CN105199948A - 大肠杆菌的快速检验试剂盒及检测方法 - Google Patents

大肠杆菌的快速检验试剂盒及检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN105199948A
CN105199948A CN201510629717.7A CN201510629717A CN105199948A CN 105199948 A CN105199948 A CN 105199948A CN 201510629717 A CN201510629717 A CN 201510629717A CN 105199948 A CN105199948 A CN 105199948A
Authority
CN
China
Prior art keywords
colibacillary
chamber
pcr reaction
reaction solution
pipeline
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201510629717.7A
Other languages
English (en)
Inventor
窦晓鸣
山口佳则
刘晨晨
李振庆
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Individual
Original Assignee
Individual
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Individual filed Critical Individual
Priority to CN201510629717.7A priority Critical patent/CN105199948A/zh
Publication of CN105199948A publication Critical patent/CN105199948A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C12Q1/686—Polymerase chain reaction [PCR]

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明涉及细菌检测技术领域，具体涉及大肠杆菌的检测装置与方法。一种大肠杆菌快速检验的试剂盒，包括试剂盒主体，试剂盒主体还设有至少三个相对独立的密封腔室，分别为装有预处理液的第一腔室，装有PCR反应液的第二腔室和装有电泳液的第三腔室；预处理液是一用于溶解并分散大肠杆菌的处理液；PCR反应液是一用于对大肠杆菌的16S？rDNA片段进行特异性的复制增殖的PCR反应液；电泳液是一用于将采用PCR反应液得到的DNA分子进行电泳检测的电泳液。本发明通过预处理液能够免去提取分离培养等步骤，可以直接得到大肠杆菌基因组，节省了时间提高了效率。

