CN105105146B - 一种益生菌的活性保持方法及其在固态脂质食品中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种益生菌的活性保持方法及其在固态脂质食品中的应用，属于食品加工技术领域。本发明利用高浓度甘油通过渗透压平衡原理对活性益生菌进行脱水预处理，以达到降低益生菌内部所含残存水分的目的。所得活性菌泥在巧克力调温工艺过程加入，可使其与巧克力脂质形成良好的晶体结构，有效延长益生菌在巧克力中的活力，从而得到一种益生巧克力。本发明制备得到的巧克力中的益生菌活力保持效果与冻干菌粉加工制得产品相近，本发明方法避免了制备冻干粉所产生的高成本，能耗低，设备投资小，可大大节约加工成本。

Description

一种益生菌的活性保持方法及其在固态脂质食品中的应用
技术领域
本发明涉及一种益生菌的活性保持方法及其在固态脂质食品中的应用，属于食品加工技术领域。
背景技术
益生菌是一类对宿主有益的活性微生物，可定植于人体肠道、生殖***内，并产生确切健康功效，进而改善宿主微生态平衡、发挥有益作用的活性有益微生物的总称。近年来，随着人们对身体健康关注度的日趋升高，益生菌受到众多国内外科学研究者的广泛关注，其具有包括改善消化***功能、增强免疫、降低血脂血压、抑制有害微生物、恢复肝功能、甚至抗恶性肿瘤等诸多益生功效。然而，益生菌益生功效的发挥需建立在人体对一定量活体细胞数的摄入，且活性菌种可在胃肠道中完成定殖。因此，针对益生菌在食品加工过程及其储藏过程中生长活性的保持，成为食品工业乃至学术领域所面临的重大难题。
菌种活性的保持是根据微生物的理化特性，人为地运用物理、生物等手段创造适宜的条件：降低基质的含水量、减少培养基中的营养成分、降低氧分压或者采用低温，抑制微生物的呼吸作用，使其代谢处于最不活泼、生长繁殖受到抑制或者处于相对静止的状态。即通过低温、干燥、缺氧三个能够有效降低微生物代谢的重要条件，使微生物暂时性地处于半休眠的状态或者全休眠的状态，从而使菌种经过在长时间的保存后仍然能够保持原有的生物学特性和良好的遗传特性。
2001年3月中国***发布了卫法监发〔2001〕84号益生菌类保健食品评审规定第十条明确指出：不提倡以液态形式生产益生菌类保健食品活菌产品。这是由于液态形式产品水分活度较高，且溶氧量相对较高，而对于大多数微生物而言，其生长的最佳水分活度为＞0.99。快速的生长、代谢和繁殖，最终导致菌种的快速死亡。为此，生产者通常采用喷雾干燥、冷冻干燥等干燥手段，结合包埋技术、真空包装和低温储藏等手段，以保持菌种良好的生长活性。一方面，喷雾干燥和冷冻干燥技术可有效降低菌种中残余水分含量；另一方面，高/低温和干燥脱水会引发细胞损伤。包埋技术可通过蛋白/多糖结合或外层包裹等方式，有效降低益生菌所受到的外界环境侵害，结合真空包装可有效隔绝菌种与氧气的直接接触，有效降低其生长代谢活性。然而，喷雾干燥的加工温度较高，制得益生菌菌粉存在存活率较低等弊端；而采用冷冻干燥制得的益生菌菌粉虽然具备较高的品质，但由于其昂贵的加工成本，严重阻碍了益生菌的推广发展。此外，由于加工干燥技术所限，一方面市售益生菌类产品多以干粉态、片剂和胶囊等形式出现，存在产品形式较单一，且普遍具有药物外型，容易导致消费者存在认识上的误区等弊端。另一方面，研究表明现有菌粉干燥技术对菌体活力的保持效果较差，通常低温储藏6个月后，菌粉活力损失率较大，严重影响产品的品质和益生功能。
此外，益生菌功能活性的发挥不仅需要一定量活性菌体的摄入，同时还需要菌种经胃肠等人体消化***并最终实现在小肠中的长期定植。因此，能够抵抗较强的酸性环境和具备良好的耐胆汁盐能力是益生菌能在肠道中存活和发挥作用的先决条件。然而，胃酸和胆汁盐均具有较强抑菌性，体外模拟消化试验结果显示，益生菌经耐酸耐胆盐试验测试，菌体存活率通常仅为40％左右，甚至更低。目前，主要采用包埋技术以提高益生菌的活力保持效果，但该方法受限于包埋涂层材料及其应用载体，制作复杂，且效果不显著。因此，开发固态益生菌产品成为新的趋势。
