CN105311089A - 发酵大豆萃取物作为吲哚胺2，3双加氧酶抑制剂的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了发酵大豆萃取物作为吲哚胺2，3双加氧酶抑制剂的应用。具体地，本发明关于发酵大豆萃取物作为吲哚胺2，3双加氧酶(indoleamine？2,3-dioxygenase,IDO)抑制剂的应用。

Description

发酵大豆萃取物作为吲哚胺2，3双加氧酶抑制剂的应用

相关申请案交互参照

本申请主张于2014年6月13日申请的第62/011,856号美国临时专利申请案的优先权，这些全部在此完整并入当成参考。

技术领域

本发明关于发酵大豆萃取物作为吲哚胺2，3双加氧酶(indoleamine2,3-dioxygenase,IDO)抑制剂的用途。

背景技术

吲哚胺2，3双加氧酶(IDO1或IDO)是一种含有含铁血红素单体蛋白，其催化必需氨基酸色胺酸(Tryp)的降解。IDO已经被视为是一种赋予有力的免疫调节效应的酵素，以调节体内的免疫反应，归因于其造成了必需氨基酸色胺酸的分解代谢的酵素活性。IDO调节的色胺酸分解代谢已经被证实藉由通过多种机转而对T细胞产生效应，包括降低的T细胞增生、增加的T细胞自戕以及调控T细胞(Tregulatorycells,Tregs)的诱发，其共同导致细胞免疫反应的损害[1-4]。

发明内容

本发明非可预期的发现，发酵大豆萃取物有效于抑制吲哚胺2，3双加氧酶的活性，因而可作为IDO抑制剂。

因此，本发明提供发酵大豆萃取物作为IDO抑制剂的应用。

具体而言，所述的发酵大豆萃取物是通过以至少一种乳酸菌(例如，乳杆菌属(LactobaciIIusspecies)和可视需要的至少一种酵母菌(例如，酵母菌属(Saccharomycesspecies))使水溶性大豆萃取物发酵来制得。

在部分具体实施例中，发酵后进行一或多个选自由以下组成的群组的步骤:灭菌、过滤、浓缩、冻干及其任何组合。

在特定具体实施例中，该发酵大豆萃取物是通过包含以下步骤的过程来制得:(a)以至少一种乳酸菌伴随至少一种酵母菌使水溶性大豆萃取物发酵，以形成发酵液；(b)对该发酵液进行灭菌；(c)过滤经灭菌发酵液；和(d)从经过滤发酵液移除水，以形成浓缩的发酵大豆萃取物。

本发明的各个具体实例的细节说明如后。本发明的其它特征将会经由以下各个具体实例中的详细说明及权利要求书而清楚呈现。

附图说明

出于阐释本发明的目的，在图式中显示当前较佳的实施例。然而，应理解，本发明并不限于所显示的较佳实施例。在图式中：

图1中显示MS-20(本发明的发酵大豆萃取物)在人类周边血单核细胞(PBMCs)抑制干扰素伽玛(IFNγ)诱发的IDO活性。结果来自于n＝6单独实验，数据以平均±标准偏差的方式呈现，其中(a)显示色氨酸浓度降低(μM,Tryp)，(b)犬尿氨酸(kynurenine)浓度增加(μM,kyn)，以及(c)Kyn/Tryp比例(μmol/mmol)。

图2中显示MS-20以剂量依赖方式在人类周边血单核细胞(PBMCs)抑制IFNγ诱发的IDO活性，其中(a)为色氨酸浓度(Tryp)，(b)犬尿氨酸浓度(Kyn)，以及(c)为Kyn/Tryp比例(*10³)。这些结果显示MS-20以剂量依赖方式抑制IDO活性，EC₅₀经计算分别为0.71、0.46或0.48％(1％MS-20＝4mg/mL)。

图3中显示MS-20以剂量依赖方式抑制IFNγ诱发的海拉(HeLa)人类子***细胞IDO活性，其中(a)为犬尿氨酸浓度(μM,Kyn)及(b)抑制百分比(％)。这些结果以平均±标准偏差表示(n＝3独立实验)。

图4显示人类周边血单核细胞(PBMCs)的存活率。以0.125％-1％(0.5-4mg/mL)的MS-20处理人类PBMCs达2天。以MTT分析测定细胞存活率。结果显示细胞存活率以MS-20剂量依赖的方式增加。这些结果来自于2次独立实验的平均值。

