CN105153082A - 穿心莲内酯的大生产工艺 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种穿心莲内酯的大生产工艺。本发明采用适宜工业大规模生产的回流法提取穿心莲内酯，提取效率可达80％以上，可节约大量原药材，节约成本；提取时间仅为2小时每次，提取时间短，避免长时间加热破坏穿心莲内酯；4倍量95％乙醇提取，提取溶剂用量小，且提取溶剂经回收后，可重复利用，大量节约成本。

Description

穿心莲内酯的大生产工艺

技术领域

本发明涉及穿心莲内酯的大生产工艺。

背景技术

穿心莲内酯，分子式C20H30O5，天然植物穿心莲的主要有效成份，具有祛热解毒，消炎止痛之功效，对细菌性与病毒性上呼吸道感染及痢疾有特殊疗效，被誉为天然抗生素药物。本品为二萜类内酯化合物，均难溶于水，通常仅能口服给药。

目前公开的穿心莲内酯的制备方法有：专利申请号200710142800.7，公开了一种醇提后用树脂分离的方法。大孔树脂法洗脱时不同浓度乙醇洗脱物均不同程度含有穿心莲内酯，80％乙醇洗脱物含量较高，但收率较低。鹿萍等的文献(穿心莲内酯的超声波提取法研究，赤峰学院学报(自然科学版)第24卷第2期，2008)报道了以穿心莲茎杆粉末为原料，采用超声波辅助提取穿心莲内酯。结果表明最理想的提取溶剂为75％乙醇，料也比为1：20，超声时间为40分钟效果最佳。马芝玉等的文献(微波和超声波辅助提取穿心莲内酯，精细化工第24卷第8期，2007)报道了以穿心莲茎叶为原料，分别采用超声辅助提取和微波辅助提取穿心莲内酯。结果超声辅助提取最佳工艺条件为提取溶剂为75％乙醇，超声效率为40％、超声时间为50分钟；微波辅助提取最佳工艺条件为温度为40℃，提取溶剂为75％乙醇，提取时间为8分钟。超声波辅助提取、微波辅助提取法在某些条件下具有积极的效果，但这两种方法难以应用于工业化大生产。

发明内容

本发明的技术方案提供了穿心莲内酯的大生产工艺。

本发明提供了一种穿心莲内酯的大生产工艺，它包括如下步骤：

a、取穿心莲粗粉，加入95％乙醇或甲醇浸润，再加入95％乙醇或甲醇，加热回流提取，过滤，合并滤液；

b、滤液加蒸馏水调节乙醇浓度至55％－85％，室温静置，过滤，得滤液；

c、滤液加0.4-0.8％活性炭粉末，加热回流脱色，过滤；

d、滤液减压回收乙醇至1－10g/ml(药材量/浓缩液体积)，4℃静置，过滤，得穿心莲内酯沉淀；

e、穿心莲内酯沉淀加少量80％乙醇洗涤，洗涤至类白色，再加少量水洗涤至水溶液无色，得穿心莲内酯白色粉末；

f、将e步骤制备的穿心莲内酯白色粉末加三氯甲烷静置，过滤，得精制穿心莲内酯粉末；

g、加入95％乙醇，加热使精制穿心莲内酯粉末溶解，过滤，减压回收乙醇至半量，4℃静置过夜，使析晶，过滤，得穿心莲内酯结晶；母液再次减压回收溶剂至半量，过滤，合并穿心莲内酯结晶，减压干燥，即得。

其中，a步骤所述的提取溶剂为95％乙醇。a步骤所述的提取工艺为：每次加入95％乙醇4倍量，回流提取3次，每次2h。

其中，b步骤所述的乙醇浓度至65％。

b步骤所述的静置时间为36小时。

c步骤所述的活性炭的用量为0.5％。

c步骤所述的活性炭脱色时间0.5－3小时。

d步骤所述的滤液减压回收乙醇至1g/ml。

f步骤所述的10倍量三氯甲烷静置1小时，静置3次。

g步骤所述的减压干燥条件为：50℃减压干燥2小时。

本发明采用适宜工业大规模生产的回流法提取穿心莲内酯，提取效率可达80％以上，可节约大量原药材，节约成本；提取时间仅为2小时每次，提取时间短，避免长时间加热破坏穿心莲内酯；4倍量95％乙醇提取，提取溶剂用量小，且提取溶剂经回收后，可重复利用，大量节约成本。