发明内容
本发明首先提供了一种保持益生菌活性的方法，及按所述方法制备得到的活性益生菌菌泥。
所述方法，是将质量分数为70％～90％的甘油溶液与益生菌菌泥按质量比(5-20)：1混合，待渗透压平衡后，离心收集活性益生菌菌泥。
所述益生菌包括发酵乳杆菌、纤维二糖乳杆菌、弯曲乳杆菌、乳酸乳杆菌、胚芽乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、嗜酸乳杆菌、短乳杆菌、保加利亚乳杆菌、干酪乳杆菌、肠系膜明串珠球菌、啤酒片球菌、戊糖片球菌、乳酸菌片球菌、乳酸链球菌、乳链球菌、嗜热链球菌、青春双歧杆菌、动物双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌、嗜热性双歧杆菌等。
在本发明的一种实施方式中，是将1～2重量份浓度2～8×1010cfu/g的活性菌泥与10～20重量份质量分数为70％～90％的甘油水溶液混合，于低温下静置18～24h，然后离心脱水，使所得活性益生菌菌泥含水量为35～40％。
在本发明的一种实施方式中，所述甘油水溶液中还含有1～3％的肽类物质。
在本发明的一种实施方式中，所述方法包括如下步骤：
A、制备活化益生菌菌液；
所述益生菌菌液可由一种或多种益生菌混合制作而成。
所述制备活化益生菌菌液的步骤，包括从甘油保菌管内吸取益生菌菌液，接种到800～1200mL MRS肉汤培养基中，然后在温度36～38℃、厌氧条件下进行活化培养16～18h，重复上述活化操作2～4次，得到活化益生菌菌液。
所述的MRS肉汤培养基组成比例如下：500mL蒸馏水、5g蛋白胨、5g牛肉膏、2.5g酵母膏、2.5g乙酸钠、10g葡萄糖、0.05g MgSO4.7H20、0.025gMnSO4.H20、1g柠檬酸二铵、1gK2HPO4与0.5ml吐温，pH 6.2～6.4；
B、将步骤A得到的活化益生菌菌液在6000～8000g的条件下高速离心、分离，分离得到的菌体用无菌磷酸盐缓冲液洗涤2～4次，得到浓度2～8×1010cfu/g的活性菌泥。
所述高速离心是使用高速离心分离机进行离心分离10～15min。
所述磷酸盐缓冲液的组成比例如下：0.2g KCl、0.27g KH2PO4、8.5gNaCl、2.85gNa2HPO4·12H2O与1000mL蒸馏水，pH至7.2。
所述的cfu/g的意义是指每克样品中含有的细菌群落总数，其细菌群落总数的测定采用本技术领域技术人员熟知的常规方法。
C、称取70～90重量份食品级甘油，加入10～30重量份去离子水中，振荡混匀，制得甘油混合溶液；
将所述步骤B中所得活性菌泥加入上述甘油混合溶液中(如上)，并置于4℃恒温箱内平衡18～24h，待平衡完毕，取出，将含有活性菌泥的甘油混合溶液在6000～8000g的条件下高速离心、分离，得到具有低残存水分的活性益生菌菌泥。
所述低残存水分的活性益生菌菌泥含水量为35～40％。
所述固态脂质体系，主要由来源于动物或植物的脂质组成，脂质含量≥70％，熔点≥30℃，在35℃～45℃条件下，具有良好的流变学特性，在4℃～15℃条件下储藏时，通常为固态。
本发明还提供所述活性益生菌菌泥在制备益生固态脂质食品中的应用，例如巧克力、起酥油、奶酪等，是在固态脂质产品加工的后期，加入活性益生菌菌泥并搅拌混匀。
为了更便于理解本发明所述方法在固态脂质食品中的应用，本发明还提供所述活性益生菌菌泥在制备巧克力中的应用方法。
