CN105145352B - 一种白芨种苗高效组培快繁技术 - Google Patents
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Abstract
一种白芨种苗高效组培快繁技术，将白芨种子撒播在种子萌发培养基上进行种子无菌萌发后，将所获得小苗分株接种在增殖继代培养基进行增殖继代培养，得到丛生苗后将其接种在生根培养基进行生根培养，再将得到的组培苗种植于所制备的炼苗基质中进行炼苗，炼苗后移栽至大田种植即可，其中，种子萌发培养基的组成为：MS+蔗糖30g/L +琼脂8g/L +马铃薯10‑12g/L；增殖继代培养基的组成为：MS+ KT 1.0 mg/ L +NAA 0.2mg/L+蔗糖30g/L +琼脂9 g/L；生根培养基组成为：MS+NAA 0.2mg/L+ IAA1.0mg/L+蔗糖30g/L +琼脂9g/L+25‑30g/L马铃薯；炼苗基质的成分为：中位泥炭土、珍珠岩与碎木屑，其体积比为5:2:3。本发明技术成熟，体系完善，可有效解决白及自然萌发率低，种苗获得困难的现状，具有较好的推广、应用价值，市场前景广阔。
Description
技术领域
本发明属于利用组织培养进行药用植物育苗的技术领域，尤其涉及一种白芨种苗高效组培快繁技术。
背景技术
白芨Bletilla striata为兰科白芨属多年生草本植物，是一种常用药材，以块茎入药，具有收敛止血、消肿生肌之功效，用于治疗咯血，吐血，外伤出血，疮疡肿毒，皮肤皲裂等症。
由于白芨市场主要依靠野生资源，盲目的私采滥挖，导致白芨野生资源日渐枯竭。白芨种子极小，而且没有胚乳，自然萌发率极低，目前常用的分株繁殖，繁殖系数低，无法满足规模化生产的需求。因此，能否快速获得白芨种苗成为白芨规模化种植的制约因素。为解决这个问题，采取组织培养技术获得白芨组培苗逐步成为白芨种苗获得的重要措施，并且已经取得了较大进展，出现了许多白芨种苗方面的育种技术，采用不同方法获得白芨种苗，但对于后期组培苗的炼苗、驯化环节的技术不明确，效果也不够好。
发明内容
本发明的目的是针对当前白芨人工栽培中种子萌发率低，自然繁殖差的问题，提供一种白芨种苗组培快繁技术，不仅可以高效的获得白芨组培苗，还对白芨组培苗的炼苗、驯化机制进行了研究，利用组织培养技术，可以获得大量的白芨种苗，为白芨规模化种植奠定了基础。
为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：一种白芨种苗高效组培快繁技术，将无菌白芨蒴果中的白芨种子撒播在种子萌发培养基上，进行种子无菌萌发，然后将萌发后所获得小苗分株接种在增殖继代培养基中，进行增殖继代培养，得到白芨丛生苗后将其接种在生根培养基中，进行生根培养，再将得到的白芨组培苗种植于所制备的炼苗基质中进行炼苗，炼苗后移栽大田种植即可，其中，获得无菌白芨蒴果的方法为：选取成熟但尚未开裂的白芨蒴果，先用流水冲洗表面杂质并沥干，然后用75%的酒精棉球把蒴果表面擦拭干净，再将其转移至超净工作台内，用75%的酒精溶液浸泡30秒后，依次用0.1-0.5%的升汞溶液消毒6min以及无菌水冲洗2-3次，再用无菌滤纸吸干表面的水分后，得到无菌的白芨蒴果，所述的种子无菌萌发以及炼苗的方法如下：
（1）种子无菌萌发的方法为：将撒播有白芨种子的种子萌发培养基置于培养室内进行暗培养，培养温度为25℃，当培养基上的种子开始萌绿时，将其转为光培养，光照强度为2000-2500lx，光照为每天12小时，并连续照射，光培养15~20天后分化为丛生芽的小苗，完成无菌萌发；
其中，所述种子萌发培养基的组成为：MS、蔗糖、琼脂以及马铃薯，其中蔗糖的添加量为30g/L，琼脂的添加量为8g/L，马铃薯的添加形式为糊状，其添加量为10-12g/L，种子萌发培养基的pH为5.5~6.0；
（2）炼苗的方法为：取盛有经生根培养所得的白芨组培苗的组织培养瓶，打开瓶盖，向其中喷洒5~8ml的无菌水后，在培养室内放置2~3天，然后将组织培养瓶移出培养室放置在室外2~3天，在室外培养期间，温度保持在20~25℃，湿度保持在30~40%，然后取出组织培养瓶内的白芨组培苗，用蒸馏水清洗掉组培苗根部的培养基后，在0.2mg/L的NAA中浸泡30秒，种植于炼苗基质中，炼苗90天后即可移栽大田种植；