Description

大肠杆菌的快速检验试剂盒及检测方法
技术领域
本发明涉及细菌检测技术领域，具体涉及大肠杆菌的检测装置与方法。
背景技术
大肠杆菌是人和许多动物肠道中最主要且数量最多的一种细菌，周身鞭毛，能运动，无芽孢。主要生活在大肠内。大肠杆菌是引发肠道疾病以及***性疾病的主要病原菌。研究表明，饮用水、食品中大肠杆菌的数量，可作为其安全程度的重要指标。因此，大肠杆菌的检测具有重要研究意义。
传统大肠杆菌检测主要有两种方法，一种需要进过提取分离培养，细菌形态鉴定等步骤较为繁琐。然而，这种技术具有局限性，多种细菌并不具可供鉴定的形态学特征；细菌培养技术本身会引入很大的误差，重复性低。这种传统大肠杆菌检测试剂的种类繁多耗时较长，而且试剂大多放在各个试剂瓶内，取用较为麻烦而且还容易搞错试剂，不利于长期发展。另外一种，实时荧光定量PCR，可将细菌样品的特异性DNA进行扩增，同时进行荧光定量检测。但这种方法极易产生非特异性产物，从而形成假阳性结果。
本方案提出的大肠杆菌的16SrDNA基因鉴定手段可克服以上问题。该手段不需细菌培养，直接提取样品基因组，继而进行特异性基因扩增检测。所需时间只需数小时。本发明所用的16SrDNA基因片段异性强，能有效地作为目标大肠杆菌的鉴定标记，提高检测结果的准确性。本发明所用的PCR技术和电泳技术灵敏度高，电泳技术对PCR产物进行分离/纯化检测，从很大程度上排除假阳性的可能性。
发明内容
本发明的目的在于，提供一种大肠杆菌的快速检验试剂盒，解决以上技术问题。
本发明的另一目的在于，提供一种大肠杆菌的快速检测方法，解决以上技术问题。
本发明所解决的技术问题可以采用以下技术方案来实现：
一种大肠杆菌快速检验的试剂盒，包括试剂盒主体，其特征在于，所述试剂盒主体还设有至少三个相对独立的密封腔室，分别为装有预处理液的第一腔室，装有PCR反应液的第二腔室和装有电泳液的第三腔室；
所述预处理液是一用于溶解并分散大肠杆菌的处理液；所述PCR反应液是一用于对大肠杆菌的16SrDNA片段进行特异性的复制增殖的PCR反应液；所述电泳液是一用于将采用所述PCR反应液得到的DNA分子进行电泳检测的电泳液。
本发明通过预处理液能够免去提取分离培养等步骤，可以直接得到大肠杆菌基因组，节省了时间提高了效率。所述预处理液能破坏采集到的细菌的细胞壁和细胞膜，获得细菌细胞的内容物将细菌的DNA释放到溶液中的预处理液。PCR反应液提供反应引物，反应原材料，合成所需要的酶。
所述第一腔室设有第一管路，所述第二腔室设有第二管路，所述第一管路和第二管路设有至少一个第一交叉点，所述第一交叉点为所述预处理液和所述PCR反应液进行反应的第一反应点；所述第三腔室设有第三管路，所述第三管路与所述第二管路设有至少一个第二交叉点，所述第二交叉点为所述PCR反应液和所述电泳液进行反应的的第二反应点。确保第一腔室，第二腔室导通、第二腔室与第三腔室导通。
所述第一腔室设有第一管路，所述第二腔室设有第二管路，所述第一管路和第二管路设有至少一个第一交叉点，所述第一交叉点为所述预处理液和所述PCR反应液进行反应的第一反应点；所述第三腔室设有第三管路，所述第一反应点与所述第三管路设有至少一个第二交叉点。确保第一腔室，第二腔室导通，所述预处理液和所述PCR反应液在第一交叉点进行反应，第二交叉点与第三腔室导通，从而实现所述预处理液和所述PCR反应液反应后的反应液与电泳液在第二交叉点反应。
所述第一管路与所述第三管路设有至少一个第三交叉点。
确保第一腔室，第二腔室和第三腔室三者之间两两相互导通便于检测。
所述预处理液是磷酸缓冲盐溶液。
所述磷酸缓冲盐溶液主要成分以质量百分比，包括30％～45％磷酸二氢钾、15％～25％磷酸氢二钠、25％～35％氯化钠、10％～13％氯化钾和10％～15％水。磷酸缓冲盐溶液具有盐平衡、可调整的适宜pH缓冲作用。
所述PCR反应液主要成分以容积计，包括3μL-10μL三羟甲基氨基甲烷缓冲液，2μL-8μL脱氧核糖核苷三磷酸，0.2μL-0.5μLDNA聚合酶和1μL-2μL大肠杆菌细菌的特异性引物和35μL-40μL去离子水。三羟甲基氨基甲烷缓冲液用作核酸和蛋白质的溶剂，也是蛋白质电泳缓冲液的主要成分之一。
所述大肠杆菌细菌的特异性引物的浓度在150nmol/L～250nmol/L之间。
所述脱氧核糖核苷三磷酸的浓度在2nmol/L～3nmol/L之间。
最适条件可进行梯度实验进行调整。
所述三羟甲基氨基甲烷缓冲液的PH值在7.8～8.4之间，优选为PH＝8。
弱碱环境下缓冲液发挥的功效最大。
所述电泳液是羟乙基纤维素溶液。对电介质具有异常好的盐溶性。
所述特异性引物序列为：
上游引物：5’-GGAAGAAGCTTGCTTCTTTGCTGAC-3’
下游引物：3’-AGCCCGGGGATTTCACATCTGACTTA-5’。用于对大肠杆菌细菌的16SrDNA片段进行特异性的复制增殖。
所述试剂盒主体是由聚乙烯制成的试剂盒主体。聚乙烯质量轻硬度大，成本低，使用寿命长。
所述试剂盒主体保存的条件在-15摄氏度～-30摄氏度，优选为-20摄氏度。低温环境能保持试剂活性，减慢试剂降解的速度。
作为一种方案，所述试剂盒主体的体积不超过200μL。降低检测成本。