所述应用方法，是在对不同类型巧克力产品进行加工的过程中，将所述活性益生菌菌泥在产品生产加工后期加入并搅拌混匀。以避免活性益生菌会因生产过程而导致活力的下降或丧失，使活性益生菌在后续的储藏阶段会进一步受到保护。
在本发明的一种实施方式中，所述产品生产加工后期的温度应处于35～45℃，产品流动性良好或呈粘稠液态。
在本发明的一种实施方式中，所述应用方法包括以下步骤：
(1)称取70％～75％可可液块经高温熔化后，加入35％～38％白砂糖粉，混合均匀，制得巧克力匀浆，备用；
(2)将上述巧克力匀浆，置于45～60℃的温度环境下，精炼36～72h；
(3)精炼完成的巧克力匀浆，待冷却至40～45℃，将所述活性益生菌菌泥添加至巧克力匀浆中，并完成巧克力三个阶段的调温流程。调温的第一阶段，物料从40℃冷却至29℃；第二阶段，从29℃冷却至27℃；第三阶段，从27℃回升至29～30℃
(4)浇注成型：置于8～10℃环境下冷却25～30min，脱模，包装。
本发明具有下述优点：
1.制备方法简便，经长时间储藏后，益生菌活力保持优良：
本发明利用高浓度甘油通过渗透压平衡原理对活性益生菌进行脱水预处理，以达到降低益生菌内部所含残存水分的目的。菌体细胞经高浓度甘油预处理后，细胞内水分粘稠度显著提升，水分活度下降，且菌体表面会被甘油包裹形成良好的“包埋”液滴，形成良好的空气阻隔层，有效避免菌体因氧化死亡。经处理后的活性菌泥应用于固态脂质食品中，并在固态脂质食品加工后期调温工艺过程中加入，可使其与脂质形成良好的晶体结构，有效延长益生菌在固态脂质中的活力，且活力保持效果优于市售冻干菌粉类益生菌产品，同时避免了制备冻干粉所产生的高额成本。此外，甘油作为一种乳化剂，有助于脂质与菌体液滴的均匀混合。
2.体外模拟消化测试结果更优，有助于益生菌肠道的定植和功能特性的发挥
采用本发明所述方法制得产品，经体外模拟消化试验发现，其与现有益生菌类产品加工技术(干燥菌粉、包埋技术等)相较，活性菌体存活率明显提升。这主要是由于本发明所述固态脂质体系中，益生菌菌体多以“油包菌”形式存在，脂质层较厚，且耐酸耐胆盐能力强，因此，活性菌体经肠道消化过程后仍具有较高的存活率，有助于益生菌肠道的定植和功能特性的发挥。
3.原料安全可靠，加工成本低廉，设备投资小：
本发明采用甘油作为渗透压水分平衡原料，其在我国GB2760-2014食品添加剂使用标准中被列入可在各类食品中按生产需要适量使用的食品添加剂名单中，因此，不具有食品安全隐患。菌泥预处理方法简便，能耗低，设备投资小，可大大节约加工成本。
综上所述，本发明可有效保持益生菌活性、降低益生菌类产品的加工制作成本，方法简便，且经长时间储藏后，产品中所含益生菌仍具有良好的生长活性，营养健康。
附图说明
图1.益生菌巧克力菌体活力的保持随储藏时间的变化
具体实施方式
为了更好的阐述说明本发明所述方法的优势，本发明还对活性益生菌及含有活性益生菌的巧克力进行了相关物性测试，具体如下：
根据GB/T 5497-1985测试方法，对益生菌菌泥中水分含量进行了测定比较；
根据SN/T 0168-2015测试方法，对经长时间储藏的益生菌巧克力中所含益生菌活菌总数进行了测定比较；
益生菌活力保持储藏实验：将制得益生菌巧克力置于4℃环境下储藏6个月，并定期对产品中所含益生菌含量进行测试比较。
体外模拟消化实验：取适当质量的待测样品固体，加入一定体积的人工胃液或人工肠液，同时设置对照组，对照组中加入等体积的PBS，于37℃水浴中培养2h，每隔30min颠倒摇匀1次，培养2h后采用梯度稀释法进行平板菌落计数。
实施例1未经甘油预处理的益生菌活性菌泥制得益生菌巧克力
A、从甘油保菌管内吸取200μL益生菌菌液，接种到1000mL MRS肉汤培养基中，然后在温度37℃、厌氧条件下进行活化培养17h，重复上述活化操作2次，得到一种活化益生菌菌液；