其中，所述的炼苗基质的成分包括中位泥炭土、珍珠岩以及碎木屑，碎木屑为锯末，其制作方法为：先将中位泥炭土经高温湿热灭菌，灭菌温度121℃，灭菌时间为20min，然后将中位泥炭土、珍珠岩以及碎木屑按照体积比5:2:3的比例混合后，加入灭菌的蒸馏水拌匀，使其含水量为50~55%即可，然后将所制作的炼苗基质放置于育苗盘中，并放在遮阳率为50%的拱棚中备用，拱棚中的湿度为50~55%，温度为15~25℃。
进一步的，所述的种子萌发培养基的制备方法为：先将马铃薯清洗掉表面杂质，然后去皮放入蒸馏水中加热，沸腾后继续煮沸30min，然后将马铃薯取出捣碎成马铃薯泥，并将煮沸后的蒸馏水冷却至室温加入马铃薯泥中混匀成糊状，最后将糊状的马铃薯与蔗糖、琼脂按照所述的添加量依次加入MS中，并搅拌均匀即可。
进一步的，在增殖继代培养中，其培养方法为：在超净工作台内，将种子无菌萌发所获得的丛生芽小苗分株后接种在盛有增殖继代培养基的组织培养瓶内，每瓶接种20~25株，并将接种后的组织培养瓶至于培养室内光照培养，培养温度为25℃，光照强度为2000-2500lx，培养期间每天的光照时间为12h，50天后获得3~5cm的白芨丛生苗；
所述的增殖继代培养基的配方配比为：MS+ KT 1.0 mg/ L +NAA 0.2mg/L+蔗糖30g/L +琼脂9 g/L。
进一步的，在生根培养的过程中，其培养方法如下：在超净工作台内将增殖继代培养所获得的丛生苗分成单株，接种在盛有生根培养基的组织培养瓶内，每瓶接种20~25株，置于培养室内培养，培养温度为25℃，光照强度为2000-2500lx，光照为每天12小时，40天后可获得株高5-8cm，根长2-3cm的白芨组培苗，生根率达95%以上；
所述的生根培养基的配方配比为：MS+NAA 0.2mg/L+ IAA1.0mg/L+蔗糖30g/L +琼脂9g/L+25-30g/L马铃薯。
进一步的，在所述的炼苗基质中加入0.1g/L的多菌灵溶液。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
第一，本发明技术成熟，体系完善，可有效解决白芨自然萌发率低，种苗获得困难的现状，具有较好的推广、应用价值，市场前景广阔；
第二，本发明所提供的方法中，种子无菌萌发阶段所用的种子萌发培养基中并未添加任何激素，而是利用经过处理的马铃薯中的天然物质为白芨种子萌发提供养分，再加之采用暗培养和光培养相结合的培养方法，即可在30天内使白芨种子萌发获得丛生芽，相对于外源添加激素，既降低了培养成本，又减少了培养过程对激素的利用，更符合绿色农业的理念，并且，经计算，白芨种子的萌发率达到98%以上；
第三，本发明在炼苗阶段所提供的炼苗培养基组成成分容易获取，配比合理，保证白芨组培苗炼苗、驯化过程中的保水、透气和营养物质的供应，显著提高白芨组培苗炼苗、驯化的成活率。
附图说明
图1是种子无菌萌发阶段采用不同种子萌发培养基对种子萌发率的影响。
图2是生根培养阶段采用不同生根培养基对生根率的影响。
图3是采用不同炼苗基质对成活率的影响。
具体实施方式
下面通过具体实施方式以及试验例对本发明作进一步的说明。
实施例1：一种白芨种苗高效组培快繁技术，其步骤包括材料准备、种子无菌萌发、增殖继代培养、生根培养以及炼苗与驯化，具体方法如下：
1、材料准备
选取成熟但尚未开裂的白芨蒴果，先用流水冲洗表面杂质并沥干，然后用75%的酒精棉球把蒴果表面擦拭干净，再将其转移至超净工作台内，用75%的酒精溶液浸泡30秒后，依次用0.1%的升汞溶液消毒6min以及无菌水冲洗2-3次，再用无菌滤纸吸干表面的水分后，得到无菌的白芨蒴果。
2、种子无菌萌发
2.1、种子萌发培养基的准备
在MS培养基中依次加入30g/L的蔗糖、8g/L的琼脂以及10g/L的糊状马铃薯，搅拌混匀，并调整pH至5.5，并置于培养瓶中备用，其中，糊状马铃薯的制备方法为：将马铃薯清洗掉表面杂质，然后去皮放入蒸馏水中加热，沸腾后继续煮沸30min，然后将马铃薯取出捣碎成马铃薯泥，并将煮沸后的蒸馏水冷却至室温加入马铃薯泥中混匀成糊状即可。
