CN105101977A - 治疗心力衰竭的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及给予硝酸盐和/或亚硝酸盐是改善患有心力衰竭，包括射血分数正常性心力衰竭(HFpEF)的患者短期和长期治疗结果的有效疗法的发现。因此，本发明提供了在其需要的受试者中治疗或预防心力衰竭，包括HFpEF的组合物和方法。

Description

治疗心力衰竭的方法

相关申请的引用

本申请要求享有2013年2月7日提交的美国临时申请序列号61/761,863的优先权，该申请以其全部内容结合于本文中作为参考。

背景技术

射血分数正常性心力衰竭(HF)(HFpEF)是一种重大的流行病。HF会影响～2％的西方人群和10％年龄>75岁的成年人(Lametal.，2011，Eur.J.HeartFailure13:18-28)。HF是年龄>65岁的成年人住院的最常见原因(Lametal.，2011，Eur.J.HeartFailure13:18-28)。大约54％的患有HF的患者(Lametal.，2011，Eur.J.HeartFailure13:18-28；Vasanetal.，1995，J.Am.CollegeCardiol.26:1565-1547；Redfieldetal.，2003，Jama289:194-202；Kitzmanetal.，2001，Am.J.Cardiol.87:413-419；Devereuxetal.，2000，Am.J.Cardiol.86:1090-1096；Ceiaetal.，2002，Eur.J.HeratFailure4:531-539；Mosterdetal.，1999，Eur.HeartJ.20:447-455；Morganetal.，1999，BMJ318:368-372；Cortinaetal.，2001，Am.J.Cardiol.87:1417-1419；Kuparietal.，1997，J.Intern.Med.241:387-394)和46％～51％的因为急性HF而入院的患者都具有HFpEF(Lametal.，2011，Eur.J.HeartFailure13:18-28；Fonarowetal.，2007，J.Am.CollegeCardiol.50:768-777；Yancyetal.，2006，J.Am.CollegeCardiol.47:76-84；Lenzenetal.，2004，Eur.HeartJ.25:1214-1220)。在一般人群中HFpEF的流行度高达1.1％～5.5％(Lametal.，2011，Eur.J.HeartFailure13:18-28；Owanetal.，2005，Prog.Cardiofasc.Dis.47:320-332)。

HFpEF的流行度将继续增加。在美国新的HF病例数从2000年的348,000增加到2007年的670,000(Lametal.，2011，Eur.J.HeartFailure13:18-28；Lloyd-Jonesetal.，2010，Circulation121:586-613)(增长93％)，大大超出此前预期并且表明预期在未来几十年内应该还有进一步的急剧增加(Lametal.，2011，Eur.J.HeartFailure13:18-28；Lloyd-Jonesetal.，2010，Circulation121:586-613)。假设一半HF病例量由HFpEF构成，则HFpEF负担就可能表现出等量增加。即使这些可能是保守估计，因为HFpEF的相对患病率(作为HF病例总负担量的比例)随着人口年龄而升高(Lametal.，2011，Eur.J.HeartFailure13:18-28；Owanetal.，2005，Prog.Cardiofasc.Dis.47:320-332)。来自明尼苏达州奥姆斯特德县(OlmstedCounty，MN)的研究表明，1987年中HFpEF占38％的所有HF病例，在2001年升高至54％(Lametal.，2011，Eur.J.HeartFailure13:18-28；Owanetal.，2005，Prog.Cardiofasc.Dis.47:320-332)。在同一时间框架内，已经注意到在患有射血分数降低的HF的患者中存活率得以改善，但是在患有HFpEF的那些患者中却没有。因此，虽然已经是一种流行病，但预期HFpEF的患病率会进一步急剧增加(Lametal.，2011，Eur.J.HeartFailure13:18-28)。

HFpEF是具有高死亡率的恶性疾病。研究一致证实患有HFpEF的患者年死亡率很高，在大型随机试验中范围为～3.5％～6％(Clelandetal.，2006，Eur.HeartJ.27:2338-2345；Massieetal.，2008，N.Eng.J.Med.359:2456-2467；Yusufetal.，2003，Lancet262:777-781)至弗拉明翰心脏研究(FraminghamHeartStudy)的～15％(Leeetal.，2009，Circulation119:3070-3077)。7,688例HFpEF患者随访～4年的荟萃分析报告年度死亡率～8％(Lametal.，2011，Eur.J.HeartFailure13:18-28)。在代偿不足期间，90-天死亡率和返院率分别为5％～9.5％(Fonarowetal.，2007，J.Am.CollegeCardiol.50:768-777；PerezdeIslaetal.，2008，J.Cardiovasc.Med9:1011-1015；Tsuchihashi-Makayaetal.，2009，Circ.J.73:1893-1900；Bhatiaetal.，2006，N.Engl.J.Med.355:260-269)和～29％(Fonarowetal.，2007，J.Am.CollegeCardiol.50:768-777，Lenzenetal.，2004，Eur.HeartJ.25:1214-1220)。心血管原因占HFpEF的50％死亡率(Lametal.，2011，Eur.J.HeartFailure13:18-28)。可以获得在射血分数降低的HF中提供的大量的临床获益的多种疗法。相比之下，目前还没有有效的饮食或药剂干预，改善HFpEF患者的长期治疗结果(Oghlakianetal.，2011，MayoClinProc.86:531-539)。

运动耐受性是HFpEF的标志并决定了生活质量差(Hoekstraetal.，2011，EuropeanJ.HeartFail.13:1013-1018；Lewisetal.，2007，EuropeanJ.HeartFail.9:83-91；Kitzmanetal.，2002，JAMA288:2144-2150；Phanetal.，2012，Int.J.Cardiol.158:337-343)。因此，在这种人群中增强运动能力是直接临床相关性的关键目标。这一目标需要考虑HFpEF运动耐受性的病理生理学。所述早期病理生理学范式是左心室(LV)在运动过程中增加填充压力并不伴有舒张末期容积增大，导致未能吸纳补充所述Frank-Starling机制而增加了每搏量(Kitzmanetal.，1991，J.Am.CollegeCardiol.17:1065-1072)。然而，随后的各种研究并未能够证实锻炼舒张末期LV量的异常(Borlaugetal.，2006，Circulation114:2138-2147；Ennezatetal.，2008，J.Card.Fail.14:475-480；Maederetal.，2010，J.Am.Coll.Cardiol.56:855-863)和HFpEF的搏量储备(Borlaugetal.，2006，Circulation114:2138-2147Maederetal.，2010，J.Am.Coll.Cardiol.56:855-863；Bhellaetal.，2011，Eur.J.HeartFail.13:1296-1304)。随后的研究报道了变时功能不全的存在，导致心输出量储备异常(Borlaugetal.，2006，Circulation114:2138-2147；Maederetal.，2010，J.Am.Coll.Cardiol.56:855-863；Bhellaetal.，2011，Eur.J.HeartFail.13:1296-1304)。然而，现有的数据有些矛盾，因为无论是运动，变时功能不全(Ennezatetal.，2008，J.Card.Fail.14:475-480)，还是心输出量储备都不是一致的发现结果(Bhellaetal.，2011，Eur.J.HeartFail.13:1296-1304)。因此，HFpEF并非唯一源自心脏异常，现在看来HFpEF是一种复杂的多器官疾病，并非常需要理解和定标这种病症中的***异常。

运动动脉血管扩张剂(“后负荷”)储量在HFpEF中异常。在运动期间，LV后负荷(动脉阻力和阻抗)必须降低才能适应无压力过量增益的流量增加。在几项研究中，相对于正常对照(Maederetal.，2010，J.Am.Coll.Cardiol.56:855-863；Borlaugetal.，2010，J.Am.Coll.Cardiol.56:845-854，authorreply156-158)，年龄匹配的无HF高血压受试者(Ennezatetal.，2008，J.Card.Fail.14:475-480；Borlaugetal.，2010，J.Am.Coll.Cardiol.56:845-854，authorreply156-158)，或年龄-和同病-匹配的对照(Borlaugetal.，2006，Circulation114:2138-2147)，患有HFpEF的患者证实在全身血管阻力方面存在麻木的运动诱导性降低，这指示运动期间的受损血管舒张反应。

骨骼肌流量和氧的输送与提取是所述正常运动响应的重要组成部分(Pooleetal.，2012，Am.J.Physiol.HertCirc.Physiol.302:H1050-1063)，并取决于产生运动的肌肉中的所述血管扩张反应，允许其有效“竞争”所述可用心输出量(Pooleetal.，2012，Am.J.Physiol.HertCirc.Physiol.302:H1050-1063)。这个过程需要工作骨骼肌脉管克服体液和反射介导的血管收缩(Pooleetal.，2012，Am.J.Physiol.HertCirc.Physiol.302:H1050-1063)。NO生物利用度和释放是介导这种反应的关键机制(Pooleetal.，2012，Am.J.Physiol.HertCirc.Physiol.302:H1050-1063)。重要的是，肌肉内受损血管反应可能对O₂提取具有严重的后果，造成肌肉中O₂输送和需求之间的显著不平衡，并即使在低运动水平下会导致大的O₂逆差，加重胞内代谢扰动和增强糖原分解(Pooleetal.，2012，Am.J.Physiol.HertCirc.Physiol.302:H1050-1063)。

虽然相关肌肉群的血流量在运动期间很显然是重要的，但活动肌肉的血流量(Q)是不均匀的，在高度氧化的肌肉中更甚，这通常表现出更大的内皮依赖性血管舒张(Muller-Delp，2006，Microcirculation13:301-314；Pooleetal.，2007，Exp.Physiol.92:341-346)。这些控制过程的失调会提供过量的流量，并因此导致O₂输送到代谢欠活性的肌肉而O₂交换的能力降低，因此会降低肌肉和全身分级的O₂提取(Pooleetal.，2007，Exp.Physiol.92:341-346)。

O₂提取看起来是HFpEF中运动耐受的所述病理生理的一种关键异常。峰值O₂摄取(VO₂)，是最广泛接受的有氧代谢能力的指数，会在HFpEF中降低(Kitzmanetal.，1991，J.Am.CollegeCardiol.17:1065-1072；Borlaugetal.，2006，Circulation114:2138-2147；Maederetal.，2010，J.Am.Coll.Cardiol.56:855-863；Bhellaetal.，2011，Eur.J.HeartFail.13:1296-1304Borlaugetal.，2010，J.Am.Coll.Cardiol.56:845-854)。作为心输出量和动脉-静脉O₂含量差的乘积，凹陷峰值VO₂可能反映出运动期间O₂组织递送或提取(主要在骨骼肌中)的缺乏，心输出量的限制或这二者。最近，3个独立实验室使用3种不同的技术的研究表明，患有HFpEF的患者表现出降低的峰值运动动静脉O₂梯度(Kitzmanetal.，1991，J.Am.CollegeCardiol.17:1065-1072；Bhellaetal.，2011，Eur.J.HeartFail.13:1296-1304；Haykowskyetal.，2011，JAC58:265-274)。这表明，对于运动期间的任何给定心输出量，HFpEF患者具有较低的O₂周氧提取。此外，在训练患有HFpEF的老年患者的运动的随机受控试验(Haykowskyetal.，2012，J.Am.Coll.Cardiol.60:120-128)中，与耐力运动相关的峰值运动能力的提高主要相关于峰值动静脉O₂梯度的增加，而并非心输出量的增强，这表明周围血管和/或骨骼肌功能得到改善，从而所述活性骨骼肌增强了O₂运输和/或O₂利用率。药剂干预提高骨骼肌O₂运输和/或其有效利用率尚未在HFPEF中提出/证实或测试。

