CN105254718A - 一种牛乳铁蛋白肽的制备方法及应用 - Google Patents
一种牛乳铁蛋白肽的制备方法及应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105254718A CN105254718A CN201510688999.8A CN201510688999A CN105254718A CN 105254718 A CN105254718 A CN 105254718A CN 201510688999 A CN201510688999 A CN 201510688999A CN 105254718 A CN105254718 A CN 105254718A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- temperature
- lactoferricin
- pcr
- upstream
- antibacterial peptide
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明涉及一种牛乳铁蛋白肽的制备方法及应用，该方法选取氨基酸编码序列NO.1为目标蛋白，然后将氨基酸序列NO.1，转化成核苷酸编码序列NO.2，并在苷酸编码序列NO.2设计并人工合成两条反相互补的寡核苷酸链上下游引物，在上下两条引物的5’端分别引入限制性酶切位点？EcoR？I和？Xho？I，PCR扩增获得抗菌肽基因片段，分别构建重组表达载体，转化大肠杆菌后诱导表达，超声裂解菌体，SDS-PAGE凝胶电泳检测，融合蛋白GST-LfcinB成功表达，融合蛋白经谷胱甘肽琼脂糖亲和层析纯化后，经羟胺剪切缓冲液切割融合蛋白，释放抗菌肽。通过琼脂扩散法抑菌实验检测其对大肠杆菌和金色葡萄球菌都具有明显的抑菌活性。克服了牛乳铁蛋白肽分子量较小容易被蛋白酶水解，造成产量低。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域。具体涉及一种牛乳铁蛋白肽的制备方法及应用。
背景技术
近年来从世界范围来看由于抗生素的过度使用，造成细菌性感染和疾病呈上升趋势负面效应越来越大，耐药性菌株的不断出现也越来越引起人们忧虑，因此寻找、发现和生产新的抗生素的替代品已列入人们的议事日程。跨入新世纪以来，抗菌肽(Antibacterlalpeptides)是生物体内经诱导产生的一类具有生物学活性的小分子多肤,存在于多种生物体中,是宿主免疫防御***的一个重要组成部分。由于自身的优点已日益引起人们的关注，并已成为研究的热点，其中牛乳铁蛋白肽(LactoferricinB)，不仅参与铁的转运，而且具有广谱抗菌、抗氧化、抗癌、调节免疫***等生物学功能，因此被认为是一种新型的抗菌药物和极具开发潜力的婴幼儿食品﹑饲料添加剂。
最初，日本研究人员发现天然牛乳铁蛋白的降解后，其抗菌活性比牛乳铁蛋白强400多倍，分离提取后发现活性物质为牛乳铁蛋白肽。然而从天然来源中分离牛乳铁蛋白肽产量低、费时长、工艺复杂，成本昂贵。此后，商业上用的牛乳铁蛋白肽是从牛奶中分离提取牛乳铁蛋白，再经过生物酶降解产物，产生牛乳铁蛋白肽。由于所原来降解牛乳铁蛋白的生物酶价格昂贵，因此这种方法生产的牛乳铁蛋白肽成本仍然较高。而人工合成牛乳铁蛋白肽及其衍生物费用更高，无法大规模生产。目前我国从新西兰进口的牛乳铁蛋白每吨价格为35万美元。尽管如此，随着生物技术的发展，牛乳铁蛋白已在欧洲和日本被进行商业化生产，用于制造母乳化婴儿配方奶粉或其它功能性食品。因此利用基因工程技术将牛乳铁蛋白肽基因转入其它生物中表达，为解决牛乳铁蛋白肽来源不足提供了新的途径。
基因工程表达法将是大量生产抗菌肽的理想途径。基因工程生产抗菌肽的表达***主要是毕赤酵母和大肠杆菌,常选用表达宿主偏爱的密码子人工合成基因并进行克隆表达。原核表达***是最早采用的表达***,也是目前应用的较为经典的表达***。该***主要是将目的基因连接到载体上,再对其进行克隆,之后转化至细菌,通过诱导表达、纯化获得目的蛋白。该表达***的优点体现在短时间内能获得目的蛋白,而且成本较低。但是，抗菌肽的大量分泌会对宿主产生有害作用，因此，目前主要通过重组蛋白技术将目的基因同谷胱甘肽硫转移酶，硫氧还蛋白，绿色荧光蛋白，外壳蛋白，类弹性蛋白，酮类固醇异构酶，小分子泛素样修饰蛋白等融合表达，降低了抗菌肽对宿主细胞的毒性。本研究选择谷胱甘肽巯基转移酶(GlutathioneS-transferase，GST)作为融合标签，尝试利用大肠杆菌表达***制备牛乳铁蛋白肽(LfcinB)抗菌肽。
发明内容