图5中显示海拉人类子***细胞的存活率。以不同浓度的(a)MS-20或(b)L-1MT处理海拉人类子***细胞达2天。结果显示细胞存活率随着MS-20的浓度增加而降低。这些结果以平均±标准偏差表示(n＝3独立实验)。

图6显示MS-20以剂量依赖方式抑制IDO酵素活性。数据以抑制百分比(％)表示。这些结果以平均±标准偏差表示(n＝2独立实验)。

具体实施方式

除非另外定义，否则本文所用的所有技术和科学术语都具有与本发明所属领域技术人员一般所了解相同的含义。如此处所使用者，以下用语具有归因于该等用语的意义，除非另有限定。

在本文中，冠词“一”是指一个或一个以上(亦即，至少一个)该冠词语法上之受词。举例而言，一组件是指一个组件或多于一个的组件。

在本发明中，非可预期的发现，发酵大豆萃取物有效于抑制吲哚胺2，3双加氧酶的活性，因而可作为IDO抑制剂。

因此，本发明提供一种抑制吲哚胺2，3双加氧酶(IDO)的方法，包括将发酵大豆萃取物以有效于抑制IDO活性的含量投用于有需要的个体。

本发明也提供发酵大豆萃取物用于制备抑制吲哚胺2，3双加氧酶活性的组合物的应用。本发明还提供一种抑制吲哚胺2，3双加氧酶活性的方法，包括使吲哚胺2，3双加氧酶与有效于抑制IDO活性的含量的发酵大豆萃取物接触。

根据本发明，此处所使用的发酵大豆萃取物是指通过利用至少一种乳酸菌和可视需要的至少一种酵母菌使水溶性大豆萃取物发酵制得的萃取物。在一个实施例中，该至少一种乳酸菌是乳杆菌属且该至少一种酵母菌是酵母菌属。在特定实施例中，发酵是使用不同种类的乳杆菌属培养物(例如5、10、15、20、25或30种乳杆菌属菌株的培养物)来实施，且较佳地，将至少一种酵母菌添加到不同种类的乳杆菌属培养物中。可用于发酵的乳杆菌属菌株包括，但不限于，嗜酸乳杆菌(Lactobacillusacidophilus)CCRC(食品工业发展研究所生物资源保存及研究中心，台湾)10695、14026、14064、14065及/或14079；德氏乳杆菌保加利亚亚种(Lactobacillusdelbrueckiibulgaricus)CCRC10696、14007、14009、14010、14069、14071、14098及/或16054；德氏乳杆菌乳亚种(LactobacillusIactislactis)CCRC10791、12267、12306、12312、12315、12323、14016、14015及/或14117；高加索酸奶乳杆菌(LactobaciIIuskefir)CCRC14011及/或马乳酒样乳杆菌(Lactobacilluskefiranofaciens)CCRC16059。可用于发酵的酵母菌菌株包括，但不限于，酿酒酵母菌(Saccharomycescerevisiae)CCRC20577、20578、20581、21494、21550、21797、21805、22138、22234、22337、22731及/或22728及/或乳酒假丝酵母菌(Candidakefyr)CCRC21269、21742及/或22057。具体而言，在发酵后进行一个或一个以上步骤，例如灭菌、过滤、浓缩、冻干或其任何组合。较佳地，在发酵后通过例如加热进行灭菌，且可视需要地进行过滤和浓缩。更佳地，可经由例如冻干来干燥发酵大豆萃取物，以获得呈粉末形式的发酵大豆萃取物。在某一实施例中，本发明的发酵大豆萃取物是通过包含以下步骤的制程来制得：(a)利用至少一种乳酸菌伴随至少一种酵母菌使水溶性大豆萃取物发酵，以形成发酵液；(b)对该发酵液进行灭菌；(c)过滤经灭菌发酵液；和(d)自经过滤发酵液移除水，以形成浓缩的发酵大豆萃取物。本文所用的发酵大豆萃取物可如美国专利第6,855,350号和第6,733,801号来制备，所述专利的每一者都以全文引用方式并入本文中。

