CN105030664B - 果糖注射液的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种果糖注射液的制备方法，包括步骤：（1）将果糖用60°C‑80°C的注射用水溶解；（2）加入质量浓度在0.05%‑0.15%的药用炭，搅拌使果糖完全溶解后再脱碳；（3）通入氮气；（4）加注射用水，再加入稀盐酸；（5）测定溶液含量，精滤；（6）充氮灌装，控制氮气的流量使瓶口内气体含氧量不大于4%；（7）在121℃水浴，灭菌12分钟，本发明的优点在于，提供了一种果糖注射液的制备方法，产品质量稳定。并进行了该品种的小剂量给药的急性毒性试验、长期毒性试验、刺激溶血、过敏性试验研究，弥补了果糖注射液在儿童用药安全性和有效性领域的空白。它不含抗氧剂和缓冲盐，在临床上为儿童提供了一个高安全性的果糖注射液产品。

Description

果糖注射液的制备方法

技术领域

本发明涉及一种果糖注射液的制备方法，主要应用在药物制备生产的技术领域。

背景技术

果糖注射液已在国内外上市多年，其标准已被美国药典(USP35)、英国药典(BP2013)、日本药典(JP16)、印度药典(IP2010)和部颁标准(YBH02402006)收载。其临床主要用于：1.注射剂的稀释剂；2.用于烧创伤、术后及感染等胰岛素抵抗状态下或不适宜使用葡萄糖时需补充水分或能源的患者的补液治疗。

该产品的临床使用不良反应较多过量使用有可能引起危及生命的乳酸性酸中毒。所以果糖注射液的使用剂量根据病人的年龄、体重和临床症状调整，一般每日的使用量为500～1000ml，所以目前国内外已上市的果糖注射液多为250ml、500ml两种规格，主要用于成人患者。儿童用药剂量都根据医生的临床经验，酌情增减，并且国内尚未进性小剂量使用的安全性和有效性研究。

因目前临床中有越来越多的小儿烧创伤患者及儿童及青少年2型糖尿病患者，小儿临床用量使用量较小、但是对产品的安全性要求高，上市的产品规格较大，易造成临床用药浪费，同时因果糖在高温和有氧环境中，性质不稳定，在制备过程中一般通过加入抗氧剂或缓冲剂，来保持果糖性质的稳定性，如CN201310019384.7公开了一种含果糖的注射液及其制备方法，发明提供的制备方法中配方加入了辅料缓冲剂醋酸钠，目的是使溶液在高温灭菌后pH保持稳定，减少5-羟甲基糠醛(5-HMF)的产生，保持溶液的稳定。

CN201210192053.9公开了一种果糖药物组合物注射液及其制备方法，发明提供的制备方法中加入了亚硫酸氢钠和乳酸钙来减少5-HMF的产生，提高果糖注射液的稳定性。

大容量注射液直接注射到人体静脉中，与血液直接接触，对产品的安全性要求非常高，本产品的目标人群为小儿患者，在注射液中添加抗氧剂或缓冲盐会对其脆弱的血管产生一定的潜在性副作用。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种果糖注射液的制备方法，它不含任何抗氧剂和缓冲盐。