2.2、接种萌发
在超净工作台内用刀片把无菌的白芨蒴果切开，用镊子夹住蒴果，深入培养瓶内，通过震动镊子，把白芨种子均匀地撒播在种子萌发培养基上，然后将该培养瓶置于培养室内进行暗培养，培养温度为25℃，暗培养10天左右，当种子开始萌绿时，转为光培养，光照强度为2000lx，光照时间为每天连续照射12小时，在光照培养15-20天后即可分化为大量丛生芽。由于白芨种子极小，无法计算种子数，以培养基的底面积计算，种子的萌发率达98%以上。
3、增殖继代培养
3.1、增殖继代培养基的准备
增殖继代培养基的配方配比为：MS+ KT 1.0 mg/ L +NAA 0.2mg/L+蔗糖30g/L +琼脂9 g/L，其制作方法如下：先称30g蔗糖溶解在水中后，向其中加入9g琼脂粉，并加热，待琼脂粉完全溶解后，再向其中分别加入KT 和NAA溶液，使KT 和NAA的浓度分别为1.0 mg/ L和0.2mg/L，然后定容至1000mL， 此时的pH为5.5-6.0，定容后将其分装在底部直径为70cm的组织培养瓶中，每个组织培养瓶的分装量为30mL，然后进行灭菌，灭菌后待冷却、凝固后即可得到增殖继代培养基。
3.2、接种培养
在超净工作台内，将种子无菌萌发所获得的丛生芽小苗分株后接种在盛有增殖继代培养基的组织培养瓶内，每瓶接种20株，如果不容易分开，也可以3~5株在一起接种，并将接种后的组织培养瓶至于培养室内光照培养，培养温度为25℃，光照强度为2000lx，培养期间每天的光照时间为12h，50天后获得3~5cm的白芨丛生苗。
4、生根培养
4.1、生根培养基的准备
生根培养基的配方配比为：MS+NAA 0.2mg/L+ IAA1.0mg/L+蔗糖30g/L +琼脂9g/L+25g/L马铃薯，马铃薯的添加形式为糊状马铃薯，糊状马铃薯的制作方法与上述步骤2.1中所述的方法相同，生根培养基的制作方法如下：先称30g蔗糖溶解在水中后，向其中加入9g琼脂粉，并加热，待琼脂粉完全溶解后，再向其中分别加入IAA 和NAA溶液，使IAA 和NAA的浓度分别为1.0 mg/ L 和0.2mg/L，然后定容至1000mL， 此时的pH为5.5-6.0，定容后将其分装在底部直径为70cm的组织培养瓶中，每个组织培养瓶的分装量为30mL，然后进行灭菌，灭菌后待冷却、凝固后即可得到生根培养基。
4.2、接种丛生苗
在超净工作台内把增殖继代培养所获得丛生苗分成单株，接种在4.1所制得的生根培养基中，每个组织培养瓶接种20~25株，然后将其置于培养室内培养，培养温度为25℃，光照强度为2000lx，光照为每天12小时，约40天后可获得株高5-8cm，根长2-3cm的白芨组培苗，生根率达95%以上。
5、炼苗与驯化
5.1、炼苗基质的准备
炼苗基质的成分包括中位泥炭土、珍珠岩以及碎木屑，碎木屑为锯末，其制作方法为：先将中位泥炭土经高温湿热灭菌，灭菌温度121℃，灭菌时间为20min，然后将中位泥炭土、珍珠岩以及碎木屑按照体积比5:2:3的比例混合后，加入灭菌的蒸馏水拌匀，使其含水量为50~55%即可，然后将所制作的炼苗基质放置于育苗盘中，并放在遮阳率为50%的拱棚中备用，控制拱棚中的湿度为50%，温度为15℃。
5.2、炼苗、驯化
选择生长健壮、根系发达的白芨组培苗，打开其所在的组织培养瓶瓶盖，向瓶内喷洒无菌水，每瓶喷洒5ml，然后置于培养室内2~3天后，将组织培养瓶移出培养室再放置2~3天，在室外期间，温度为20℃，湿度为30%，然后从培养瓶中取出白芨组培苗，并用蒸馏水清洗干净根部残留的培养基，置于0.2mg/L的NAA中浸泡30秒，种植于5.1所制作的炼苗基质中，炼苗90天后即可移栽大田种植，炼苗成活率为95%左右。
实施例2：一种白芨种苗高效组培快繁技术，其步骤包括材料准备、种子无菌萌发、增殖继代培养、生根培养以及炼苗与驯化，具体方法如下：
1、材料准备
