CN1050359C

CN1050359C - 绣线菊二萜生物碱,其制备方法和用途

Info

Publication number: CN1050359C
Application number: CN97112872A
Authority: CN
Inventors: 郝小江; 聂晶磊; 洪鑫; 陈植和; 沈志强; 李玲
Original assignee: KUNMING MEDICAL COLLEGE; Kunming Institute of Botany of CAS
Current assignee: KUNMING MEDICAL COLLEGE; Kunming Institute of Botany of CAS
Priority date: 1997-07-23
Filing date: 1997-07-23
Publication date: 2000-03-15
Anticipated expiration: 2017-07-23
Also published as: CN1178219A

Abstract

提供ATISINE型绣线菊二萜生物碱Q、T、U和P四个化合物，制备该四个化合物的方法，以及它们作为PAF拮抗剂、花生四烯酸拮抗剂的应用，和它们在制备治疗心脑缺血、炎症、过敏、哮喘疾病药物中的应用。

Description

绣线菊二萜生物碱，其制备方法和用途

本发明涉及通式(I)所示的ATISINE型绣线菊二萜生物碱，其制备方法，以及作为PAF拮抗剂、花生四烯酸拮抗剂的应用，以及在制备治疗心脑缺血、炎症、过敏、哮喘疾病药物中的应用。

现有技术中未见有从粉花绣线菊(Spiraea japonica)植物中分离的结构特征如通式(I)的生物碱的报道。

本发明的目的在于提供通式(I)所示的ATISINE型二萜生物碱，制备通式(I)化合物的方法，以及通式(I)所示的生物碱作为PAF拮抗剂、花生四烯酸拮抗剂的应用，和在制备治疗心脑缺血、炎症、过敏、哮喘疾病药物中的应用。

本发明提供了如下通式(I)所示的ATISINE型二萜生物碱：

式中R₁代表甲基或羟基，R₂代表甲基或羟基，R₃代表氢或乙酰基，19位碳为R构型或S构型。

本发明同时提供了制备通式(I)所示化合物的方法：取粉花绣线菊(Speraeajaponica)的干根粉末以75-95％乙醇冷浸5-7天，经减压浓缩除去乙醇得浸膏，用2-4％盐酸溶解，酸液分别用石油醚-苯(1∶1)萃取3次以脱脂，再用NaOH水溶液碱化至PH＝11左右，用氯仿萃取3次，萃取液经水洗至中性，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得总生物碱部分，然后经硅胶H减压短柱层析，分别以不同比例的石油醚-丙酮-二乙胺梯度洗脱，即得到通式(I)所示各生物碱。

本发明还提供了通式(I)生物碱在制备抗炎药物中的应用；在制备抗过敏药物中的应用；在制备抗哮喘药物中的应用；在制备治疗心脑缺血病药物中的应用，以及用通式(I)生物碱作为PAF拮抗剂和花生四烯酸拮抗剂。

下面用本发明通式(I)所示的ATISINE型二萜生物碱的药理实验结果来说明本发明的有益效果：

实验动物：健康家兔，2-3公斤，雌雄均用。

药品及试剂：本发明的通式(I)生物碱以蒸馏水溶解并调PH至6.5。

血小板活化因子(Platelet activating factor)和花生四烯酸(Arachidonicacid)均系Sigma公司产品，前者溶于含0.25％BSA的tris-NaCl缓冲液中，PH7.6；后者溶于无水乙醇中，使用前以1％Na₂CO₃稀释成0.5％的工作液，二磷酸腺甘溶于磷酸盐缓冲液中。

方法：按常规方法制备富血小板血浆(PRP)和贫血小板血浆(PPP)，实验过程中，PRP中的血小板数控制在5X10⁸cell/L。然后进行血小板凝聚性测定。

1、体外实验：按Born氏比浊法原理采用BS-631型血小板凝聚仪进行，药物与血小板作用5分钟后，加入诱导剂测试并记录最大凝聚百分率，以【(对照管凝聚％-样品管凝聚％)/对照管凝聚％】X100％计算血小板凝聚抑制率。

体外实验表明，绣线菊碱Q明显抑制AA诱导的血小板凝聚，并呈量-效关系，IC₅₀为18.7μmol/L，而对PAF和ADP诱导的血小板凝聚无明显抑制作用，绣线菊碱T、U、V显著抑制PAF诱导的血小板凝聚，有浓度依赖关系，IC₅₀分别为57.8μmol/L，55.4μmol/L和52.2μmol/L，但不抑制AA或ADP诱导的血小板凝聚。