本发明是通过以下技术方案来实现的。

一种果糖注射液的制备方法，包括步骤：

(1)将果糖用60℃-80℃的注射用水溶解，控制果糖的质量浓度不大于60％；

(2)加入质量浓度在0.05％-0.15％的药用炭，搅拌15分钟使果糖完全溶解后再脱碳；

(3)通入氮气，控制氮气的流量使得溶液中含氧量不大于3ppm；

(4)加60℃-80℃的注射用水使果糖的浓度在0.04g/mL-0.06g/mL，再加入稀盐酸调节pH值在4.7±0.2；

(5)测定溶液含量，精滤；

(6)充氮灌装，控制氮气的流量使瓶口内气体含氧量不大于4％；

(7)在121℃水浴，灭菌12分钟后在不大于65℃出柜，灯检，贴签，质量检验，包装，成品，入库。

进一步地，上述(1)：将果糖置浓配罐中用60℃-80℃的注射用水溶解，上述浓配罐中的钛棒打底碳10-20g/根。

进一步地，在上述浓配罐使用前清洗浓配罐及其管路清洁：若距上次清洗时间超过6小时，开启注射用水淋洗阀门，淋洗浓配罐内壁5分钟，放掉淋洗水，再打开注射用水淋洗阀门，淋洗同时放入注射用水约300L，开启循环泵，自身循环10分钟后排放；再开启注水阀，放入注射用水300L，循环清洗10分钟后排放，再重复操作一次，排尽清洗水；若距上次清洗时间不超过6小时：开启注射用水淋洗阀门，淋洗浓配罐内壁直至注入水量达到300L，开启循环泵，自身循环10分钟后泵入稀配排放；再通过注水阀向浓配注入300L注射用水，直接泵入另一稀配罐排放。

进一步地，上述(2)：脱碳时使用8μm-12μm钛滤器。

进一步地，上述(3)：在通入氮气前，将浓配罐中的溶液泵入稀配罐中，上述稀配罐中的钛棒打底碳10-20g/根。

进一步地，在稀配罐使用前冲洗稀配罐及管道***：在上述浓配罐循环清洗的第三遍水泵入稀配时，同时开启喷淋淋洗内壁直待稀配水量约500L，清洗10分钟后从稀配罐排放清洗水，另一稀配罐采取开启自身循环和大循环形式清洗，清洗10分钟后从灌装机排放。再从稀配注水阀分别放注射用水约500L，循环清洗和排放方法同前。再重复操作一次；距上次清洗时间不超过6小时：将从浓配循环清洗后泵入稀配的注射用水排放。开启喷淋淋洗内壁，直至液位达到500L，其中一稀配罐采取自身循环和大循环形式清洗，清洗10分钟后从稀配罐排放清洗水，另一稀配罐采取开启自身循环和大循环形式清洗，清洗10分钟后从灌装机排放。

进一步地，上述(5)：精滤为0.20μm-0.25μm条件下的过滤。

以果糖溶液的pH值、加入稳定剂、活性炭用量、滤膜、配液温度及灭菌温度与时间对其溶液稳定性的影响为研究对象，通过变更前后处方工艺的详细对比研究，按上述变更后的处方组成及制备工艺制备的新产品规格样品与已上市产品规格样品进行全面质量对比研究，同时两者经初步稳定性考察：影响因素10天、加速试验6月和长期留样试验12月的考察，结果表明变更后的产品规格质量较变更前产品质量有所提高，表明本品拟增加规格样品的处方组成和制备工艺较合理。

去除原规格处方组成中含有抗氧剂或缓冲盐，采用在产品制备过程中严格控制溶液的pH值和减少溶液中残氧量来增加溶液的稳定性，经变更前后处方组成详细对比研究，最终优选拟增加规格产品单剂量处方组成为：100ml注射用水含果糖5g、稀盐酸和氮气适量。

本发明对于各个步骤的制备工艺参数控制较为精细：

①严控溶液pH值：在原稀配工艺溶液在必要时用稀盐酸或氢氧化钠溶液调溶液pH值(实际生产中范围控制在4.0～5.5)，其范围较广，质量差异较大，变更后严控稀配液的pH值在4.7±0.2，能有效降低产品质量差异，提高产品质量。

②改变配料液温度：将现有技术中原浓配和稀配液的室温水(水温降至≤40℃)变更为热水(60-80℃)配液，同时在浓配和稀配及灌装过程中均充氮，有效降低溶液残氧量(溶液含氧量≤3ppm)，提高溶液稳定性。

③进行了果糖注射液小剂量给药的长期毒性试验伴随毒代动力学试验(Beagle犬4周静脉给药长期毒性试验，伴随毒代动力学试验)和安全性试验研究(兔溶血性、血管刺激性、豚鼠主动全身过敏试验)。

1.溶血性试验摘要

目的：观察果糖注射液在体外是否可引起溶血和红细胞凝聚等反应。

方法：选择新西兰兔红细胞作为试验***进行体外试管法溶血性试验。供试品溶液采用原液，浓度为100mg/ml；选择0.9％氯化钠注射液作为阴性对照，低渗的灭菌注射用水作为阳性对照。