所述动脉树众所周知会直接决定脉动LV后负荷(Nicholsetal.，2005，McDonald’sbloodflowinarteries.Theoretical，experimentalandclinicalprinciples，OxfordUniversityPress；Kass，2005，Hypertension46:185-193；Mitchell，2009，Med.Biol.Eng.Comput，47:153-163；ChirinosandSegers，2010，Hypertension56:563-570；ChirinosandSegers，2010，Hypertension56:555-562；Mitchell，2004，Curr.Hypertens.Rep.6:436-441；Mitchell，Med.Biol.Eng.Comput.47:153-163；NicholsandVlachopolous，2011，McDonald’sbloodflowinarteries.Theoretical，experimentalandclinicalprinciples，HodderArnold；Westerhofetal.，2009，Med.Biol.Eng.Comput.47:131-141；Segersetal.，2000，Hyptertension36:760-765；Mitchell，2004，Curr.Hyptertens.Rep.6:436-441；Chirinos，2012，J.Cardiovasc.Transl.res.5:243-255；Segersetal.，Proc.Inst.Mech.Eng.H.222:417-428)，会增加所述收缩期LV心肌壁应力(Chirinosetal.，2012，Hyptertension60:64-70)和O₂消耗，影响所述心室和动脉***之间的匹配，这会影响心肌O₂供应/需求和心脏效率(Kellyetal.，1992，Circ.Res.71:490-502)。人们已经确定了在促进心脏工作量增加的所述动脉树中的几个异常。患有劳力性呼吸困难的受试者或明显HFpEF的那些人证实了大动脉僵硬增加(Weberetal.，2008，Am.J.Hypertens.21:1194-1202；Hundleyetal.，2001，J.Am.CollegeCardiol.38:796-802)。此外，大动脉僵硬增加密切关联于峰值运动耗氧降低(R＝0.79)(Hundleyetal.，2001，J.Am.CollegeCardiol.38:796-802)。

由LV产生的所述脉冲波会在动脉中正向传播并部分在阻抗不匹配的位点(即，分叉，动脉大小或管壁僵硬的变点)发生反射。波反射主要会产生中等尺寸的导管动脉并回流至心脏，合并成离散的反射波(ChirinosandSegers，2010，Hypertension56:563-570；ChirinosandSegers，2010，Hypertension56:555-562；NicholsandVlachopolous，2011，McDonald’sbloodflowinarteries.Theoretical，experimentalandclinicalprinciples.HodderArnold)。所述反射波会影响LV后负荷并由于从心脏到反射点并返回至所述近端主动脉的所述波传导时间会改变所述负荷顺序，波反射在所述心脏处返回传播的同时所述LV依然在收缩中至后期射血(NicholsandVlachopolous，2011，McDonald’sbloodflowinarteries.Theoretical，experimentalandclinicalprinciples.HodderArnold；ChirinosandSegers，2010，Hypertension56:563-570)。因此，波反射会增加所述LV的收缩中后期的工作量并深刻影响所述LV负荷顺序(后期相对于早期收缩负荷)。

波反射的收缩晚期负荷导致LV肥厚。对于收缩压任何给定的水平，后期收缩负荷会对所述LV产生有害效应(NicholsandVlachopolous，2011，McDonald’sbloodflowinarteries.Theoretical，experimentalandclinicalprinciples.HodderArnold；Kobayashietal.，1996，Circulation94:3362-3368；GillebertandLew，1991，Am.J.Physiol.261:H805-813)。在Wistar大鼠模型中，所述腹主动脉的收缩(其导致从所述远端收缩部位的反射波负荷突出的收缩晚期负荷)，无论峰值LV压力是否相同，都会导致比主动脉弓的收缩(其增加所述早期收缩负荷)更加严重的左心室肥大和纤维化。这些因果关系的发现强力支撑人的数据(Hashimotoetal.，2008，J.Hypertens.26:1017-1024)，这表明抗高血压治疗期间波反射幅度的变化强烈预测LV质量的回归，而与血压降低无关。值得注意的是，标准的降压药剂对波反射具有高度不一致的影响。

人们已证明，在狗中主动脉球囊的收缩晚期膨胀比收缩早期膨胀更严重地削弱τ(tau)(LV舒张的金标准测量)，证实了收缩晚期负荷和舒张功能障碍之间的因果关系(GillebertandLew，1991，Am.J.Physiol.261:H805-813)。为了支持这些因果发现，波反射独立地关联于人类临床年龄组的舒张功能障碍(Weberetal.，2008，Am.J.Hypertens.21:1194-1202，Fukutaetal.，2010，Circ.J.74:1900-1905)。

在哺乳动物中没有出现经由两个路径的形成：(1)NO合成酶(NOS)催化来自L-精氨酸和O₂的NO形成(Chirinos，2012，J.Cardiovasc.Transl.Res.5:243-255；Chirinosetal.，2012，Hypertension60:64-70；Ordonezetal.，2011，AnticancerRes.31:3607-3613；Lundbergetal.，2008，Nat.Rev.DrugDiscov.7:156-167)；和(2)硝酸盐循环(先前考虑NO代谢的惰性产物)(Ordonezetal.，2011，AnticancerRes.31:3607-3613)能够通过所述硝酸盐-亚硝酸-NO途径转化成NO，这在很大程度上与NOS无关(Lundbergetal.，2008，Nat.Rev.DrugDiscov.7:156-167；Cosbyetal，2003，Nat.Med.9:1498-1505；MachhaandSchechter，2012，Nutr.Rev.70:367-372；Tangetal.，2011，Curr.Opin.Lipidol.22:11-15；Weitzbergetal.，2010，Anesthesiology113:1460-1475；Lundbergetal.，2011，Cardiovasc.Res.89:525-532)。摄入的无机硝酸盐易于横跨所述上胃肠道吸收。此外，口腔共生细菌会将硝酸盐还原成具有高口腔生物利用度(>95％)(Lundbergetal.，2011，Cardiovasc.Res.89:525-532；Dibbleetal.，2011，Chest140:310-316；Rubinetal.，2011，Am.J.KidneyDis.57:488-497；Durandetal.，2010，Contraception82:526-533)的亚硝酸盐。存在于血液流中的亚硝酸盐会直接还原成NO，反应由几种分子，包括脱氧肌红蛋白(Totzecketal.，2012，Circulation126:325-334；Shivaetal.，2007，Circ.Res.100:654-661；Rassafetal.，2007，Circ.Res.100:1749-1754；Hendgen-Cottaetal.，2008，Proc.Natl.Acad.Sci.USA105:10256-10261)，脱氧血红蛋白(GladwinandKim-Shapiro，2008，Blood112:2636-2647)，黄嘌呤氧化还原酶(Webbetal.，2004，Proc.Natl.Acad.Sci.USA101:13683-13688)，线粒体呼吸链酶(Kozlovetal.，1999，FEBSLett.454:127-130)，醛氧化酶(Zweieretal.，2010，NitricOxide22:83-90)，碳酸酐酶(Aamandetal.，2009，Am.J.Physiol.HeartCirc.Physiol.297:H2068-2074)，维生素C(Carlssonetal.，2001，NitricOxide5:580-586)，多酚(Gagoetal.，2007，FreeRadic.Biol.Med.43:1233-1242；Gagoetal.，2008，FreeRadic.Biol.Med.45:404-412)和甚至内皮NO合成酶(Gautieretal.，2006，Biochem.Biophys.Res.Commun.341:816-821；Vaninetal.，2007，CellMol.LifeSci.64:96-103)进行催化。硝酸盐在血浆中进行循环并具有～5h的半衰期。高达25％的所有循环硝酸盐由唾液腺主动吸收并浓缩于唾液中(进入肠-唾液循环)(Betalleluz-Pallardeletal.，2012，FoodSci.Technol.Int.18:271-280)，而其余部分由肾脏排出体外。

蔬菜是饮食中硝酸盐的主要来源(>80％)。特别是绿叶蔬菜和甜菜根，都包含大量的硝酸盐(Lundbergetal.，2008，Nat.Rev.DrugDiscov.7:156-167；Lundbergetal.，2011，Cardiovasc.Res.89:525-532)。增加硝酸盐的饮食摄入能够显著增加全身硝酸盐和亚硝酸盐的水平并为硝酸盐-亚硝酸通路“提供燃料”，甚至在单种富硝酸盐饮料之后也是如此(Lundbergetal.，2011，Cardiovasc.Res.89:525-532；Dibbleetal.，2011，Chest140:310-316；Rubinetal.，2011，Am.J.KidneyDis.57:488-497；Durandetal.，2010，Contraception82:526-533)。虽然NOS源性NO会迅速氧化成亚硝酸盐(NO₂ ^-)和硝酸盐(NO₃ ^-)(Chirinos，2012，J.Cardiovasc.Transl.Res.5:243-255；Ordonezetal.，2008，Nat.Rev.DrugDiscov.7:156-167)，但是它会对所述循环硝酸盐池作出有限贡献。

亚硝酸盐转化成NO在低氧条件下会增强。运动肌肉特征在于低的pO₂(Lundbergetal.，2011，Cardiovasc.Res.89:525-532)，其有利于从循环亚硝酸盐形成NO。当O₂水平低时，黄嘌呤氧化还原酶会将亚硝酸盐转化成NO(Webbetal.，2004，Proc.Natl.Acad.Sci.USA101:13683-13688)。同样，脱氧血红蛋白支持亚硝酸盐还原成NO，并因此有人认为在从循环到组织的O₂提取最显著的小阻力血管调节(特别是肌血管床)中起到关键作用。在这种情况下，血红蛋白的O₂饱和度接近P50(血红蛋白半饱和的O₂浓度)，R(氧)状态四聚体种血红蛋白的较大还原电位和亚硝酸盐结合必需的未配对脱氧血红蛋白位点数量(这在T状态四聚体种更丰富)之间的最佳平衡点。这会导致亚硝酸盐向NO接近最大转化，而因此发生血管舒张。同样，通过脱氧肌红蛋白的NO会增强血液流向骨骼肌并将O₂供给匹配于缺氧条件下代谢需求的增加(Totzecketal.，2012，Circulation126:325-334)。有趣的是，经由经典精氨酸途径的NO生产会受阻于缺氧的抑制作用，而同时内皮型NOS介导的亚硝酸盐还原产生NO会在并不存在缺氧时增强(Vaninetal.，2007，CellMol.LifeSci.64:96-103)。因此，内源性亚硝酸盐是经由NO释放的缺氧性血管舒张的生理效应子，这与L-精氨酸途径无关并很大程度上与NOS无关(Cosbyetal.，2003，Nat.Med.9:1498-1505)。

硝酸盐会增强线粒体的效率，并降低正常受试者中运动的O₂代价(Baileyetal.，2009，J.Appl.Physiol.107:1144-1155)。因此，不仅亚硝酸盐介导的血管扩张似乎会理想地增强O₂输送至运动肌肉，而且多项研究表明硝酸盐会降低健康志愿者的低-和高-强度运动的O₂代价，包括次最大循环(Baileyetal.，2009，J.Appl.Physiol.107:1144-1155；Larsenetal.，2007，ActaPhysiol.(Oxf.)191:59-66；Vanhataloetal.，2010，Am.J.Physiol.Regul.Integr.Comp.Physiol.299:R1121-1131)，伸膝运动(Baileyetal.，2010，J.Appl.Physiol.109:135-148)，行走和奔跑(Lansleyetal.，2011，CellMetab.13:149-159)。这种效应并非由于无氧代谢增加所致(Larsenetal.，2007，ActaPhysiol.(Oxf.)191:59-66)，这表明能量效率的内在提升。最近，硝酸盐已经证明会降低肌肉力量生产的ATP代价(Baileyetal.，2010，J.Appl.Physiol.109:135-148)，并增强人骨骼肌线粒体的效率(Larsenetal.，2011，CellMetab.13:149-159)。

无机亚硝酸盐/硝酸盐会提高正常受试者的运动能力。采用富含硝酸钠或硝酸盐的甜菜根汁的膳食补充已经证明会在高强度恒定工作速率运动期间延迟时间/消耗高达约15％～25％(Baileyetal.，2009，J.Appl.Physiol.107:1144-1155；Baileyetal.，2010，J.Appl.Physiol.109:135-148；Lansleyetal.，2011，CellMetab.13:149-159)，并且最近证实会增强运动表现(在自行车测功计中健康受试者完成给定距离的最快可能时间)(Lansleyetal.，2011，Med.Sci.SportsExerc.43:1125-1131)。膳食亚硝酸盐还会在慢性补充之后的增量运动期间增大峰值功率输出，指示持续受益的潜力(Vanhataloetal.，2010，Am.J.Physiol.Regul.Integr.Comp.Physiol.299:R1121-1131)。尽管在健康受试者中的这些运动促进作用是有据可查的，但这种方法还从未进行HFPEF提高运动耐力的测试。