选取成熟但尚未开裂的白芨蒴果，先用流水冲洗表面杂质并沥干，然后用75%的酒精棉球把蒴果表面擦拭干净，再将其转移至超净工作台内，用75%的酒精溶液浸泡30秒后，依次用0.5 %的升汞溶液消毒6min以及无菌水冲洗2-3次，再用无菌滤纸吸干表面的水分后，得到无菌的白芨蒴果。
2、种子无菌萌发
2.1、种子萌发培养基的准备
在MS培养基中依次加入30g/L的蔗糖、8g/L的琼脂以及12g/L的糊状马铃薯，搅拌混匀，并调整pH至6.0，并置于培养瓶中备用，其中，糊状马铃薯的制备方法为：将马铃薯清洗掉表面杂质，然后去皮放入蒸馏水中加热，沸腾后继续煮沸30min，然后将马铃薯取出捣碎成马铃薯泥，并将煮沸后的蒸馏水冷却至室温加入马铃薯泥中混匀成糊状即可。
2.2、接种萌发
在超净工作台内用刀片把无菌的白芨蒴果切开，用镊子夹住蒴果，深入培养瓶内，通过震动镊子，把白芨种子均匀地撒播在种子萌发培养基上，然后将该培养瓶置于培养室内进行暗培养，培养温度为25℃，暗培养10天左右，当种子开始萌绿时，转为光培养，光照强度为2500lx，光照时间为每天连续照射12小时，在光照培养15-20天后即可分化为大量丛生芽。由于白芨种子极小，无法计算种子数，以培养基的底面积计算，种子的萌发率达98%以上。
3、增殖继代培养
3.1、增殖继代培养基的准备
增殖继代培养基的配方配比为：MS+ KT 1.0 mg/ L +NAA 0.2mg/L+蔗糖30g/L +琼脂9 g/L，其制作方法如下：先称30g蔗糖溶解在水中后，向其中加入9g琼脂粉，并加热，待琼脂粉完全溶解后，再向其中分别加入KT 和NAA溶液，使KT 和NAA的浓度分别为1.0 mg/ L和0.2mg/L，然后定容至1000mL， 此时的pH为5.5-6.0，定容后将其分装在底部直径为70cm的组织培养瓶中，每个组织培养瓶的分装量为30mL，然后进行灭菌，灭菌后待冷却、凝固后即可得到增殖继代培养基。
3.2、接种培养
在超净工作台内，将种子无菌萌发所获得的丛生芽小苗分株后接种在盛有增殖继代培养基的组织培养瓶内，每瓶接种20株，如果不容易分开，也可以3~5株在一起接种，并将接种后的组织培养瓶至于培养室内光照培养，培养温度为25℃，光照强度为2500lx，培养期间每天的光照时间为12h，50天后获得3~5cm的白芨丛生苗。
4、生根培养
4.1、生根培养基的准备
生根培养基的配方配比为：MS+NAA 0.2mg/L+ IAA1.0mg/L+蔗糖30g/L +琼脂9g/L+30g/L马铃薯，马铃薯的添加形式为糊状马铃薯，糊状马铃薯的制作方法与上述步骤2.1中所述的方法相同，生根培养基的制作方法如下：先称30g蔗糖溶解在水中后，向其中加入9g琼脂粉，并加热，待琼脂粉完全溶解后，再向其中分别加入IAA 和NAA溶液，使IAA 和NAA的浓度分别为1.0 mg/ L 和0.2mg/L，然后定容至1000mL， 此时的pH为5.5-6.0，定容后将其分装在底部直径为70cm的组织培养瓶中，每个组织培养瓶的分装量为30mL，然后进行灭菌，灭菌后待冷却、凝固后即可得到生根培养基。
4.2、接种丛生苗
在超净工作台内把增殖继代培养所获得丛生苗分成单株，接种在4.1所制得的生根培养基中，每个组织培养瓶接种20~25株，然后将其置于培养室内培养，培养温度为25℃，光照强度为2500lx，光照为每天12小时，约40天后可获得株高5-8cm，根长2-3cm的白芨组培苗，生根率达95%以上。
5、炼苗与驯化
5.1、炼苗基质的准备
炼苗基质的成分包括中位泥炭土、珍珠岩以及碎木屑，碎木屑为锯末，其制作方法为：先将中位泥炭土经高温湿热灭菌，灭菌温度121℃，灭菌时间为20min，然后将中位泥炭土、珍珠岩以及碎木屑按照体积比5:2:3的比例混合后，加入灭菌的蒸馏水拌匀，使其含水量为50~55%即可，然后将所制作的炼苗基质放置于育苗盘中，并放在遮阳率为50%的拱棚中备用，控制拱棚中的湿度为55%，温度为25℃。
5.2、炼苗、驯化