取洁净试管14支，进行编号，1～5号管为供试品管，6号管为阴性对照管，7号管为阳性对照管。每个编号做2管，标记为“管号-1”和“管号-2”。依次加入2％红细胞混悬液、0.9％氯化钠注射液或灭菌注射用水、供试品溶液。将各管轻轻摇匀，立即置恒温水浴锅中37±0.5℃保温3小时。

分别于温育后15min、30min、45min、1h、2h、3h各观察一次各管的有无溶血情况；3h观察结束观察各管有无凝聚现象。

结果：供试品各管和阴性对照管在温育后15min、30min、45min、1h、2h、3h均未出现溶血现象，3h未出现凝聚现象；阳性对照管加入灭菌注射液用水后即可出现溶血现象。

结论：果糖注射液100mg/ml对新西兰兔红细胞无明显的体外溶血及致凝聚作用。

2.血管刺激性试验摘要

目的：观察果糖注射液新西兰兔耳缘静脉给药后有无血管刺激作用。

方法：选择新西兰兔耳缘静脉作为试验***进行血管刺激性试验。取新西兰兔5只，采用耳缘静脉给药方式给药，采用同体左右侧自身对比法给药，左耳给予供试品原液，右耳同法给予0.9％氯化钠注射液用作对照。给药剂量为1g/kg，给药浓度为100mg/ml，给药容积为10ml/kg，给药速度约为10ml/min，一日一次，连用7天。

每天给药前和给药后，对动物和注射部位进行肉眼观察，观察血管是否清晰，有无血管扩张、收缩，血管内是否淤血，血管周围组织有无水肿等。

末次给药后48h，肉眼观察5只新西兰兔耳缘静脉，将新西兰兔打击头部处死。分别于注射部位近心端1.5cm至3cm处剪取含有血管的耳缘组织，其它部位有肉眼可见变化一并剪取。将所取病理标本用10％***固定，常规组织切片，观察有无血栓形成、内皮损伤及其他组织病理变化。

结果：果糖注射液静脉给药，3号动物给药侧和6号动物对照侧自第5次给药后出现注射部位红肿现象，停药48h恢复正常。病理组织学检查结果显示，给药侧兔耳缘静脉结构清晰，内皮及血管壁完整，血管腔内可见数量不等的红细胞，所有动物管腔内无血栓形成。血管周围组织未见出血、水肿及炎细胞浸润等病理改变。3号、6号动物血管腔内可见均质红染的嗜酸性物质。

根据组织病理学评价标准判断，果糖注射液给药侧和对照侧平均积分均为0，无刺激性。

结论：果糖注射液静脉给药，给药剂量为1g/kg，给药浓度为100mg/ml，给药容积为10ml/kg，给药速度约为10ml/min，一日一次，连用7天。对新西兰兔耳缘静脉血管无明显刺激作用。

3.豚鼠主动全身过敏试验

果糖注射液为安徽双鹤药业有限责任公司研制的药物。我们对本品进行了豚鼠主动全身过敏性试验研究，为临床应用提供参考。

目的：观察豚鼠给予果糖注射液后，机体免疫***反应在全身的表现，即有无过敏反应及过敏程度如何。

方法：选择豚鼠作为试验***进行主动全身过敏性试验。供试品溶液采用原液，浓度为100mg/ml；选择0.9％氯化钠注射液作为阴性对照，0.2％卵白蛋白溶液作为阳性对照。

取豚鼠20只，按体重随机分为3组，分别为供试品组、阴性对照组和阳性对照组。致敏时，供试品采用原液，给药体积为1ml/只，阴性对照组给予1ml/只0.9％氯化钠注射液，阳性对照组给予1ml/只0.2％的卵白蛋白溶液，隔日腹腔注射1次致敏，共致敏3次；末次致敏后10d，自外侧跖静脉一次快速注射激发，供试品采用原液，给药容积2ml/只，阴性对照组给予,2ml/只0.9％氯化钠注射液，阳性对照组给予2ml/只0.2％的卵白蛋白溶液。

致敏期间每次致敏前和致敏后观察，非给药日每天观察1次动物的临床症状；激发后立刻至30min详细观察每只动物的有无出现过敏反应，症状出现及消失的时间等。并于初次、末次致敏和激发时称重。