如美国专利第6,733,801号所述，制备方法是将大豆属有机物(去脂后)与蒸馏水按照1∶10的比例混合。将混合物加热到100℃，并保持30分钟，然后过滤得到大豆属萃取物。将牛肉和海藻在蒸馏水中保持沸腾状态30分钟，以得到肉汤培养基。加入盐、糖和琼脂以得到特殊的琼脂培养基。向特制的琼脂培养基中加入乳酸菌和酵母菌株。培养基中的乳酸菌和可选的酵母菌转移到大豆属萃取物中，在36-43℃培养45-50小时。由于不同种类的微生物根据其相似的生长特性而成群生长，因此最好在培养前将这些微生物群分开加入到大豆属萃取物中。这些生长特性为(例如)独特营养培养基的任何要求、微生物菌株发酵后是否能产生较好的气味、以及该类微生物是否能在此独特的条件下存活。这样做的目的是减少不同种菌株间的负面作用。不同的微生物菌株群最好在培养前以等比例加入到大豆属发酵萃取物中，得到的萃取物在40℃下培养45-47小时。该培养过程结束后，再将异种培养物引入大豆属萃取物中，在36-43℃下培养100-150小时。将最终的发酵萃取物加热灭菌过滤。在浓缩器中去除95％的水份，得到浓缩或凝聚状态的发酵的大豆属萃取物。最上层经过瓷器过滤，分放在容器中密封保存。

此处所使用的名词“个体”或“对象”包括人类及非人类动物，例如，伴侣动物(如，狗、猫及类似者)、农场动物(如，牛、羊、猪、马及类似者)或实验动物(如，大鼠、小鼠、天竺鼠及类似者)。

此处所使用的名词“治疗”是指为了治愈、愈合、减轻、舒缓、改变、矫正、改善、改进或影响该疾病、该疾病之症状、该疾病引起的残疾或该疾病的进展，而将包含一或多种活性剂之组合物施用或投与至患有该疾病、该疾病之症状或病况或该疾病的进展的个体。

此处所使用的名词“有效量”是指各活性成分对个体可产生治疗效应之所需含量，可以是单独或结合一或多种活性成分。如熟习本项技术者可理解的，有效量将视情形而定，取决于，例如，给药途径，赋形剂的使用，及与其他活性成份的并用。例如，有效于抑制IDO活性的量是降低或抑制IDO活性的量，其可使用此领域已知的方法来决定或评估，例如，以细胞为基础的分析或酵素分析(参见以下实例)。

在部分具体实施例中，本发明的发酵大豆萃取物有效于降低周边血单核细胞(PBMCs)的IDO活性。

在部分具体实施例中，本发明的发酵大豆萃取物有效于增加周边血单核细胞(PBMCs)的存活率。

在部分具体实施例中，本发明的发酵大豆萃取物有效于增加免疫反应，特别是T细胞调节的免疫反应，经由，例如，增加T细胞增生、降低T细胞自戕及降低调节T细胞而达成。

具体而言，本发明的发酵大豆萃取物有效于在有需要的个体治疗IDO调节的免疫低下。此处所使用的名词“免疫低下”可指免疫***任一成员的损坏，导致降低的免疫功能。免疫低下可能由各种因素造成，例如，压力、营养不良、感染疾病、癌症、器官移植的抗排斥药物、抗发炎药物或癌症的化疗或辐射治疗。

在部分具体实施例中，感染疾病是病毒感染，选自人类免疫不全病毒(HIV)、C型肝炎病毒、麻疹病毒、登革热病毒及淋巴球性脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)所组成的群组。

在部分具体实施例中，化疗是经由投用抗癌化疗药物而进行，选自顺铂(cisplatin)、多西它赛(docelaxel)、泛艾霉素(epirubicin)、艾日布尔(eribulin)、弗瑞斯锭(fareston)、吉西它宾(gemcitabine)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、泰莫西芬(tamoxifen)及长春新碱(vincristine)所组成的群组。

在部分具体实例中，辐射治疗包括铯，铱，碘或钴。辐射治疗可以是全身性或针对位置的局部性，例如，针对肿瘤位置及固体癌组织。幅射治疗可以是传统的外照射和电子放射疗法，质子放射疗法，近距离放射疗法和分子放射疗法。