选择生长健壮、根系发达的白芨组培苗，打开其所在的组织培养瓶瓶盖，向瓶内喷洒无菌水，每瓶喷洒8ml，然后置于培养室内2~3天后，将组织培养瓶移出培养室再放置2~3天，在室外期间，温度为25℃，湿度为40%，然后从培养瓶中取出白芨组培苗，并用蒸馏水清洗干净根部残留的培养基，置于0.2mg/L的NAA中浸泡30秒，种植于5.1所制作的炼苗基质中，炼苗90天后即可移栽大田种植，炼苗成活率为95%左右。
实施例3：一种白芨种苗高效组培快繁技术，其步骤包括材料准备、种子无菌萌发、增殖继代培养、生根培养以及炼苗与驯化，具体方法如下：
1、材料准备
选取成熟但尚未开裂的白芨蒴果，先用流水冲洗表面杂质并沥干，然后用75%的酒精棉球把蒴果表面擦拭干净，再将其转移至超净工作台内，用75%的酒精溶液浸泡30秒后，依次用0.3%的升汞溶液消毒6min以及无菌水冲洗2-3次，再用无菌滤纸吸干表面的水分后，得到无菌的白芨蒴果。
2、种子无菌萌发
2.1、种子萌发培养基的准备
在MS培养基中依次加入30g/L的蔗糖、8g/L的琼脂以及10g/L的糊状马铃薯，搅拌混匀，并调整pH至5.8，并置于培养瓶中备用，其中，糊状马铃薯的制备方法为：将马铃薯清洗掉表面杂质，然后去皮放入蒸馏水中加热，沸腾后继续煮沸30min，然后将马铃薯取出捣碎成马铃薯泥，并将煮沸后的蒸馏水冷却至室温加入马铃薯泥中混匀成糊状即可。
2.2、接种萌发
在超净工作台内用刀片把无菌的白芨蒴果切开，用镊子夹住蒴果，深入培养瓶内，通过震动镊子，把白芨种子均匀地撒播在种子萌发培养基上，然后将该培养瓶置于培养室内进行暗培养，培养温度为25℃，暗培养10天左右，当种子开始萌绿时，转为光培养，光照强度为2300lx，光照时间为每天连续照射12小时，在光照培养15-20天后即可分化为大量丛生芽。由于白芨种子极小，无法计算种子数，以培养基的底面积计算，种子的萌发率达98%以上。
3、增殖继代培养
3.1、增殖继代培养基的准备
增殖继代培养基的配方配比为：MS+ KT 1.0 mg/ L +NAA 0.2mg/L+蔗糖30g/L +琼脂9 g/L，其制作方法如下：先称30g蔗糖溶解在水中后，向其中加入9g琼脂粉，并加热，待琼脂粉完全溶解后，再向其中分别加入KT 和NAA溶液，使KT 和NAA的浓度分别为1.0 mg/ L和0.2mg/L，然后定容至1000mL， 此时的pH为5.5-6.0，定容后将其分装在底部直径为70cm的组织培养瓶中，每个组织培养瓶的分装量为30mL，然后进行灭菌，灭菌后待冷却、凝固后即可得到增殖继代培养基。
3.2、接种培养
在超净工作台内，将种子无菌萌发所获得的丛生芽小苗分株后接种在盛有增殖继代培养基的组织培养瓶内，每瓶接种20株，如果不容易分开，也可以3~5株在一起接种，并将接种后的组织培养瓶至于培养室内光照培养，培养温度为25℃，光照强度为2300lx，培养期间每天的光照时间为12h，50天后获得3~5cm的白芨丛生苗。
4、生根培养
4.1、生根培养基的准备
生根培养基的配方配比为：MS+NAA 0.2mg/L+ IAA1.0mg/L+蔗糖30g/L +琼脂9g/L+25g/L马铃薯，马铃薯的添加形式为糊状马铃薯，糊状马铃薯的制作方法与上述步骤2.1中所述的方法相同，生根培养基的制作方法如下：先称30g蔗糖溶解在水中后，向其中加入9g琼脂粉，并加热，待琼脂粉完全溶解后，再向其中分别加入IAA 和NAA溶液，使IAA 和NAA的浓度分别为1.0 mg/ L 和0.2mg/L，然后定容至1000mL， 此时的pH为5.5-6.0，定容后将其分装在底部直径为70cm的组织培养瓶中，每个组织培养瓶的分装量为30mL，然后进行灭菌，灭菌后待冷却、凝固后即可得到生根培养基。
4.2、接种丛生苗
在超净工作台内把增殖继代培养所获得丛生苗分成单株，接种在4.1所制得的生根培养基中，每个组织培养瓶接种20~25株，然后将其置于培养室内培养，培养温度为25℃，光照强度为2300lx，光照为每天12小时，约40天后可获得株高5-8cm，根长2-3cm的白芨组培苗，生根率达95%以上。
5、炼苗与驯化
5.1、炼苗基质的准备