除了其运动增强机械效应之外，膳食硝酸盐所施加的外周动脉效应在HFpEF中对于慢性“疾病改性”的受益具有潜力。健康志愿者中最近的一项安慰剂受控的随机研究表明，8毫摩尔无机硝酸盐的摄入提高了摄入后3小时的血浆硝酸盐，而这与主动脉脉搏波传导速度下降(主动脉僵硬的金标准指数)相关(Bahraetal.，2012，NitricOxide26:197-202)。这项人的研究与最近在老年小鼠(478-384AU)中3周补充亚硝酸钠将主动脉脉搏波速度(PWV)降低至更接近其年轻副本(332AU)的值的另一项研究(Sindleretal.，2011，AgingCell10:429-437)是一致的。

因此，在本领域中对于治疗HFpEF的改进组合物和方法仍存需要。本发明解决了本技术领域内的这些未满足之需。

发明内容

本发明涉及无机硝酸盐或亚硝酸盐是改善患有心力衰竭(HF)，包括射血分数正常性HF(HFpEF)的患者运动耐受性、症状、生命质量、和/或长期疗效的有效疗法的发现。因此，在一个实施方式中，本发明是治疗或预防需要其的受试者中心力衰竭的方法，该方法包括给予受试者治疗有效量的包含选自由无机硝酸盐和无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的组合物。在一些实施方式中，心力衰竭是射血分数正常性心力衰竭(HFpEF)。在一些实施方式中，组合物是包含至少一部分至少一种含硝酸盐的蔬菜的液体。在一个实施方式中，含硝酸盐的蔬菜是甜菜根。在各个实施方式中，包含选自由无机硝酸盐和无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的组合物的治疗有效量为约0.001mg/kg～约5mg/kg。在一些实施方式中，结合用于治疗或预防HFpEF的至少一种其它药剂给予包含选自由无机硝酸盐和无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的组合物。在各个实施方式中，至少一种其它药剂选自由利尿药、血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂、血管紧张素II受体阻断剂(ARB)、β-阻断剂、钙通道阻断剂、他汀类、有机硝酸盐和有机亚硝酸酯/盐组成的组。在一些实施方式中，受试者是人。

在另一个实施方式中，本发明是改善患有心率衰竭的受试者中运动耐受性的方法，该方法包括给予受试者治疗有效量的包含选自由无机硝酸盐或无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的组合物。在一些实施方式中，心力衰竭是射血分数正常性心力衰竭(HFpEF)。在一些实施方式中，组合物是包含至少一部分至少一种含硝酸盐的蔬菜的液体。在一个实施方式中，含硝酸盐的蔬菜是甜菜根。在各个实施方式中，包含选自由无机硝酸盐和无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的组合物的治疗有效量为约0.001mg/kg～约5mg/kg。在一些实施方式中，包含选自由无机硝酸盐和无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的组合物结合至少一种其它用于治疗或预防HFpEF的药剂给药。在各个实施方式中，至少一种其它药剂选自由利尿药、血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂、血管紧张素II受体阻断剂(ARB)、β-阻断剂、钙通道阻断剂、他汀类、有机硝酸盐和有机亚硝酸酯/盐组成的组。在一些实施方式中，受试者是人。

在一个实施方式中，本发明是降低患有心率衰竭的受试者中大主动脉僵硬的方法，该方法包括给予受试者治疗有效量的包含选自由无机硝酸盐或无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的组合物。在一些实施方式中，心力衰竭是射血分数正常性心力衰竭(HFpEF)。在一些实施方式中，组合物是包含至少一部分至少一种含硝酸盐的蔬菜的液体。在一个实施方式中，含硝酸盐的蔬菜是甜菜根。在各个实施方式中，包含选自由无机硝酸盐和无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的组合物的治疗有效量为约0.001mg/kg～约5mg/kg。在一些实施方式中，包含选自由无机硝酸盐和无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的组合物结合至少一种其它用于治疗或预防HFpEF的药剂给药。在各个实施方式中，至少一种其它药剂选自由利尿药、血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂、血管紧张素II受体阻断剂(ARB)、β-阻断剂、钙通道阻断剂、他汀类、有机硝酸盐和有机亚硝酸酯/盐组成的组。在一些实施方式中，受试者是人。

在另一个实施方式中，本发明是降低患有心率衰竭的受试者中动脉波反射的方法，该方法包括给予受试者治疗有效量的包含选自由无机硝酸盐或无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的组合物。在一些实施方式中，心力衰竭是射血分数正常性心力衰竭(HFpEF)。在一些实施方式中，组合物是包含至少一部分至少一种含硝酸盐的蔬菜的液体。在一个实施方式中，含硝酸盐的蔬菜是甜菜根。在各个实施方式中，包含选自由无机硝酸盐和无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的组合物的治疗有效量为约0.001mg/kg～约5mg/kg。在一些实施方式中，包含选自由无机硝酸盐和无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的组合物结合至少一种其它用于治疗或预防HFpEF的药剂给药。在各个实施方式中，至少一种其它药剂选自由利尿药、血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂、血管紧张素II受体阻断剂(ARB)、β-阻断剂、钙通道阻断剂、他汀类、有机硝酸盐和有机亚硝酸酯/盐组成的组。在一些实施方式中，受试者是人。

在一个实施方式中，本发明是提高患有心率衰竭的受试者的血浆中硝酸盐浓度的方法，该方法包括给予受试者治疗有效量的包含选自由无机硝酸盐或无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的组合物。在一些实施方式中，心力衰竭是射血分数正常性心力衰竭(HFpEF)。在一些实施方式中，组合物是包含至少一部分至少一种含硝酸盐的蔬菜的液体。在一个实施方式中，含硝酸盐的蔬菜是甜菜根。在各个实施方式中，包含选自由无机硝酸盐和无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的组合物的治疗有效量为约0.001mg/kg～约5mg/kg。在一些实施方式中，包含选自由无机硝酸盐和无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的组合物结合至少一种其它用于治疗或预防HFpEF的药剂给药。在各个实施方式中，至少一种其它药剂选自由利尿药、血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂、血管紧张素II受体阻断剂(ARB)、β-阻断剂、钙通道阻断剂、他汀类、有机硝酸盐和有机亚硝酸酯/盐组成的组。在一些实施方式中，受试者是人。

在另一个实施方式中，本发明是提高患有心率衰竭的受试者的血浆中亚硝酸盐浓度的方法，该方法包括给予受试者治疗有效量的包含选自由无机硝酸盐或无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的组合物。在一些实施方式中，心力衰竭是射血分数正常性心力衰竭(HFpEF)。在一些实施方式中，组合物是包含至少一部分至少一种含硝酸盐的蔬菜的液体。在一个实施方式中，含硝酸盐的蔬菜是甜菜根。在各个实施方式中，包含选自由无机硝酸盐和无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的组合物的治疗有效量为约0.001mg/kg～约5mg/kg。在一些实施方式中，包含选自由无机硝酸盐和无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的组合物结合至少一种其它用于治疗或预防HFpEF的药剂给药。在各个实施方式中，至少一种其它药剂选自由利尿药、血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂、血管紧张素II受体阻断剂(ARB)、β-阻断剂、钙通道阻断剂、他汀类、有机硝酸盐和有机亚硝酸酯/盐组成的组。在一些实施方式中，受试者是人。

在另一个实施方式中，本发明是改善患有心率衰竭的受试者中对运动血管扩张反应的方法，该方法包括给予受试者治疗有效量的包含选自由无机硝酸盐或无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的组合物。在一些实施方式中，心力衰竭是射血分数正常性心力衰竭(HFpEF)。在一些实施方式中，组合物是包含至少一部分至少一种含硝酸盐的蔬菜的液体。在一个实施方式中，含硝酸盐的蔬菜是甜菜根。在各个实施方式中，包含选自由无机硝酸盐和无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的组合物的治疗有效量为约0.001mg/kg～约5mg/kg。在一些实施方式中，包含选自由无机硝酸盐和无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的组合物结合至少一种其它用于治疗或预防HFpEF的药剂给药。在各个实施方式中，至少一种其它药剂选自由利尿药、血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂、血管紧张素II受体阻断剂(ARB)、β-阻断剂、钙通道阻断剂、他汀类、有机硝酸盐和有机亚硝酸酯/盐组成的组。在一些实施方式中，受试者是人。

在一个实施方式中，本发明是提高患有心率衰竭的受试者中运动期间肌肉血流量的方法，该方法包括给予受试者治疗有效量的包含选自由无机硝酸盐或无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的组合物。在一些实施方式中，心力衰竭是射血分数正常性心力衰竭(HFpEF)。在一些实施方式中，组合物是包含至少一部分至少一种含硝酸盐的蔬菜的液体。在一个实施方式中，含硝酸盐的蔬菜是甜菜根。在各个实施方式中，包含选自由无机硝酸盐和无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的组合物的治疗有效量为约0.001mg/kg～约5mg/kg。在一些实施方式中，包含选自由无机硝酸盐和无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的组合物结合至少一种其它用于治疗或预防HFpEF的药剂给药。在各个实施方式中，至少一种其它药剂选自由利尿药、血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂、血管紧张素II受体阻断剂(ARB)、β-阻断剂、钙通道阻断剂、他汀类、有机硝酸盐和有机亚硝酸酯/盐组成的组。在一些实施方式中，受试者是人。

在另一个实施方式中，本发明是提高患有心率衰竭的受试者中肌肉氧化能力的方法，该方法包括给予受试者治疗有效量的包含选自由无机硝酸盐或无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的组合物。在一些实施方式中，心力衰竭是射血分数正常性心力衰竭(HFpEF)。在一些实施方式中，组合物是包含至少一部分至少一种含硝酸盐的蔬菜的液体。在一个实施方式中，含硝酸盐的蔬菜是甜菜根。在各个实施方式中，包含选自由无机硝酸盐和无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的组合物的治疗有效量为约0.001mg/kg～约5mg/kg。在一些实施方式中，包含选自由无机硝酸盐和无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的组合物结合至少一种其它用于治疗或预防HFpEF的药剂给药。在各个实施方式中，至少一种其它药剂选自由利尿药、血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂、血管紧张素II受体阻断剂(ARB)、β-阻断剂、钙通道阻断剂、他汀类、有机硝酸盐和有机亚硝酸酯/盐组成的组。在一些实施方式中，受试者是人。

在一个实施方式中，本发明是用于治疗或预防需要其的受试者中心力衰竭的包含选自由无机硝酸盐或无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的组合物。在一些实施方式中，心力衰竭是射血分数正常性心力衰竭(HFpEF)。在一些实施方式中，组合物是包含至少一部分至少一种含硝酸盐的蔬菜的液体。在一个实施方式中，含硝酸盐的蔬菜是甜菜根。

附图说明

本发明优选实施方式的以下详细描述在结合附图阅读时将会更好理解。为了举例说明本发明的目的，在附图中所示的实施方式目前是优选的。然而，应当理解的是，本发明并不限于附图中所示的实施方式的精确排布设计和手段。

图1是描绘了无机硝酸盐/亚硝酸盐如何能够定标于提出促进HFpEF中运动耐受性的机制的曲线图。图2是描绘根据存在或不存在高血压(患病率＝45％)分级的或存在或不存在“高”反射幅度(人群的顶部45％)的5,958个动脉粥样硬化(MESA)多种族研究参与者中HF发病率的危险曲线的曲线图。曲线都对这个人群中HF的其它显著预测进行了调整。

图2是描绘本文中所述的各种治疗效果的流程图。

具体实施方式

本发明涉及(口服或静脉给药的)膳食无机硝酸盐或亚硝酸盐是改善患有心里衰竭(HF)，包括射血分数正常性心力衰竭(HFpEF)的患者中运动耐力，症状，生命质量，和/或长期治疗结果的有效疗法的发现。因此，本发明涉及组合物和通过给予包含选自由无机硝酸盐或无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的组合物治疗或预防受试者HFpEF的方法。一般而言，本发明涉及给予受试者无机硝酸盐是治疗HFpEF的有效方法的发现。在一些实施方式中，包含选自由无机硝酸盐或无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的组合物是包含至少一部分至少一种含硝酸盐的蔬菜的液体。在一些实施方式中，含硝酸盐的蔬菜是甜菜根。本发明还涉及甜菜根和/或亚硝酸钠改变患有HFpEF的患者中关键外周机械靶标的发现，提供短期症状改善和长期疾病缓解效果。在一些实施方式中，本发明提供了用于调节诊断患有HFpEF的受试者中这些机械靶标(mechanistictarget)的组合物和方法。

