CN105198790B - 促进双阴性t细胞体外增殖的四环化合物 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种促进双阴性T细胞体外增殖的四环化合物，所述四环化合物为IMC‑00239，其分子式为：。本发明涉及用高通量筛选法从化合物库中筛选到能促进CD3+/CD4‑/CD8‑双阴性T(DN T)细胞体外增殖的四环化合物，包括其药学上可接受的盐和前药。该类化合物是Wnt信号通路的抑制剂，在体外实验中能诱导DN T细胞β‑Catenin的降解,促进细胞周期与有丝***。此类化合物可以有效的促进CAR‑DN‑T体外扩增***的构建，帮助CAR‑DN‑T细胞工厂的实现。

Description

促进双阴性T细胞体外增殖的四环化合物
技术领域
本发明涉及生物医药领域的一种促进双阴性T细胞体外增殖的四环化合物，尤其涉及一种促进CD3+/CD4-/CD8-双阴性T(DN T)细胞体外增殖的四环化合物。
背景技术
免疫疗法被认为是癌症治疗的第三次革命，其中嵌合抗原受体T细胞（CAR-T）技术对CD19+急性B淋巴细胞白血病的卓越的临床试验结果已经引起医学界的广泛关注，被认为是最有希望治愈肿瘤的疗法。
然而，当前的CAR-T治疗是用患者自体T细胞进行CAR-T细胞改造，这就对患者的T细胞数量，活力与增殖能力有很高的要求。临床试验实践中发现，超过80% 的患者的T细胞达不到CAR-T细胞制备的要求，因此大多数患者无法从现行的CAR-T治疗中受益。鉴于这一问题，同源异体类CAR-T的制备成为研究的热点。
目前的研究策略是通过基因敲除技术将同源异体来源的T细胞的T细胞受体（TCR）敲除后，使其失去MHC限制的特性，然后纯化出TCR敲除的T细胞，再进行CAR-T细胞的制备，使之发挥肿瘤杀伤作用且避免引起移植物抗宿主疾病（GVHD）。但在实际操作中遇到很大的技术瓶颈，主要原因是用于基因敲除技术的CRISPR-Cas9等载体分子量较大，导入T细胞困难、基因敲除的效率低下。并且，如果使用病毒转染的方式导入CRISPR-Cas9等载体，又会出现嵌合抗原受体二次病毒转染的抵制现象，CAR-T细胞得率低下，不能进行大规模制备，应用性差。
已有的研究发现，正常人的外周血中存在一群CD3+/CD4-/CD8-双阴性T(DN T) 细胞，其不具有MHC限制性，不会引起移植物抗宿主疾病，结合已有的嵌合抗原受体技术，构建出一种新型的嵌合抗原受体DN-T细胞(CAR-DN-T)，可以异体回输肿瘤患者。但是，鉴于DN T细胞仅占约占外周血单个核细胞（PBMC）的1-5%，难以达到 CAR-DN-T治疗所需的细胞量。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术存在的以上问题，提供一种促进双阴性T细胞体外增殖的四环化合物。
为实现上述技术目的，达到上述技术效果，本发明通过以下技术方案实现：
一种促进双阴性T细胞体外增殖的四环化合物，所述四环化合物为IMC-00239，其分子式为：
。
进一步的，所述促进双阴性T细胞体外增殖的四环化合物促进DN T细胞体外增殖的应用。
本发明的有益效果是:
1、发明涉及用高通量筛选法从化合物库中筛选到能促进CD3+/CD4-/CD8-双阴性T(DN T)细胞体外增殖的四环化合物，包括其药学上可接受的盐和前药。该类化合物是Wnt信号通路的抑制剂，在体外实验中能诱导DN T细胞β-Catenin的降解,促进细胞周期与有丝***。由于DN T细胞不具有MHC限制性，不会引起移植物抗宿主疾病（GVHD），结合已有的嵌合抗原受体(CAR)技术，构建出一种新型的嵌合抗原受体DN-T细胞(CAR-DN-T)，可以异体回输肿瘤患者，实现CAR-T细胞工厂的产业化。鉴于DN T细胞仅占约占外周血单个核细胞（PBMC）的1-5%，需建立高效的体外大规模扩增***才能满足CAR-DN-T治疗的细胞量需求。此类化合物可以有效的促进CAR-DN-T体外扩增***的构建，帮助CAR-DN-T细胞工厂的实现。