结果：供试品组、阳性对照组和阴性对照组所有动物致敏期间均未见明显异常，体重增长正常；供试品组及0.9％氯化钠注射液阴性对照组动物激发后，未见明显异常症状，试验结果均为阴性。0.2％卵白蛋白溶液阳性对照组给药后出现躁动、竖毛、颤抖、搔鼻、喷嚏、咳嗽、呼吸急促、排尿、排粪、流泪、呼吸困难、啸鸣音、紫癜、步态不稳、跳跃、喘息、痉挛、旋转、潮式呼吸等表现并于2分钟内全部死亡，过敏反应为极强阳性，发生率为100％。

结论：果糖注射液，致敏剂量为1ml原液/只，隔日腔注射致敏，共致敏三次，末次致敏后10天，静脉注射激发，激发剂量为2ml原液/只，豚鼠未出现任何过敏反应症状，表明：果糖注射液对豚鼠无主动全身致敏作用。

综合上述试验结果，可以得知，本发明所制备的果糖注射液，其在溶血性、过敏性和局部刺激性获得的试验数据弥补了果糖注射液在儿童用药安全性和有效性领域的空白。

本发明的有益效果：

对本产品安全性和质量稳定性有效提高，对原规格中处方组成及制备工艺进行相关变更研究，以适用于产品的处方组成及制备工艺，在溶血性、过敏性和局部刺激性获得的试验数据弥补了果糖注射液在儿童用药安全性和有效性领域的空白，通过严格控制溶液的pH值、充分冲氮和改变配料液温度来减少溶液中残氧含量来增加溶液的稳定性，达到去除果糖注射液原处方组成中含有的抗氧剂或者缓冲盐的一种制备方法。

具体实施方式

下面根据实施例对本发明作进一步详细说明。

实施案例1：

一种果糖注射液的制备方法，包括步骤：

(1)将果糖置浓配罐中用60℃-80℃的注射用水溶解，上述浓配罐中的钛棒打底碳10-20g/根，控制果糖的质量浓度不大于60％；

在上述浓配罐使用前清洗浓配罐及其管路清洁：若距上次清洗时间超过6小时，开启注射用水淋洗阀门，淋洗浓配罐内壁5分钟，放掉淋洗水，再打开注射用水淋洗阀门，淋洗同时放入注射用水约300L，开启循环泵，自身循环10分钟后排放；再开启注水阀，放入注射用水300L，循环清洗10分钟后排放，再重复操作一次，排尽清洗水；若距上次清洗时间不超过6小时：开启注射用水淋洗阀门，淋洗浓配罐内壁直至注入水量达到300L，开启循环泵，自身循环10分钟后泵入稀配排放；再通过注水阀向浓配注入300L注射用水，直接泵入另一稀配罐排放；

(2)加入质量浓度在0.05％-0.15％的药用炭，搅拌使果糖完全溶解后再使用8μm-12μm钛滤器脱碳；

(3)将浓配罐中的溶液泵入稀配罐中，上述稀配罐中的钛棒打底碳10-20g/根，通入氮气，控制氮气的流量使得溶液中含氧量不大于3ppm；

在稀配罐使用前冲洗稀配罐及管道***：在上述浓配罐循环清洗的第三遍水泵入稀配时，同时开启喷淋淋洗内壁直待稀配水量约500L，清洗10分钟后从稀配罐排放清洗水，另一稀配罐采取开启自身循环和大循环形式清洗，清洗10分钟后从灌装机排放。再从稀配注水阀分别放注射用水约500L，循环清洗和排放方法同前。再重复操作一次；距上次清洗时间不超过6小时：将从浓配循环清洗后泵入稀配的注射用水排放。开启喷淋淋洗内壁，直至液位达到500L，其中一稀配罐采取自身循环和大循环形式清洗，清洗10分钟后从稀配罐排放清洗水，另一稀配罐采取开启自身循环和大循环形式清洗，清洗10分钟后从灌装机排放；