作为另一种方案，所述试剂盒单次使用各试剂的体积均在μL量级。
一种大肠杆菌的快速检测方法采用所述大肠杆菌快速检验的试剂盒进行检测。
一种大肠杆菌的快速检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一，大肠杆菌待测样本液氮研磨，取0.05g～0.07g粉末，浸泡在所述预处理液中，使得样本中的大肠杆菌的内容物释放在溶液中；
步骤二，取步骤一所得到1μL～20μL的溶液，添加到所述PCR反应液中，进行PCR反应，使大肠杆菌的16SrDNA片段进行特异性的复制增殖；
步骤三，取步骤二所得到的1μL～10μL溶液，使用所述电泳液进行毛细管电泳分离和检测，根据电泳检测到的DNA情况，得出大肠杆菌的阴、阳性。
本发明减少了多种试剂的使用，从而对检测大肠杆菌的效率进行进一步的提升，优化了检测步骤，减少了错误率。步骤三中若电泳检测到544bp的DNA，即表明样本中含有大肠杆菌，反之则没有。特异性强，灵敏度高。通过PCR反应和特异性引物，样本中对应于大肠杆菌的特异性DNA序列数量得到极大增加，其增殖倍数可达109，样本中的少量大肠杆菌细菌就可被检测到。而样本中其它来源的DNA数量则不会得到增加，不会干扰目标细菌的检验。速度快，效率高，每个PCR产物的电泳检出时间通常不超过8分钟。
所述步骤三中，若电泳检测到来自于大肠杆菌的544bp的特异性序列，即表明样本中有大肠杆菌，反之则没有。
所述步骤一中，浸泡时间不少于2分钟，优选为3分钟。使物质充分释放在溶液中。
所述步骤二中反应条件包括将大肠杆菌待测样品放置在常规PCR仪中，先预热5-10分钟，所述预热环境在90摄氏度～100摄氏度，然后在第一温度阶段和第二温度阶段中反复循环10-40次。确保尽可能检测到真实的数据。
所述第一温度阶段为持续10秒～15秒在95摄氏度～100摄氏度的环境中；所述第二温度阶段为持续30秒～40秒在55摄氏度～70摄氏度的环境中。对大肠杆菌进行特异性的PCR增殖。
作为一种优选方案，所述预处理液为100μL磷酸缓冲盐溶液，所述PCR反应液包括三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH＝8)5μL；脱氧核糖核苷三磷酸0.2mM；DNA聚合酶0.25μL，大肠杆菌的特异性引物200nM，上/下游引物各1μL；去离子水37.75μL；共49μL；大肠杆菌的特异性引物序列为：
上游引物：5’-GGAAGAAGCTTGCTTCTTTGCTGAC-3’
下游引物：3’-AGCCCGGGGATTTCACATCTGACTTA-5’电泳液：0.5％羟乙基纤维素(1300k)溶液，含1xSYBRGreenI，共50μL。
作为一种优选方案，大肠杆菌的检测方法包括：
步骤一，大肠杆菌待测样本液氮研磨，取0.05g～0.07g粉末，浸泡在所述预处理液中3分钟，使得样本中的大肠杆菌的内容物释放在溶液中；
步骤二，取步骤一所得到1μL的溶液，添加到所述PCR反应液中，将PCR反应液置于PCR仪内，95℃(预热)2分钟，然后设置95℃(变性)10秒、64℃(退火和延伸)30秒两个温度阶段，循环40次，最后冷却至4摄氏度；
步骤三，取步骤二所得到的溶液置于样品位置，所述电泳液填充入毛细管，电场强度100V/cm进样2秒；然后以电场强度200V/cm电泳，采用荧光检测；若电泳检测到来自于大肠杆菌的544bp的特异性序列，即表明样本中有大肠杆菌，反之则没有。
附图说明
图1为本发明的荧光检测信号的一种示意图；
图2为本发明大肠杆菌的检测方法的流程图。
具体实施方式
为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体图示，进一步阐述本发明。
参照图1、图2，一种大肠杆菌快速检验的试剂盒，包括试剂盒主体，试剂盒主体还设有至少三个相对独立的密封腔室，分别为装有预处理液的第一腔室，装有PCR反应液的第二腔室和装有电泳液的第三腔室；预处理液是一用于溶解并分散大肠杆菌的处理液；PCR反应液是一用于对大肠杆菌的16SrDNA片段进行特异性的复制增殖的PCR反应液；电泳液是一用于将采用PCR反应液得到的DNA分子进行电泳检测的电泳液。本发明通过预处理液能够免去提取分离培养等步骤，可以直接得到大肠杆菌基因组，节省了时间提高了效率。预处理液能破坏采集到的细菌的细胞壁和细胞膜，获得细菌细胞的内容物将细菌的DNA释放到溶液中的预处理液。PCR反应液提供反应引物，反应原材料，合成所需要的酶。第一腔室设有第一管路，第二腔室设有第二管路，第一管路和第二管路设有至少一个第一交叉点，第一交叉点为预处理液和PCR反应液进行反应的第一反应点；第三腔室设有第三管路，第三管路与第二管路设有至少一个第二交叉点，第二交叉点为PCR反应液和电泳液进行反应的的第二反应点。确保第一腔室，第二腔室导通、第二腔室与第三腔室导通。