附图说明

图1工艺流程图

图2穿心莲TLC(A-紫外灯下穿心莲TLC；B-日光下穿心莲TLC；S1-穿心莲内酯；S2-脱水穿心莲内酯；1-混合对照品；2-穿心莲对照药材；3-CXL1；4-CXL2；5-CXL3)

图3254nm条件下空白溶剂HPLC色谱图

图4225nm条件下空白溶剂HPLC色谱图

图5254nm条件下混合对照品HPLC色谱图(1-穿心莲内酯；2-脱水穿心莲内酯)

图6225nm条件下混合对照品HPLC色谱图(1-穿心莲内酯；2-脱水穿心莲内酯)

图7254nm条件下样品HPLC色谱图(1-穿心莲内酯；2-脱水穿心莲内酯)

图8225nm条件下样品HPLC色谱图(1-穿心莲内酯；2-脱水穿心莲内酯)

图9脱水穿心莲内酯标准曲线

图10穿心莲内酯标准曲线

图11穿心莲浓缩体积考察

图12穿心莲内酯TLC(1－J1；2-J2；3-J3)

图13穿心莲内酯对照品HPLC色谱图(1-穿心莲内酯)

图14结晶HPLC色谱图(1-穿心莲内酯)

具体实施方式

实施例1本发明穿心莲内酯的提取工艺(工艺流程图见图1)

1实验仪器与材料

1.1实验仪器

ShimadzuLC-20AT高效液相色谱仪(日本岛津公司)，SIL-20A自动进样器，SPD-20A检测器，CTO-20A柱温箱，LCsolution色谱工作站软件，BP211D电子分析天平(德国Sartouris股份有限公司)，旋转蒸发仪RE-2000B(上海亚荣生化仪器厂)；UPT-I-10T优普系列超纯水机(成都超纯科技有限公司)；BP211D型电子分析天平(十万分之一)(德国Sartorius公司)、BP121S型(万分之一)(德国Sartorius公司)、SB25-12D型超声波清洗器(宁波新艺超声设备有限公司)；电热鼓风干燥箱(型号：DB-211SD)。

1.2实验材料

1.2.1药材

共收集穿心莲药材3批，其中1批购自成都荷花池药材专业市场，产地不详，1批购自成都中医药大学附属医院，产地不详，1批药材购自清远圣芝堂现代中药有限公司，产地为广东清远。药材收集情况见表1。

表1穿心莲药材收集

“-”表示不详清

1.2.2试药与试剂

穿心莲对照药材(中国食品药品检定院，批号121082-200603)，穿心莲内酯(中国食品药品检定院，供含量测定用，110797-201108)，脱水穿心莲内酯(中国食品药品检定院，供含量测定用，批号110854-201308)，水为超纯水，甲醇为色谱纯(国药集团化学试剂有限公司)，其他试剂均为分析纯。

2穿心莲药材质量检查

21薄层色谱鉴别

2.1.1供试品溶液的制备

取本品粉末(过四号筛)约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入40％甲醇25ml，称定重量，浸泡1小时，超声处理(功率250W，频率33kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用40％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液10ml，置中性氧化铝柱(200～300目，5g，内径为1.5cm)上，用甲醇15ml洗脱，收集洗脱液，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

2.1.2对照药材溶液的制备

取穿心莲对照药材0.5g，加乙醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至5ml，作为对照药材溶液。

2.1.3对照品溶液的制备

再取脱水穿心莲内酯对照品、穿心莲内酯对照品，加无水乙醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液。

照薄层色谱法(附录VIB)试验，吸取上述供试品溶液、对照药材溶液各6μl和对照品溶液4μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇(4：3：0.4)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，分别显相同颜色的斑点；喷以2％3，5-二硝基苯甲酸乙醇溶液-2mol/L氢氧化钾溶液(1：1)混合溶液(临用配制)，立即在日光下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，分别显相同颜色的斑点。(见图2)

2.2水分测定

照《中国药典》2010年一部(附录ⅨH第一法)，测定。结果见表2。

表2.穿心莲药材水分测定(n＝3)

2.3含量测定

照《中国药典》2010年版一部高效液相色谱法(附录ⅥD)测定，色谱条件、对照品溶液制备、供试品溶液制备同《中国药典》2010年版一部穿心莲含量测定项下。对照品及样品HPLC色谱图见图3～8。