定义

除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语具有本发明领域内普通技术人员通常理解的相同含义。尽管类似或等同于本文描述的任何方法和材料能够用于本发明的实践或测试，但还是描述了优选的方法和材料。

正如以下本文所用的每个术语都具有与其在本节相关的含义。

冠词“一”和“一个”在本文中用于指一个或多于一个(即，是指至少一个)的冠词的语法对象。例如，“一个要素”意指一个要素或超过一个元要素。

本文中所使用的“约”在指可测量的值时，例如含量，时间的持续时间等，是指涵盖所指定的值±30％～±10％，更优选±5％，甚至更优选±1％，而更加优选规定值±0.1％的变化，同样这样的变化合适于实施所公开的方法。

术语“异常”当在生物，组织，细胞或其组成的上下文中使用时是指与这些显示“正常”(预期)各自特性的有机体，组织，细胞或其组件的可观察到的或可检测的特性(例如，年龄，治疗，天日的时间等)至少一种不同的那些生物体，组织，细胞或其组件。对于一个细胞或组织类型是正常或预期的特性，或许对于不同细胞或组织类型是异常的。

“疾病(disease)”是在动物不能保持体内平衡，并且如果疾病没有改善而随后动物的健康将继续变坏的动物健康状态。

相对而言，动物中的“失调(disorder)”是动物能够保持体内平衡但动物的健康状态比不存在失调时不太有利的健康状态。如果置之不治疗，“失调”并非一定会导致动物的健康状态的进一步下降。

如果疾病或失调的症状严重程度、患者经受这种症状的频率降低，疾病或失调“缓解”。

化合物的“有效量”或“治疗有效量”是化合物足以向给予化合物的受试者提供有益效果的量。

本文所用的“说明书材料”包括能够用于传达实现缓解本文中引述的各种疾病或失调症的试剂盒中本发明的化合物，组合物，载体或递送***的使用的出版物，记录，图表或任何其它表达媒介。可选地或可替代地，说明书材料能够描述一种或多种减轻哺乳动物细胞或组织中疾病或失调症的方法。本发明试剂盒的说明书材料，例如，能够固定于包含所确定的本发明的化合物，组合物，载体或递送***的容器。另外，说明书材料能够与容器独立运输而意在使接收者能够协同使用说明书材料和化合物。

术语“患者”，“受试者”，“个体”等在本文中都能够互换使用，并是指任何，无论体外或原位，适合本文中所描述的方法的动物或其细胞。在某些非限制性实施方式中，患者，受试者或个体是人。

“治疗性”治疗是为降低或消除这些迹象和/或症状给药于表现出疾病和/或失调症的迹象和/或症状的受试者的治疗。

正如本文中所用的“治疗疾病或失调”是指降低患者经历疾病或失调的迹象和/或症状的严重度和/或频率。

本文中所用的短语“治疗有效量”是指足够或有效预防或治疗(延迟或防止其发作，防止恶化，抑制，降低或反转)与心力衰竭，包括射血分数正常性心力衰竭相关的疾病或失调，包括缓解此类疾病和失调的迹象和/或症状的用量。

本文中所用的术语“充血性心力衰竭(CHF)”，“慢性心力衰竭，“急性心力衰竭”和“心力衰竭”可互换使用，并是指心脏不能按照充分的速率泵出血液或仅在存在左心室充盈压增加下如此而为之的任何病症。当心脏在正常充盈左心室压力下无法将血液充分泵到身体的其它部位时，血液能够回流至肺部，造成肺部充集流体。心力衰竭的典型症状包括气短(呼吸困难)，疲劳，虚弱，平躺时呼吸困难，腿部，脚踝或腹部肿胀(水肿)。心力衰竭之因与各种病症包括冠状动脉疾病，全身性高血压，心肌病或心肌炎，先天性心脏病，心脏瓣膜异常或瓣膜性心脏病，严重肺部疾病，糖尿病，严重贫血性甲状腺功能亢进症，心律失常，节律紊乱和心肌梗死。心力衰竭能够在正常的(≥50％)或降低的(＜50％)左心室射血分数存在下发生。人们越来越认识到这些两种病症代表着两种不同的疾病状态，而不是连续体(BorlaugBA，RedfieldMM。Circulation。2011May10；123(18):2006-13)。HFpEF通常发生于具有诸如肥胖，糖尿病和高血压危险因素的老年患者，而在女性中更常见。

范围：在整个公开内容中，本发明的各方面能够按照范围格式表述。应该理解的是，按照范围格式的描述仅仅是为了方便和简洁起见，而不应该解释为对本发明范围不可改变的限制。因此，范围的描述应该视为专门公开所有可能的子范围以及范围内的各个数值。例如，诸如1～6的范围的描述应考虑为专门公开诸如1～3，1～4，1～5，2～4，2～6，3～6等的子范围，以及范围内的各个数，例如，1，2，2.7，3，4，5，5.3，6。无论范围的宽度如何这都适用。

描述

本发明涉及给予硝酸盐或亚硝酸盐是改善患有HF(包括HFpEF)的患者的运动耐力，症状，生命质量和/或长期治疗结果的有效膳食疗法的发现。因此，本发明涉及通过给药包含选自由无机硝酸盐或无机亚硝酸盐组成的组中至少一种的组合物用于治疗或预防受试者中HF的组合物和方法。在一些实施方式中，HF是HFpEF。一般而言，本发明涉及通过膳食给予受试者无机硝酸盐或亚硝酸盐是治疗HFpEF的有效方法的发现。在一些实施方式中，包含选自由无机硝酸盐或无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的组合物是包含至少一部分至少一种含硝酸盐的蔬菜的液体。在一些实施方式中，含硝酸盐的蔬菜是甜菜根。

本发明还涉及硝酸盐改变患有HFpEF的患者中关键外周机械靶标，同时提供短期症状改善和长期疾病缓解效果的发现。在一些实施方式中，本发明提供了用于调节诊断患有HFpEF的受试者中这些外周机械靶标的组合物和方法。

本发明的方法涉及通过给予至少一种无机硝酸盐或无机亚硝酸盐治疗和预防HF。HF是特征为心脏不能按照适当的速度泵血或仅仅在左心室充盈压增加存在下如此而为之的异常低心输出量的任何疾病。在HFpEF中，休息时的心输出量通常是正常的，但增加的左心室充盈压却出现于休息时或运行期间。本发明提供了涉及治疗和预防可以表征为HF的任何病症的组合物和方法。HF能够包括能够用本发明的化合物和方法治疗的广泛的各种症状。在一些实施方式中，HF包括受损的左心室射血分数(“收缩性”心力衰竭)。在其它实施方式中，HF是射血分数正常的(HFpEF，之前称为“舒张性”心力衰竭)。患有HFpEF的患者具有相对正常的或接近正常的左心室射血分数(＞50％)。现在所见的HFpEF是一种复杂的多器官疾病，包括与心脏异常结合的外周异常。本发明提供了用于调节诊断患有HFpEF的受试者中这些外周异常的组合物和方法。在各个实施方式中，能够用本发明的组合物和方法治疗的外周异常包括，但不限于，运动耐力，血管扩张反应，大动脉僵硬和动脉波偏移。

方法

本发明提供了通过给予受试者治疗有效量的包含选自由无机硝酸盐或无机亚硝酸盐组成的组中至少一种的组合物用于治疗或预防HF的方法。无机硝酸盐的实例包括，但不限于，硝酸钠，硝酸锂，硝酸钾，硝酸铯，硝酸钡和硝酸铵。无机亚硝酸盐的实例包括，但不限于，亚硝酸钠，亚硝酸锂，亚硝酸钾，亚硝酸铯和亚硝酸铵。在一些实施方式中，HF是HFpEF。在一些实施方式中，受试者是人。本发明部分基于高度浓缩的甜菜根汁(其包含高浓度硝酸盐)是改善患有HFpEF的患者中运动耐力，症状，和/或生命质量的有效膳食疗法的发现。其它已知包含高浓度硝酸盐的蔬菜包括，但不限于，萝卜，芜青，芹菜，菠菜和生菜。饮食来源的硝酸盐或口服给予的亚硝酸盐是通过在缺氧的存在下会增强的硝酸盐-亚硝酸盐路径的强效血管扩张剂一氧化氮(NO)的重要的内皮非依赖性的源，而缺氧发生于运动肌肉中。膳食硝酸盐也会增强线粒体效率并降低运动的氧气损失。亚硝酸盐诱导低氧血症引起的选择性动脉血管扩张，并改善朝向锻炼肌肉以及锻炼肌肉内的血流量分布。这增加至HFpEF中外周肌肉的氧气供应。亚硝酸盐还可以降低静脉回流和前负荷，其能够有助于改善的症状。

HFpEF的许多性症状不仅是由心脏异常所致，而且由其它外周异常表现出。外周异常非限制性的实例包括运动血管扩张反应，增加的动脉波偏移和大动脉硬化。这些导致过量的左心室工作负荷的异常在HFpEF中通过无机硝酸盐/亚硝酸盐有利地影响。因此，本发明提供了治疗或预防HF，包括HFpEF的受试者中这些***异常的方法。

在一个实施方式中，本发明包括通过给予包含选自由无机硝酸盐或无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的组合物改善患有HF如HFpEF的受试者中运动耐力的方法。正如本文中所用的“运动耐力”是指在标准化运动测试(如6-min步行测试或正常的心肺压力测试)期间按照在其一般身体状况下预期的水平或定量性能进行运动。据发现，患有HFpEF的患者运动耐力较差，这导致严重下降的生命质量。在运动期间，患有HFpEF的患者证实血管扩张反应受损且峰值耗氧量(VO₂)下降。正如本领域技术人员所理解的那样，测定运动耐力的测量结果可以通过本领域内任何已知的方法获得。例如，在标准化的6-min步行测试期间行走的距离是运动能力的良好定量替代(Brooksetal.，AmJRespirCritCareMed。167:1287)。此外，在最大努力的仰卧踏车运动测试期间的气体分析可以提供测定峰值耗氧量(VO₂)和运动效率的参数，这正如由本领域内技术人员所理解的那样。正如本文中所用的“运动效率”是指每耗氧量的外部能量输出。

在一个实施方式中，本发明的方法包括通过给予受试者包含选自由无机硝酸盐或无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的组合物改善患有HF如HFpEF的受试者中对运动的血管扩张反应。正如本领域技术人员所理解的那样，用于测定对运动的血管扩张反应的测定结果可以通过本领域内任何已知的方法获得。例如，对运动的血管扩张反应可以作为最大努力仰卧脚踏车运动期间全身血管阻力的变化进行测定，正如本领域技术人员所理解的那样。

在一个实施方式中，本发明的方法包括通过给予受试者包含选自由无机硝酸盐或无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的组合物降低患有HF如HFpEF的受试者中大动脉僵硬。已知动脉僵硬会提高患有HFpEF的患者中脉动LV后负荷。正如本领域技术人员所理解的那样，用于测定大动脉僵硬的测定结果可以通过本领域内任何已知的方法获得。例如，大动脉僵硬可以使用颈股动脉脉搏波速度，主动脉僵硬指数进行测量，其可以使用动脉张力评估，正如本领域技术人员所理解的那样。

在一个实施方式中，本发明的方法包括通过给予受试者包含选自由无机硝酸盐或无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的组合物降低患有HF，如HFpEF的受试者中的动脉波反射。动脉波反射与左心室重塑，舒张功能不全和HF风险增加有关。正如本领域技术人员所理解的那样，用于测定动脉波反射的测定结果可以通过本领域内任何已知的方法获得。例如，动脉波反射可以通过动脉波反射幅度进行测定，动脉波反射幅度通过采用动脉张力和多普勒超声心动图的主动脉压力流量关系的分析进行评价，正如本领域技术人员所理解的那样。

