CN104990882A - 体外生物瓣钙化评价的方法及抗钙化因子溶液 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及生物瓣技术领域，提供一种体外生物瓣钙化评价方法，包括的步骤有钙化评价液的配制；RCI溶液预加热；PRCI处理；样品保存；体外钙化反应；钙定量检测；所述的抗钙化因子溶液包括：包括醇类试剂A、碱溶液B油脂类及其衍生物试剂C和缓冲溶液试剂D；采用本发明的评价方法评价周期短，减少了评价工序，节省了评价费用；同时通过抗钙化因子溶液的配合对生物瓣进行化学处理，封闭某些游离化学基团，减小生物瓣与钙离子的结合力，从而降低生物瓣的挂钙量，增强生物瓣膜的抗钙化能力；通过本发明的体外生物瓣钙化评价方法，快速有效的判断化学处理后的生物瓣抗钙化性能。

Description

体外生物瓣钙化评价的方法及抗钙化因子溶液
技术领域
本发明涉及生物瓣膜领域，具体涉及一种体外生物瓣钙化的评价方法及抗钙化因子溶液。
背景技术
目前年龄超过65岁老年人中，由于主动脉瓣钙化所致的主动脉瓣狭窄发生率达2％～7％，随着年龄增长主动脉瓣狭窄比例越来越高。严重主动脉瓣狭窄的病人左心功能严重受损，病人生活质量下降且生存时间明显缩短，必须进行有效的治疗。
针对外科手术适应症的严重主动脉瓣病人，外科人工主动脉瓣置换术(无论选用机械瓣或生物瓣)仍然是首选治疗，置换后主动脉瓣口面积常大于1.5cm2。然而，对于那些高龄、主动脉瓣狭窄终末期、全身多发的严重合并症的病人，外科主动脉瓣置换术后死亡和其它严重并发症的发生率大大增加。经皮球囊主动脉瓣成形术治疗老年主动脉瓣狭窄的方法，由于术中、手术后产生死亡、中风、主动脉破裂、主动脉瓣严重关闭不全等严重并发症的发生率高，术后短期(3～12个月)内主动脉瓣又明显狭窄，所以已不作为严重主动脉瓣狭窄的治疗方法。另外，严重主动脉瓣狭窄的高龄老年病人，无外科手术适应症时，临床治疗十分困难。
现有技术中，在进行动物试验前，选取适龄的猪或者羊，经过医生超声以及健康状况观察，评价手术风险和匹配度，确定瓣架和主肺动脉口径的吻合度，要求瓣架尺寸与主动脉或者肺动脉口径相匹配，防止瓣周漏或移位等情况发生。然后根据动物临床的要求开展动物临床，将经过处理后的生物瓣植入到猪或者羊体内，经超声影像观察瓣膜正常工作，通过饲养半年到一年的观察期，解剖取出生物瓣后经原子吸收光谱法检测生物瓣组织的含钙量，从而判定生物瓣的抗钙化性能。
通过动物临床来评价生物瓣钙化的方法具有一定的局限性，对临床手术和临床医生的技术依存度要求高、对动物选择也有相应要求，同时饲养周期长、受饲养环境和个体差异的影响较大，可能出现其它症状，比如生物瓣表皮化、生长赘生物等，不能准确有效的反映生物瓣化学处理后与钙离子的化学作用。现有技术方法不仅仅在技术上增加了难度，而且时间和成本上都大幅的增加，同时在生物瓣的钙化性能评价上，受到多种因素的影响。
发明内容
本发明要解决的技术问题在于，针对现有技术的上述缺陷，提供一种体外物瓣钙化评价方法，该方法大大缩短了钙化评价周期，是一套高效的标准化评价方法。
本发明要解决的另一技术问题是，提供一种抗钙化因子溶液，其通过对生物瓣进行化学处理，封闭某些游离化学基团，减小生物瓣与钙离子的结合力，从而降低生物瓣的挂钙量，增强生物瓣膜的抗钙化能力。所述的抗钙化因子英文全称为：Reducing Calcium Ingredient，简称为：RCI。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：提供一种体外生物瓣钙化评价方法，包括以下步骤：
(1)钙化评价液的配制；该钙化评价液包括：戊二醛溶液、生理盐水溶液、硼酸盐缓冲溶液、抗钙化因子溶液和血浆含钙溶液；
(2)抗钙化因子溶液预加热：取抗钙化因子溶液于30～40℃的恒温水浴锅中以5～10rpm转速温浴18～24h；
(3)抗钙化前处理：取切割好的瓣膜样品，用戊二醛溶液完全浸泡，室温静置18～24h；
(4)抗钙化因子溶液处理：将抗钙化前处理的液体倒去，倒入硼酸盐缓冲溶液浸没，去液后用抗钙化因子溶液完全浸泡，在30～40℃的恒温水浴锅中以120～130rpm转速温浴67～72h；
(5)瓣膜样品保存：瓣膜样品去液后，倒入生理盐水溶液完全浸泡瓣膜样品，2～8℃保存；