2.3.1标准曲线

分别取上述混合对照品溶液2μl、5μl、10μl、15μl、20μl注入液相色谱仪，按“2.4.1“项下方法测定峰面积，并以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，绘制标准曲线，回归方程见表3，图9-10。

表3.标准曲线

由表3可知，脱水穿心莲内酯在0.1848～1.848μg范围内呈良好的线性关系，穿心莲内酯在0.1964～1.946μg范围内呈良好的线性关系。

2.3.2测定结果

穿心莲药材HPLC含量测定结果见表4。

表4.穿心莲含量测定(n＝3)

HPLC含量测定结果表明脱水穿心莲内酯理论塔板数为6084，穿心莲内酯理论塔板数为4305，符合《中国药典》2010年版一部穿心莲含量测定项下规定。

由表4可知CXL1样品穿心莲内酯与脱水穿心莲内酯含量不合格，CXL2、CXL3样品穿心莲内酯与脱水穿心莲内酯含量均符合《中国药典》2010年版一部穿心莲含量测定项下规定，但由于CXL2产地并不明确，不符合《关于征求加强中药提取和提取物监督管理意见的函》相关规定，且其穿心莲内酯含量低于产地明确的CXL3样品含量，故选择CXL3样品进行试验研究。

3穿心莲内酯制备

实验对穿心莲内酯提取、纯化等关键性工艺进行了***研究。结果如下。

3.1穿心莲药材前处理

将穿心莲药材粉碎成粗粉。

3.2提取

3.1.1提取方法考察

试验研究对比研究了适宜工业大生产的浸渍法、渗漉法、回流法3种方法对穿心莲内酯提取效率的影响，方法及结果如下。

浸渍法：取穿心莲药材粗粉3份，每份25g，分别加入1.5倍量95％乙醇浸润30分钟。再加入5倍量95％乙醇55℃水浴温浸2次，每次12小时，过滤，合并滤液。得浸渍提取液。

渗漉法：取穿心莲药材粗粉3份，每份25g，分别加入1.5倍量95％乙醇浸润30分钟。以1～3ml/min速度缓慢收集渗漉液250ml(边渗漉边加95％乙醇)。得渗漉提取液。

回流法：取穿心莲药材粗粉3份，每份25g，分别加入1.5倍量95％乙醇浸润30分钟。加入5倍量95％乙醇回流提取2次，每次3小时，过滤，合并滤液。得回流提取液。

分别取上述浸渍提取液、渗漉提取液、回流提取液1ml置10ml容量瓶中，加95％乙醇定容至刻度，取续滤液，测定各提取液中穿心莲内酯浓度，计算穿心莲内酯提出量。以穿心莲内酯转移率为指标，考察提取方法。结果见表5。

表5穿心莲内酯提取方法考察

由表5可见，采用浸渍法和渗漉法提取效果相似，回流法提取效率最高，采用回流法进行试验。

3.2.2提取溶剂考察

取穿心莲药材粗粉2份，每份25g，分别加入1.5倍量95％乙醇和甲醇浸润30分钟。分别加入5倍量95％乙醇和甲醇回流提取2次，每次3小时，过滤，合并滤液，将滤液定容至500ml。得回流提取液。结果见表6。

表6提取溶剂考察

由表6可见，采用95％乙醇和甲醇作为提取溶剂对穿心莲内酯提取率影响无较大差异，考虑到采用甲醇作为提取溶剂成本较高，且甲醇残留在临床使用时有一定的安全隐患，故选择95％乙醇作为提取溶剂。

3.2.3正交设计优化关键工艺参数

乙醇浓度、乙醇用量、提取时间、提取次数对穿心莲内酯的提取效率有较大影响，故选择上述4个因素分别设置3个水平，考察其对穿心莲内酯提取效率的影响，因素水平设计见表7。

取穿心莲药材，每份约25g，以95％乙醇作为提取溶剂，按照正交试验表进行试验，合并滤液，滤液按照穿心莲药材含量测定方法测定穿心莲内酯含量。正交设计及结果见表8。

表7试验因素水平表

表8正交实验结果(n＝2)