所述益生菌包括发酵乳杆菌、纤维二糖乳杆菌、弯曲乳杆菌、乳酸乳杆菌、胚芽乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、嗜酸乳杆菌、短乳杆菌、保加利亚乳杆菌、干酪乳杆菌、肠系膜明串珠球菌、啤酒片球菌、戊糖片球菌、乳酸菌片球菌、乳酸链球菌、乳链球菌、嗜热链球菌、青春双歧杆菌、动物双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌、嗜热性双歧杆菌。
所述益生菌菌液可由上述一种或多种益生菌混合制作而成。
所述的MRS肉汤培养基组成如下：500mL蒸馏水、5g蛋白胨、5g牛肉膏、2.5g酵母膏、2.5g乙酸钠、10g葡萄糖、0.05g MgSO4·7H20、0.025gMnSO4·H20、1g柠檬酸二铵、1g K2HPO4与0.5ml吐温，pH 6.2；
B、将步骤A得到的活化菌液在6500g的条件下高速离心、分离，分离得到的菌体用无菌磷酸盐缓冲液洗涤3次，于是得到浓度7.3×1010cfu/g活性菌泥。
在这个步骤B中，所述的活化菌液使用高速离心分离机进行离心分离10min。
所述磷酸盐缓冲液的组成如下：0.2g KCl、0.27g KH2PO4、8.5gNaCl、2.85gNa2HPO4·12H2O与1000mL蒸馏水，pH至7.2。
所述的cfu/g的意义是指每克样品中含有的细菌群落总数，其细菌群落总数的采用本技术领域里技术人员熟知的常规方法测定的。
所述活性益生菌菌泥含水量为80.92％。
C、制备巧克力
(1)称取70％可可液块经高温熔化后，加入36％白砂糖粉，混合均匀，制得巧克力匀浆，备用；
(2)将上述巧克力匀浆，置于50℃的温度环境下，精炼40h；
(3)精炼完成的巧克力匀浆，待冷却至40℃，将本发明所述方法步骤B中活性益生菌菌泥添加至巧克力匀浆中，并完成巧克力三个阶段的调温流程。调温的第一阶段，物料从40℃冷却至29℃；第二阶段，从29℃冷却至27℃；第三阶段，从27℃回升至29℃；
(4)浇注成型，置于8℃环境下冷却25min，脱模，包装。
实施例2冻干菌粉制得益生菌巧克力
A、从甘油保菌管内吸取200μL益生菌菌液，接种到1000mL MRS肉汤培养基中，然后在温度37℃、厌氧条件下进行活化培养17h，重复上述活化操作2次，得到一种活化益生菌菌液；
所述益生菌包括发酵乳杆菌、纤维二糖乳杆菌、弯曲乳杆菌、乳酸乳杆菌、胚芽乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、嗜酸乳杆菌、短乳杆菌、保加利亚乳杆菌、干酪乳杆菌、肠系膜明串珠球菌、啤酒片球菌、戊糖片球菌、乳酸菌片球菌、乳酸链球菌、乳链球菌、嗜热链球菌、青春双歧杆菌、动物双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌、嗜热性双歧杆菌。
所述益生菌菌液可由上述一种或多种益生菌混合制作而成。
所述的MRS肉汤培养基组成如下：500mL蒸馏水、5g蛋白胨、5g牛肉膏、2.5g酵母膏、2.5g乙酸钠、10g葡萄糖、0.05g MgSO4·7H20、0.025gMnSO4·H20、1g柠檬酸二铵、1g K2HPO4与0.5ml吐温，pH 6.2；
B、将步骤A得到的活化菌液在6500g的条件下高速离心、分离，分离得到的菌体用无菌磷酸盐缓冲液洗涤3次，于是得到浓度7.3×1010cfu/g活性菌泥。
在这个步骤B中，所述的活化菌液使用高速离心分离机进行离心分离10min。
所述磷酸盐缓冲液的组成如下：0.2g KCl、0.27g KH2PO4、8.5gNaCl、2.85gNa2HPO4·12H2O与1000mL蒸馏水，pH至7.2。