具体而言，如此领域已知者，IDO的免疫抑制活性已经在不同的生理及病理情况中予以证实，包括癌症。基于测定色氨酸及犬尿氨酸的血清浓度的研究，IDO显示在患有癌症的病患中慢性活化，且IDO活化与广泛的疾病状态有关。IDO在许多的人类肿瘤种类及定位于肿瘤引流***(TDLNs)的星状细胞(DCs)过度表现。增加的IDO表现已经显示是对于患有急性髓性白血病(AML)、小细胞肺癌、黑素瘤、卵巢癌、结肠直肠癌、胰腺癌及子宫内膜癌之病患的降低存活之独立预后可变因素。因此，IDO抑制可被确认为癌症免疫疗法的有希望的方式。

在部分具体实施例中，癌症包括胃癌、结肠癌、乳腺癌、肝癌、肺癌、子***、***癌、胰腺癌、肾癌、卵巢癌及血癌。

本发明的发酵大豆萃取物可通过任何生理上可接受的途径来递送，例如，经口、经肠外(例如，肌内、静脉内、皮下、腹膜内)、经皮、经直肠、通过吸入等。在一具体实施例中，本发明的发酵大豆萃取物是经口投与。

在部分具体实施例中，根据本发明的发酵大豆萃取物可以有效量投用达一段足够时间，以在有需要的病患活化或恢复T细胞活性。

为帮助递送，可用生理上可接受的载剂将本发明发酵大豆萃取物调配为组合物。可将本发明组合物调配成药物、食品添加剂或保健产品。

本文所使用的“生理上可接受的”乙词指载剂与组合物中所含的活性成份兼容，较佳地能稳定该活性成份，并且对治疗个体无害。载剂可用作活性成份的稀释剂、媒剂、赋形剂或介质。适宜赋形剂的一些实例包括乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀粉、***胶(gumacacia)、磷酸钙、藻酸盐、黄蓍胶、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、无菌水、糖浆和甲基纤维素。医药组合物可另外包括润滑剂，例如，滑石粉、硬脂酸镁和矿物油；润湿剂；乳化剂和悬浮剂；防腐剂，例如，羟基苯甲酸甲酯和羟基苯甲酸丙酯；增甜齐；和矫味剂。

可根据说明书中所提供教示内容使用常规技术视需要以任何形式来制备本发明的组合物。在某些实例中，可将本发明组合物制成以下形式：锭剂、丸剂、粉剂、锭剂、香囊、扁囊剂、酏剂、悬浮剂、乳剂、溶液、糖浆剂、软和硬明胶胶囊、栓剂、无菌注射液及包装的粉末。

本发明组合物可通过任何生理上可接受的途径来递送，例如经口、经肠外(例如肌内、静脉内、皮下、腹膜内)、经皮、经直肠、通过吸入和诸如此类。在一具体实施例中，本发明的组合物是经口投与。

现将参照以下实施例更具体地阐述本发明，提供所述实施例用于说明性而非限制性目的。

实施例

在本研究中，我们使用IFNγ刺激的人类周边血单核细胞(PBMCs)，以研究本发明的发酵大豆萃取物(下称MS-20)对于色氨酸降解的效应。以IFNγ刺激PBMC诱发显著的色氨酸分解代谢，其可反应于色氨酸浓度降低及犬尿氨酸浓度的平行增加，相较于未经刺激的细胞而言。并行地，也观察到细胞存活的增加。以增加剂量0.5-4mg/mL(0.125％-1％)MS-20处理经IFNγ刺激的PBMC显著地抑制IFNγ诱发的色氨酸降解。MS-20的该等效应是剂量依赖的。此一基于细胞的IDO分析也在具有较高内生IDO表现的海拉人类子***细胞中进行，结果也在海拉细胞中观察到相同的经由MS-20的抑制现象，IC₅₀为1.8mg/mL。由MS-20抑制IDO也经由酵素分析确认，获得与基于细胞分析类似的结果(IC₅₀为1.86mg/mL)。这些结果证实MS-20对于IFNγ诱发的IDO有抑制作用。

1.材料方法

1.1.试剂

细胞株购自美国典型组织培养物中心(ATCC)及依据建议的培养条件例行维护。L-1MT(IDO抑制剂)、L-色氨酸、L-犬尿氨酸购自Sigma-Aldrich。人类IFNγ购自R&DSystems，根据制造商的建议储存和使用。

