CN105176887A - 一种大肠杆菌的培养方法 - Google Patents
一种大肠杆菌的培养方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105176887A CN105176887A CN201510690274.2A CN201510690274A CN105176887A CN 105176887 A CN105176887 A CN 105176887A CN 201510690274 A CN201510690274 A CN 201510690274A CN 105176887 A CN105176887 A CN 105176887A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- seed
- culture
- colibacillary
- cultivate
- conditions
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种大肠杆菌的培养方法。该方法包括步骤：1)将大肠杆菌菌种接种于第一培养基中培养，在琼脂平板上划线接种，得到一级培养种子；2)将一级培养种子接种到第二培养基中培养，得到二级培养种子；3)将二级培养种子接种到第三培养基中培养，得到三级培养种子，保存；4)将三级培养种子接种于菌液中，并导入至离心管中，加入10～15％的琼脂，摇床过夜，再加入氯化钙溶液，混悬菌液，离心分离，将上层清液去除，即得。本发明所提供的大肠杆菌的培养方法能快速对大肠杆菌进行培养，同时优化了微生物发酵培养条件，培养工艺简单，能够获得理想的高活菌浓度。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种大肠杆菌的培养方法。
背景技术
大肠杆菌是与我们日常生活关系非常密切的一类细菌，学名称作“大肠埃希菌”，属于肠道杆菌大类中的一种。它是寄生在人体大肠里对人体无害的一种单细胞生物，结构简单，繁殖迅速，培养容易，它是生物学上重要的实验材料。在婴儿刚出生的几小时内，大肠杆菌就经过吞咽在肠道内定居了。正常情况下，大多数大肠杆菌是非常安分守己的，他们不但不会给我们的身体健康带来任何危害，反而还能竞争性抵御致病菌的进攻，同时还能帮助合成维生素，与人体是互利共生的关系。只有在机体免疫力降低、肠道长期缺乏刺激等特殊情况下，大肠杆菌才移居到肠道以外的地方，例如胆囊、尿道、膀胱、阑尾等地，造成相应部位的感染或全身播散性感染。因此，大部分大肠杆菌通常被看作机会致病菌。
各种动物大肠杆菌灭活疫苗的制备中，首要环节就是大肠杆菌的培养。为了获得理想的活菌浓度，业界对大肠杆菌培养工艺进行了大量研究。影响大肠杆菌培养菌浓度的因素有很多，如培养基组成、培养时间、菌种接种量以及细菌生长环境等一般情况下，生物药物的产率与大肠杆菌发酵密度密切相关，大肠杆菌的收率直接关系到生物药物的产率。所以在菌体表达蛋白效率相当的情况下，大肠杆菌的发酵密度直接影响到生物药物的生产成本。特别是在同样的纯化技术条件下。
发明内容
为解决现有技术的不足，本发明提供了一种大肠杆菌的培养方法。
一种大肠杆菌的培养方法，包括以下步骤：
1)将大肠杆菌菌种接种于第一培养基中，36.8～37.5℃条件下培养24～30小时，在琼脂平板上划线接种，37.2～37.8℃条件下培养20～24小时，得到一级培养种子。
具体的，步骤1)中，所述的第一培养基中的营养成分包括：葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氢钾、七水硫酸镁、孟加拉红溶液、琼脂、蒸馏水、去氧胆酸钠溶液、链霉素溶液和二水氯化钙。
2)将步骤1)得到的一级培养种子接种到第二培养基中，34.5～35.2℃条件下培养12～16小时，得到二级培养种子。
具体的，步骤2)中，所述的第二培养基中的营养成分包括：硫酸铵、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、柠檬酸、硫酸镁、酵母提取物、甘油、二水钼酸钠、七水硫酸镁、五水硫酸铜、六水氯化钴和蒸馏水。
3)将步骤2)得到的二级培养种子接种到第三培养基中，37.5～38.0℃条件下培养16～18小时，得到三级培养种子，至于2～5℃条件下保存。
具体的，步骤3)中，所述的第三培养基中的营养成分包括：硫酸铵、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、柠檬酸、硫酸镁、酵母提取物、六水氯化铁、硼酸、七水硫酸锌、生物素、硫酸锰、谷氨酸钠和蒸馏水。
优选的，步骤3)中，低温保存的时候滴加适量甘油。
4)将步骤3)得到的三级培养种子接种于菌液中，并导入至离心管中，加入10～15％的琼脂，摇床过夜，再加入氯化钙溶液，混悬菌液，离心分离，将上层清液去除，即得。
优选的，所述摇床的转速为120～160转/分钟。
优选的，所述氯化钙溶液的温度为3～6℃。
本发明所提供的大肠杆菌的培养方法能快速对大肠杆菌进行培养，同时优化了微生物发酵培养条件，培养工艺简单，能够获得理想的高活菌浓度。
具体实施方式
以下对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。
实施例1
1)将大肠杆菌菌种接种于第一培养基中，37.2℃条件下培养28小时，在琼脂平板上划线接种，37.5℃条件下培养22小时，得到一级培养种子。其中，第一培养基中的营养成分包括：葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氢钾、七水硫酸镁、孟加拉红溶液、琼脂、蒸馏水、去氧胆酸钠溶液、链霉素溶液和二水氯化钙。
