CN104988152A - Xrcc2启动子、含有xrcc2启动子的载体、载体的构建及应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及XRCC2启动子、含有XRCC2启动子的载体、载体的构建及应用，XRCC2启动子序列如SEQ ID NO.1所示，含有XRCC2启动子的载体包括pXRCC2-GFP、pXRCC2-Luciferase、pXRCC2-DTA、pXRCC2-其他毒蛋白、AAV-pXRCC2-Luciferase及Fugw-pXRCC2-Luciferase。含有XRCC2启动子的载体在制备肿瘤治疗药物或肿瘤诊断试剂中的应用。相较于已发现的其他肿瘤特异性启动子，XRCC2启动子具有在正常、肿瘤细胞中活性差异大及片段长度小易于病毒载体的构建等突出优势，因此XRCC2启动子具有应用于肿瘤基因治疗及诊断的巨大潜力。

Description

XRCC2启动子、含有XRCC2启动子的载体、载体的构建及应用

技术领域

本发明涉及一种XRCC2启动子、含有XRCC2启动子的载体、载体的构建及应用，属于基因工程技术领域。

背景技术

肿瘤是严重危害人类健康及生命的疾病之一，其死亡率高居各类疾病之首。因此，除应用传统的手术、放疗及化疗等方式***以外，不断开发全新的肿瘤治疗方式对于缓解肿瘤给人类健康造成的巨大威胁刻不容缓。随着病理学及分子生物学等学科的不断发展，人们逐渐意识到肿瘤是一种多因素、多步骤和多基因共同参与的“基因病”，多种原癌基因的激活及抑癌基因的失活被认为是肿瘤发生的重要诱因。因此，以改变人遗传物质为基础的基因治疗是针对肿瘤发生根源的本质治疗方法。由于具有针对性强及效果显著等突出优势，基因治疗为肿瘤治疗领域带来了具有里程碑意义的一次革命。

合理利用肿瘤基因组学的改变是肿瘤基因治疗的一种重要策略，其被证实能够特异性靶向肿瘤细胞，而对正常组织影响有限，具有良好的可控性及靶向性。诸多研究表明运用在肿瘤细胞中具有高活性的基因表达调控原件如启动子调控报告基因或***基因的表达能够有效应用于肿瘤的诊断及治疗。例如，有研究者构建了由端粒酶催化亚基(hTERT)的启动子控制促凋亡蛋白Caspase8表达的载体，体内外实验均表明其对肿瘤细胞有特异性的杀伤作用；此外，用Rad51启动子调控荧光素酶或***基因DTA的表达被证实能够实现体内肿瘤的可视化及靶向性治疗。然而，由于在肿瘤细胞及正常细胞中活性差异不够大而使得肿瘤靶向性不高或启动子片段过长而导致难以利用传统方式将其高水平转运入肿瘤细胞等缺陷，大大限制了已发现的在肿瘤细胞中活性较高的启动子运用于肿瘤基因治疗的可能性。因此，寻找更多有效并具有临床应用前景的在肿瘤细胞中特异性激活的蛋白启动子将为更好地推动肿瘤的基因治疗奠定基础。

XRCC2是DNA同源重组(HR)修复通路关键蛋白分子Rad51家族中的重要成员，其被证实能够与其他Rad51家族蛋白结合共同参与HR修复过程或识别DNA损伤位点，募集修复蛋白，在HR修复的早期阶段发挥重要作用。

发明内容

本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种XRCC2启动子、含有XRCC2启动子的载体、载体的构建及应用。

本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：

技术方案一： 

一种XRCC2启动子，其序列如SEQ ID NO.1所示。

技术方案二： 

一种含有XRCC2启动子的载体，包括pXRCC2-GFP、pXRCC2-Luciferase、pXRCC2-DTA、pXRCC2-其他毒蛋白、AAV-pXRCC2-Luciferase及Fugw-pXRCC2-Luciferase，其中pXRCC2指代XRCC2启动子。