2、通过基于原代DN T细胞的高通量细胞增殖筛选平台所获得的化合物IMC-00239与T细胞受体抗体和细胞因子联用，能做体外高效促进DN T细胞增殖，其扩增能力超过4000倍，比T细胞受体抗体和细胞因子处理组高出7倍，且呈剂量依赖效应。该化合物在≦30μM下无明显细胞毒性。进一步研究发现IMC-00239主要通过抑制Wnt信号通路诱导β-Catenin降解调控DN T细胞的增殖。IMC-00239对DN T细胞的促增殖作用有力的支持的CAR-DN-T细胞体外扩增***的建立，满足了治疗所需细胞量。
上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本发明的较佳实施例并配合附图详细说明如后。本发明的具体实施方式由以下实施例及其附图详细给出。
附图说明
此处所说明的附图用来提供对本发明的进一步理解，构成本申请的一部分，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。在附图中：
图1为基于原代DN T细胞的高通量细胞增殖筛选以及CAR-T杀伤实验流程图；
图2为IMC-00239促进DN T细胞的增殖及其信号通路图一；
图3为IMC-00239促进DN T细胞的增殖及其信号通路图二；
图4为IMC-00239促进DN T细胞的增殖及其信号通路图三；
图5为IMC-00239促进DN T细胞的增殖及其信号通路图四；
图6为IMC-00239对CAR-DN-T增殖的促进作用示意图；
图7为IMC-00239化合物处理的CAR-DN-T细胞具有体外杀伤功能示意图。
具体实施方式
下面将参考附图并结合实施例，来详细说明本发明。
鉴于DN T细胞仅占外周血单个核细胞（PBMC）的1-5%，需建立高效的体外大规模扩增***才能满足CAR-DN-T治疗的细胞量需求。我们建立基于原代DN T细胞的高通量细胞增殖筛选平台，并将筛选到的化合物在CAR-DN-T细胞上进一步验证，并确证其不影响CAR-T的细胞杀伤能力，具体流程见图1所示。通过这一平台，我们发现一系列能够促进DN T细胞增殖的小分子化合物，其中，作用最强的是一个四环化合物（IMC-00239），其分子式为：
。
我们通过基于原代DN T细胞的高通量细胞增殖筛选平台所获得的化合物IMC-00239与T细胞受体抗体和细胞因子联用，能做体外高效促进DN T细胞增殖，其扩增能力超过4000倍，比T细胞受体抗体和细胞因子处理组高出7倍（0.5μM，参照图2所示），且呈剂量依赖效应（pEC50=7.2,参照图3所示）。该化合物在≦30μM下无明显细胞毒性，参照图4所示。进一步研究发现IMC-00239主要通过抑制Wnt信号通路诱导β-Catenin降解调控DN T细胞的增殖，参照图5所示。IMC-00239对DN T细胞的促增殖作用有力的支持的CAR-DN-T细胞体外扩增***的建立，满足了治疗所需细胞量。
实施例
IMC-00239对CAR-DN-T的促扩增作用，且不影响CAR-DN-T的细胞杀伤功能。
从健康捐献者外周血单个核细胞中分选出的DN T细胞经嵌合抗原受体的慢病毒感染后，分别用T细胞受体抗体和细胞因子(Vehicle)以及0.5μM IMC-00239联合T细胞受体抗体和细胞因子刺激，培养14天。IMC-00239组细胞数高于Vehicle组约7倍左右，参照图6所示。将IMC-00239组与细胞因子组CAR-DN-T进行细胞杀伤能力的比较发现IMC-00239对CAR-DN-T的细胞杀伤能力无明显影响，参照图7所示。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (1)

1.一种促进双阴性T细胞体外增殖的四环化合物，其特征在于，所述四环化合物为IMC-00239，其结构式为：
。
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