1.2IDO酵素活性分析

IDO活性测定采用比色法。简言之，将2×10⁶细胞通过冷冻和解冻破坏，溶解物(250μL)通过离心澄清化，加入等量2倍IDO缓冲液(100mM磷酸盐缓冲盐水(PBS)，pH为6.5，含40mM抗坏血酸、20μm的亚甲基蓝、200mg/ml过氧化氢酶和800μm的L-色氨酸(Sigma-Aldrich,St.Louis,MO))。在37℃培育30分钟后，加入100μL的30％三氯乙酸以终止反应，在52℃再另外培育30分钟，并离心。将上清液用Ehrlich试剂(100mg对-二甲基苯甲醛，5mL冰醋酸)于微量滴定板孔(96孔格式)等量混合，使颜色发展10分钟，然后以分光量度计在490nm读取吸亮度。样本相对于空白试剂以490nm滤镜在微量盘分析仪(BioTekSystems)读取。犬尿氨酸的浓度对应于犬尿氨酸标准曲线予以计算。

1.3以细胞为基础的IDO分析

在人类PBMC测定抑制剂活性

人类周边血单核细胞(PBMCs)是通过Ficoll-Hypaque密度梯度分离自健康志愿者的白血球细胞浓缩物(从血库得到)。该测定如下进行：人类PBMCs以每孔2×10⁵的密度接种于含有RPMI培养基的96孔培养板，RPMI含有10％胎牛血清，100单位/毫升青霉素和链霉素(GIBCO)。将100ng/mL的人类IFNγ(R&DSystems)及MS-20连续稀释液添加至合适的孔，使得每孔最终体积为200μL培养基。在含5％CO₂的湿润培养箱中，于37℃培育40-44小时后，收集来自三重复的孔的上清液并予以保存，以供藉由HPLC的色氨酸和犬尿氨酸分析。对于剩余的细胞，进行MTT细胞存活分析，以测定经过各种处理后的细胞存活率。

1.4在以海拉细胞为基础的IDO/犬尿氨酸分析测定抑制剂活性

海拉细胞(#CCL-2)是从美国典型组织培养物中心(ATCC，马纳萨斯，弗吉尼亚州)获得，并常规维持于Dulbecco氏改良Eagle培养基(DMEM)，其含有10％牛胎儿血清，含有100单位/毫升的青霉素和链霉素(GIBCO)。将细胞保持在37℃，供给5％CO₂的湿润培养箱中。该分析如下进行：将海拉细胞以5×10³每孔的密度接种在96孔培养板，生长过夜。隔日，将50ng/mL的人类IFNγ(R&DSystems)及MS-20或L-1MT的连续稀释液，以每孔200μL培养基总体积，加入到细胞中。经过额外40-44小时培养后，收集来自三重复的孔的上清液并予以保存，以供藉由HPLC的色氨酸和犬尿氨酸分析。对于剩余的细胞，进行MTT细胞存活分析，以测定细胞存活率。

1.5藉由HPLC分析培养基中的色氨酸及犬尿氨酸。

为了测定IDO活性，使用高效能液相层析法(Highperformanceliquidchromatography)在反相测量上清液的色氨酸和犬尿氨酸的浓度，以及计算Kyn/Tryp[5]。

2.结果

在以细胞为基础的IDO分析中，以IFNγ刺激PBMC，观察到色氨酸的降解有提升。相较于未经处理的细胞，IFNγ刺激的PBMC的上清液含有显著较低的色氨酸的浓度(P<0.001，表1及图1)。相较之下，在IFNγ刺激的细胞中，犬尿酸浓度显著上升(P<0.001，未显示)。因此，Kyn/Tryp比例在IFNγ刺激的PBMC比在未经IFNγ刺激的PBMC还要高(P<0.001，表1a及图1)。

以0.5-4mg/mL(0.125％-1％)的MS-20处理细胞，不影响静息细胞的色氨酸代谢(数据未显示)。相较之下，在PBMC，以IFNγ刺激提升了色氨酸的降解、犬尿酸的产生，以及Kyn/Tryp比例以剂量依赖方式受到MS-20的影响(图2)。在IFNγ活化的海拉人类子***细胞，也观察到类似受MS-20抑制的现象(图3)。的确，在海拉细胞受50ng/mL的IFNγ刺激40-42小时后，在培养基中的色氨酸浓度下降到甚至低于检测限制(表1b)。L-1MT，一种IDO抑制剂，平行地予以测试，以比较IDO抑制活性。以MS-20抑制IDO也可藉由IDO酵素分析获得确认，结果类似于以细胞为基础的分析(图6；IC50＝1.86mg/mL)。这些结果显示，MS-20有效地抑制IDO活性。