所述的cfu/g的意义是指每克样品中含有的细菌群落总数，其细菌群落总数的采用本技术领域里技术人员熟知的常规方法测定的。
C、益生菌冻干菌粉的制作
将步骤B中所述活性菌泥，加入30重量份脱脂乳溶液，混合均匀，再经冷冻干燥，得到高活性益生菌冻干菌粉，备用，同时用于储藏实验活菌数的测定。
所述益生菌冻干菌粉菌落总数为8.9×109cfu/g；
所述益生菌冻干菌粉水分含量为8.21％。
D、制备巧克力
(1)称取70％可可液块经高温熔化后，加入36％白砂糖粉，混合均匀，制得巧克力匀浆，备用；
(2)将上述巧克力匀浆，置于50℃的温度环境下，精炼40h；
(3)精炼完成的巧克力匀浆，待冷却至40℃，将本发明所述方法步骤C中活性益生菌冻干菌粉添加至巧克力匀浆中，并完成巧克力三个阶段的调温流程。调温的第一阶段，物料从40℃冷却至29℃；第二阶段，从29℃冷却至27℃；第三阶段，从27℃回升至29℃；
(4)浇注成型，置于8℃环境下冷却25min，脱模，包装。
实施例3本发明方法制得的活性益生菌用于制备益生菌巧克力
A、从甘油保菌管内吸取200μL益生菌菌液，接种到1000mL MRS肉汤培养基中，然后在温度37℃、厌氧条件下进行活化培养17h，重复上述活化操作2次，得到一种活化益生菌菌液；
所述益生菌包括发酵乳杆菌、纤维二糖乳杆菌、弯曲乳杆菌、乳酸乳杆菌、胚芽乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、嗜酸乳杆菌、短乳杆菌、保加利亚乳杆菌、干酪乳杆菌、肠系膜明串珠球菌、啤酒片球菌、戊糖片球菌、乳酸菌片球菌、乳酸链球菌、乳链球菌、嗜热链球菌、青春双歧杆菌、动物双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌、嗜热性双歧杆菌。
所述益生菌菌液可由上述一种或多种益生菌混合制作而成。
所述的MRS肉汤培养基组成如下：500mL蒸馏水、5g蛋白胨、5g牛肉膏、2.5g酵母膏、2.5g乙酸钠、10g葡萄糖、0.05g MgSO4·7H20、0.025gMnSO4·H20、1g柠檬酸二铵、1g K2HPO4与0.5ml吐温，pH 6.2；
B、将步骤A得到的活化菌液在6500g的条件下高速离心、分离，分离得到的菌体用无菌磷酸盐缓冲液洗涤3次，于是得到浓度7.3×1010cfu/g活性菌泥。
在这个步骤B中，所述的活化菌液使用高速离心分离机进行离心分离10min。
所述磷酸盐缓冲液的组成如下：0.2g KCl、0.27g KH2PO4、8.5gNaCl、2.85gNa2HPO4·12H2O与1000mL蒸馏水，pH至7.2。
所述的cfu/g的意义是指每克样品中含有的细菌群落总数，其细菌群落总数的采用本技术领域里技术人员熟知的常规方法测定的。
C、称取90重量份食品级甘油，加入10重量份去离子水中，振荡混匀，制得甘油混合溶液；
将所述步骤B中所得活性菌泥加入上述甘油混合溶液中，并置于4℃恒温箱内平衡20h，待平衡完毕，取出，将含有活性菌泥的甘油混合溶液在6500g的条件下高速离心、分离，得到具有低残存水分的活性益生菌菌泥，用于巧克力中的加工应用；
所述低残存水分的活性益生菌菌泥含水量为35.67％。
D、制备巧克力
(1)称取70％可可液块经高温熔化后，加入36％白砂糖粉，混合均匀，制得巧克力匀浆，备用；
(2)将上述巧克力匀浆，置于50℃的温度环境下，精炼40h；
(3)精炼完成的巧克力匀浆，待冷却至40℃，将本发明所述方法步骤C中低残存水分的活性益生菌菌泥添加至巧克力匀浆中，并完成巧克力三个阶段的调温流程。调温的第一阶段，物料从40℃冷却至29℃；第二阶段，从29℃冷却至27℃；第三阶段，从27℃回升至29℃；