在一个实施方式中，本发明的方法包括通过给予受试者包含选自由无机硝酸盐或无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的组合物提高患有HF，如HFpEF的受试者中的肌肉血流量。正如本领域技术人员所理解的那样，用于测定肌肉血流量的测定结果可以通过本领域内任何已知的方法获得。实例包括，但不限于，标准跖屈运动测试，仰卧位自行车运动测试、采用动脉MRI自旋标记评估的下肢肌肉灌注，股多普勒超声或近红外光谱学，正如本领域技术人员所理解的那样。正如本文中所用的“血管阻力”是指平均动脉压力/血流量的比率。

在一个实施方式中，本发明的方法包括通过给予受试者包含硝酸盐或亚硝酸盐的组合物降低患有HF，如HFpEF的受试者中血管阻力和提高骨骼肌血流量。正如本领域技术人员所理解的那样，用于测定骨骼肌血流量的测定结果可以通过本领域内任何已知的方法获得。实例包括，但不限于袖套阻塞测试(cuffocclusiontest)，其中肌肉灌注采用多普勒超声或近红外光谱评估.正如本文中所用的“血管阻力”是指平均动脉压力/血流量的比率。

在一个实施方式中，本发明的方法包括通过给予受试者包含选自由无机硝酸盐或无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的组合物提高患有HF，如HFpEF的受试者中的肌肉氧化能力。正如本领域技术人员所理解的那样，用于测定对运动的血管扩张反应的测定结果可以通过本领域内任何已知的方法获得。实例包括，但不限于，标准化的跖屈运动试验，采用磷谱测定的肌肉磷酸肌酸(PCR)动力学、使容许PCr浓度成像的化学交换饱和转移的、或使用短暂性动脉闭塞的刚轻微运动后肌肉氧气消耗近红外光谱测量，正如本领域技术人员所理解的那样。

在一个实施方式中，本发明的方法包括通过给予包含选自由无机硝酸盐或无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的组合物降低患有HF，如HFpEF的受试者中前负荷。正如本领域技术人员所理解的，用于测定前负荷的测量结果包括用导管测量左心室舒张末压、用导管测量肺毛细血管楔压、或用多普勒超声心动图测量舒张期杂音填充的指数。这事本领域技术人员会理解的。

本发明方法的各种实施方式包括给予治疗有效量的包含无机硝酸盐或无机亚硝酸盐中至少一种的组合物。在一些实施方式中，包含无机硝酸盐或无机亚硝酸盐中至少一种的组合物的治疗有效量为0.1～100mmol的无机硝酸盐，有机硝酸盐，无机亚硝酸盐或有机硝酸盐。在其它实施方式中，包含无机硝酸盐或无机亚硝酸盐中至少一种的组合物的治疗有效量为1～50mmol的硝酸盐。在其它实施方式中，包含无机硝酸盐或无机亚硝酸盐中至少一种的组合物的治疗有效量为5～25mmol的无机硝酸盐或无机亚硝酸盐。在进一步的实施方式中，包含无机硝酸盐或无机亚硝酸盐中至少一种的组合物的治疗有效量为10～15mmol的无机硝酸盐或无机亚硝酸盐。

在一些实施方式中，包含无机硝酸盐或无机亚硝酸盐中至少一种的组合物包含治疗有效量的亚硝酸钠。在一些实施方式中，亚硝酸钠的治疗有效量为0.01mg～1000mg。在其它实施方式中，亚硝酸钠的治疗有效量为1mg～500mg。在其它实施方式中，亚硝酸钠的治疗有效量为10mg～100mg。在一个实施方式中，亚硝酸钠的治疗有效量为80mg。

此外，正如本文中其它地方所公开的，一旦配备本文中提供的教导内容，本领域的技术人员能够理解的是，本发明涵盖预防各种疾病、失调和病症的方法，其中给予至少一种无机硝酸盐或无机亚硝酸盐治疗或预防疾病，失调或病理。用于评估疾病是否涉及无机硝酸盐或无机亚硝酸盐水平降低的方法在本领域内是已知的。此外，本发明涵盖治疗或预防这些未来发现的疾病。

本发明涵盖给予包含至少一种无机硝酸盐或无机亚硝酸盐的组合物以实施本发明的方法；基于本文中提供的公开内容，本领域技术人员将会理解，如何配制和给予受试者包含选自由无机硝酸盐或无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的合适的组合物。缺失，成功给予包含选自由无机硝酸盐或无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的组合物已经降低而如本文中举例说明进行实施。然而，本发明并不限于任何给药或治疗方案的具体方法。

组合物

本发明提供了包含至少一种无机硝酸盐或无机亚硝酸盐用于治疗和预防HF，包括HFpEF的组合物。任何包含选自由无机硝酸盐或无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的组合物都由本发明设想到。无机硝酸盐的实例包括，但不限于，硝酸钠，硝酸锂，硝酸钾，硝酸铯，硝酸钡和硝酸铵。有机硝酸盐的实例包括，但不限于，硝酸二烷基咪唑鎓(dialkylimidazoliumnitrate)和硝酸胍。无机亚硝酸盐的实例包括，但不限于，亚硝酸钠，亚硝酸锂，亚硝酸钾，亚硝酸铯和亚硝酸铵。有机亚硝酸盐/酯(nitrite)的实例包括，但不限于，乙基亚硝酸酯/盐，丙基亚硝酸酯/盐，丁基亚硝酸酯/盐，戊基亚硝酸酯/盐和辛基亚硝酸酯/盐。包含选自由无机硝酸盐或无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的组合物可以包括任何形式，正如本领域技术人员所理解的那样。非限制性的实例形式包括液体，膏(paste)，凝胶(gel)，棒(bar)，块状物(cake)，粉末，颗粒，泡腾片，嚼口香糖，片剂，胶囊，锭剂，快熔片或晶片，舌下片或喷雾。此类产品能够采用食品和饮料行业或制药行业中实施的常规方法进行生产。

优选地，包含选自由无机硝酸盐或无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的组合物是包含至少一部分至少一种含硝酸盐的蔬菜的液体。蔬菜已知是膳食中重要的硝酸盐来源。富含硝酸盐的蔬菜的实例是绿叶蔬菜，菠菜，甜菜根，茴香，生菜，洋白菜等。设想这类蔬菜的汁，糊，浓缩液和其它这样的组合物都是合适的硝酸盐来源。正如本文中所设想到的，任何含硝酸盐的蔬菜可以单独或以任意组合，以任何浓度，在本发明包含至少一种无机硝酸盐或无机亚硝酸盐的组合物的构造中都可以使用。在一个实施方式中，含硝酸盐的蔬菜是甜菜根。包含至少一部分至少一种含硝酸盐的蔬菜的液体可以通过任何技术中已知的方法制备。举例而言，液体能够通过将蔬菜置于压滤机中而收集释放的汁而制备。通过举另一个例子，蔬菜能够通过将蔬菜放置于掺混机中而收集掺混的蔬菜而制备。

确定为潜在有用的化合物(包含至少一种无机硝酸盐或无机亚硝酸盐)用于治疗和/或预防心脏病如HFpEF的组合物，能够进行配制并给予受试者用于治疗或预防心脏病如HFpEF，如现在所描述的。

本发明涵盖了如本文中所公开的包含用于治疗心脏病如HFpEF的组合物如包含选自由无机硝酸盐或无机亚硝酸盐组成的组中至少一种的组合物的组合物的制备和用途。这种组合物可以以适合于向受试者给药的形式单独由至少一种无机硝酸盐或无机亚硝酸盐组成，或组合物可以包含至少一种无机硝酸盐或无机亚硝酸盐以及一种或多种药用载体、一种或多种其它成分或这些的某些组合。至少一种无机硝酸盐或无机亚硝酸盐可以以生理上可接受的酯或盐的形式，如与生理上可接受的阳离子或阴离子组合存在于组合物中，正如本领域内众所周知的情况。

正如本文中所用的术语“药用载体”是指可以与其合适抑制剂组合并在组合之后能够用于给予受试者合适的抑制剂的化学组合物。

可以给予用于实践本发明的组合物可以递送约0.1ng/kg/d～100mg/kg/d的硝酸盐和/或亚硝酸盐剂量。

在各个实施方式中，用于本发明方法的组合物可以进行例如全身性或胃肠道给药，如以口服制剂给药。除了合适的治疗组合物之外，这种组合物可以包含药用载体和其它已知增强和有利于药剂给药的成分。

正如本文中所用的术语“生理上可接受的”酯或盐是指与组合物任何其它成分相容的至少一种无机硝酸盐或无机亚硝酸盐的酯或盐形式，其不会有害于组合物将会给药的受试者。

本文中所描述的组合物的配制剂可以通过制药行业中任何已知或此后开发的方法进行制备。一般而言，这种制备方法包括使至少一种无机硝酸盐或无机亚硝酸盐与载体或一种或多种其它辅助成分相混合，随后，如果必要或期望，将产物成形或包装成所需的单或多剂量单位的步骤。

尽管本文中提供的组合物的描述主要涉及适合于伦理性给予人的组合物，但本领域技术人员应该理解的是，这种组合物一般而言适合给予各种动物。为了使组合物适合给予各种动物，很好理解的是对适于给予人的组合物进行改变，并且本领域普通训练有素的兽医药理学家都能够以仅仅如有存在的普通实验方法设计和实施这种改变。

用于本发明方法的组合物可以以适合口服，非胃肠道，静脉内以及其它已知的给药路径的配制剂进行制备，包装或销售。

本发明的组合物可以散装(inbulk)，作为单个单位剂量或作为多个单一单位剂量进行制备，包装或销售。正如本文中所用的“单位剂量”是包含预定量的硝酸盐的离散量的组合物。硝酸盐的量通常等于将会给予受试者的至少一种无机硝酸盐或无机亚硝酸盐的剂量或这样的剂量的方便部分，如例如，这种剂量的二分之一或三分之一。

本发明组合物中的至少一种无机硝酸盐或无机亚硝酸盐，药用载体和任何其它成分的相对量将根据所治疗的受试者的身份，尺寸和状况并进一步根据给予组合物的途径而改变。例如，组合物可以包含0.1％～100％(w/w)的硝酸盐。

除了至少一种无机硝酸盐无机亚硝酸盐之外，本发明的组合物可以进一步包含一种或多种其它的药剂活性剂。

本发明的组合物受控或持续释放的配制剂可以使用常规的技术进行制备。

本发明组合物适于口服给药的配制剂可以以离散固体剂量单元的形式，包括，但不限于，片剂，硬或软胶囊，扁囊剂，糖锭或锭剂，每种都包含预定量的至少一种无机硝酸盐或无机亚硝酸盐进行制备，包装或销售。其它适于口服给药的配制剂包括，但不限于，粉末状或颗粒状配制剂，水性或油性悬浮液，水性或油性溶液或乳液。

包含至少一种无机硝酸盐或无机亚硝酸盐的片剂可以，例如，通过可选地与一种或多种其它成分一起挤压或模制至少一种无机硝酸盐或无机亚硝酸盐制备。挤压的片剂可以通过在合适的设备中以自由流动如粉末或颗粒配制剂形式挤压可选地与一种或多种粘合剂，润滑剂，赋形剂，表面活性剂和分散剂混合的至少一种无机硝酸盐或无机亚硝酸盐制备。模制的片剂可以通过在合适设备中模制至少一种无机硝酸盐或无机亚硝酸盐，药用载体，以及至少足够润湿混合物的液体的混合物而制备。片剂生产中使用的药用赋形剂包括，但不限于，惰性稀释剂，造粒剂和崩解剂，粘合剂和润滑剂。已知的分散剂包括，但不限于，马铃薯淀粉和淀粉乙醇酸钠(sodiumstarchglycollate)。已知的表面活性剂包括，但不限于，十二烷基硫酸钠。已知的稀释剂包括，但不限于，碳酸钙，碳酸钠，乳糖，微晶纤维素，磷酸钙，磷酸氢钙和磷酸钠。已知的造粒剂和崩解剂包括，但不限于，玉米淀粉和海藻酸。已知的粘合剂包括，但不限于，明胶，***树胶，预胶化玉米淀粉，聚乙烯吡咯烷酮和羟丙基甲基纤维素。已知的润滑剂包括，但不限于，硬脂酸镁，硬脂酸，二氧化硅，和滑石。