(4)加60℃-80℃的注射用水使果糖的浓度在0.04g/mL-0.06g/mL，再加入稀盐酸调节pH值在4.7±0.2；

(5)测定溶液含量，0.20μm-0.25μm条件下精滤；

(6)充氮灌装，控制氮气的流量使瓶口内气体含氧量不大于4％；

(7)在120℃-125℃水浴，灭菌12分钟，灯检，贴签，质量检验，包装，成品，入库。

生产工艺关键步骤和控制点

实施案例2：

1)处方变更前后对比

本品拟定处方组成以已上市产品为基础，结合处方筛选结果，最终优选结果如下：

变更前后处方组成对比

[注]：含亚硫酸氢钠的中间体溶液pH值不稳定，或高或低，故有时需采用氢氧化钠调溶液pH值。

2)、溶液pH值对质量的影响考察

文献报道果糖注射液在pH值下灭菌后溶液稳定性有较大差异，依据果糖注射液部颁标准中溶液的pH值限度(3.0～5.5)要求，设计不同梯度pH值(5.5、5.0、4.5、4.0、3.5)的溶液，考察灭菌(121℃灭菌15min)前后溶液的pH值、外观色泽、5-羟甲基糠醛(5-HFM)和含量。

不同pH值(3.5～5.5)灭菌前后对制剂质量的影响

结论：从实验结果看不同pH值溶液灭菌后其溶液pH值均下降；对果糖溶液色泽有一定影响；对溶液中5-HMF量影响较大，对含量影响明显。

为进一步确定溶液pH值最佳范围，同上述样品配制较小的pH值范围，依法测定，结果如下：

不同pH值(4.2～5.0)灭菌前后对制剂质量的影响

结论：灭菌前溶液的pH值在4.4～4.8之间时，灭菌后溶液的杂质增加相对较小，且灭菌后溶液的pH值较稳定在4.2左右。因此，结合工艺大生产操作的可行性，制定本品生产时用稀盐酸调溶液pH值应控制在4.7±0.2范围内。

3)、稳定剂对溶液的质量的影响考察

果糖溶液在高温较不稳定，可考虑在其处方组成中加入适量稳定性：抗氧剂亚硫酸氢钠或氮气及缓冲剂：乙酸盐、柠檬盐和磷酸盐等，依据不同文献报道，在其基础上进行相关研究，同时将其试制的各处方样品置高温(60℃)放置10，进行稳定性考察，结果见下：

稳定剂对溶液灭菌前后的质量的影响

注：0.005％亚硫酸氢钠+充氮为现有在生产处方。

不同处方在高温(60℃)10天下影响因素试验

结论：本品在含有亚硫酸氢钠的溶液灭菌后及高温下溶液pH值下降明显，可能是因亚硫酸氢钠受热降解成酸性物质所致；而含有缓冲盐的灭菌后溶液pH值较稳定，但溶液颜色加深，鉴于本品充氮后能有效改善上述缺陷，且加入不同稳定剂时其质量无明显改善，综合大容量注射剂安全性及本品临床适用人群为小儿，故处方中拟定不加入亚硫酸氢钠或缓冲盐等稳定剂，而采用在稀配过程中和灌装时充分充氮降低溶液中含氧量，以增加溶液的稳定性。

4)微孔滤膜吸附的考察

按上述处方配制溶液，分成4等份，分别通过0.45μm微孔滤膜1次、0.22μm微孔滤膜1次、0.22μm聚醚砜筒式过滤1次及0.1μm聚丙烯筒式过滤1次。测定溶液含量，结果与过滤前的溶液进行比较，结果如下：

微孔滤膜孔径大小

结论：微孔滤膜及钛棒对溶液中果糖几乎无吸附作用，因此，配制注射液过程中可采用0.22～0.1μm微孔滤膜及钛棒精滤。

5)、活性炭用量对质量的考察

按上述处方进行稀配方法进行制备溶液，分成6等份，其中1份作为原液，另5份分别加入溶液体积0.025％、0.05％、0.1％、0.2％、0.3％的活性炭，在80℃水浴中搅拌30min，用0.45μm微孔滤膜过滤，测定溶液相关指标，结果如下：

活性炭用量对含量的影响

结论：可看出活性炭用量对溶液颜色和5-HMF量几乎无影响，对果糖吸附不明显，随活性炭用量的增加，pH值明有明显的下降趋势，可能与活性炭中吸附二氧化碳显酸性有关，因此，为有效去除原、辅料中的热源，本品拟采用浓配法，浓配体积约为标示体积的1/10，活性炭用量采用果糖量的0.1％(g/g)，同时采用打底碳方法(浓配罐和稀配罐中每根碳棒装15g活性炭)进行过滤脱热源。