2)将步骤1)得到的一级培养种子接种到第二培养基中，35.0℃条件下培养15小时，得到二级培养种子。其中，第二培养基中的营养成分包括：硫酸铵、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、柠檬酸、硫酸镁、酵母提取物、甘油、二水钼酸钠、七水硫酸镁、五水硫酸铜、六水氯化钴和蒸馏水。
3)将步骤2)得到的二级培养种子接种到第三培养基中，37.8℃条件下培养16小时，得到三级培养种子，至于4℃条件下保存。其中，第三培养基中的营养成分包括：硫酸铵、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、柠檬酸、硫酸镁、酵母提取物、六水氯化铁、硼酸、七水硫酸锌、生物素、硫酸锰、谷氨酸钠和蒸馏水。
4)将步骤3)得到的三级培养种子接种于菌液中，并导入至离心管中，加入12％的琼脂，摇床过夜，再加入4℃的氯化钙溶液，混悬菌液，离心分离，将上层清液去除，即得。其中，摇床的转速为150转/分钟。
所得活菌浓度为4.8×109CFU/ml。
实施例2
1)将大肠杆菌菌种接种于第一培养基中，36.8℃条件下培养30小时，在琼脂平板上划线接种，37.2℃条件下培养24小时，得到一级培养种子。其中，第一培养基中的营养成分包括：葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氢钾、七水硫酸镁、孟加拉红溶液、琼脂、蒸馏水、去氧胆酸钠溶液、链霉素溶液和二水氯化钙。
2)将步骤1)得到的一级培养种子接种到第二培养基中，34.5℃条件下培养16小时，得到二级培养种子。其中，第二培养基中的营养成分包括：硫酸铵、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、柠檬酸、硫酸镁、酵母提取物、甘油、二水钼酸钠、七水硫酸镁、五水硫酸铜、六水氯化钴和蒸馏水。
3)将步骤2)得到的二级培养种子接种到第三培养基中，37.5℃条件下培养18小时，得到三级培养种子，至于2℃条件下保存。其中，第三培养基中的营养成分包括：硫酸铵、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、柠檬酸、硫酸镁、酵母提取物、六水氯化铁、硼酸、七水硫酸锌、生物素、硫酸锰、谷氨酸钠和蒸馏水。
4)将步骤3)得到的三级培养种子接种于菌液中，并导入至离心管中，加入15％的琼脂，摇床过夜，再加入3℃的氯化钙溶液，混悬菌液，离心分离，将上层清液去除，即得。其中，摇床的转速为160转/分钟。
所得活菌浓度为4.9×109CFU/ml。
实施例3
1)将大肠杆菌菌种接种于第一培养基中，37.5℃条件下培养24小时，在琼脂平板上划线接种，37.8℃条件下培养20小时，得到一级培养种子。其中，第一培养基中的营养成分包括：葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氢钾、七水硫酸镁、孟加拉红溶液、琼脂、蒸馏水、去氧胆酸钠溶液、链霉素溶液和二水氯化钙。
2)将步骤1)得到的一级培养种子接种到第二培养基中，35.2℃条件下培养12小时，得到二级培养种子。其中，第二培养基中的营养成分包括：硫酸铵、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、柠檬酸、硫酸镁、酵母提取物、甘油、二水钼酸钠、七水硫酸镁、五水硫酸铜、六水氯化钴和蒸馏水。
3)将步骤2)得到的二级培养种子接种到第三培养基中，38.0℃条件下培养16小时，得到三级培养种子，至于5℃条件下保存。其中，第三培养基中的营养成分包括：硫酸铵、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、柠檬酸、硫酸镁、酵母提取物、六水氯化铁、硼酸、七水硫酸锌、生物素、硫酸锰、谷氨酸钠和蒸馏水。
4)将步骤3)得到的三级培养种子接种于菌液中，并导入至离心管中，加入10％的琼脂，摇床过夜，再加入6℃的氯化钙溶液，混悬菌液，离心分离，将上层清液去除，即得。其中，摇床的转速为120转/分钟。
所得活菌浓度为5.2×109CFU/ml。
以上所述仅为本发明的较佳实施方式，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (7)
1.一种大肠杆菌的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)将大肠杆菌菌种接种于第一培养基中，36.8～37.5℃条件下培养24～30小时，在琼脂平板上划线接种，37.2～37.8℃条件下培养20～24小时，得到一级培养种子；
2)将步骤1)得到的一级培养种子接种到第二培养基中，34.5～35.2℃条件下培养12～16小时，得到二级培养种子；
3)将步骤2)得到的二级培养种子接种到第三培养基中，37.5～38.0℃条件下培养16～18小时，得到三级培养种子，至于2～5℃条件下保存；
4)将步骤3)得到的三级培养种子接种于菌液中，并导入至离心管中，加入10～15％的琼脂，摇床过夜，再加入氯化钙溶液，混悬菌液，离心分离，将上层清液去除，即得。
2.根据权利要求1所述的大肠杆菌的培养方法，其特征在于：步骤1)中，所述的第一培养基中的营养成分包括：葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氢钾、七水硫酸镁、孟加拉红溶液、琼脂、蒸馏水、去氧胆酸钠溶液、链霉素溶液和二水氯化钙。
3.根据权利要求2所述的大肠杆菌的培养方法，其特征在于：步骤2)中，所述的第二培养基中的营养成分包括：硫酸铵、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、柠檬酸、硫酸镁、酵母提取物、甘油、二水钼酸钠、七水硫酸镁、五水硫酸铜、六水氯化钴和蒸馏水。