片剂可以是未涂覆的或它们可以使用实现在受试者的胃肠道中延迟崩解的已知方法进行涂覆，从而提供至少一种无机硝酸盐或无机亚硝酸盐的持续释放和吸收。例如，物质如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯都可以用于涂覆片剂。进一步举例而言，片剂可以使用美国专利号4,256,108；4,160,452；和4,265,874中描述的方法涂覆以形成渗透性控释的片剂。片剂还可以包含为了提供药学上美观和可口配制剂的甜味剂，调味剂，着色剂，防腐剂或这些的某些组合。

包含至少一种无机硝酸盐或无机亚硝酸盐的硬胶囊可以使用生理上可降解的组合物如明胶制备。这种硬胶囊包含至少一种无机硝酸盐或无机亚硝酸盐，并可以进一步包含包括，例如，惰性固体稀释剂如碳酸钙，磷酸钙或高岭土的其它成分。

包含至少一种无机硝酸盐或无机亚硝酸盐的软明胶胶囊可以使用生理学上可降解的组合物，如明胶制成。这样的软胶囊包含至少一种无机硝酸盐或无机亚硝酸盐，其可与水或油介质如花生油，液体石蜡或橄榄油混合。

本发明组合物适合于口服给药的液体配制剂可以以液体形式或以旨在使用之前用水或其他合适载体重构的干燥产品的形式进行制备，包装和销售。

液体悬浮液可以使用获得至少一种无机硝酸盐或无机亚硝酸盐在水性或油性载体中的悬浮液的常规方法进行制备。水性载体包括，例如，水和等渗盐水。油性载体包括，例如，杏仁油，油酯，乙醇，植物油如花生油，橄榄油，芝麻油或椰子油，分馏植物油和矿物油如液体石蜡。液体悬浮液可进一步包含一种或多种其它成分，包括但不限于，悬浮剂，分散剂或润湿剂，乳化剂，缓和剂，防腐剂，缓冲剂，盐，调味剂，着色剂和甜味剂。油性悬浮液还可以包含增稠剂。

已知的悬浮剂包括，但不限于，山梨糖醇糖浆，氢化食用脂肪，海藻酸钠，聚乙烯吡咯烷酮，黄蓍树胶，***树胶和纤维素衍生物如羧甲基纤维素钠，甲基纤维素和羟丙基甲基纤维素。已知的分散剂或润湿剂包括，但不限于，天然存在的磷脂如卵磷脂，环氧烷(alkyleneoxide)与脂肪酸、与长链脂族醇、与衍生于脂肪酸和己糖醇的部分酯或与衍生于脂肪酸和己糖醇酸酐的部分酯的缩合产物(例如，各自为，聚氧乙烯硬脂酸酯，十七乙烯氧基鲸蜡醇，聚氧乙烯山梨醇单油酸酯和聚氧乙烯山梨聚糖单油酸酯)。已知的乳化剂包括，但不限于，卵磷脂和***树胶。已知的防腐剂包括，但不限于，甲基、乙基或正丙基-对-羟基苯甲酸，抗坏血酸和山梨酸。已知的甜味剂包括，例如，甘油，丙二醇，山梨糖醇，蔗糖和糖精。已知用于油性悬浮液的增稠剂包括，例如，蜂蜡，硬石蜡和鲸蜡醇。

至少一种无机硝酸盐或无机亚硝酸盐在水性或油性溶剂中的液体溶液可以按照与液体悬浮液基本相同的方式制备，主要区别在于至少一种无机硝酸盐或无机亚硝酸盐溶解于而不是悬浮于溶剂中。本发明组合物的液体溶液可以包含关于液体悬浮液描述的每一种组分，应该理解的是，悬浮剂不一定会辅助至少一种无机硝酸盐或无机亚硝酸盐溶解在溶剂中。水性溶剂包括，例如，水和等渗盐水。油性溶剂包括，例如，杏仁油，油酯，乙醇，植物油如花生油，橄榄油，芝麻油或椰子油，分馏植物油和矿物油如液体石蜡。

本发明的药剂制剂的粉末配制剂和颗粒配制剂可以使用已知方法进行制备。这样的配制剂可以直接给予受试者，用于例如形成片剂、填充胶囊或通过向其中添加水性或油性载体而制备水性或油性悬浮液或溶液。每种这些配制剂可以进一步包含一种或多种分散剂或润湿剂，悬浮剂和防腐剂。其它赋形剂，如填充剂和甜味剂，调味剂或着色剂，也可以包含于这些配制剂中。

本发明的组合物也可以以水包油乳液或油包水乳液的形式制备，包装或出售。油相可以是植物油如橄榄油或花生油，矿物油如液体石蜡或这些的组合。这种组合物可以进一步包含一种或多种乳化剂如天然存在的树胶如***树胶或黄蓍树胶，天然存在的磷脂如大豆或卵磷脂磷脂，衍生于脂肪酸和己糖醇酸酐的酯或部分酯如脱水山梨醇单油酸酯，和这种部分酯与环氧乙烷的缩合产物如聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯。乳液也可以包含其它成分，包括，例如，甜味剂或调味剂。

用化学组合物浸渍或涂覆材料的方法在本领域是已知的，并且包括，但不限于将化学组合物沉积或粘合至表面上的方法，在材料(即，如采用生理可降解的材料)合成期间将化学组合物引入到材料的结构中的方法，和将水性或油性溶液或悬浮液吸入吸收性材料，采用或不采用后续干燥的方法。

正如本文中所用的组合物的“胃肠外给药”包括任何特征在于受试者组织的物理损伤并通过组织的伤口给予组合物的给药途径。肠胃外给药因此包括，但不限于，通过注射组合物给予组合物，通过外科手术切口施加组合物，通过组织穿透的非手术伤口施加组合物等。具体而言，设想肠胃外给药包括，但不限于，皮肤，皮下，腹膜内，静脉内和肌肉内，脑池内注射。

适于胃肠外给药的组合物的配制剂包含与药用载体，如无菌水或无菌等渗盐水组合的至少一种无机硝酸盐或无机亚硝酸盐。这样的配制剂可以以适于快速给药或连续给药的形式制备，包装或出售。可注射配制剂可以以单位剂量的形式，如在安瓿瓶中或在包含防腐剂的多剂量容器中进行制备，包装或出售。胃肠外给药的配制剂包括，但不限于，悬浮液，溶液，油性或水性载体中的乳液，浆膏和可植入的持续释放或生物可降解的配制剂。这样的配制剂可以进一步包含一种或多种其它成分，包括但不限于，悬浮剂，稳定剂或分散剂。在用于胃肠外给药的配制剂的一个实施方式中，至少一种无机硝酸盐或无机亚硝酸盐以干燥(即，粉末或颗粒)的形式提供而用于在胃肠外给药重构的组合物之前与合适的载体(例如，无菌无热原之水)进行重构。

组合物可以以无菌可注射的水性或油性悬浮液或溶液的形式制备，包装或出售。这种悬浮液或溶液可以根据已知技术进行配制，并除了至少一种无机硝酸盐或无机亚硝酸盐之外，可以包含其它成分如本文所描述的分散剂，润湿剂或悬浮剂。这样的无菌可注射配制剂，例如，可以使用非毒性的胃肠外可接受的稀释剂或溶剂，如水或1,3-丁二醇进行制备。其它可接受的稀释剂和溶剂包括，但不限于，林格氏(Ringer)溶液，等渗氯化钠溶液，和固定油如合成的单-或二-甘油酯。其它有用的肠胃外给药的配制剂包括以微晶形式，在脂质体制剂中或作为可生物降解的聚合物***的组分包含至少一种无机硝酸盐或无机亚硝酸盐的那些。用于缓释或植入的组合物可以包括药用的聚合物或疏水材料如乳剂，离子交换树脂，微溶性聚合物或微溶性盐。

本发明的组合物可以以适合于口腔给药的配制剂进行制备，包装或出售。这样的配制剂可以，例如，以使用常规方法制备的片剂或锭剂形式，并且可以，例如，包含0.1％～100％(w/w)的硝酸盐，其余的成分包括口腔可溶解的或可降解的组合物和可选的本文中的一种或多种其它成分。或者，适于颊部给药的配制剂可以包括包含至少一种无机硝酸盐或无机亚硝酸盐的粉末或气雾化或粒子化溶液或悬浮液。这种粉末状，气雾化或粒子化的配制剂，在分散时，优选具有约0.1～约200nm范围内的平均颗粒或液滴大小，并且可以进一步包含本文的一种或多种其它成分。

正如本文中所用的“其它成分”包括，但不限于，一种或多种的下列成分：赋形剂；表面活性剂；分散剂；惰性稀释剂；造粒剂和崩解剂；粘合剂；润滑剂；甜味剂；调味剂；着色剂；防腐剂；生理可降解的组合物如明胶；水性载体及溶剂；油性载体和溶剂；悬浮剂；分散剂或润湿剂；乳化剂，缓和剂；缓冲剂；盐；增稠剂；填料；乳化剂；抗氧化剂；抗生素；抗真菌剂；稳定剂；和药用聚合物或疏水性材料。其它可以包含于本发明药剂组合物中的“其它成分”在本领域内已知的，并描述于文献，例如，Genaro，ed.，1985，Remington'sPharmaceuticalSciences，MackPublishingCo.，Easton，Pa.中，该文献结合于本文中作为参考。

可以给予动物优选人的本发明的化合物的典型剂量范围为约0.01mg/kg动物体重～约100g/kg动物体重。给予的精确剂量将取决于任何数目的因素，包括，但不限于，动物的类型和要治疗的疾病状态类型，动物的年龄和给药途径。在一些实施方式中，化合物的剂量将在约1mg/kg动物体重～约100mg/kg动物体重范围内变化。在其它实施方式中，剂量将在约1μg/kg动物体重～约1g/kg动物体重范围内变化。化合物能够按照每天二，三，四，五，六，七或八次的频率给药或它能够以不太频繁地进行给药，如，每天一次，每周一次或多次，每两周一次或多次，每月一次或多次或更加少的频率，如每隔数月一次或多次或甚至每年一次或多次。剂量的频率对于熟练技术人员而言将是显而易见的并取决于任何数目的因素，如，但不限于，要治疗的疾病类型和严重程度，动物的类型和年龄等。

组合疗法

在一些实施方式中，包含选自由无机硝酸盐或无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的组合物可以与至少一种其它用于治疗或预防HF，如HFpEF的药剂组合。用于治疗或预防HF，如HFpEF的药剂的实例，包括，但不限于，利尿剂，血管紧张素转换酶(ACE)-抑制剂，血管紧张素II受体阻断剂(ARBs)，β-阻断剂，钙通道阻断剂，地高辛、他汀类、有机硝酸盐或有机亚硝酸酯/盐。有机硝酸盐的实例包括但不限于硝酸二烷基咪唑鎓(dialkylimidazoliumnitrate)和硝酸胍。有机亚硝酸盐/酯的实例包括，但不限于，乙基亚硝酸酯/盐，丙基亚硝酸酯/盐，丁基亚硝酸酯/盐，戊基亚硝酸酯/盐和辛基亚硝酸酯/盐。

在一个实施方式中，其它治疗药剂与包含选自由无机硝酸盐或无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的组合物组合而给予受试者，而使产生协同治疗作用。“协同治疗作用”是指由两种治疗药剂组合产生的，并超过另外由各种单独给药每种治疗药剂产生的大于加和的治疗效应。因此，可以使用更低剂量的一种或两种治疗药剂治疗或预防HF，如HFpEF，从而导致治疗效果提高而副作用降低。在一些实施方式中，药剂是磷酸二酯酶5(PED5)抑制剂。PED5抑配制剂的实例包括，但不限于，西地那非，伐地那非和他达拉非。

实验实施例

本发明参照以下实验实施例进行进一步详细描述。这些实施例提供仅仅用于举例说明，而除非另外指出，并非预想是限制性的。因此，本发明不应该以任何方式解释为限于以下实施例，正好相反，应该解释为包含由于本文提供的教导而变得显而易见的任何和所有变体。

无需进一步说明，据信本领域的普通技术人员使用前述的说明和下面说明性实施例而能够制备和利用本发明的化合物和实践权利要求所要求保护的方法。以下工作实施例，因此，专门指出本发明的优选的实施方式，而不应该以任何方式解释为限制本公开的其余部分。