炼苗基质的成分包括中位泥炭土、珍珠岩以及碎木屑，碎木屑为锯末，其制作方法为：先将中位泥炭土经高温湿热灭菌，灭菌温度121℃，灭菌时间为20min，然后将中位泥炭土、珍珠岩以及碎木屑按照体积比5:2:3的比例混合后，加入灭菌的蒸馏水拌匀，使其含水量为50~55%即可，然后将所制作的炼苗基质放置于育苗盘中，并放在遮阳率为50%的拱棚中备用，控制拱棚中的湿度为50%，温度为20℃。
5.2、炼苗、驯化
选择生长健壮、根系发达的白芨组培苗，打开其所在的组织培养瓶瓶盖，向瓶内喷洒无菌水，每瓶喷洒6ml，然后于培养室内2~3天后，将组织培养瓶移出培养室再放置2~3天，在室外期间，温度为22℃，湿度为35%，然后从培养瓶中取出白芨组培苗，并用蒸馏水清洗干净根部残留的培养基，置于0.2mg/L的NAA中浸泡30秒，种植于5.1所制作的炼苗基质中，炼苗90天后即可移栽大田种植，炼苗成活率为95%左右。
下面结合具体的试验例，通过设计的对照实验，说明本发明的有益效果。
试验例1：该试验例用于研究种子无菌萌发阶段采用不同种子萌发培养基对种子萌发率的影响，每一试验组的种子萌发培养基配方如下：
1组：MS+蔗糖30g/L +琼脂8g/L+10g/L马铃薯
2组：MS+蔗糖30g/L +琼脂8g/L+12g/L马铃薯
3组：MS+蔗糖30g/L +琼脂8g/L
4组：MS+蔗糖30g/L +琼脂8g/L+NAA 1.0mg/L
5组：MS+蔗糖30g/L +琼脂8g/L+NAA 1.0mg/L+10g/L马铃薯
6组：MS+蔗糖30g/L +琼脂8g/L+NAA 1.0mg/L+12g/L马铃薯
将上述6组试验例中的种子萌发培养基分别按照本发明所述的方法进行白芨种子无菌萌发，并计算种子萌发率。
试验结果见附图1，由附图1可知：当培养基中不添加马铃薯和外源激素NAA时，其接种30天后的萌发率仅有60%，不及添加马铃薯或NAA后的萌发率，而采用添加马铃薯的培养基内的种子萌发率无论是在接种7天、30天时均远高于添加NAA的培养基的萌发率，尤其是在接种7天后，效果更为明显，并且，通过1组和5组、2组合6组可以看出，在加入马铃薯后如果再次添加NAA反倒不利于白芨种子的萌发，因此，本发明所用的种子萌发培养基无需添加外源激素，即可有效促进白芨种子的萌发，并且与添加激素的培养基相比，能够取得更高的萌发率。
试验例2：该试验例用于研究生根培养阶段采用不同生根培养基对生根率的影响，每一试验组的生根培养基配方如下：
1组：
MS+NAA 0.2mg/L+ IAA1.0mg/L+蔗糖30g/L +琼脂9g/L+25g/L马铃薯
2组：
MS+NAA 0.2mg/L+ IAA1.0mg/L+蔗糖30g/L +琼脂9g/L+28g/L马铃薯
3组：
MS+NAA 0.2mg/L+ IAA1.0mg/L+蔗糖30g/L +琼脂9g/L+30g/L马铃薯
4组：
MS+NAA 0.2mg/L+ IAA1.0mg/L+蔗糖30g/L +琼脂9g/L
5组：
MS+NAA 0.2mg/L +蔗糖30g/L +琼脂9g/L
6组：
MS+ IAA1.0mg/L+蔗糖30g/L +琼脂9g/L
其中，1、2、3组为实验组，4、5、6组为对照组，按照本发明所述的方法进行生根培养，并计算生根率，其试验结果如下见附图2，由附图2可知：在生根培养基中添加马铃薯后，其生根率显著高于未添加马铃薯的生根培养基。
试验例3：该试验例用于研究炼苗、驯化阶段采用不同炼苗基质对成活率的影响，每一试验组的炼苗基质配方如下：
组1：按照体积比，中位泥炭土：珍珠岩：碎木屑=5:2:3
组2：采用组1等量的泥炭土
组3：采用组1等量的珍珠岩
组4：采用组1等量的碎木屑
其中，组1为试验组，组2、3、4均为对照组，然后，按照本发明所述的炼苗、驯化的方法进行白芨组培苗的炼苗、驯化，并计算其成活率，试验结果见附图3，由附图3可知，采用组1即本发明所述的炼苗基质后，其成活率可达98%，远高于其他三个对照组的成活率。
Claims (3)