本发明目的在于，提供一种牛乳铁蛋白肽的制备方法及应用，该方法选取氨基酸编码序列NO.1为目标蛋白，然后将氨基酸序列NO.1，转化成核苷酸编码序列NO.2，并在苷酸编码序列NO.2设计并人工合成两条反相互补的寡核苷酸链上下游引物，在上下两条引物的5’端分别引入限制性酶切位点EcoRI和XhoI，PCR扩增获得抗菌肽基因片段，分别构建重组表达载体，转化大肠杆菌后诱导表达。超声裂解菌体，十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，融合蛋白GST-LfcinB成功表达。融合蛋白经谷胱甘肽琼脂糖亲和层析纯化后，经羟胺剪切缓冲液切割融合蛋白，释放抗菌肽。通过琼脂扩散法抑菌实验检测其对大肠杆菌和金色葡萄球菌都具有明显的抑菌活性。克服了牛乳铁蛋白肽分子量较小而且容易被蛋白酶水解，往往造成产量低，难以产业化。本发明所述方法，大大提高了抗菌肽的产量。
本发明所述的一种牛乳铁蛋白肽的制备方法，按下列步骤进行：
a、抗菌肽LfcinB基因的合成：
根据牛乳铁蛋白肽的基因序列LfcinB，选取氨基酸编码序列NO.1：Ac-FKCRRWQWRMKKLGAP-NH为目标蛋白，然后将氨基酸序列NO.1，转化成核苷酸编码序列NO.2：上游5’-TCAAATGCTGGCGTTGGCAGTGGCGTTGGAAGAAATTGGGTGCTCCTTTTC-3’下游5’-GAAAGCACGACGCACGCAAGTGATAGAAGGAGCACCCAATTTCTTCCA-3’，再将核苷酸编码序列NO.2，设计并人工合成两条反相互补的寡核苷酸链上下游引物，在上下两条引物的5’端分别引入限制性酶切位点EcoRI和XhoI，即得上游引物：5’-GATCCTTCAAATGCTGGCGTTGGCAGTGGCGTTGGAAGAAATTGGGTGCTCCTTTTCTAAC；下游引物：5’-TCGAGTTAGAAAGCACGACGCACGCAAGTGATAGAAGGAGCACCCAATTTCTTCCATTGAAG，再将选取的氨基酸编码序列NO.1目标蛋白上游引入羟胺切割蛋白位点天冬酰胺—甘氨酸；
PCR扩增目的抗菌肽基因：
PCR反应体系：超纯水40μL，10×PCR含Mg2 +缓冲液5μL，2.5mmol/LdNTPs1μL，上游引物1.5μL，下游引物1.5μL，Taq酶1μL，共计50μL；
反应程序为：温度94℃保持5分钟后，温度94℃反应30秒，温度55℃反应30秒，温度72℃反应30秒，共进行30循环后，温度72℃保持10分钟；
PCR扩增产物经PCR纯化试剂盒纯化后，温度-20℃保存备用；
b、抗菌肽LfcinB基因重组载体的构建：
将步骤a中PCR产物与表达载体pGEX-4T-1用EcoRI和XhoI进行双酶切反应，反应体系为载体pGEX-4T-142μL，EcoRI1.5μL，XhoI1.5μL，10×FastDigest缓冲液5μL，Total50μL分别混匀，温度37℃水浴20min；
连接产物转化到BL21大肠杆菌中，在含有抗生素氨苄青霉素的LB固体平板上挑选转化子，分别接种于含50μg/mL氨苄青霉素的4mLLB液体培养基中，温度37℃，220rpm振荡培养8-10h，提取质粒后，PCR鉴定，并命名为pGEX-4T-1LfcinB；
c、重组抗菌肽LfcinB基因的诱导表达：
重组菌pGEX-4T-1LfcinB经终浓度为1mmol/L异丙基硫代半乳糖苷诱导后，经十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，与阴性对照相比，重组菌有明显浓集的目的蛋白表达条带，检测目的蛋白，即得牛乳铁蛋白肽。
所述方法获得的牛乳铁蛋白肽在制备抑制大肠杆菌和金色葡萄球菌中的应用。
本发明所述的一种牛乳铁蛋白肽的制备方法，该方法获得的牛乳铁蛋白肽经谷光甘肽琼酯糖凝胶—4B(GlutathioneSepharose4B)亲和层析凝胶纯化融合蛋白结果：
大量培养诱导重组表达菌pGEX-4T-1LfcinB，收集后高压破碎菌体，离心后分别取上清液和沉淀样品，三羟甲基甘氨酸—十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳(Tricine-SDS-PAGE)检测，结果显示上清液和沉淀都有表达，主要表达在上清液，上清液经0.45μm滤膜过滤除杂后，经谷光甘肽琼酯糖凝胶—4B(GlutathioneSepharose4B)凝胶亲和层析纯化，用20％Tricine-SDS-PAGE胶电泳检测到一条与预测分子量大小一致的条带。