2、体内实验：兔分两组，一组经耳缘注入生物碱(均2.0mg/kg)，另一组注入等体积的蒸馏水，给药前取血一次，给药后分别于不同时间点自颈动脉取血制备PRP和PPP，观察体内给药，药物对PAF、AA和ADP诱导的血小板凝聚的影响，方法同前。

体内实验表明，绣线菊碱Q静脉给药后(2mg/kg)，主要抑制AA诱导的血小板凝聚，其作用特点是：给药后10分钟即显示很强的抑制作用(抑制率：100％)，给药90分钟的抑制率仍高达81.3％，至180分钟时药效基本消失(表1)。

绣线菊碱T或U或P(2mg/kg)在体内不仅抑制PAF诱导的血小板凝聚，还显著抑制AA诱导的凝聚，其作用表现为：对PAF诱导的凝聚，于给药后2小时显示较强的抑制作用(抑制率均为65.0％以上，P＜0.05vs 0min)，至4小时仍有明显抑制作用；对AA诱导的凝聚，于给药后1小时即具有很强的抑制作用(抑制率均为99％以上)，4小时的抑制率依然高达75.0％以上。作为说明，仅用表2列出绣线菊碱T对AAPAF和ADP诱导的血小板凝聚的抑制作用。表1.生物碱Q对AA，PAF和ADP诱导的血小板凝聚的抑制作用

Table1.Effects of Spiramine Q(2mg/kg，i.v.)on the Platelet aggregationinduced by AA，PAF or ADP.n＝2rabbits，x±s，P^*＜0.05

Time(min)/Inducer AA PAF ADP

Aggregant rate/％

0 75.0±1.4 67.5±0.7 69.0±6.4

10 0.0±0.0^* 60.5±9.2 62.5±3.1

30 0.0±0.0^* 67.0±1.4 64.5±4.7

60 0.0±0.0^* 65.0±1.4 66.4±2.7

90 14.0±9.8^* 65.0±0.0 61.0±3.5

120 62.0±11.3 62.5±4.9 64.0±2.3

180 71.5±2.1 66.3±2.3 66.6±1.4表2.绣线菊碱T对AA，PAF和ADP诱导的血小板凝聚的抑制作用Table2.Effects of Spiramine T(2mg/kg，i.v.)on the Platelet Aggregation inducedby AA，PAF or ADP.n＝5rabbits，x±s，P^*＜0.05

Time/Inducer AA PAF ADP

Aggregant rate/％

0min 61.6±2.1 57.2±4.1 57.2±4.1

15min 61.4±1.1 52.8±1.9 51.0±5.5

1h 0.6±0.8^* 47.8±1.9 50.6±6.3

2h 0.0±0.0^* 19.2±2.8^* 47.0±8.1

3h 2.4±2.6^* 13.4±7.9^* 47.8±9.4

4h 13.8±8.6^* 10.4±6.1^* 50.8±8.3

含有本发明通式(I)生物碱的药物可以用下述方法制成：将所述生物碱转化为适宜的给药剂型，在必要时使用惰性辅助剂和赋型剂即可制成药物。应用上述方法制成的药物组合物可以是油膏、凝胶、糊剂、霜剂、喷雾剂、悬浮剂、活性成分在水或非水稀释剂中的溶液或乳剂、糖浆、颗粒或粉剂。

应用本发明通式(I)生物碱作为药物，可以采用的剂型是惯用的盖伦给药剂型，例如：膏药、片剂、丸剂、胶囊剂、栓剂、乳剂、输入液和注射液，这些制剂可按众所周知的方法，使用传统的添加剂和赋型剂制得，由此制得的药物根据需要可以按局部、非肠道、口服等途径给药。

上述药用组合物或药物的生产可用在该技术中的任何已知方法进行，例如将一种或几种活性成分与一种或几种稀释剂混合形成药用组合物，再将组合物制成药物。本发明通式(I)生物碱作为临床药品的剂量，最好是在以1至5毫克/公斤的范围之内。

下面用实施例来进一步说明本发明的实质内容，但本发明的内容并不局限于此：

实施例一：

采粉花绣线菊(Spiraea japonica)样品，用其干根粉末5公斤，以95％乙醇冷浸一周，经减压浓缩除去乙醇得浸膏850克，将其用3％盐酸溶解，酸液分别用石油醚-苯(1∶1)萃取3次以脱脂，再用NaOH水溶液碱化至PH＝11左右后，用氯仿萃取3次，氯仿萃取液经水洗至中性，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得总生物碱部分35克，总碱经硅胶H减压短柱层析，分别以不同比例的石油醚-丙酮-二乙胺梯度洗脱，分别得到绣线菊碱P(V)230mg，Q(I)250mg，T(III)1200mg，和U(II)1000mg。