MTT(细胞存活率)分析结果显示PBMC的存活率在MS-20存在下增加(表1a)，而海拉细胞的存活率在MS-20最高浓度(4mg/mL)下，仅有轻度的降低(20％)。此等在PBMC及海拉细胞的细胞存活率的改变是剂量依赖性的(图4-5)。综合判断之，由MS-20处理所观察到的IDO活性降低并非因细胞数量或细胞存活率下降所致。

表1：在(1a)初级人类PBMCs或(1b)海拉人类子***细胞的上清液，在存在或不存在MS-20或L-1MT(IDO抑制剂)的情形，未经刺激的或以IFNγ刺激的色氨酸及犬尿酸浓度及kyn/Tryp比例。

咸信本发明所属领域的技术人员基于本文的叙述，无须进一步之例示即可将本发明应用至其最广泛之范围。因此，应了解此处所提供之叙述及权利要求书是供例示目的而非以任何方式限制本发明之范畴。

参考文献：

1.Godin-EthierJ,HanafiLA,PiccirilloCA,etal.Indoleamine2,3-dioxygenaseexpressioninhumancancers:clinicalandimmunologicperspectives.ClinCancerRes.2011Nov15；17(22):6985-91.

2.BeckerJC,AndersenMH,SchramaD,etal.Immune-suppressivepropertiesofthetumormicroenvironment.CancerImmunolImmunother.2013Jul；62(7):1137-48.

3.MurakamiY,HoshiM,ImamuraY,etal.RemarkableRoleofIndoleamine2,3-DioxygenaseandTryptophanMetabolitesinInfectiousDiseases:PotentialRoleinMacrophage-MediatedInflammatoryDiseases.MediatorsInflamm.2013；2013:391984.

4.LiuX,NewtonRC,FriedmanSM,etal.Indoleamine2,3-dioxygenase,anemergingtargetforanti-cancertherapy.CurrCancerDrugTargets.2009Dec；9(8):938-52.

5.WidnerB,WernerER,SchennachH,WachterH,FuchsD.SimultaneousmeasurementofserumtryptophanandkynureninebyHPLC.ClinChem1997；43:2424–6.

Claims (13)

1.一种发酵大豆萃取物用于制备抑制吲哚胺2，3双加氧酶活性的组合物的应用。

2.如权利要求1所述的应用，其中所述的组合物有效于降低周边血单核细胞的吲哚胺2，3双加氧酶活性。

3.如权利要求1所述的应用，其中所述的组合物有效于增加周边血单核细胞的存活率。

4.如权利要求1所述的应用，其中所述的组合物有效于提升免疫反应。

5.如权利要求4所述的应用，其中所述的免疫反应是T细胞调节的免疫反应。

6.如权利要求1所述的应用，其中所述的组合物有效于治疗吲哚胺2，3双加氧酶调节的免疫低下。

7.如权利要求1所述的应用，其中所述的组合物包含另一吲哚胺2，3双加氧酶抑制剂。

8.如权利要求1所述的应用，其中所述的另一吲哚胺2，3双加氧酶抑制剂是1-甲基色氨酸。

9.如权利要求1至8中任一项所述的应用，其中所述的发酵大豆萃取物是通过以至少一种乳酸菌和可视需要的至少一种酵母菌使水溶性大豆萃取物发酵来制得。

10.如权利要求9所述的应用，其中该至少一种乳酸菌是乳杆菌属(Lactobacillusspecies)且该酵母菌是酵母菌属(Saccharomycesspecies)。

11.如权利要求9所述的应用，其中在发酵后进行一或多个选自由以下组成的群组的步骤:灭菌、过滤、浓缩、冻干及其任何组合。

12.如权利要求9所述的应用，其中该发酵大豆萃取物是通过包含以下步骤的过程来制得:a)以至少一种乳酸菌伴随至少一种酵母菌使水溶性大豆萃取物发酵，以形成发酵液；b)对该发酵液进行灭菌；c)过滤经灭菌发酵液；和d)从经过滤发酵液移除水，以形成浓缩的发酵大豆萃取物。

13.一种抑制吲哚胺2，3双加氧酶活性的方法，包括使吲哚胺2，3双加氧酶与发酵大豆萃取物接触，其中该发酵大豆萃取物的量有效于抑制吲哚胺2，3双加氧酶的活性。