(4)浇注成型，置于8℃环境下冷却25min，脱模，包装。
实施例4本发明方法制得的活性益生菌用于制备益生菌巧克力
A、从甘油保菌管内吸取200μL益生菌菌液，接种到1200mL MRS肉汤培养基中，然后在温度38℃、厌氧条件下进行活化培养18h，重复上述活化操作2次，得到一种活化益生菌菌液；
所述益生菌包括发酵乳杆菌、纤维二糖乳杆菌、弯曲乳杆菌、乳酸乳杆菌、胚芽乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、嗜酸乳杆菌、短乳杆菌、保加利亚乳杆菌、干酪乳杆菌、肠系膜明串珠球菌、啤酒片球菌、戊糖片球菌、乳酸菌片球菌、乳酸链球菌、乳链球菌、嗜热链球菌、青春双歧杆菌、动物双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌、嗜热性双歧杆菌。
所述益生菌菌液可由上述一种或多种益生菌混合制作而成。
所述的MRS肉汤培养基组成如下：500mL蒸馏水、5g蛋白胨、5g牛肉膏、2.5g酵母膏、2.5g乙酸钠、10g葡萄糖、0.05g MgSO4·7H20、0.025gMnSO4·H20、1g柠檬酸二铵、1g K2HPO4与0.5ml吐温，pH 6.3；
B、将步骤A得到的活化菌液在8000g的条件下高速离心、分离，分离得到的菌体用无菌磷酸盐缓冲液洗涤4次，于是得到浓度6.3×1010cfu/g活性菌泥。
在这个步骤B中，所述的活化菌液使用高速离心分离机进行离心分离15min。
所述磷酸盐缓冲液的组成如下：0.2g KCl、0.27g KH2PO4、8.5gNaCl、2.85gNa2HPO4·12H2O与1000mL蒸馏水，pH至7.2。
所述的cfu/g的意义是指每克样品中含有的细菌群落总数，其细菌群落总数的采用本技术领域里技术人员熟知的常规方法测定的。
C、称取75重量份食品级甘油和1.6重量份肽类物质，加入25重量份去离子水中，振荡混匀，制得甘油混合溶液；
将所述步骤B中所得活性菌泥加入上述甘油混合溶液中，并置于4℃恒温箱内平衡24h，待平衡完毕，取出，将含有活性菌泥的甘油混合溶液在8000g的条件下高速离心、分离，得到具有低残存水分的活性益生菌菌泥，用于巧克力中的加工应用；
所述低残存水分的活性益生菌菌泥含水量为36.06％。
D、制备巧克力
(1)称取75％可可液块经高温熔化后，加入38％白砂糖粉，混合均匀，制得巧克力匀浆，备用；
(2)将上述巧克力匀浆，置于45℃的温度环境下，精炼60h；
(3)精炼完成的巧克力匀浆，待冷却至45℃，将本发明所述方法步骤C中低残存水分的活性益生菌菌泥添加至巧克力匀浆中，并完成巧克力三个阶段的调温流程。调温的第一阶段，物料从40℃冷却至29℃；第二阶段，从29℃冷却至27℃；第三阶段，从27℃回升至30℃；
(4)浇注成型，置于10℃环境下冷却30min，脱模，包装。
表1.不同处理条件下益生菌水分含量的比较
表2.甘油平衡预处理对益生菌生长活性的影响
表3在人工胃液和人工肠液中的体外耐受实验结果
从图1可以看出，利用益生菌制得的巧克力经长时间储藏放置后，采用新鲜菌泥制得的巧克力中益生菌总数随储藏时间的延长，下降较明显，而采用本发明方法和冻干菌粉制得的巧克力，其内所含益生菌总数并未随着储藏时间的延长而下降显著，且在30天后菌落总数趋于稳定。此外，实施例3、4所得巧克力风味没有受到甘油的影响。
虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。

Claims (9)