(6)体外钙化反应：取样品放入血浆含钙溶液中，生物瓣与定量的钙离子溶液充分反应，钙离子通过化学键结合到瓣膜中，30～40℃,120rpm，恒温水浴中反应60天内的任意一天；
(7)钙定量检测：分别取任意一天反应后的瓣膜样品进行原子吸收光谱钙含量测定，与标准对照样进行对比，得到评价瓣膜样品的钙含量。
本发明更进一步的方案是：所述的戊二醛溶液浓度为0.25～5.0％的戊二醛溶液，其每配制5L包括的成分及含量为：硫酸镁1.0～3.0g；氯化钾1.0～3.0g；磷酸氢二钠3.0～5.0g；磷酸二氢钾0.6～1.2g；氯化钠15～30g；25％戊二醛150～250ml；异丙醇500～1000ml；纯水定容到5000ml。
本发明更进一步的方案是：所述的生理盐水溶液为0.9％生理盐水，其每配制10L包括的成分及含量为：氯化钠90g±0.1g；纯水定容到10L。
本发明更进一步的方案是：所述的硼酸盐缓冲溶液配制1L包括的成分及含量为：氯化钠3.0～15.0g；四硼酸钠2.0～5.0g；纯水定容到1000ml。
本发明更进一步的方案是：所述的抗钙化因子溶液配制1L包括的成分及含量为：试剂A 150～300ml，该试剂A为醇类；试剂B 10～100ml，该试剂B为碱溶液；试剂C 0.5～9.0g，试剂C为油脂及其衍生物；试剂D 690～820ml，pH值8.5～9.5，该试剂D为缓冲溶液。
本发明更进一步的方案是：所述的血浆是人工***，其配制1L的成分包括：10％CaCl2溶液10～15ml；羟乙基淀粉氯化钠注射液900～1000ml。
本发明更进一步的方案是：所述的试剂A包括乙醇、异丙醇、戊醇中的任意一种。
本发明更进一步的方案是：所述的试剂B包括KOH、NaOH中的任意一种。
本发明更进一步的方案是：所述的试剂C包括四烯酸、亚油酸、二十碳三烯酸、亚麻酸、氨基油酸、十二酸、庚酸、软脂酸、硬脂酸、油酸、及其衍生物中的一种或任意几种。
本发明更进一步的方案是：所述的试剂D包括磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液或甘氨酸盐酸缓冲液中的一种，pH值为8.5～9.5。
本发明的另一技术方案是：一种抗钙化因子溶液，该溶液包括：试剂A、试剂B、试剂C、试剂D，其中：
试剂A为醇类，包括乙醇、异丙醇、戊醇中的任意一种；
试剂B为碱溶液，包括KOH、NaOH中的任意一种；
试剂C为油脂类及其衍生物，包括四烯酸、亚油酸、二十碳三烯酸、亚麻酸、氨基油酸、十二酸、庚酸、软脂酸、硬脂酸、油酸、及其衍生物中的一种或任意几种；
试剂D为缓冲溶液，包括磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液或甘氨酸盐酸缓冲液中的一种，pH值为8.5～9.5。
本发明的有益效果在于，本发明的体外生物瓣钙化评价方法，其评价周期短，同时减少了工序，节省了评价费用；同时通过抗钙化因子溶液的配合对生物瓣进行化学处理，封闭某些游离化学基团，减小生物瓣与钙离子的结合力，从而降低生物瓣的挂钙量，增强生物瓣膜的抗钙化能力；通过本发明的体外生物瓣钙化评价方法，快速有效的判断化学处理后的生物瓣抗钙化性能。
具体实施方式
以下对本发明的较佳实施例作详细说明。
具体方案如下：
1.钙化评价液配制
本发明的整个方案中需用到5种溶液，0.25～5.0％戊二醛溶液、0.9％生理盐水溶液、BBS溶液、RCI溶液、人工***含钙溶液。其成分及含量如下所示：
上述试剂中：
试剂A为醇类，包括乙醇、异丙醇、戊醇中的任意一种；
试剂B为碱溶液，包括KOH、NaOH中的任意一种；
试剂C为油脂类及其衍生物，包括四烯酸、亚油酸、二十碳三烯酸、亚麻酸、氨基油酸、十二酸、庚酸、软脂酸、硬脂酸、油酸、及其衍生物中的一种或任意几种；
试剂D为缓冲溶液，包括磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液或甘氨酸盐酸缓冲液中的一种，pH值为8.5～9.5。
2.RCI溶液预加热
取RCI溶液于30～40℃的恒温水浴锅中以5～10rpm转速温浴18～24h。
此过程主要是对RCI溶液进行预热，让有效成分充分均匀，达到一个稳定有效的工作环境溶液。
3.抗钙化前(PRCI)处理