第一腔室设有第一管路，第二腔室设有第二管路，第一管路和第二管路设有至少一个第一交叉点，第一交叉点为预处理液和PCR反应液进行反应的第一反应点；第三腔室设有第三管路，第一反应点与第三管路设有至少一个第二交叉点。确保第一腔室，第二腔室导通，预处理液和PCR反应液在第一交叉点进行反应，第二交叉点与第三腔室导通，从而实现预处理液和PCR反应液反应后的反应液与电泳液在第二交叉点反应。第一管路与第三管路设有至少一个第三交叉点。确保第一腔室，第二腔室和第三腔室三者之间两两相互导通便于检测。预处理液是磷酸缓冲盐溶液。磷酸缓冲盐溶液主要成分以质量百分比，包括30％～45％磷酸二氢钾、15％～25％磷酸氢二钠、25％～35％氯化钠、10％～13％氯化钾和10％～15％水。磷酸缓冲盐溶液具有盐平衡、可调整的适宜pH缓冲作用。PCR反应液主要成分以容积计，包括3μL-10μL三羟甲基氨基甲烷缓冲液，2μL-8μL脱氧核糖核苷三磷酸，0.2μL-0.5μLDNA聚合酶和1μL-2μL大肠杆菌细菌的特异性引物和35μL-40μL去离子水。三羟甲基氨基甲烷缓冲液用作核酸和蛋白质的溶剂，也是蛋白质电泳缓冲液的主要成分之一。
大肠杆菌细菌的特异性引物的浓度在150nmol/L～250nmol/L之间。脱氧核糖核苷三磷酸的浓度在2nmol/L～3nmol/L之间。最适条件可进行梯度实验进行调整。三羟甲基氨基甲烷缓冲液的PH值在7.8～8.4之间，优选为PH＝8。弱碱环境下缓冲液发挥的功效最大。电泳液是羟乙基纤维素溶液。对电介质具有异常好的盐溶性。特异性引物序列为：上游引物：5’-GGAAGAAGCTTGCTTCTTTGCTGAC-3’下游引物：3’-AGCCCGGGGATTTCACATCTGACTTA-5’。用于对大肠杆菌细菌的16SrDNA片段进行特异性的复制增殖。试剂盒主体是由聚乙烯制成的试剂盒主体。聚乙烯质量轻硬度大，成本低，使用寿命长。试剂盒主体保存的条件在-15摄氏度～-30摄氏度，优选为-20摄氏度。低温环境能保持试剂活性，减慢试剂降解的速度。作为一种方案，试剂盒主体的体积不超过200μL。降低检测成本。作为另一种方案，试剂盒单次使用各试剂的体积均在μL量级。
一种大肠杆菌的快速检测方法采用大肠杆菌快速检验的试剂盒进行检测。一种大肠杆菌的快速检测方法，包括以下步骤：步骤一，大肠杆菌待测样本液氮研磨，取0.05g～0.07g粉末，浸泡在预处理液中，使得样本中的大肠杆菌的内容物释放在溶液中；步骤二，取步骤一所得到1μL～20μL的溶液，添加到PCR反应液中，进行PCR反应，使大肠杆菌的16SrDNA片段进行特异性的复制增殖；步骤三，取步骤二所得到的1μL～10μL溶液，使用电泳液进行毛细管电泳分离和检测，根据电泳检测到的DNA情况，得出大肠杆菌的阴、阳性。本发明减少了多种试剂的使用，从而对检测大肠杆菌的效率进行进一步的提升，优化了检测步骤，减少了错误率。步骤三中若电泳检测到544bp的DNA，即表明样本中含有大肠杆菌，反之则没有。特异性强，灵敏度高。通过PCR反应和特异性引物，样本中对应于大肠杆菌的特异性DNA序列数量得到极大增加，其增殖倍数可达109，样本中的少量大肠杆菌细菌就可被检测到。而样本中其它来源的DNA数量则不会得到增加，不会干扰目标细菌的检验。速度快，效率高，每个PCR产物的电泳检出时间通常不超过8分钟。
步骤三中，若电泳检测到来自于大肠杆菌的544bp的特异性序列，即表明样本中有大肠杆菌，反之则没有。步骤一中，浸泡时间不少于2分钟，优选为3分钟。使物质充分释放在溶液中。步骤二中反应条件包括将大肠杆菌待测样品放置在常规PCR仪中，先预热5-10分钟，预热环境在90摄氏度～100摄氏度，然后在第一温度阶段和第二温度阶段中反复循环10-40次。确保尽可能检测到真实的数据。第一温度阶段为持续10秒～15秒在95摄氏度～100摄氏度的环境中；第二温度阶段为持续30秒～40秒在55摄氏度～70摄氏度的环境中。对大肠杆菌进行特异性的PCR增殖。
作为一种优选方案，预处理液为100μL磷酸缓冲盐溶液，PCR反应液包括三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH＝8)5μL；脱氧核糖核苷三磷酸0.2mM；DNA聚合酶0.25μL，大肠杆菌的特异性引物200nM，上/下游引物各1μL；去离子水37.75μL；共49μL；大肠杆菌的特异性引物序列为：上游引物：5’-GGAAGAAGCTTGCTTCTTTGCTGAC-3’下游引物：3’-AGCCCGGGGATTTCACATCTGACTTA-5’电泳液：0.5％羟乙基纤维素(1300k)溶液，含1xSYBRGreenI，共50μL。
作为一种优选方案，大肠杆菌的检测方法包括：步骤一，大肠杆菌待测样本液氮研磨，取0.05g～0.07g粉末，浸泡在预处理液中3分钟，使得样本中的大肠杆菌的内容物释放在溶液中；步骤二，取步骤一所得到1μL的溶液，添加到PCR反应液中，将PCR反应液置于PCR仪内，95℃(预热)2分钟，然后设置95℃(变性)10秒、64℃(退火和延伸)30秒两个温度阶段，循环40次，最后冷却至4摄氏度；步骤三，取步骤二所得到的溶液置于样品位置，电泳液填充入毛细管，电场强度100V/cm进样2秒；然后以电场强度200V/cm电泳，采用荧光检测；若电泳检测到来自于大肠杆菌的544bp的特异性序列，即表明样本中有大肠杆菌，反之则没有。
以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