实施例二：

采粉花绣线菊(Spiraea japonica)样品，用其干根粉末5公斤，以75％乙醇冷浸一周，经减压浓缩除去乙醇得浸膏800克，将其用2％盐酸溶解，酸液分别用石油醚-苯(1∶1)萃取3次以脱脂，再用NaOH水溶液碱化至PH＝11左右后，用氯仿萃取3次，氯仿萃取液经水洗至中性，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得总生物碱部分32克，总碱经硅胶H减压短柱层析，分别以不同比例的石油醚-丙酮-二乙胺梯度洗脱，分别得到绣线菊碱P(V)210mg，Q(I)220mg，T(III)1000mg，和U(II)900mg。

实施例三：

采粉花绣线菊(Spiraea japonica)样品，用其干根粉末5公斤，以80％乙醇冷浸一周，经减压浓缩除去乙醇得浸膏820克，将其用4％盐酸溶解，酸液分别用石油醚-苯(1∶1)萃取3次以脱脂，再用NaOH水溶液碱化至PH＝11左右后，用氯仿萃取3次，氯仿萃取液经水洗至中性，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得总生物碱部分35克，总碱经硅胶H减压短柱层析，分别以不同比例的石油醚-丙酮-二乙胺梯度洗脱，分别得到绣线菊碱P(V)220mg，Q(I)210mg，T(III)1100mg，和U(II)800mg。

实施例四：

采粉花绣线菊(Spiraea japonica)样品，用其干根粉末5公斤，以90％乙醇冷浸一周，经减压浓缩除去乙醇得浸膏840克，将其用3％盐酸溶解，酸液分别用石油醚-苯(1∶1)萃取3次以脱脂，再用NaOH水溶液碱化至PH＝11左右后，用氯仿萃取3次，氯仿萃取液经水洗至中性，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得总生物碱部分35克，总碱经硅胶H减压短柱层析，分别以不同比例的石油醚-丙酮-二乙胺梯度洗脱，分别得到绣线菊碱P(V)220mg，Q(I)220mg，T(III)1000mg，和U(II)1000mg。

用上述方法得到的四个化合物的理化性质如下：

1.绣线菊碱Q(spiramine Q)(II)：

C₂₂H₃₃O₄N，无色针晶(石油醚-丙酮-二乙胺)，mp195-197℃，[α]_D-70°(c0.84，CHCl₃)；元素分析：C，69.78；H，8.90.计算值：C，70.40；H，8.80；EIMS m/z：375(M)，319(20)，288(10)，180(30)；IR(KBr)v：3420，1520，1200，1120cm^-1；¹H NMRδ(ppm，CDCl₃)：4.56(1H，br.m，H-15β)，4.52(1H，br.s，H-20)，3.84(1H，br.S，H-19)，3.60，3.18(各1H，m，H2-22)，3.30(1H，d，J＝5Hz，H-7β)，3.46，3.28(各1H，m，H2--21)，1.28(3H，s，H3-17)，1.15(3H，s，H3-18)；¹³C NMRδ(ppm，CDCl₃)：40.9(C-1)，22.7(C-2)，47.3(C-3)，35.2(C-4)，42.2(C-5)，27.3(C-6)，69.4(C-7)，36.3(C-8)，40.8(C-9)，35.6(C-10)，29.1(C-11)，55.9(C-12)，23.5(C-13)，20.3(C-14)，73.9(C-15)，73.9(C-16)，33.1(C-17)，22.7(C-18)，95.1(C-19)，85.5(C-20)，51.0(C-21)，63.1(C-22).

2.绣线菊碱T(spiramine T)(III)：

C₂₄H₃₅O₅N，无色针晶(石油醚-丙酮-二乙胺)，mp183-185℃，[α]_D-151.6°(c0.67，CHCl₃)，高分辨质谱：417.2538(M)；EIMS m/z：417(M，100)，400(10)，389(17)，374(75)，105(70)；IR(KBr)v：3520，2960，1720，1250，1090，920cm^-1；¹H NMRδ(ppm，C₅D₅N)：5.26(1H，m，H-15β)，4.77(1H，br.s，H-20)，4.05(1H，br.s，H-19)，3.82，3.79(各1H，m，H2-22)，3.55(1H，d，J＝4.6Hz，H-7β)，2.99，2.96(各1H，m，H2--21)，2.02(3H，s，H3-24)，1.27(3H，s，H3-17)，0.88(3H，s，H3-18).¹³C NMRδ(ppm，CDCl₃)：33.8(C-1)，22.7(C-2)，45.4(C-3)，36.2(C-4)，41.2(C-5)，26.5(C-6)，70.0(C-7)，34.7(C-8)，38.3(C-9)，36.1(C-10)，29.0(C-11)，56.3(C-12)，23.5(C-13)，20.3(C-14)，70.8(C-15)，73.7(C-16)，30.1(C-17)，22.5(C-18)，91.4(C-19)，83.1(C-20)，47.3(C-21)，64.9(C-22)，169.6(C＝O)，21.3(CH₃).