实施例1：无机硝酸盐在射血分数正常性心力衰竭(HF)中的 用途

本文中描述的是靶向有可能在HFpEF的运动耐受性方面发挥作用的特异性机制的膳食干预。这是新的膳食治疗(无机硝酸盐补充)用于关键外周机制靶(例如，动脉血管扩张储备，肌肉O₂输送和利用，动脉波反射和动脉僵硬)的改变，这对于HFpEF患者的短期症状改善和长期“疾病缓解”的影响都具有潜在作用。这种膳食疗法代表了一种新的治疗模式，并能够为HFpEF改善症状、运动能力和结果提供容易实现的方法。

本文描述的是一项研究，其中将22个患有HFpEF的受试者按照双盲交叉设计随机化，并分配140mL以下单剂量：(a)富含硝酸盐的浓缩甜菜根汁(NO₃ ^- _RICHBR，含12.9mmolNO₃ ^-)，或；(b)另外相同的贫硝酸盐的浓缩甜菜根汁(NO₃ ^- _DEPBR，包含<0.01mmolNO₃ ^-)。检测了采用NO₃ ^- _RICHBR的补充对以下端点的改进：运动性能，运动全身血管扩张储备和，更具体而言，工作肌肉中的血管扩张反应，肌肉氧化能力，动脉波反射和大动脉僵硬。

收缩晚期负荷促进舒张功能不全

人的左心室(LV)收缩壁应力的时间过程(Chirinosetal.，2009，Circulation119:2798-2807)，允许收缩早期和晚期壁应力的分离，分别定量为在第一和第二半射血中时间分辨的应力曲线(应力-时间积分，STI)之下的面积。使用这种技术，心肌负荷顺序(早期对后期应力)和舒张功能之间的关系在1,215位参加Asklepios研究(Chirinosetal.，2009，Circulation119:2798-2807；Chirinosetal.，2009，Hypertension54:558-566；Chirinosetal.，2010，Hypertension56:91-98)的中年成人中进行评价。在对混杂因素调整后，收缩晚期负荷，相比于早期收缩负荷(其在二尖瓣环松弛速度中预测46％的可变性的多变量模型中与更高的松弛速度相关，表1)，与更低的二尖瓣环速度(LV松弛指数)相关。因此获得的证据表明人中负荷顺序作为LV松弛的独立关联。

表1：1,215位Asklepios研究中的成年人中于多变量模型(R²＝0.46)中作为早期二尖瓣环松弛速度(EarlyDiastolicMitralAnnularVelocity)的预报因子的早期和后期收缩应力

波反射的幅度强烈预示HF发生。基于上面提出的数据，并且不希望受限于任何具体理论的束缚，假设波反射独立预测在一般人群中的新发HF危险。主动脉压力波形使用施加于动脉粥样硬化的多种族研究(MESA)中无临床上明显的心血管疾病的5934个参与者采用动脉张力计法在基线上记录的径向波形的传递函数导出。中央压力波形如前用于近似反射幅度大小(Westerhofetal.，1972，Cardiovasc.Res.6:648-656)。在随访的7.61年期间(和在血压，年龄，性别，身体质量指数，糖尿病，种族，抗高血压药剂的使用，总的和HDL-胆固醇，目前吸烟，心率和肾小球滤过率进行调整之后)，反射幅度强烈预测HF(危险比率/10％-增加＝2.69；95％CI＝1.79～4.04；P<0.0001)，是比血压及以上列出的其它可改变的危险因素更强的预报因子。在对其它HF预报因子进行调整的模型中，相比于具有低反射幅度的非高血压受试者，具有低反射幅度的非高血压受试者，高反射幅度的非高血压受试者和高反射幅度的高血压受试者的风险比分别为1.81(95％CI＝0.85～3.86)，2.16(95％CI＝1.04～4.43)和3.98(95％CI＝1.96～8.05)(图1)。不希望受任何具体理论的束缚，这些通过仔细随访和事件判决的大型社区基样品的研究结果，与动脉波反射是HF的一种新的强风险因子的解释是一致的。

膳食硝酸盐降低波反射

由于NO-介导的中型肌动脉导管的血管舒张(NicholsandVlachopolous，2011，McDonald’sbloodflowinarteries.theoretical，experimentalandclinicalprinciples，HodderArnold；O-RourkeandHashimoto，2007，J.Am.CollegeCardiol.50:1-13；Yaginumaetal.，1986，Cardiovasc.Res.20:153-160；Kellyetal.，1990，Eur.HeartJ.11:138-144；Latsonetal.，1988，Circ.Res.62:884-890)能够显著降低波反射，并且波反射导致心肌功能失调，设计实验以靶标使用无机硝酸盐/亚硝酸盐的患有HFpEF的患者中的波反射。不希望受任何理论约束，无机硝酸盐/亚硝酸盐可以导致中间肌性动脉中NO释放，这会降低波反射和/或可能增加通过微血管扩张的远端血流量，这会增加在更近端血管的剪切应力，导致流量介导的扩张。这些作用会导致降低的波反射。

方法

22名患有HFpEF的受试者分配140mL/d的以下任意之一长达3天：(a)富含硝酸盐的浓缩甜菜根汁(NO₃ ^- _RICHBR，含12.9mmol的NO₃ ^-)，或；(b)其它相同的贫硝酸盐甜菜根汁(NO₃ ^- _DEPLBR，含<0.01mmol的NO₃ ^-)。研究是双盲交叉控制的。干预的顺序是随机的，每个补充周期用7天清除期隔开。交叉设计使每个受试者都接受两种治疗，降低个体间的反应可变性。NO₃ ^- _RICHBR和NO₃ ^-由JamesWhiteDrinksLtd.,(Ipswich，UnitedKingdom，U.K.)提供。NO₃ ^- _RICHBR和NO₃ ^- _DEPL由研究药剂的药剂师分散。所有的研究过程都是双盲的。受试者在指示之下保持稳定的蔬菜摄入量并在整个补充期间避免抗菌漱口。对照汁液的硝酸盐清除使用选择性去除硝酸盐的离子交换树脂完成(Lansleyetal.，2011，J.Appl.Physiol.110:591-600)，导致汁除此之外外观，气味，味道和质地都相似，允许对膳食硝酸盐是否归因推测作用进行评估，并执行双盲实验设计。血浆硝酸盐/亚硝酸盐的干预有关变化进行了说明。不希望受任何具体理论的束缚，假设NO₃ ^- _RICHBR补充改善了运动性能，运动全身血管扩张储备和工作肌肉的血管扩张反应，肌肉氧化能力，以及动脉僵硬和波反射。

研究人群

纳入标准

22名成年人参加。这些成年人患有HFpEF和纽约心脏协会II-IV级症状，LV射血分数>50％，稳定药剂治疗(抗高血压药或利尿剂无添加，删除或剂量改变长达至少30天)，以及显著舒张功能失调的迹象，因此满足HFpEF诊断的超声心动描记术的欧洲协会(EuropeanSocietyofEchocardiography)标准(Paulusetal.，2007，Eur.HeartJ.28:2539-2550)。

排除标准

具有任何以下标准的成年人都被排除：心房纤维性颤动或扑动(flutter)，妨碍受试者运动的神经肌肉或矫形状态，超轻度心脏瓣膜病，肥厚性、浸润性或炎性心肌病，心包疾病，原发性肺动脉动脉病，60天内的急性冠脉综合征或冠状动脉血运重建，超轻度阻塞性肺疾病，1年内压力测试的非血运重建的显著心肌缺血，甜菜根过敏，采用磷酸二酯酶抑制剂或禁忌症候或不愿进行MRI研究。

端点

NO₃ ^- _RICHBR或NO₃ ^- _DEPLBR的首剂量之前和采用NO₃ ^- _RICHBR或NO₃ ^- _DEPLBR的双盲3-天补充期阶段结束时测定端点。

运动能力

运动能力采用仰卧位蹬自行车期间心肺压力测试测定。峰值耗氧量(VO₂)和[峰值外能量输出/峰值VO₂]比率通过最大努力仰卧循环运动测试期间的呼出气分析进行评鉴接着在低于换气阈值下实施恒定强度亚极量运动方案实现稳定状态的氧消耗。呼出气分析使用ParvomedicsTrueOne设备完成。气体计量和流量传感器校准在每次测试之前实施。β-阻断剂在测试之前停止至少48小时。

全身动脉血流动力学

高保真米勒压平眼压计(high-fidelityMillarapplanationtonometer)(NicholsandVlachopolous，2011，Mcdonald’sbloodflowinarteries.theoretical，experimentalandclinicalprinciples，HodderArnold)用于记录颈动脉压力波形，这采用肱舒张压和用验证示波装置测定的平均压力进行校正(Segersetal.，2007，Hypertension49:1248-1255)。采用VividE9设备进行多普勒超声心动图。LV流出道血流速度的脉冲波多普勒探察在休息和运动高峰期进行。流量通过LV流出道流速乘以3D超声心动术测定的LV流出道截面积进行计算(ChirinosandSegers，2010，Hypertension56:563-570；ChirinosandSegers，2010，Hypertension56:555-562)。反射幅度使用采用中心压力和流量波形的线性波分离分析进行计算(ChirinosandSegers，2010，Hypertension56:563-570；ChirinosandSegers，2010，Hypertension56:555-562；Segersetal.，2007，Hypertension49:1248-1255；Westerhofetal.，1972，Cardiovasc.Res.6:648-656)。颈动脉-股动脉脉冲波速度是采用动脉张力术进行测定(Sphygmocordevice，AtcorMedical)。还评估了增强指数(其是第二与第一收缩峰的比率)对于运动血流动力学，峰值运动下的动脉压使用验证光体积描记器(Finapressdevice)进行测定。全身血管阻力(SVR)计算为[平均动脉压力/心输出量]。运动血管扩张储备计算为休息SVR减去运动SVR。

肌肉灌注和能量学

MRI研究在休息时和标准化跖屈运动测试后立即使用配备28-通道射频线圈的7T扫描仪进行。动脉自旋标记(Robertsetal.，1994，Proc.Natl.Acad.Sci.USA91:33-37)用于肌肉灌注成像。³¹P磁共振波谱用于研究运动之后的磷酸肌酸(PCr)恢复动力学。细胞内pH由无机磷酸盐(Pi)和PCr之间的化学位移差计算(MoonandRichards，1973，J.Biol.Chem.248:7276-7278)，这种化学位移差用于使用肌酸激酶(CK)平衡常数计算游离胞质ADP(Kempetal.，2001，J.Physiol.535:910-928)。pH和磷代谢物浓度的变化用于计算通过先前描述的CK反应，氧化性磷酸化和无氧糖酵解的氧化能力和ATP合成(Kempetal.，1994，Magn.Reson.Q.10:43-63；Trenelletal.，2006，MuscleNerve33:524-531；Conleyetal.，1997，Am.J.Physiol.273:C306-315；Layecetal.，2009，Eur.J.Appl.Physiol.106:229-242)。评价了PCr的恢复动力学和肌肉灌注之间的相关性。骨骼肌的磷酸肌酸含量使用化学交换饱和转移方法进行成像(Caietal.，2012，Nat.Med.18:302-306；Singhetal.，2011，Int.Soc.Mag.Res.Med.19:4619)。灌注和PCr恢复动力学之间的相关性使用体素方面的相关分析进行评价。

硝酸盐和亚硝酸盐水平测定

将静脉血液样品吸入到肝素锂管中，其具有水平非常低的硝酸盐/亚硝酸盐。样品以4000rpm离心10分钟，3分钟内收集。提取血浆并立即冷冻于-80℃下用于以后的分析。室温解冻后，血浆样品如前最初使用冷乙醇沉淀而脱蛋白质(Lansleyetal.，2011，J.Appl.Physiol.110:591-600)。脱蛋白血浆的硝酸盐/亚硝酸盐含量使用Ionics/Sievers一氧化氮分析仪(NOA280)采用改性检测化学发光技术进行测定，如别处所描述的(参见Munsonetal.，2005，Am.J.Respir.CellMol.Biol.33:582-588)，并随后通过Allen等对于人血浆(Allenetal.，2010，FreeRadic.Biol.Med.49:1138-1144)进行调节。

统计功效和方法

22名受试者随机分到2个序列之一中，其每个由2个周期(AB/BA设计)构成。研究具有80％的功效检测0.549或更大的干预引起的端点变化的标准差，单边α＝0.05。对于推理分析，对于具有连续数据的的交叉的一般模型遵循：