Claims (10)

1.一种大肠杆菌快速检验的试剂盒，包括试剂盒主体，其特征在于，所述试剂盒主体还设有至少三个相对独立的密封腔室，分别为装有预处理液的第一腔室，装有PCR反应液的第二腔室和装有电泳液的第三腔室；
所述预处理液是一用于溶解并分散大肠杆菌的处理液；所述PCR反应液是一用于对大肠杆菌的16SrDNA片段进行特异性的复制增殖的PCR反应液；所述电泳液是一用于将采用所述PCR反应液得到的DNA分子进行电泳检测的电泳液。
2.根据权利要求1所述的一种大肠杆菌快速检验的试剂盒，其特征在于：所述第一腔室设有第一管路，所述第二腔室设有第二管路，所述第一管路和第二管路设有至少一个第一交叉点，所述第一交叉点为所述预处理液和所述PCR反应液进行反应的第一反应点；所述第三腔室设有第三管路，所述第一反应点与所述第三管路设有至少一个第二交叉点。
3.根据权利要求1所述的一种大肠杆菌快速检验的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒主体保存的条件在-15摄氏度～-30摄氏度。
4.一种大肠杆菌的快速检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一，大肠杆菌待测样本液氮研磨，取0.05g～0.07g粉末，浸泡在预处理液中，使得样本中的大肠杆菌的内容物释放在溶液中；
步骤二，取步骤一所得到1μL～20μL的溶液，添加到PCR反应液中，进行PCR反应，使大肠杆菌的16SrDNA片段进行特异性的复制增殖；
步骤三，取步骤二所得到的1μL～10μL溶液，使用电泳液进行毛细管电泳分离和检测，根据电泳检测到的DNA情况，得出大肠杆菌的阴、阳性。
5.根据权利要求4所述的一种大肠杆菌的快速检测方法，其特征在于：所述预处理液是磷酸缓冲盐溶液。
6.根据权利要求5所述的一种大肠杆菌的快速检测方法，其特征在于：所述磷酸缓冲盐溶液主要成分以质量百分比，包括30％～45％磷酸二氢钾、15％～25％磷酸氢二钠、25％～35％氯化钠、10％～13％氯化钾和10％～15％水。
7.根据权利要求4所述的一种大肠杆菌的快速检测方法，其特征在于：所述PCR反应液主要成分以容积计，包括3μL-10μL三羟甲基氨基甲烷缓冲液，2μL-8μL脱氧核糖核苷三磷酸，0.2μL-0.5μLDNA聚合酶和1μL-2μL大肠杆菌细菌的特异性引物和35μL-40μL去离子水。
8.根据权利要求7所述的一种大肠杆菌的快速检测方法，其特征在于：所述特异性引物序列为：
上游引物：5’-GGAAGAAGCTTGCTTCTTTGCTGAC-3’
下游引物：3’-AGCCCGGGGATTTCACATCTGACTTA-5’。
9.根据权利要求7所述的一种大肠杆菌的快速检测方法，其特征在于：所述三羟甲基氨基甲烷缓冲液的PH值在7.8～8.4之间。
10.根据权利要求4所述的一种大肠杆菌的快速检测方法，其特征在于：所述步骤三中，若电泳检测到来自于大肠杆菌的544bp的特异性序列，即表明样本中有大肠杆菌，反之则没有。
CN201510629717.7A 2015-09-29 2015-09-29 大肠杆菌的快速检验试剂盒及检测方法 Pending CN105199948A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510629717.7A CN105199948A (zh) 2015-09-29 2015-09-29 大肠杆菌的快速检验试剂盒及检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510629717.7A CN105199948A (zh) 2015-09-29 2015-09-29 大肠杆菌的快速检验试剂盒及检测方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN105199948A true CN105199948A (zh) 2015-12-30