取切割好的瓣膜，放置换于空瓶中，用0.25～5.0％戊二醛溶液完全浸泡，室温静置18～24h。
此过程是通过戊二醛浸泡瓣膜，达到饱和过交联的作用，基团充分配对。
4.RCI处理
将PRCI处理的液体倒去，倒入BBS溶液浸没，晃动清洗一次或数次，去液后用RCI溶液完全浸泡，在30～40℃的恒温水浴锅中以120～130rpm转速温浴67～72h。
此过程是将RCI溶液的化学物质与瓣膜中游离的基团进行化学结合，达到封闭瓣膜中游离的醛基和羧基的目的。
5.瓣膜样品保存
样品去液后，倒入0.9％生理盐水溶液完全浸泡样品，2～8℃保存。
6.体外钙化反应
取样品放入人工***含钙溶液中，30～40℃,120rpm，恒温水浴中反应10天、15天、30天、60天。
此过程是评价生物瓣钙化性能的重要环节，将生物瓣与定量的钙离子溶液充分反应，钙离子通过化学键结合到瓣膜中，以评价瓣膜附着钙量。
7.钙定量检测
分别取0天、10天、15天、30天、60天的样品进行原子吸收光谱钙含量测定。
从以上表格测定结果可以看出，经过抗钙化的样品钙含量低于对照样，评价方法有效。
实施例1－4
1.钙化评价液配制
本发明的5种溶液包括：0.25～5.0％戊二醛溶液、0.9％生理盐水溶液、BBS溶液、RCI溶液、人工***含钙溶液。其成分及含量如下所示：
上述试剂中：
试剂A中，1#为正丙醇，2#为异丙醇，3#为乙醇，4#为正戊醇；
试剂B中，1#为K0H，2#为KOH，3#为NaOH，4#为NaOH；
试剂C中，1#为亚油酸，2#为氨基油酸，3#为软脂酸，4#为油酸；
试剂D为缓冲溶液，1#为磷酸盐缓冲液，2#为硼酸盐缓冲溶液，3#甘氨酸盐酸缓冲液，4#为硼酸盐缓冲溶液。
2.RCI溶液预加热
取RCI溶液于30～40℃的恒温水浴锅中以5～10rpm转速温浴18～24h。
此过程主要是对RCI溶液进行预热，让有效成分充分均匀，达到一个稳定有效的工作环境溶液。
3.抗钙化前(PRCI)处理
取切割好的瓣膜，放置换于空瓶中，用0.25～5.0％戊二醛溶液完全浸泡，室温静置18～24h。
此过程是通过戊二醛浸泡瓣膜，达到饱和过交联的作用，基团充分配对。
4.RCI处理
将PRCI处理的液体倒去，倒入BBS溶液浸没，晃动清洗一次或数次，去液后用RCI溶液完全浸泡，在30～40℃的恒温水浴锅中以120～130rpm转速温浴67～72h。
此过程是将RCI溶液的化学物质与瓣膜中游离的基团进行化学结合，达到封闭瓣膜中游离的醛基和羧基的目的。
5.瓣膜样品保存
样品去液后，倒入0.9％生理盐水溶液完全浸泡样品，2～8℃保存。
6.体外钙化反应
取样品放入人工***含钙溶液中，30～40℃,120rpm，恒温水浴中反应10天、15天、30天、60天。
此过程是评价生物瓣钙化性能的重要环节，将生物瓣与定量的钙离子溶液充分反应，钙离子通过化学键结合到瓣膜中，以评价瓣膜附着钙量。
7.钙定量检测
分别取0天、10天、15天、30天、60天的样品进行原子吸收光谱钙含量测定。
从以上表格测定结果可以看出，经过抗钙化的样品钙含量低于对照样，评价方法有效。
本发明的体外生物瓣钙化评价方法，在时间上极大的缩短了钙化评价周期，与动物临床6个月相比，缩短了4个月时间，同时减少了工序，不再需要试验动物和临床医生的参与，从而极大的节省了科研费用。在技术上对生物瓣化学处理的钙化评价，形成了一套高效的评价方法，标准化的评价，不易受其它因素的影响，对因化学基团造成的生物瓣钙化现象具有很好的评价意义，也为后续动物体内生物瓣的钙化评价起到了辅助和指导作用。
应当理解的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制，对本领域技术人员来说，可以对上述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而所有这些修改和替换，都应属于本发明所附权利要求的保护范围。

Claims (11)

1.一种体外生物瓣钙化评价方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)钙化评价液的配制；该钙化评价液包括：戊二醛溶液、生理盐水溶液、硼酸盐缓冲溶液、抗钙化因子溶液和血浆含钙溶液；