本发明所述的一种牛乳铁蛋白肽的制备方法，该方法中氨基酸序列No1：Ac-FKCRRWQWRMKKLGAP-NH2；牛乳铁蛋白肽的基因序列LfcinB，核苷酸编码序列NO.2：上游5’-TCAAATGCTGGCGTTGGCAGTGGCGTTGGAAGAAATTGGGTGCTCCTTTTC-3’下游5’-GAAAGCACGACGCACGCAAGTGATAGAAGGAGCACCCAATTTCTTCCA-3’。其制备方法，构建牛乳铁蛋白肽的基因序列LfcinB氨基酸的核苷酸序列的表达载体，并将表达载体转化到宿主细胞中，形成可以表达LfcinB抗菌肽的重组细胞；培养重组细胞，使其可以表达LfcinB抗菌肽；分离细胞裂解后，用蛋白酶切除去标签，产物具有抗菌活性。
附图说明
图1为本发明LfcinB抗菌肽基因的PCR扩增结果图；
图2为本发明LfcinB抗菌肽基因重组质粒的PCR鉴定图；
图3为本发明LfcinB抗菌肽基因重组质粒的双酶切鉴定图；
图4为本发明重组LfcinB抗菌肽基因诱导表达图；
图5为本发明亲和层析凝胶纯化LfcinB抗菌肽融合蛋白图；
图6为本发明LfcinB抗菌肽融合蛋白对金色葡萄球菌的抑制效果图；
图7为本发明LfcinB抗菌肽融合蛋白对大肠杆菌的抑制效果图。
具体实施方式：
实施例
a、抗菌肽LfcinB基因的合成：
根据牛乳铁蛋白肽的基因序列LfcinB，选取氨基酸编码序列NO.1：Ac-FKCRRWQWRMKKLGAP-NH为目标蛋白，然后将氨基酸序列NO.1，转化成核苷酸编码序列NO.2：上游5’-TCAAATGCTGGCGTTGGCAGTGGCGTTGGAAGAAATTGGGTGCTCCTTTTC-3’下游5’-GAAAGCACGACGCACGCAAGTGATAGAAGGAGCACCCAATTTCTTCCA-3’，再将核苷酸编码序列NO.2，设计并人工合成两条反相互补的寡核苷酸链上下游引物，在上下两条引物的5’端分别引入限制性酶切位点EcoRI和XhoI，即得上游引物：5’-GATCCTTCAAATGCTGGCGTTGGCAGTGGCGTTGGAAGAAATTGGGTGCTCCTTTTCTAAC；下游引物：5’-TCGAGTTAGAAAGCACGACGCACGCAAGTGATAGAAGGAGCACCCAATTTCTTCCATTGAAG，再将选取的氨基酸编码序列NO.1目标蛋白上游引入羟胺切割蛋白位点天冬酰胺—甘氨酸；
PCR扩增目的抗菌肽基因：
PCR反应体系：超纯水40μL，10×PCR含Mg2 +缓冲液5μL，2.5mmol/LdNTPs1μL，上游引物1.5μL，下游引物1.5μL，Taq酶1μL，共计50μL；
反应程序为：温度94℃保持5分钟后，温度94℃反应30秒，温度55℃反应30秒，温度72℃反应30秒，共进行30循环后，温度72℃保持10分钟；
PCR扩增产物经PCR纯化试剂盒纯化后，温度-20℃保存备用；
b、抗菌肽LfcinB基因重组载体的构建：
将步骤a中PCR产物与表达载体pGEX-4T-1用EcoRI和XhoI进行双酶切反应，反应体系为载体pGEX-4T-142μL，EcoRI1.5μL，XhoI1.5μL，10×FastDigest缓冲液5μL，Total50μL分别混匀，温度37℃水浴20min；
连接产物转化到BL21大肠杆菌中，在含有抗生素氨苄青霉素的LB固体平板上挑选转化子，分别接种于含50μg/mL氨苄青霉素的4mLLB液体培养基中，温度37℃，220rpm振荡培养8-10h，提取质粒后，PCR鉴定，并命名为pGEX-4T-1LfcinB；
c、重组抗菌肽LfcinB基因的诱导表达：
重组菌pGEX-4T-1LfcinB经终浓度为1mmol/L异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后，经十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)胶电泳检测，与阴性对照相比，重组菌有明显浓集的目的蛋白表达条带，检测目的蛋白，即得牛乳铁蛋白肽。
谷光甘肽琼酯糖凝胶—4B(GlutathioneSepharose4B)亲和层析凝胶纯化融合蛋白结果：
大量培养诱导重组表达菌pGEX-4T-1LfcinB，收集后高压破碎菌体，离心后分别取上清液和沉淀样品，三羟甲基甘氨酸—十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳(Tricine-SDS-PAGE)胶电泳检测，结果显示上清液和沉淀都有表达，主要表达在上清液，上清液经0.45μm滤膜过滤除杂后，经谷光甘肽琼酯糖凝胶—4B(GlutathioneSepharose4B)凝胶亲和层析纯化，用20％三羟甲基甘氨酸—十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳(Tricine-SDS-PAGE)胶电泳检测到一条与预测分子量大小一致的条带。
