.0g；磷酸氢二钾4.0g；磷酸二氢钾1.3g；去氧胆酸钠/牛胆盐0.5g/2.0g；其余为水；最终pH＝7.4±0.2；
菌落总数的检测，使用平板计数培养基，所述平板计数培养基的组方为每升培养基中：胰蛋白胨：5.0g；酵母浸粉：2.5g；葡萄糖：1.0g；琼脂：15.0g；其余为水；pH7.0士0.2；
霉菌以及酵母菌的检测，使用孟加拉红培养基，所述孟加拉红培养基的组方为每升培养基中：蛋白胨5g；葡萄糖10g；磷酸二氢钾1g；硫酸镁0.5g；琼脂15g；孟加拉红0.03g；氯霉素0.1g；其余为水；最终pH＝7.2±0.2。
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