1.一种制备益生固态脂质产品的方法，其特征在于，是在固态脂质产品加工的后期，加入活性益生菌菌泥并搅拌混匀；所述活性益生菌菌泥是通过将质量分数为70％～90％的甘油溶液与浓度为2～8×1010cfu/g的益生菌菌泥按质量比(5-20)：1混合，待渗透压平衡后，离心收集得到的菌泥；所述固态脂质产品加工的后期的温度处于40～45℃，将所述活性益生菌菌泥添加至巧克力匀浆中，并完成巧克力三个阶段的调温流程；所述调温流程包括：调温的第一阶段，物料从40℃冷却至29℃，第二阶段，从29℃冷却至27℃，第三阶段，从27℃回升至29～30℃；(4)浇注成型：置于8～10℃环境下冷却25～30min，脱模，包装，得到益生巧克力。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述固态脂质产品是巧克力、起酥油或奶酪。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述益生菌包括发酵乳杆菌、纤维二糖乳杆菌、弯曲乳杆菌、乳酸乳杆菌、胚芽乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、嗜酸乳杆菌、短乳杆菌、保加利亚乳杆菌、干酪乳杆菌、肠系膜明串珠球菌、啤酒片球菌、戊糖片球菌、乳酸菌片球菌、乳酸链球菌、乳链球菌、嗜热链球菌、青春双歧杆菌、动物双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌、嗜热性双歧杆菌。
4.根据权利要求1-3任一所述的方法，其特征在于，所述活性益生菌菌泥是将1～2重量份浓度2～8×1010cfu/g的活性菌泥与10～20重量份质量分数为70％～90％的甘油水溶液混合，于低温下静置18～24h，然后离心脱水收集菌泥；所述活性益生菌菌泥含水量为35～40％。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)称取70％～75％可可液块经高温熔化后，加入35％～38％白砂糖粉，混合均匀，制得巧克力匀浆，备用；
(2)将上述巧克力匀浆，置于45～60℃的温度环境下，精炼36～72h；
(3)精炼完成的巧克力匀浆，待冷却至40～45℃，将所述活性益生菌菌泥添加至巧克力匀浆中，并完成巧克力三个阶段的调温流程；所述调温流程包括：调温的第一阶段，物料从40℃冷却至29℃，第二阶段，从29℃冷却至27℃，第三阶段，从27℃回升至29～30℃；
(4)浇注成型：置于8～10℃环境下冷却25～30min，脱模，包装，得到益生巧克力。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述甘油溶液中还含有按质量分数计1～3％的肽类物质。
7.根据权利要求1或2或3或4或6所述方法制备得到的益生固态脂质产品。
8.一种保持益生菌活性的方法，其特征在于，是将质量分数为70％～90％的甘油溶液与浓度为2～8×1010cfu/g的益生菌菌泥按质量比(5-20)：1混合，于低温下静置18～24h，待渗透压平衡，离心收集活性益生菌菌泥；所述活性益生菌菌泥含水量为35～40％；所述益生菌包括发酵乳杆菌、纤维二糖乳杆菌、弯曲乳杆菌、乳酸乳杆菌、胚芽乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、嗜酸乳杆菌、短乳杆菌、保加利亚乳杆菌、干酪乳杆菌、肠系膜明串珠球菌、啤酒片球菌、戊糖片球菌、乳酸菌片球菌、乳酸链球菌、乳链球菌、嗜热链球菌、青春双歧杆菌、动物双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌、嗜热性双歧杆菌。
9.根据权利要求8所述方法制备得到的活性益生菌菌泥。
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