抗菌肽的抗菌效果：
将纯化后的凝胶从胶上切下来，溶解在0.01％的醋酸缓冲液中，取上清液，采用琼脂扩散法检测抑菌活性，结果表明：通过本发明所述方法获得的牛乳铁蛋白肽对大肠杆菌和金色葡萄球菌有明显的抑菌活性，图6，图7。
名称：一种牛乳铁蛋白肽的制备方法及应用
申请人：中国科学院新疆理化技术研究所
牛乳铁蛋白肽的基因序列LfcinB，氨基酸编码序列NO.1：Ac-FKCRRWQWRMKKLGAP-NH2。
牛乳铁蛋白肽的基因序列LfcinB，核苷酸编码序列NO.2：上游5’-TCAAATGCTGGCGTTGGCAGTGGCGTTGGAAGAAATTGGGTGCTCCTTTTC-3’下游5’-GAAAGCACGACGCACGCAAGTGATAGAAGGAGCACCCAATTTCTTCCA-3’。
Claims (2)
1.一种牛乳铁蛋白肽的制备方法，其特征在于按下列步骤进行：
a、抗菌肽LfcinB基因的合成：
根据牛乳铁蛋白肽的基因序列LfcinB，选取氨基酸编码序列NO.1：Ac-FKCRRWQWRMKKLGAP-NH为目标蛋白，然后将氨基酸序列NO.1，转化成核苷酸编码序列NO.2：上游5’-TCAAATGCTGGCGTTGGCAGTGGCGTTGGAAGAAATTGGGTGCTCCTTTTC-3’下游5’-GAAAGCACGACGCACGCAAGTGATAGAAGGAGCACCCAATTTCTTCCA-3’，再将核苷酸编码序列NO.2，设计并人工合成两条反相互补的寡核苷酸链上下游引物，在上下两条引物的5’端分别引入限制性酶切位点EcoRI和XhoI，即得上游引物：5’-GATCCTTCAAATGCTGGCGTTGGCAGTGGCGTTGGAAGAAATTGGGTGCTCCTTTTCTAAC；下游引物：5’-TCGAGTTAGAAAGCACGACGCACGCAAGTGATAGAAGGAGCACCCAATTTCTTCCATTGAAG，引入酶切位点后，氨基酸编码序列NO.1目标蛋白上游引入羟胺切割蛋白位点天冬酰胺—甘氨酸；
PCR扩增目的抗菌肽基因：
PCR反应体系：超纯水40μL，10×PCR含Mg2 +缓冲液5μL，2.5mmol/LdNTPs1μL，上游引物1.5μL，下游引物1.5μL，Taq酶1μL，共计50μL；
反应程序为：温度94℃保持5分钟后，温度94℃反应30秒，温度55℃反应30秒，温度72℃反应30秒，共进行30循环后，温度72℃保持10分钟；
PCR扩增产物经PCR纯化试剂盒纯化后，温度-20℃保存备用；
b、抗菌肽LfcinB基因重组载体的构建：
将步骤a中PCR产物与表达载体pGEX-4T-1用EcoRI和XhoI进行双酶切反应，反应体系为载体pGEX-4T-142μL，EcoRI1.5μL，XhoI1.5μL，10×FastDigest缓冲液5μL，Total50μL分别混匀，温度37℃水浴20min；
连接产物转化到BL21大肠杆菌中，在含有抗生素氨苄青霉素的LB固体平板上挑选转化子，分别接种于含50μg/mL氨苄青霉素的4mLLB液体培养基中，温度37℃，220rpm振荡培养8-10h，提取质粒后，PCR鉴定，并命名为pGEX-4T-1LfcinB；
c、重组抗菌肽LfcinB基因的诱导表达：
重组菌pGEX-4T-1LfcinB经终浓度为1mmol/L异丙基硫代半乳糖苷诱导后，经十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，与阴性对照相比，重组菌有明显浓集的目的蛋白表达条带，检测目的蛋白，即得牛乳铁蛋白肽。
2.一种如权利要求1所述方法获得的牛乳铁蛋白肽在制备抑制大肠杆菌和金色葡萄球菌中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510688999.8A CN105254718A (zh) | 2015-10-21 | 2015-10-21 | 一种牛乳铁蛋白肽的制备方法及应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510688999.8A CN105254718A (zh) | 2015-10-21 | 2015-10-21 | 一种牛乳铁蛋白肽的制备方法及应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN105254718A true CN105254718A (zh) | 2016-01-20 |
Family
ID=55094695