6)、配液注射用水温度的考察

按处方组成配制溶液，用0.1mol/L盐酸溶液调溶液pH值约为4.7后，用0.22μm微孔滤膜精滤分成3份，分别置不同温度下水浴下保温6小时，在其间内考察溶液的稳定性情况，结果如下：

配液温度对果糖溶液稳定性的影响

结论：不同水温对5-HMF影响不明显，为减少溶液中残氧量，拟采用较高的水温(60-80℃)配液；对溶液的pH值有一定影响，随时间延长而下降，因此配液后应尽快灌装完毕。

7)、处方工艺初步评价

样品制备：取果糖15kg，置浓配罐中，加50L注射用水热水溶解，加入50g针用活性炭，搅拌20分钟，钛棒脱炭(10μm)，将药液移至稀配罐中，通入氮气，补加注射用水至约300L，用稀盐酸溶液调节药液pH值至4.7，搅拌均匀，精滤(0.22μm)，分装，溶液通氮气，加塞、扎盖，灭菌(蒸汽121℃，12min)，依法进行影响因素10天考察，结果如下：

处方工艺初步评价

结论：按拟定的处方工艺试制放大，试验考察结果表明本品拟定的处方组成和制备工艺具有一定的合理性。

上述实施例只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此领域技术的人士能够了解本发明内容并加以实施，并不能以此限制本发明的保护范围。凡根据本发明精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围内。

Claims (1)

1.一种果糖注射液的制备方法，其特征在于，该注射液由果糖、注射用水、稀盐酸、以及氮气制成，其制备方法包括步骤：

(1)将果糖置浓配罐中用60℃-80℃的注射用水溶解，控制果糖的质量浓度不大于60％，所述浓配罐中的钛棒打底碳10-20g/根；

(2)加入质量浓度在0.05％-0.15％的药用炭，搅拌15分钟使果糖完全溶解后再脱碳，脱碳时使用8μm-12μm钛滤器；

(3)将浓配罐中的溶液泵入稀配罐中，所述稀配罐中的钛棒打底碳10-20g/根；通入氮气，控制氮气的流量使得溶液中含氧量不大于3ppm；

(4)加60℃-80℃的注射用水使果糖的浓度在0.04g/mL-0.06g/mL，再加入稀盐酸调节pH值在4.7±0.2；

(5)测定溶液含量，精滤，所述精滤为0.20μm-0.25μm条件下的过滤；

(6)充氮灌装，控制氮气的流量使瓶口内气体含氧量不大于4％；

(7)在121℃水浴，灭菌12分钟后在不大于65℃出柜，灯检，贴签，质量检验，包装，成品，入库；

所述浓配罐使用前清洗浓配罐及其管路清洁：若距上次清洗时间超过6小时，开启注射用水淋洗阀门，淋洗浓配罐内壁5分钟，放掉淋洗水，再打开注射用水淋洗阀门，淋洗同时放入注射用水约300L，开启循环泵，自身循环10分钟后排放；再开启注水阀，放入注射用水300L，循环清洗10分钟后排放，再重复操作一次，排尽清洗水；若距上次清洗时间不超过6小时：开启注射用水淋洗阀门，淋洗浓配罐内壁直至注入水量达到300L，开启循环泵，自身循环10分钟后泵入稀配罐排放；再通过注水阀向浓配罐注入300L注射用水，直接泵入另一稀配罐排放；

在稀配罐使用前冲洗稀配罐及管道***：所述浓配罐循环清洗的第三遍水泵入稀配罐，同时开启喷淋阀淋洗内壁直待稀配罐水量约500L，清洗10分钟后从稀配罐排放清洗水，另一稀配罐采取开启自身循环和大循环形式清洗，清洗10分钟后从灌装机排放，再从稀配罐注水阀分别放入注射用水约500L，循环清洗和排放方法同前，再重复操作一次；距上次清洗时间不超过6小时：将从浓配罐循环清洗后泵入稀配罐的注射用水排放，开启喷淋阀淋洗内壁，直至液位达到500L，其中一稀配罐采取自身循环和大循环形式清洗，清洗10分钟后从稀配罐排放清洗水，另一稀配罐采取开启自身循环和大循环形式清洗，清洗10分钟后从灌装机排放。