Family

ID=54947911

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201510629717.7A Pending CN105199948A (zh) 2015-09-29 2015-09-29 大肠杆菌的快速检验试剂盒及检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105199948A (zh)

Citations (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0337896A1 (en) * 1988-04-15 1989-10-18 N.V. Innogenetics S.A. Hybridization probes for detecting neisseria strains
CN1364940A (zh) * 2002-01-28 2002-08-21 国前 一种核酸分析用收集装置及其应用方法
US20030087227A1 (en) * 1997-02-20 2003-05-08 Frank H. Prortugal Methods for identifying species or shigella and e. coli using operon sequence analysis
CN1900306A (zh) * 2005-07-21 2007-01-24 崔玉东 一种病原菌多重pcr检测试剂盒及其检测方法
CN101680013A (zh) * 2007-06-11 2010-03-24 和光纯药工业株式会社 微芯片大容量pcr与集成实时ce检测
WO2012080754A2 (en) * 2010-12-16 2012-06-21 Genetic Analysis As Oligonucleotide probe set and methods of microbiota profiling
CN202401058U (zh) * 2011-10-14 2012-08-29 深圳太太基因工程有限公司 一种用于检测幽门螺杆菌感染的试剂盒
CN102844433A (zh) * 2010-04-14 2012-12-26 东洋制罐株式会社 Pcr用引物对、pcr用反应液以及食物中毒菌的检测方法
CN103468797A (zh) * 2013-08-13 2013-12-25 无锡中德伯尔生物技术有限公司 一种快速准确检测大肠杆菌o157:h7活菌试剂盒及其检测方法
CN103608110A (zh) * 2011-03-09 2014-02-26 彼克斯赛尔医疗科技有限公司 用于制备用于分析的包含细胞的样品流体的一次性盒子
CN104745447A (zh) * 2013-12-31 2015-07-01 窦晓鸣 一种牙周病病原菌快速检验的试剂盒与检测方法