对正交试验结果进行方差分析，由于A因素SS值小于误差，故归于误差后再次进行分析，结果见表9。

表9正交试验方差分析结果

对正交试验进行直观分析和方差分析可知，各因素对穿心莲提取率影响顺序为C>D>B>A，即提取次数为主要因素，提取时间为重要因素，乙醇浓度、料液比为次要因素，考虑到低浓度乙醇提出水溶性杂质较多，故乙醇浓度选择95％乙醇。由此得最佳提取工艺D₃C₂B₂A₁，即每次加入95％乙醇4倍量，回流提取3次，每次2h。

3.2.4提取工艺验证试验

取穿心莲药材粉末200g，加入4倍量95％乙醇，回流提取3次，每次2h。结果见表10。

表10提取工艺验证试验

由表10可见，工艺经优化后穿心莲内酯提取率平均为83.28，RSD为0.80％，表明经优化后的工艺提取率较高，且稳定。

3.3纯化工艺考察

穿心莲内酯纯化采用水沉、加活性炭回流的方法除去叶绿素等杂质，采用三氯甲烷静置除去脱水穿心莲内酯，最后采用乙醇重结晶的方法得到穿心莲内酯结晶。

3.3.1调节乙醇浓度考察

取3.2.4中穿心莲提取液100ml(相当于生药量9g)，加入适量蒸馏水调节乙醇浓度分别为55％、65％、75％、85％，静置过夜后观察沉淀情况及过滤情况，并测定溶液中穿心莲内酯含量，计算穿心莲内酯减失量。结果见表11。

表11调节乙醇浓度考察(n＝3)

“+”表示有沉淀析出，“+++”表示沉淀量最大，“—”表示无沉淀析出

“**”表示可过滤，“***”表示易过滤

由表11可见，加水调节调节乙醇浓度为55％后穿心莲内酯含量有少量降低，65％～95％则无明显变化，且调节乙醇浓度为65％时有大量沉淀析出，且过滤迅速，故选择调节乙醇浓度为65％即可。

3.3.2水沉静置时间考察

取穿心莲药材粉末500g，按3.2.4中提取方法提取的穿心莲内酯提取液并测定提取液中穿心莲内酯含量，加提取液分为3份，分别加入相当于生药6倍量蒸馏水静置，分别于3、6、12、24、36小时取样测定其穿心莲内酯含量，计算穿心莲内酯减失量，并观察沉淀情况。结果见表12。

表12加水沉淀时间考察(n＝3)

“+”表示有沉淀析出，“+++”表示沉淀量最大，“—”表示无沉淀析出

“**”表示可过滤，“***”表示易过滤

由表12可见，加水后静置36小时，沉淀完全且穿心莲内酯含量无明显变化，即加水后室温静置36小时即可。

3.3.3活性炭脱色考察

3.3.3.1活性炭用量考察

取3.3.2中穿心莲提取液3份，每份500ml(相当于生药量30g)，加入2.0g、2.5g、3g、3.5g、4.0g活性炭粉末，相当于溶液量0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％，回流脱色1小时，冷却后观察脱色液颜色并测定穿心莲内酯含量，计算穿心莲内酯减失量。结果见表13。

表13活性炭加入量考察(n＝3)

“+”表示颜色最浅，““++”表示颜色较浅“+++”表示颜色较深，“++++”表示颜色最深

由表13可见，加入溶液量0.4％～0.5％活性炭回流脱色1小时穿心莲内含量无明显降低，且无脱色液中无明显可见绿色，当活性炭加入量大于溶液量0.5％时穿心莲内酯含量明显降低，故活性炭用量取药材量0.5％即可。

3.3.3.1脱色时间考察

取3.3.2中穿心莲提取液4份，每份500ml(相当于生药量30g)，加入2.5g活性炭粉末，回流脱色0、0.5、1、2、3小时，过滤，冷却后观察脱色液颜色并测定穿心莲内酯含量，计算穿心莲内酯减失量。结果见表14。

表14活性炭加入量考察(n＝3)

“++”颜色最深；“+”颜色较浅

由表14可见，随回流时间延长穿心莲内酯有少量降低，温度过高会破坏穿心莲内酯，若脱色时间太短，则未能达到脱色目的，故回流脱色时间选择1小时即可。

3.3.4浓缩体积考察

取穿心莲药材粉末500g，按上述操作后得穿心莲脱色液，取穿心莲脱色5份，每份500ml(相当于生药31g)，减压浓缩至1ml/g、2ml/g、3ml/g、5ml/g、8ml/g、10ml/g，静置过夜后测定滤液中穿心莲内酯含量。结果见图11。