(2)抗钙化因子溶液预加热：取抗钙化因子溶液于30～40℃的恒温水浴锅中以5～10rpm转速温浴18～24h；
(3)抗钙化前处理：取切割好的瓣膜样品，用戊二醛溶液完全浸泡，室温静置18～24h；
(4)抗钙化因子溶液处理：将抗钙化前处理的液体倒去，倒入硼酸盐缓冲溶液浸没，去液后用抗钙化因子溶液完全浸泡，在30～40℃的恒温水浴锅中以120～130rpm转速温浴67～72h；
(5)瓣膜样品保存：瓣膜样品去液后，倒入生理盐水溶液完全浸泡瓣膜样品，2～8℃保存；
(6)体外钙化反应：取样品放入血浆含钙溶液中，生物瓣与定量的钙离子溶液充分反应，钙离子通过化学键结合到瓣膜中，30～40℃,120rpm，恒温水浴中反应60天内的任意一天；
(7)钙定量检测：分别取任意一天反应后的瓣膜样品进行原子吸收光谱钙含量测定，与标准对照样进行对比，得到评价瓣膜样品的钙含量。
2.根据权利要求1所述的体外生物瓣钙化评价方法，其特征在于：所述的戊二醛溶液浓度为0.25-5.0％的戊二醛溶液，其每配制5L包括的成分及含量为：硫酸镁1.0～3.0g；氯化钾1.0～3.0g；磷酸氢二钠3.0～5.0g；磷酸二氢钾0.6～1.2g；氯化钠15～30g；25％戊二醛150～250ml；异丙醇500～1000ml；纯水定容到5L。
3.根据权利要求1所述的体外生物瓣钙化评价方法，其特征在于：所述的生理盐水溶液为0.9％生理盐水，其每配制10L包括的成分及含量为：氯化钠90g±0.1g；纯水定容到10L。
4.根据权利要求1所述的体外生物瓣钙化评价方法，其特征在于：所述的硼酸盐缓冲溶液配制1L包括的成分及含量为：氯化钠3.0～15.0g；四硼酸钠2.0～5.0g；纯水定容到1L，pH值8.5～9.5。
5.根据权利要求1所述的体外生物瓣钙化评价方法，其特征在于：所述的抗钙化因子溶液配制1L包括的成分及含量为：试剂A 150～300ml，该试剂A为醇类；试剂B 10～100ml，该试剂B为碱溶液；试剂C 0.5～9.0g，试剂C为油脂及其衍生物；试剂D 690～820ml，pH值8.5～9.5，该试剂D为缓冲溶液。
6.根据权利要求1所述的体外生物瓣钙化评价方法，其特征在于：所述的血浆是人工***，其配制1L的成分包括：10％CaCl2溶液10～15ml；羟乙基淀粉氯化钠注射液900～1000ml。
7.根据权利要求5所述的体外生物瓣钙化评价方法，其特征在于：所述的试剂A包括乙醇、异丙醇、戊醇中的任意一种。
8.根据权利要求5所述的体外生物瓣钙化评价方法，其特征在于：所述的试剂B包括KOH、NaOH中的任意一种。
9.根据权利要求5所述的体外生物瓣钙化评价方法，其特征在于：所述的试剂C包括四烯酸、亚油酸、二十碳三烯酸、亚麻酸、氨基油酸、十二酸、庚酸、软脂酸、硬脂酸、油酸、及其衍生物中的一种或任意几种。
10.根据权利要求5所述的体外生物瓣钙化评价方法，其特征在于：所述的试剂D为缓冲溶液，包括磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液或甘氨酸盐酸缓冲液中的一种，pH值为8.5～9.5。
11.一种抗钙化因子溶液，其特征在于：该溶液包括：试剂A、试剂B、试剂C、试剂D，其中：
试剂A为醇类，包括乙醇、异丙醇、戊醇中的任意一种；
试剂B为碱溶液，包括KOH、NaOH中的任意一种
试剂C油脂类，试剂C包括四烯酸、亚油酸、二十碳三烯酸、亚麻酸、氨基油酸、十二酸、庚酸、软脂酸、硬脂酸、油酸、及其衍生物中的一种或任意几种；
试剂D为缓冲溶液，包括磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液或甘氨酸盐酸缓冲液中的一种，pH值为8.5～9.5。
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Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105363071A (zh) * 2015-11-23 2016-03-02 金仕生物科技（常熟）有限公司 生物材料的抗钙化处理方法
CN105717053A (zh) * 2016-01-28 2016-06-29 杭州启明医疗器械有限公司 一种基于疲劳试验台的体外生物瓣钙化评价方法