Patent Citations (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0337896A1 (en) * 1988-04-15 1989-10-18 N.V. Innogenetics S.A. Hybridization probes for detecting neisseria strains
US20030087227A1 (en) * 1997-02-20 2003-05-08 Frank H. Prortugal Methods for identifying species or shigella and e. coli using operon sequence analysis
CN1364940A (zh) * 2002-01-28 2002-08-21 国前 一种核酸分析用收集装置及其应用方法
CN1900306A (zh) * 2005-07-21 2007-01-24 崔玉东 一种病原菌多重pcr检测试剂盒及其检测方法
CN101680013A (zh) * 2007-06-11 2010-03-24 和光纯药工业株式会社 微芯片大容量pcr与集成实时ce检测
CN102844433A (zh) * 2010-04-14 2012-12-26 东洋制罐株式会社 Pcr用引物对、pcr用反应液以及食物中毒菌的检测方法
WO2012080754A2 (en) * 2010-12-16 2012-06-21 Genetic Analysis As Oligonucleotide probe set and methods of microbiota profiling
CN103608110A (zh) * 2011-03-09 2014-02-26 彼克斯赛尔医疗科技有限公司 用于制备用于分析的包含细胞的样品流体的一次性盒子
CN202401058U (zh) * 2011-10-14 2012-08-29 深圳太太基因工程有限公司 一种用于检测幽门螺杆菌感染的试剂盒
CN103468797A (zh) * 2013-08-13 2013-12-25 无锡中德伯尔生物技术有限公司 一种快速准确检测大肠杆菌o157:h7活菌试剂盒及其检测方法
CN104745447A (zh) * 2013-12-31 2015-07-01 窦晓鸣 一种牙周病病原菌快速检验的试剂盒与检测方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Appelt et al. Polyphasic analysis of a middle ages coprolite microbiota, Belgium
CN105420379A (zh) 牛支原体的实时荧光定量PCR检测试剂盒及其专用引物、TaqMan探针
Van Lint et al. Evaluation of a real-time multiplex PCR for the simultaneous detection of Campylobacter jejuni, Salmonella spp., Shigella spp./EIEC, and Yersinia enterocolitica in fecal samples
CN104059977A (zh) 一种沙门氏菌血清型鉴定方法及其试剂盒
CN105936935B (zh) 一种快速鉴定特定血清型沙门菌的pcr检测试剂盒
CN106148548B (zh) 一种能同时检测产气荚膜梭菌、溶血梭菌和b型诺维氏梭菌的多重pcr检测试剂盒及其应用
Yang et al. Ultrafast and absolute quantification of SARS-CoV-2 on food using hydrogel RT-LAMP without pre-lysis
CN104232783A (zh) 牛种布氏菌弱毒疫苗株a19的快速检测方法
Messer et al. Novel functional insights into the microbiome inhabiting marine plastic debris: critical considerations to counteract the challenges of thin biofilms using multi-omics and comparative metaproteomics
CN103014174B (zh) 猪支原体肺炎pcr诊断试剂盒
CN107130022A (zh) 一种检测隐秘杆菌的实时定量lamp引物、试剂盒及方法
CN111471802A (zh) 一种猪德尔塔冠状病毒快速检测引物、试剂盒及其应用
Stockdale et al. Viral dark matter in the gut virome of elderly humans
CN115747361A (zh) 检测海豚链球菌的实时荧光mira和mira-lfd引物组及检测方法
CN109666752A (zh) 一种检测绵羊肺炎支原体的实时定量lamp引物组及试剂盒
CN105199948A (zh) 大肠杆菌的快速检验试剂盒及检测方法
CN107119121A (zh) 一种检测猪丹毒杆菌的实时定量lamp引物、试剂盒及方法
CN102912021B (zh) 一种用于分子马达生物传感器技术的沙门氏菌分子分型试剂盒
Dias et al. Evaluation of 16S rRNA Hypervariable regions for bioweapon species detection by massively Parallel Sequencing
Singhal et al. Bacterial Whole Cell Protein Profiling: Methodology, Applications and Constraints
CN108034736B (zh) 用于大肠杆菌氟喹诺酮类抗生素耐药性的检测试剂盒、检测方法及应用
CN107937584B (zh) 一种肉品沙门氏菌分子检测试剂盒及其非诊断性检测方法
CN105256041A (zh) 对亲水气单胞菌o44，o24，o25和o28特异的核苷酸及应用
CN104404132A (zh) 一种猪链球菌2型的ss2-lamp检测试剂盒及应用
RU2770803C1 (ru) Способ выявления ДНК бактерии Mycobacterium tuberculosis для диагностики туберкулеза

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20151230

RJ01 Rejection of invention patent application after publication