由图11可见当浓缩至1ml/g时穿心莲内酯有大量析出，及穿心莲脱色液浓缩至1ml/g时即可。

3.3.5醇洗涤沉淀考察

在前期预示试验中发现，3.3.4中沉淀为深黄色，经后续纯化、结晶操作得到穿心莲内酯结晶为黄色片状或针状结晶，且纯度仅能达到87％。通过预示发现使用少量乙醇洗涤沉淀后，沉淀颜色变为类白色，且通过纯化结晶后，结晶为物色片状或针状，纯度达95％以上，达到《中国药典》2010年版1部穿心莲内酯项下纯度的相关规定。

故考察了乙醇洗涤沉淀时乙醇浓度、乙醇用量对洗涤效果的影响。具体试验方法及结果如下。

3.3.5.1乙醇用量

取3.3.4中沉淀4份，每份1g，分别置布氏漏斗中，加入0、3、5、8ml(0、3、5、8倍)95％乙醇洗涤，50℃减压干燥后观察沉淀颜色，并测定穿心莲内酯含量，计算穿心莲内酯减失量，结果见表15。

表15乙醇用量考察

注：“+”表示沉淀颜色为黄色，“-”表示沉淀颜色为类白色

由表15可知，当乙醇加入量小于沉淀量5倍时，沉淀颜色为黄色，当乙醇加入量大于5倍时，沉淀颜色为类白色，故选择使用5倍量乙醇洗涤即可。

3.3.5.2乙醇浓度考察

取3.3.4中沉淀4份，每份1g，分别置布氏漏斗中，加5ml65％、80％、95％乙醇洗涤，另一份不加乙醇洗涤，50℃减压干燥后观察沉淀颜色，并测定穿心莲内酯含量，计算穿心莲内酯减失量，结果见表16。

表16乙醇浓度考察

注：“+”表示沉淀颜色为黄色，“-”表示沉淀颜色为类白色

由表16可知，当乙醇浓度小于80％时，虽然穿心莲内酯损失量较少，但沉淀颜色为黄色，当乙醇浓度大于80％时，沉淀颜色为类白色，故选择使用80％乙醇洗涤即可。

在后续的验证试验中发现，使用5倍量80％乙醇洗涤沉淀时，穿心莲内酯的损失量较大，可达到20％以上。因此，使用乙醇洗涤时，洗至沉淀颜色为类白色即可，再加少量水洗涤，洗至水溶液无色即可。

3.3.6三氯甲烷纯化考察

参考文献^[9-10],利用脱水穿心莲内酯易溶于三氯甲烷，而穿心莲内酯不溶于三氯甲烷的性质，采用三氯甲烷静置的方式除去上述沉淀中脱水穿心莲内酯。考虑到三氯甲烷用量、静置时间及静置次数对除杂效果的影响，设计如下3个单因素试验，选择最佳试验方案。具体试验方法及结果如下。

3.3.6.1三氯甲烷用量考察

取穿心莲药材粉末200g，按上述操作后得穿心莲内酯粗晶，干燥后取穿心莲内酯粗晶6份，每份1g，分别加入5、10、20、30、40、50ml三氯甲烷(相当于沉淀量5、10、20、30、40、50倍)静置1小时，过滤，干燥得精制穿心莲内酯粉末，分别测定其脱水穿心莲内酯含量，并计算脱水穿心莲内酯减失量。结果见表17。

表17三氯甲烷用量考察

由表17可见，当三氯甲烷使用量大于沉淀量10倍时，脱水穿心莲内酯含量无显著降低，考虑到三氯甲烷残留及成本，选择10倍量三氯甲烷静置即可。

3.3.6.1三氯甲烷静置时间考察

取穿心莲药材粉末200g，按上述操作后得穿心莲内酯沉淀，干燥后取穿心莲内酯沉淀4份，每份1g，加入10ml三氯甲烷，分别静置0.5、1、2、3小时，过滤，干燥得精制穿心莲内酯粉末，分别测定其脱水穿心莲内酯含量，并计算脱水穿心莲内酯减失量。结果见表18。

表18三氯甲烷用量考察

由表18可见，静置0.5小时，脱水穿心莲内酯减失量比例较小，静置1、2、3小时脱水穿心莲内酯减失量比例无明显变化，故选择静置1小时静置即可。

3.3.6.1三氯甲烷静置次数考察

取穿心莲药材粉末200g，按上述操作后得穿心莲内酯沉淀，干燥后取穿心莲内酯沉淀3份，每份1g，加入10ml三氯甲烷，分别静置1、2、3次，每次1小时，过滤，干燥得精制穿心莲内酯粉末，分别测定其脱水穿心莲内酯含量。结果见表19。