WO2017012288A1 (zh) * 2015-07-22 2017-01-26 杭州启明医疗器械有限公司 体外生物瓣钙化评价的方法及抗钙化因子溶液
CN110856670A (zh) * 2018-08-22 2020-03-03 株式会社太阳医疗技术研究所 主动脉瓣评价辅助工具
CN111514375A (zh) * 2020-05-28 2020-08-11 四川大学 一种抗钙化生物瓣膜材料及其制备方法
CN116593382A (zh) * 2023-07-17 2023-08-15 上海汇禾医疗器械有限公司 一种钙化模拟液、体外生物瓣钙化评价方法及评价***

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110102190B (zh) * 2019-04-30 2024-07-23 中国海洋石油集团有限公司 一种卤水体系下纳滤膜标准化测试方法及装置

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1093566A (zh) * 1993-04-16 1994-10-19 成都科技大学 胶原组织材料缓钙化复合环氧交联法
CN1136780A (zh) * 1993-10-21 1996-11-27 密执安大学 制造抗钙化抗性生物修复组织的方法
CN1162252A (zh) * 1994-10-21 1997-10-15 密执安大学 钙化抗性生物修复组织及其制备方法
CN1371750A (zh) * 2002-02-28 2002-10-02 中南大学湘雅二医院 生物心脏瓣膜2,3－丁二醇防钙化改性的方法
CN101947147A (zh) * 2010-06-23 2011-01-19 乐普（北京）医疗器械股份有限公司 一种生物组织材料的化学处理方法

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4976733A (en) * 1988-02-03 1990-12-11 Biomedical Design, Inc. Prevention of prosthesis calcification
US5296583A (en) * 1992-07-09 1994-03-22 University Of Michigan Calcification-resistant synthetic biomaterials
US6878168B2 (en) * 2002-01-03 2005-04-12 Edwards Lifesciences Corporation Treatment of bioprosthetic tissues to mitigate post implantation calcification
US7579381B2 (en) * 2005-03-25 2009-08-25 Edwards Lifesciences Corporation Treatment of bioprosthetic tissues to mitigate post implantation calcification
US8357387B2 (en) * 2007-12-21 2013-01-22 Edwards Lifesciences Corporation Capping bioprosthetic tissue to reduce calcification
CN102114270B (zh) * 2011-02-22 2013-08-07 上海微创医疗器械（集团）有限公司 一种梯度交联及修饰型耐久性人工生物瓣及其制备方法
US9730609B2 (en) * 2011-12-15 2017-08-15 Siemens Healthcare Gmbh Method and system for aortic valve calcification evaluation
CN104023526B (zh) * 2014-03-24 2016-01-13 金仕生物科技（常熟）有限公司 一种处理生物材料的方法及经该方法处理的生物材料