1.一种白芨种苗高效组培快繁技术，将无菌白芨蒴果中的白芨种子撒播在种子萌发培养基上，进行种子无菌萌发，然后将萌发后所获得丛生芽小苗分株接种在增殖继代培养基中，进行增殖继代培养，得到白芨丛生苗后将其接种在生根培养基中，进行生根培养，获得白芨组培苗，再将得到的白芨组培苗种植于所制备的炼苗基质中进行炼苗，炼苗后移栽大田种植即可，其中，获得无菌白芨蒴果的方法为：选取成熟但尚未开裂的白芨蒴果，先用流水冲洗表面杂质并沥干，然后用75%的酒精棉球把蒴果表面擦拭干净，再将其转移至超净工作台内，用75%的酒精溶液浸泡30秒后，依次用0.1-0.5%的升汞溶液消毒6min以及无菌水冲洗2-3次，再用无菌滤纸吸干表面的水分后，得到无菌的白芨蒴果，其特征在于：所述的种子无菌萌发以及炼苗的方法如下：
（1）种子无菌萌发的方法为：将撒播有白芨种子的种子萌发培养基置于培养室内进行暗培养，培养温度为25℃，当培养基上的种子开始萌绿时，将其转为光培养，每天12小时连续光照，光照强度为2000-2500lx，光培养15~20天后分化为丛生芽的小苗，完成无菌萌发；
其中，所述种子萌发培养基的组成为：MS、蔗糖、琼脂以及马铃薯，其中蔗糖的添加量为30g/L，琼脂的添加量为8g/L，马铃薯的添加形式为糊状，其添加量为10-12g/L，种子萌发培养基的pH为5.5~6.0；
（2）炼苗的方法为：取盛有经生根培养所得的白芨组培苗的组织培养瓶，打开瓶盖，向其中喷洒5~8ml的无菌水后，在培养室内放置2~3天，然后将组织培养瓶移出培养室放置在室外2~3天，在室外培养期间，温度保持在20~25℃，湿度保持在30~40%，然后取出组织培养瓶内的白芨组培苗，用蒸馏水清洗掉组培苗根部的培养基后，在0.2mg/L的NAA中浸泡30秒，种植于炼苗基质中，炼苗90天后即可移栽大田种植；
其中，所述的炼苗基质的成分包括中位泥炭土、珍珠岩以及碎木屑，碎木屑为锯末，其制作方法为：先将中位泥炭土经高温湿热灭菌，灭菌温度121℃，灭菌时间为20min，然后将中位泥炭土、珍珠岩以及碎木屑按照体积比5:2:3的比例混合后，加入灭菌的蒸馏水拌匀，使其含水量为50~55%即制成炼苗基质，然后将所制作的炼苗基质放置于育苗盘中，并放在遮阳率为50%的拱棚中备用，拱棚中的湿度为50~55%，温度为15~25℃；
所述的增殖继代培养方法为：在超净工作台内，将种子无菌萌发所获得的丛生芽小苗分株后接种在盛有增殖继代培养基的组织培养瓶内，每瓶接种20~25株，并将接种后的组织培养瓶至于培养室内光照培养，培养温度为25℃，光照强度为2000-2500lx，培养期间每天的光照时间为12h，50天后获得3~5cm的白芨丛生苗；
所述的增殖继代培养基的配方配比为：MS+ KT 1.0 mg/ L +NAA 0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂9 g/L；
所述的生根培养的方法如下：在超净工作台内将增殖继代培养所获得的丛生苗分成单株，接种在盛有生根培养基的组织培养瓶内，每瓶接种20~25株，置于培养室内培养，培养温度为25℃，光照强度为2000-2500lx，光照为每天12小时，40天后可获得株高5-8cm，根长2-3cm的白芨组培苗；
所述的生根培养基的配方配比为：MS+NAA 0.2mg/L+ IAA1.0mg/L+蔗糖30g/L +琼脂9g/L+25-30g/L马铃薯。
2.根据权利要求1所述的一种白芨种苗高效组培快繁技术，其特征在于：所述的种子萌发培养基的制备方法为：先将马铃薯清洗掉表面杂质，然后去皮放入蒸馏水中加热，沸腾后继续煮沸30min，然后将马铃薯取出捣碎成马铃薯泥，并将煮沸后的蒸馏水冷却至室温加入马铃薯泥中混匀成糊状，最后将糊状的马铃薯与蔗糖、琼脂按照所述的添加量依次加入MS中，并搅拌均匀即可。
3.根据权利要求1所述的一种白芨种苗高效组培快繁技术，其特征在于：在所述的炼苗基质中加入0.1g/L的多菌灵溶液。
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| CN107182788A (zh) * | 2017-07-11 | 2017-09-22 | 中国科学院武汉植物园 | 白及种苗的繁殖方法 |