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201510688999.8A Pending CN105254718A (zh) | 2015-10-21 | 2015-10-21 | 一种牛乳铁蛋白肽的制备方法及应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN105254718A (zh) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106377762A (zh) * | 2016-08-24 | 2017-02-08 | 方雅悯 | 一种牛乳铁蛋白及其酶解物在护胃保肝产品中的应用 |
| CN106755042A (zh) * | 2016-12-29 | 2017-05-31 | 华东理工大学 | 一种基于组合自剪切与蛋白支架的生物活性小肽制备方法 |
| CN114014939A (zh) * | 2021-11-23 | 2022-02-08 | 华侨大学 | 一种牛乳铁蛋白肽融合蛋白、编码基因和保鲜剂及其在水果保鲜中的应用 |
| CN117024604A (zh) * | 2023-08-09 | 2023-11-10 | 广西福莱明生物制药有限公司 | 一种重组生物防御融合蛋白及其应用 |
| CN118146346A (zh) * | 2024-05-09 | 2024-06-07 | 杭州岛屿星晴生物技术有限公司 | 一种仿生胎脂蛋白肽的制备方法及其产品和应用 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101812459A (zh) * | 2010-03-26 | 2010-08-25 | 黑龙江省科学院微生物研究所 | 编码抗菌肽Lactoferricin B的核酸及其原核表达方法 |
-
2015
- 2015-10-21 CN CN201510688999.8A patent/CN105254718A/zh active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101812459A (zh) * | 2010-03-26 | 2010-08-25 | 黑龙江省科学院微生物研究所 | 编码抗菌肽Lactoferricin B的核酸及其原核表达方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| HILDE ULVATNE等: "Bactericidal Kinetics of 3 lactoferricins against staphylococcus aureus and escherichia coli", 《SCAND J INFECT DIS》 * |
| 吴建军 等: "LfcinB突变基因在大肠杆菌中的融合表达活性测定", 《生物技术通讯》 * |
| 王亮 等: "抗菌肽牛乳铁蛋白衍生肽在毕赤酵母中的表达及活性鉴定", 《生物技术通报》 * |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106377762A (zh) * | 2016-08-24 | 2017-02-08 | 方雅悯 | 一种牛乳铁蛋白及其酶解物在护胃保肝产品中的应用 |
| CN106755042A (zh) * | 2016-12-29 | 2017-05-31 | 华东理工大学 | 一种基于组合自剪切与蛋白支架的生物活性小肽制备方法 |
| CN106755042B (zh) * | 2016-12-29 | 2020-10-09 | 华东理工大学 | 一种基于组合自剪切与蛋白支架的生物活性小肽制备方法 |
| CN114014939A (zh) * | 2021-11-23 | 2022-02-08 | 华侨大学 | 一种牛乳铁蛋白肽融合蛋白、编码基因和保鲜剂及其在水果保鲜中的应用 |
| CN117024604A (zh) * | 2023-08-09 | 2023-11-10 | 广西福莱明生物制药有限公司 | 一种重组生物防御融合蛋白及其应用 |
| CN117024604B (zh) * | 2023-08-09 | 2024-03-29 | 广西福莱明生物制药有限公司 | 一种重组生物防御融合蛋白及其应用 |
| CN118146346A (zh) * | 2024-05-09 | 2024-06-07 | 杭州岛屿星晴生物技术有限公司 | 一种仿生胎脂蛋白肽的制备方法及其产品和应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| TWI702289B (zh) | 用於胜肽生產之融合夥伴 | |