CN108535205B (zh) * 2015-07-22 2021-06-22 杭州启明医疗器械股份有限公司 体外生物瓣抗钙化处理方法、钙化评价方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1093566A (zh) * 1993-04-16 1994-10-19 成都科技大学 胶原组织材料缓钙化复合环氧交联法
CN1136780A (zh) * 1993-10-21 1996-11-27 密执安大学 制造抗钙化抗性生物修复组织的方法
CN1162252A (zh) * 1994-10-21 1997-10-15 密执安大学 钙化抗性生物修复组织及其制备方法
CN1371750A (zh) * 2002-02-28 2002-10-02 中南大学湘雅二医院 生物心脏瓣膜2,3－丁二醇防钙化改性的方法
CN101947147A (zh) * 2010-06-23 2011-01-19 乐普（北京）医疗器械股份有限公司 一种生物组织材料的化学处理方法

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
林曦 等: ""新型抗钙化牛颈静脉带瓣管道的实验研究"", 《中国胸心血管外科临床杂志》 *
王成 等: ""改良处理猪主动脉瓣钙化的实验研究"", 《安徽医科大学学报》 *
魏旭峰 等: ""环氧氯丙烷处理生物瓣膜材料的体外钙沉积实验"", 《中国临床康复》 *
魏旭峰: ""环氧氯丙烷处理生物瓣膜组织防钙化机制的进一步研究"", 《中国优秀博硕士学位论文全文数据库（博士）医药卫生科技辑》 *
龙隆 等: ""醇对戊二醛鞣制的牛心包防钙化改性的实验研究"", 《中国现代医学杂志》 *

Cited By (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2017012288A1 (zh) * 2015-07-22 2017-01-26 杭州启明医疗器械有限公司 体外生物瓣钙化评价的方法及抗钙化因子溶液
CN108535205A (zh) * 2015-07-22 2018-09-14 杭州启明医疗器械有限公司 体外生物瓣抗钙化处理方法、钙化评价方法
US10768099B2 (en) 2015-07-22 2020-09-08 Venus Medtech (Hangzhou) Inc. In-vitro biological valve calcification evaluation method and reducing calcium ingredient solution
CN105363071A (zh) * 2015-11-23 2016-03-02 金仕生物科技（常熟）有限公司 生物材料的抗钙化处理方法
CN105363071B (zh) * 2015-11-23 2018-10-09 金仕生物科技（常熟）有限公司 生物材料的抗钙化处理方法
CN105717053A (zh) * 2016-01-28 2016-06-29 杭州启明医疗器械有限公司 一种基于疲劳试验台的体外生物瓣钙化评价方法
CN110856670A (zh) * 2018-08-22 2020-03-03 株式会社太阳医疗技术研究所 主动脉瓣评价辅助工具
CN110856670B (zh) * 2018-08-22 2021-12-28 株式会社太阳医疗技术研究所 主动脉瓣评价辅助工具
CN111514375A (zh) * 2020-05-28 2020-08-11 四川大学 一种抗钙化生物瓣膜材料及其制备方法
CN111514375B (zh) * 2020-05-28 2021-05-11 四川大学 一种抗钙化生物瓣膜材料及其制备方法
CN116593382A (zh) * 2023-07-17 2023-08-15 上海汇禾医疗器械有限公司 一种钙化模拟液、体外生物瓣钙化评价方法及评价***
CN116593382B (zh) * 2023-07-17 2023-10-27 上海汇禾医疗器械有限公司 一种钙化模拟液、体外生物瓣钙化评价方法及评价***

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