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| CN109006331A (zh) * | 2018-06-22 | 2018-12-18 | 广西陆川县兰辉农业科技有限公司 | 一种白芨的种植方法 |
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| CN114902920B (zh) * | 2022-04-27 | 2024-04-09 | 贵州省农作物品种资源研究所 | 白及培育方法、白及提取物及其制备和抗氧化性检测方法 |
| CN116649216A (zh) * | 2023-06-25 | 2023-08-29 | 江苏护理职业学院 | 一种纯正白芨三叉组培驯化苗育苗方法 |
Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101940158A (zh) * | 2009-07-09 | 2011-01-12 | 正安县绿野科技产业有限责任公司 | 利用白芨种子快速繁殖小苗的方法 |
| CN102972290A (zh) * | 2012-11-15 | 2013-03-20 | 贵州师范大学 | 一种提高白及组培苗移栽成活率的方法 |
| CN103828715A (zh) * | 2013-11-29 | 2014-06-04 | 安徽中升生物科技有限公司 | 一种白芨的组织培养繁育方法 |
| CN104255496A (zh) * | 2014-09-23 | 2015-01-07 | 江苏农林职业技术学院 | 一种快速繁殖白芨试管苗的方法 |
| CN104335903A (zh) * | 2014-11-21 | 2015-02-11 | 广西中医药大学 | 一种促进白及快速繁殖的方法 |
| CN104719152A (zh) * | 2015-02-16 | 2015-06-24 | 贵州省农作物品种资源研究所 | 白及工厂化育苗方法 |
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-
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Patent Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101940158A (zh) * | 2009-07-09 | 2011-01-12 | 正安县绿野科技产业有限责任公司 | 利用白芨种子快速繁殖小苗的方法 |
| CN102972290A (zh) * | 2012-11-15 | 2013-03-20 | 贵州师范大学 | 一种提高白及组培苗移栽成活率的方法 |
| CN103828715A (zh) * | 2013-11-29 | 2014-06-04 | 安徽中升生物科技有限公司 | 一种白芨的组织培养繁育方法 |
| CN104255496A (zh) * | 2014-09-23 | 2015-01-07 | 江苏农林职业技术学院 | 一种快速繁殖白芨试管苗的方法 |
| CN104335903A (zh) * | 2014-11-21 | 2015-02-11 | 广西中医药大学 | 一种促进白及快速繁殖的方法 |
| CN104719152A (zh) * | 2015-02-16 | 2015-06-24 | 贵州省农作物品种资源研究所 | 白及工厂化育苗方法 |
| CN104737911A (zh) * | 2015-03-30 | 2015-07-01 | 云南中医学院 | 一种白及组培苗的快速培育方法 |
| CN104782485A (zh) * | 2015-04-08 | 2015-07-22 | 安徽春之蔚农业科技有限公司 | 一种白芨的种子组织快繁育苗方法 |
Non-Patent Citations (1)
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