表19三氯甲烷用量考察

由表19可见，静置次数对精制效果影响较大，静置3次后即可达到除去大量脱水穿心莲内酯的目的，选择静置3次即可。

3.4结晶

参考文献^[9-10]，穿心莲内酯粗晶重结晶的方式主要为采用乙醇加热溶解，回收溶剂，静置析晶的方式纯化穿心莲内酯。

取精制穿心莲内酯粉末4g，加入200ml95％加热使溶解，过滤，减压回收溶剂至半量，4℃静置过夜，过滤，得穿心莲内酯结晶。母液再次浓缩至半量，重复上述操作，得穿心莲内酯结晶，合并两次穿心莲内酯结晶，50℃减压干燥，得穿心莲内酯结晶。结果见表20。

表20结晶结果

由表20可见，根据上述结晶方法，经两次浓缩结晶制得穿心莲内酯结晶纯度均大于95％，符合《中国药典》要求。

3.5工艺验证

取穿心莲药材粗粉200g，按工艺流程操作，结果见表21。

表21工艺验证

结果显示穿心莲内酯平均得率1.09，平均纯度为97.88％，得率及纯度RSD均小于5％，表明方法稳定可行。

3.6小结

最终确定穿心莲内酯提取、纯化工艺为：取穿心莲粗粉200g，加入1.5倍量95％乙醇，浸润30分钟，再加入4倍量95％乙醇，加热回流提取3次，每次2小时，过滤，合并3次滤液。滤液加蒸馏水调节乙醇浓度至65％，室温静置36h，过滤，滤液加0.5％活性炭粉末，加热回流脱色1小时，过滤，滤液减压回收乙醇至1g/ml(药材量/浓缩液体积)，4℃静置36小时，过滤，得穿心莲内酯沉淀。穿心莲内酯沉淀加少量80％乙醇洗涤(洗涤沉淀至类白色)，再加少量水洗涤(洗涤至水溶液无色)，得穿心莲内酯白色粉末，穿心莲内酯白色粉末加10倍量三氯甲烷静置3次，每次1小时，过滤，得精制穿心莲内酯粉末。加入生药量1倍量95％乙醇，稍加热使精制穿心莲内酯粉末溶解，过滤，减压回收乙醇至半量，4℃静置过夜，使析晶，过滤，得穿心莲内酯结晶。母液再次减压回收溶剂至半量，过滤，合并两次穿心莲内酯结晶，50℃减压干燥2小时，即得。

3.7工艺流程

3.7.1关键工艺参数说明

说明：各步骤操作中溶液颜色、溶液体积、溶液密度等均为带溶液冷却后观察或测得。

[1]回流提取后，过滤后滤液呈绿色，体积约为2300～2600ml，密度约为0.790～0.810g/ml。

[2]加水静置，过滤后，滤液应呈黄绿色，体积约为3300～3700ml，密度约为0.890～0.910g/ml。

[3]加入0.5％活性炭回流脱色，过滤后，滤液呈黄色，体积约为2900～3300ml，密度约为0.890～0.910g/ml。

[4]脱色液减压浓缩时，为避免穿心莲内酯损耗，温度不宜过高，本研究选择为55℃。

[5]脱色液浓缩后，溶液呈黄色，溶液底部有大量黄色沉淀析出，体积约为200～300ml，密度约为1.05～1.25g/ml。4℃静置36小时后，底部有大量类白色沉淀析出。

[6]4℃第二次静置后，沉淀量较少，故舍去第二次静置析出沉淀步骤。

[7]加入少量80％乙醇洗涤沉淀将沉淀洗至类白色即可，然后加少量水洗涤。

[8]结晶后减压回收乙醇时，为避免穿心莲内酯损耗，温度不宜过高，本研究选择为50℃。

[9]结晶干燥时，为避免温度过高，并快速达到干燥目的，本研究选择减压干燥的方式，与50℃田间下干燥2小时。

4穿心莲内酯质量检查

4.1其他内酯

取本品，加无水乙醇制成每1ml含2mg的溶液作为供试品溶液。照薄层色谱法(附录VIB)试验，吸取上述溶液10μl，点于硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇(19：1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％3，5-二硝基苯甲酸的乙醇溶液与5％氢氧化钾的乙醇溶液的等量混合液(临用配制)。供试品色谱中，除主斑点外，不得显其他斑点(如图12)。