| CN105254718A (zh) | 一种牛乳铁蛋白肽的制备方法及应用 | |
| CN101906165B (zh) | 两种鱼类抗菌肽基因的串联表达产物及其表达方法 | |
| Liu et al. | Fusion expression of pedA gene to obtain biologically active pediocin PA-1 in Escherichia coli | |
| US10000544B2 (en) | Process for production of insulin and insulin analogues | |
| CN114107353B (zh) | 一种高效表达多肽毒素的质粒及其制备方法与应用 | |
| Trémillon et al. | Production and purification of staphylococcal nuclease in Lactococcus lactis using a new expression-secretion system and a pH-regulated mini-reactor | |
| CN110835366A (zh) | 促进蛋白质可溶性表达的标签多肽及其用途 | |
| CN104195157A (zh) | 生物活性肽在原核细胞中的高效率重组表达和纯化方法 | |
| CN104560905A (zh) | 一种源自假单胞菌的硫醚单加氧酶及其合成应用 | |
| CN107488639B (zh) | 甲苯单加氧酶及其在手性亚砜生物催化合成中的应用 | |
| CN110078791B (zh) | 一种基于氨基酸特异性识别实现蛋白质交联的方法 | |
| CN103275917A (zh) | 一种tev蛋白酶表达工程菌及其构建和应用 | |
| CN115747075A (zh) | 一种能胞外分泌抗菌肽的三角褐指藻构建方法 | |
| RU2447151C1 (ru) | ПЛАЗМИДА 40Ph, ОПРЕДЕЛЯЮЩАЯ СИНТЕЗ ЩЕЛОЧНОЙ ФОСФАТАЗЫ CmAP, ШТАММ E.coli rosetta(DE3)/40Ph - ПРОДУЦЕНТ ХИМЕРНОГО БЕЛКА, ВКЛЮЧАЮЩЕГО АМИНОКИСЛОТНУЮ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ РЕКОМБИНАНТНОЙ ЩЕЛОЧНОЙ ФОСФАТАЗЫ CmAP, И СПОСОБ ЕЕ ПОЛУЧЕНИЯ | |
| US10351857B2 (en) | Marine bacterial gene LfliZ and use | |
| RU2453604C1 (ru) | Гибридный белок (варианты), штамм бактерий escherichia coli - продуцент гибридного белка (варианты) и способ получения безметионинового интерферона альфа-2 человека | |
| CN113025599A (zh) | 一种重组溶组织梭菌i型胶原酶及其制备方法和应用 | |
| CN103993030A (zh) | 一种大肠杆菌细胞内蛋白酶剪切融合蛋白的方法 | |
| CN102277327B (zh) | 过表达RimL的大肠杆菌及其在制备N-乙酰化胸腺素α中的应用 | |
| RU2441072C1 (ru) | ГИБРИДНЫЙ БЕЛОК, ШТАММ БАКТЕРИЙ ESCHERICHIA COLI - ПРОДУЦЕНТ ГИБРИДНОГО БЕЛКА И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БЕЗМЕТИОНИНОВОГО ИНТЕРФЕРОНА АЛЬФА-2b ЧЕЛОВЕКА ИЗ ЭТОГО ГИБРИДНОГО БЕЛКА | |
| CN112852788A (zh) | 一种碱性底物选择性提高的枯草蛋白酶e突变体及其应用 | |
| CN109750021A (zh) | 一种扇贝类胡萝卜素氧化裂解酶基因及其应用 | |
| CN110923223A (zh) | 一种新型腈水解酶及其应用 | |
| CN115976032B (zh) | 一种用于表达骆驼乳铁蛋白抑菌肽的基因、抑菌肽及应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20160120 |