Y_i(j)k＝α_ik+s_i(j)+ε_i(j)k，

其中，Y_i(j)k是观察到的结果，s_i(j)是由于序列i，j＝1,2，...22的受试者j的效果，α_ik是由序列i和周期k指数化的结果而ε_i(j)k是具有预期值0和方差γ²的随机“误差”项。由此可见，α_ik＝E[Y_i(j)k]-E[s_i(j)]。围绕α_ik的兴趣中心能够表达于治疗，周期和可能夹带的效果的项中：α_ik＝μ+τ_d(i,k)+π_k+λ_d(i,k-1)，其中τ_d(i,k)是序列I周期k内的治疗效果，π_k是周期k的效果，+λ_d(i,k-1)是序列i的周期(k-1)由治疗产生的附带效果，其将会改变序列i周期k内的治疗效果。

所用的统计测试基于结果的分布。对于正态分布，对每个序列计算由第一个周期与第二个周期的差异平均，允许计算这些两个平均值的差异作为治疗效果的良好无偏估计。周期效果利用这些差弱化。(未配对)t-检验能够用于评价这些差别。对于每一个序列，计算两个周期的差异平均，容许计算这些两个平均值之和作为周期效果差异的良好无偏估计。(未配对)t-检验能够通过一个序列的差异乘以-1而评价效果，而使两个平均差异基本求和。在非正态分布的治疗结果的情况下，利用非参数方法。归纳的线性混合模型用于评价回归框架内的研究结果，并按需要对共变量进行额外调整。

实施例2：亚硝酸钠在射血分数正常性心力衰竭(HF)中的用途

这里描述的是使用亚硝酸钠，在靶向有可能在HFpEF的运动耐受性方面发挥作用的特异性机制的药剂干预。这是用于关键外周机制靶(例如，动脉血管扩张储备，肌肉O₂输送和利用，动脉波反射和动脉僵硬)的改性的新的药剂治疗，这对于HFpEF患者的短期症状改善和长期“疾病缓解”的影响都具有潜在作用。这种疗法代表了一种新的治疗模式，并能够对HFpEF的症状，运动能力和疗效改善提供容易实现的方法。

这里描述的是其中76名患有HFpEF的受试者随机化于双盲交叉设计中，并分配：(1)亚硝酸钠口服给药4～6周，或；(b)除此之外的相同安慰剂。干预的序列随机化，双盲，并通过7-天清除期分隔开。对以下端点的改进检测了采用亚硝酸钠的补充：运动能力，运动全身血管扩张储备和，更具体而言，工作肌肉中的血管扩张剂反应，肌肉氧化能力，动脉波反射，大动脉僵硬，生命质量。运动能力，运动全身血管扩张储备和，更具体而言，工作肌肉中的血管扩张剂反应，肌肉氧化能力，动脉波反射，大动脉僵硬都使用类似于实施例1中描述的方法进行评价。生命质量使用堪萨斯城心肌病问卷调查(KansasCityCardiomyopathyQuestionnaire)(KCCQ)(GreenCP,PorterCB,BresnahanDR,SpertusJA.DevelopmentandevaluationoftheKansascitycardiomyopathyquestionnaire:Anewhealthstatusmeasureforheartfailure.JournaloftheAmericanCollegeofCardiology.2000；35:1245-1255)进行评价。

实施例3：硝酸钾在射血分数正常性心力衰竭(HF)中的用途

这里描述的是使用硝酸钾，靶向有可能在HFpEF的运动耐受性方面发挥作用的特异性机制的药剂干预。这是用于关键外周机制靶(例如，动脉血管扩张储备，肌肉O₂输送和利用，动脉波反射和动脉僵硬)的改性的新的药剂治疗，这对于HFpEF患者的短期症状改善和长期“疾病改性”的影响都具有潜在作用。这种疗法代表了一种新的治疗模式，并能够对HFpEF的症状，运动能力和疗效改善提供容易实现的方法。

这里描述的是其中HFpEF受试者随机化于双盲交叉设计中，并分配：(1)硝酸钾口服给药4～6周，或；(b)除此之外的相同安慰剂。干预的序列随机化，双盲，并通过7-天清除期分隔开。采用硝酸钾的补充对以下端点的改进进行检测：运动能力，运动全身血管扩张储备和，更具体而言，工作肌肉中的血管扩张剂反应，肌肉氧化能力，动脉波反射，大动脉僵硬，生命质量。运动能力，运动全身血管扩张剂储备和，更具体而言，工作肌肉中的血管扩张剂反应，肌肉氧化能力，动脉波反射，大动脉僵硬都使用类似于实施例1中描述的方法进行评价。生命质量使用堪萨斯城心肌病问卷调查(KansasCityCardiomyopathyQuestionnaire)(KCCQ)(GreenCP,PorterCB,BresnahanDR,SpertusJA.DevelopmentandevaluationoftheKansascitycardiomyopathyquestionnaire:Anewhealthstatusmeasureforheartfailure.JournaloftheAmericanCollegeofCardiology.2000；35:1245-1255)进行评价。

本文引用的每个专利，专利申请和出版物的公开内容以其全部内容结合于本文中作为参考。虽然本发明已经参照具体实施方式进行了公开，但显而易见的是，本发明的其它实施方式和变型可以由本领域技术人员在不脱离本发明的真实精神和范围的情况下设计出来。附加的权利要求意在解释为涵盖所有这样的实施方式和等同的变化。

Claims (52)

1.一种在需要其的受试者中治疗或预防心力衰竭的方法，所述方法包括给予所述受试者治疗有效量的包含选自由无机硝酸盐和无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的组合物。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述心力衰竭是射血分数正常性心力衰竭(HFpEF)。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述组合物是包含至少一部分至少一种含硝酸盐的蔬菜的液体。

4.根据权利要求3所述的方法，其中，所述含硝酸盐的蔬菜是甜菜根。

5.根据权利要求1所述的方法，其中，包含选自由无机硝酸盐和无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的所述组合物的治疗有效量为约0.001mg/kg～约5mg/kg。

6.根据权利要求1所述的方法，其中，结合用于治疗或预防HFpEF的至少一种其它药剂给予包含选自由无机硝酸盐和无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的所述组合物。

7.根据权利要求6所述的方法，其中，所述至少一种其它药剂选自由利尿剂、血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂、血管紧张素II受体阻断剂(ARB)、β-阻断剂、钙通道阻断剂、他汀类、有机硝酸盐和有机亚硝酸酯/盐组成的组中。

8.根据权利要求1所述的方法，其中，所述受试者是人。

9.一种改善患有心力衰竭的受试者中运动耐力的方法，所述方法包括给予所述受试者治疗有效量的包含选自由无机硝酸盐或无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的组合物。

10.根据权利要求9所述的方法，其中，所述心力衰竭是射血分数正常性心力衰竭(HFpEF)。

11.根据权利要求9所述的方法，其中，所述组合物是包含至少一部分至少一种含硝酸盐的蔬菜的液体。

12.根据权利要求11所述的方法，其中，所述含硝酸盐的蔬菜是甜菜根。

13.根据权利要求9所述的方法，其中，所述受试者是人。

14.一种降低患有心力衰竭的受试者中大动脉僵硬的方法，所述方法包括给予所述受试者治疗有效量的包含选自由无机硝酸盐或无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的组合物。

15.根据权利要求14所述的方法，其中，所述心力衰竭是射血分数正常性心力衰竭(HFpEF)。

16.根据权利要求14所述的方法，其中，所述组合物是包含至少一部分至少一种含硝酸盐的蔬菜的液体。

17.根据权利要求16所述的方法，其中，所述至少一部分至少一种含硝酸盐的蔬菜是甜菜根。

18.根据权利要求14所述的方法，其中，所述受试者是人。

19.一种降低患有心力衰竭的受试者中动脉波反射的方法，所述方法包括给予所述受试者治疗有效量的包含选自由无机硝酸盐或无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的组合物。

20.根据权利要求19所述的方法，其中，所述心力衰竭是射血分数正常性心力衰竭(HFpEF)。

21.根据权利要求19所述的方法，其中，包含选自由无机硝酸盐或无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的所述组合物是包含至少一部分至少一种含硝酸盐的蔬菜的液体。

22.根据权利要求21所述的方法，其中，所述含硝酸盐的蔬菜是甜菜根。

23.根据权利要求19所述的方法，其中，所述受试者是人。

24.一种提高患有心力衰竭的受试者血浆中硝酸盐浓度的方法，所述方法包括给予所述受试者治疗有效量的包含选自由无机硝酸盐或无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的组合物。

25.根据权利要求24所述的方法，其中，所述心力衰竭是射血分数正常性心力衰竭(HFpEF)。

26.根据权利要求24所述的方法，其中，包含选自由无机硝酸盐或无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的所述组合物是包含至少一部分至少一种含硝酸盐的蔬菜的液体。

27.根据权利要求26所述的方法，其中，所述含硝酸盐的蔬菜是甜菜根。

28.根据权利要求24所述的方法，其中，所述受试者是人。

29.一种提高患有心力衰竭的受试者血浆中亚硝酸盐浓度的方法，所述方法包括给予所述受试者治疗有效量的包含选自由无机硝酸盐或无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的组合物。

30.根据权利要求29所述的方法，其中，所述心力衰竭是射血分数正常性心力衰竭(HFpEF)。

31.根据权利要求29所述的方法，其中，包含选自由无机硝酸盐或无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的所述组合物是包含至少一部分至少一种含硝酸盐的蔬菜的液体。

32.根据权利要求31所述的方法，其中，所述含硝酸盐的蔬菜是甜菜根。

33.根据权利要求29所述的方法，其中，所述受试者是人。

34.一种改善患有心力衰竭的受试者中对运动血管扩张反应的方法，所述方法包括给予所述受试者治疗有效量的包含选自由无机硝酸盐或无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的组合物。

35.根据权利要求34所述的方法，其中，所述心力衰竭是射血分数正常性心力衰竭(HFpEF)。

36.根据权利要求34所述的方法，其中，包含选自由无机硝酸盐或无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的所述组合物是包含至少一部分至少一种含硝酸盐的蔬菜的液体。

37.根据权利要求36所述的方法，其中，所述含硝酸盐的蔬菜是甜菜根。

38.根据权利要求34所述的方法，其中，所述受试者是人。

39.一种提高患有心力衰竭的受试者中运动期间肌肉血流量的方法，所述方法包括给予所述受试者治疗有效量的包含选自由无机硝酸盐或无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的组合物。

40.根据权利要求39所述的方法，其中，所述心力衰竭是射血分数正常性心力衰竭(HFpEF)。

41.根据权利要求39所述的方法，其中，包含选自由无机硝酸盐或无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的所述组合物是包含至少一部分至少一种含硝酸盐的蔬菜的液体。

42.根据权利要求41所述的方法，其中，所述含硝酸盐的蔬菜是甜菜根。

43.根据权利要求39所述的方法，其中，所述受试者是人。

44.一种提高患有心力衰竭的受试者中肌肉氧化能力的方法，所述方法包括给予所述受试者治疗有效量的包含选自由无机硝酸盐或无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的组合物。

45.根据权利要求44所述的方法，其中，所述心力衰竭是射血分数正常性心力衰竭(HFpEF)。

46.根据权利要求44所述的方法，其中，包含选自由无机硝酸盐或无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的所述组合物是包含至少一部分至少一种含硝酸盐的蔬菜的液体。

47.根据权利要求46所述的方法，其中，所述含硝酸盐的蔬菜是甜菜根。

48.根据权利要求44所述的方法，其中，所述受试者是人。

49.一种组合物，包含选自由无机硝酸盐或无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种，用于在需要其的受试者中治疗或预防心力衰竭。

50.根据权利要求49所述的组合物，其中，所述心力衰竭是射血分数正常性心力衰竭(HFpEF)。

51.根据权利要求49所述的组合物，其中，包含选自由无机硝酸盐或无机亚硝酸盐组成的组中的至少一种的所述组合物是包含至少一部分至少一种含硝酸盐的蔬菜的液体。

52.根据权利要求49所述的组合物，其中，所述含硝酸盐的蔬菜是甜菜根。