3.绣线菊碱U(spiramine U)(IV)：

C₂₄H₃₅O₅N，无色针晶(石油醚-丙酮-二乙胺)，mp 216-218℃，[α]_D-129.9°(c0.86，CHCl₃)；高分辨质谱：417.2515(M)；EIMS m/z：417(M，100)，400(10)，389(40)，374(56)，72(42)；IR(KBr)v：3520，3400，2920，1720，1030，750cm^-1；¹HNMRδ(ppm，C₅D₅N)：5.53(1H，m，H-15β)，4.60(1H，br.s，H-20)，3.84(1H，br.S，H-19)，3.71，3.35(各1H，m，H2-22)，3.79(1H，d，J＝4.6Hz，H-7β)，3.30，3.12(各1H，m，H2--21)，1.96(3H，s，H3-24)，1.70(3H，s，H3-17)，1.24(3H，s，H3-18).¹³C NMRδ(ppm，CDCl₃)：40.7(C-1)，21.9(C-2)，48.3(C-3)，36.9(C-4)，43.7(C-5)，27.2(C-6)，71.1(C-7)，35.4(C-8)，39.6(C-9)，35.7(C-10)，29.3(C-11)，52.8(C-12)，23.0(C-13)，20.6(C-14)，71.5(C-15)，71.3(C-16)，31.9(C-17)，23.0(C-18)，94.8(C-19)，85.6(C-20)，51.3(C-21)，63.5(C-22)，169.6(C＝O)，21.1(CH₃).

4.绣线菊碱P(spiramine P)(V)：

C₂₂H₃₃O₄N，无色针晶(石油醚-丙酮-二乙胺)，mp 235-236℃，[α]_D-49°(c0.81，CHCl₃)；元素分析：C，70.25；H，8.86.计算值：C，70.40；H，8.80；EIMS m/z：375(M)，345(18)，319(18)，278(10)，180(30)；IR(KBr)v：3420，1520，1200，1120cm^-1；¹HNMRδ(ppm，CDCl₃)：4.63(1H，br.m，H-15β)，4.52(1H，br.s，H-20)，3.84(1H，br.S，H-19)，3.59，3.27(各1H，m，H2-22)，3.30(1H，d，J＝5Hz，H-7β)，3.40，3.55(各1H，m，H2--21)，1.35(3H，s，H3-17)，1.16(3H，s，H3-18)；¹³C NMRδ(ppm，CDCl₃)：40.7(C-1)，22.8(C-2)，47.9(C-3)，35.3(C-4)，43.1(C-5)，26.6(C-6)，69.5(C-7)，36.7(C-8)，39.2(C-9)，35.6(C-10)，29.2(C-11)，56.1(C-12)，21.3(C-13)，20.3(C-14)，74.0(C-15)，72.6(C-16)，31.3(C-17)，22.5(C-18)，95.1(C-19)，85.2(C-20)，51.0(C-21)，63.2(C-22).

Claims

1、通式(I)所示的ATISINE型二萜生物碱：

2、制备权利要求1所述通式(I)化合物的方法，其特征是取粉花绣线菊(Speraea japonica)的干根粉末以75-95％乙醇冷浸5-7天，经减压浓缩除去乙醇得浸膏，用2-4％盐酸溶解，酸液分别用石油醚-苯(1∶1)萃取3次以脱脂，再用NaOH水溶液碱化至PH＝11左右，用氯仿萃取3次，萃取液经水洗至中性，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得总生物碱部分，然后经硅胶H减压短柱层析，分别以不同比例的石油醚-丙酮-二乙胺梯度洗脱，即得到通式(I)所示各生物碱。

3、权利要求1所述通式(I)生物碱在制备抗炎药物中的应用。

4、权利要求1所述通式(I)生物碱在制备抗过敏药物中的应用。

5、权利要求1所述通式(I)生物碱在制备抗哮喘药物中的应用。

6、权利要求1所述通式(I)生物碱在制备治疗心脑缺血病药物中的应用。

7、权利要求1所述的通式(I)生物碱作为PAF拮抗剂活性成分的应用。

8、权利要求1所述的通式(I)生物碱作为花生四烯酸拮抗剂活性成分的应用。