4.2干燥失重

取本品，在105℃干燥至恒重，减失重量不得过1.0％(附录ⅨG)。结果见表22。

表22穿心莲内酯干燥失重(n＝3)

由表22可见，3组结晶减失重量均小于1.0％，符合药典规定。

4.2含量测定

4.2.1色谱条件与***适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(60：40)为流动相；检测波长为225nm。理论板数按穿心莲内酯峰计算应不低于5000。

4.2.2对照品溶液的制备取穿心莲内酯对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.101mg的溶液，即得。

4.2.3供试品溶液的制备取本品约4.91、4.94、5.07mg，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

4.2.4样品测定分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得，结果见图13～14。

本发明制备穿心莲内酯的方法，使用该方法具有如下特点：采用适宜工业大规模生产的回流法提取穿心莲内酯，提取效率高、耗时短、有机溶剂用量少、成本低；本发明采用醇提水沉、活性炭回流脱色相结合的方式除去叶绿素等杂质，具有活性炭使用量较少、解热时间短等优势，避免穿心莲内酯被活性炭吸附、长时间加热穿心莲内酯被分解；本研究采用乙醇洗涤穿心莲内酯粗晶除杂的方式，避免传统工艺中多次使用活性炭回流脱色除杂对穿心莲内酯的分解。制备过程中不使用大孔树脂；反应时间短，节约能源；产品安全有效，便于“三废”处理，利于环境保护；产品纯度高，穿心莲内酯含量可达97％以上；工艺过程操作简单，适合工业化生产。

参考文献：

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Claims (10)

1.穿心莲内酯的大生产工艺，它包括如下步骤：

a、取穿心莲粗粉，加入95％乙醇或甲醇浸润，再加入95％乙醇或甲醇，加热回流提取，过滤，合并滤液；

b、滤液加蒸馏水调节乙醇浓度至55％－85％，室温静置，过滤，得滤液；

c、滤液加0.4-0.8％活性炭粉末，加热回流脱色，过滤；

d、滤液减压回收乙醇至1－10g/ml(药材量/浓缩液体积)，4℃静置，过滤，得穿心莲内酯沉淀；

e、穿心莲内酯沉淀加少量80％乙醇洗涤，洗涤至类白色，再加少量水洗涤至水溶液无色，得穿心莲内酯白色粉末；

f、将e步骤制备的穿心莲内酯白色粉末加三氯甲烷静置，过滤，得精制穿心莲内酯粉末；

g、加入95％乙醇，加热使精制穿心莲内酯粉末溶解，过滤，减压回收乙醇至半量，4℃静置过夜，使析晶，过滤，得穿心莲内酯结晶；母液再次减压回收溶剂至半量，过滤，合并穿心莲内酯结晶，减压干燥，即得。

2.根据权利要求1所述的穿心莲内酯的大生产工艺，其特征在于：a步骤所述的提取溶剂为95％乙醇。

3.根据权利要求1所述的穿心莲内酯的大生产工艺，其特征在于：a步骤所述的提取工艺为：每次加入95％乙醇4倍量，回流提取3次，每次2h。

4.根据权利要求1所述的穿心莲内酯的大生产工艺，其特征在于：b步骤所述的乙醇浓度至65％。

5.根据权利要求1所述的穿心莲内酯的大生产工艺，其特征在于：b步骤所述的静置时间为36小时。

6.根据权利要求1所述的穿心莲内酯的大生产工艺，其特征在于：c步骤所述的活性炭的用量为0.5％。

7.根据权利要求1所述的穿心莲内酯的大生产工艺，其特征在于：c步骤所述的活性炭脱色时间0.5－3小时。

8.根据权利要求1所述的穿心莲内酯的大生产工艺，其特征在于：d步骤所述的滤液减压回收乙醇至1g/ml。

9.根据权利要求1所述的穿心莲内酯的大生产工艺，其特征在于：f步骤所述的10倍量三氯甲烷静置1小时，静置3次。

10.根据权利要求1所述的穿心莲内酯的大生产工艺，其特征在于：g步骤所述的减压干燥条件为：50℃减压干燥2小时。