4.根据权利要求3所述的大肠杆菌的培养方法，其特征在于：步骤3)中，所述的第三培养基中的营养成分包括：硫酸铵、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、柠檬酸、硫酸镁、酵母提取物、六水氯化铁、硼酸、七水硫酸锌、生物素、硫酸锰、谷氨酸钠和蒸馏水。
5.根据权利要求1至4任一所述的大肠杆菌的培养方法，其特征在于：步骤3)中，低温保存的时候滴加适量甘油。
6.根据权利要求1至4任一所述的大肠杆菌的培养方法，其特征在于：步骤4)中，所述摇床的转速为120～160转/分钟。
7.根据权利要求1至4任一所述的大肠杆菌的培养方法，其特征在于：步骤4)中，所述氯化钙溶液的温度为3～6℃。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510690274.2A CN105176887A (zh) | 2015-10-22 | 2015-10-22 | 一种大肠杆菌的培养方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510690274.2A CN105176887A (zh) | 2015-10-22 | 2015-10-22 | 一种大肠杆菌的培养方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN105176887A true CN105176887A (zh) | 2015-12-23 |
Family
ID=54899321
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201510690274.2A Pending CN105176887A (zh) | 2015-10-22 | 2015-10-22 | 一种大肠杆菌的培养方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN105176887A (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105238718A (zh) * | 2015-10-27 | 2016-01-13 | 桂林瑞丰环保微生物应用研究所 | 一种大肠杆菌的多级培养方法 |
| CN106434426A (zh) * | 2016-08-30 | 2017-02-22 | 内蒙古金源康生物工程有限公司 | 大肠杆菌高效表达培养基 |
-
2015
- 2015-10-22 CN CN201510690274.2A patent/CN105176887A/zh active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105238718A (zh) * | 2015-10-27 | 2016-01-13 | 桂林瑞丰环保微生物应用研究所 | 一种大肠杆菌的多级培养方法 |
| CN106434426A (zh) * | 2016-08-30 | 2017-02-22 | 内蒙古金源康生物工程有限公司 | 大肠杆菌高效表达培养基 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN106479927B (zh) | 利用地衣芽孢杆菌生物合成纳米硒的方法及其应用 | |
| CN102660473B (zh) | 一种连续发酵法生产酪酸菌制剂的方法 | |
| CN103284029A (zh) | 一种富硒沼泽红假单胞菌制剂及其制备方法 | |
| CN103421715A (zh) | 一种鼠李糖乳杆菌及其应用 | |
| CN110004096A (zh) | 一株植物乳杆菌及其应用 | |
| CN104031960A (zh) | 一种解淀粉芽孢杆菌胞外抗菌脂肽的提取方法及应用 | |
| CN106957805A (zh) | 一种具有抑菌效果的芽孢杆菌GBacillus‑9菌株及其分离方法和应用 | |
| CN109762764A (zh) | 一种富含高有机硒凝结芽孢杆菌的制备方法 | |
| CN103667137A (zh) | 大肠杆菌培养基及其培养方法 | |
| CN106635919A (zh) | 一种螺旋藻的养殖方法 | |
| CN105176887A (zh) | 一种大肠杆菌的培养方法 | |
| CN105062931A (zh) | 一种高浓度枯草芽孢杆菌的制备方法及其在水产养殖中的应用 | |
| CN102102095A (zh) | 一种利用海洋链霉菌发酵制备溶菌酶的方法 | |
| CN105624052A (zh) | 一种用于水产高效养殖的复合生物制剂 | |
| CN101732706B (zh) | 仔猪副伤寒活疫苗的制备方法及其产品 | |
| CN104745554B (zh) | 芽孢杆菌产蛋白酶和芽孢的发酵培养基及发酵方法 | |
| CN109609385A (zh) | 一种雨生红球藻的培养方法 | |
| CN105660189A (zh) | 一种蚕蛹虫草的培育方法 | |
| CN102304488A (zh) | 一种用于池蝶蚌养殖的微生物制剂 | |
| CN110699258B (zh) | 一种提高小球藻藻细胞生物量的培养方法 | |
| CN103289916A (zh) | 一种纳豆芽孢杆菌的固体发酵生产方法 | |
| CN103444440A (zh) | 一种灵芝生产方法 | |
| CN103497988B (zh) | 一种安全高效乳酸菌产品的发酵生产方法 | |
| CN107058266B (zh) | 一种通过发酵工艺制备溶菌酶的方法 | |
| CN105238718A (zh) | 一种大肠杆菌的多级培养方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20151223 |