所述的DTA为白喉毒素的A亚基，能够抑制细胞内多种蛋白的合成，具有很强的细胞毒性，其序列如SEQ ID NO.2所示；所述的其他毒蛋白包括凋亡家族蛋白caspase3、caspase6、caspase7、caspase8等能够诱导细胞死亡的蛋白。

技术方案三： 

如技术方案二所述的含有XRCC2启动子的载体的构建方法，具体如下：

(1)pXRCC2-GFP质粒的构建： 

以人皮肤成纤维细胞系细胞的基因组DNA为模板，XRCC2 5’及XRCC2 3’分别为上下游引物，PCR扩增5’端含有EcoRI、3’端含有AgeI酶切位点的pXRCC2序列，将pRad51C-GFP质粒及扩增完成的pXRCC2片段用限制性内切酶EcoRI及AgeI进行酶切，跑胶鉴定并回收相应片段后进行连接反应，构建完成pXRCC2-GFP质粒；

(2)pXRCC2-Luciferase质粒的构建：

以pXRCC2-GFP质粒为模板，采用上下游引物XRCC2-Luciferase 5’及XRCC2-Luciferase 3’PCR扩增两端分别含有NheI及HindIII酶切位点的pXRCC2，将pXRCC2片段与pGL3-basic质粒采用NheI及HindIII进行酶切，跑胶鉴定后，分别回收pXRCC2片段及pGL3-basic质粒的线性化片段并进行连接反应，构建完 成pXRCC2-Luciferase质粒；

(3)pXRCC2-DTA质粒的构建： 

采用上下游引物XRCC2-DTA5’及XRCC2-DTA3’，以Ad2-DTA-NHEJ质粒为模板PCR扩增两端分别含有AgeI与NotI酶切位点的DTA片段，将该DTA片段及pXRCC2-GFP质粒分别采用AgeI及NotI进行酶切，回收相应片段并进行连接反应，构建完成pXRCC2-DTA质粒；

(4)AAV-pXRCC2-Luciferase质粒的构建：

将正义链序列为CGCGTGCTAGCGAATTCGGTACCT，反义链序列为CTAGAGGTACCGAATTCGCTAGCA的oligo进行褪火反应，并分别采用限制性内切酶MluI及XbaI酶切经褪火完成的片段，同时将AAV-MCS质粒采用限制性内切酶MluI及XbaI酶进行酶切，连接酶切完成后的相应片段，构建完成的质粒命名为质粒1，将质粒1及pXRCC2-Luciferase质粒采用NheI及XbaI酶切后的相应产物进行连接反应，构建完成AAV-pXRCC2-Luciferase质粒；

(5)Fugw-pXRCC2-Luciferase质粒的构建：

设计并合成正义链序列为TAAGCTAGCTCTAGAG，反义链序列为TAATTCGATCGAGATCTCTTAA的oligo片段，进行褪火反应，分别采用限制性内切酶PacI及EcoRI酶切Fugw慢病毒载体，胶回收后得到线性化片段，连接该线性化片段和已褪火的oligo片段，得到Fugw-oligo载体，采用限制性内切酶NheI、XbaI及SalI酶切pXRCC2-Luciferase质粒，并同时采用NheI及XbaI酶切Fugw-oligo载体，跑胶鉴定后胶回收pXRCC2-Luciferase和Fugw-oligo线性化片段并进行连接反应，构建完成Fugw-pXRCC2-Luciferase质粒。

各种载体的构建过程中，引物XRCC2 5’序列如SEQ ID NO.7所示，

引物XRCC2 3’序列如SEQ ID NO.8所示，

引物XRCC2-Luciferase 5’序列如SEQ ID NO.9所示，

引物XRCC2-Luciferase 3’序列如SEQ ID NO.10所示，

引物XRCC2-DTA5’序列如SEQ ID NO.11所示，

引物XRCC2-DTA3’序列如SEQ ID NO.12所示。

技术方案四：提供含有XRCC2启动子的载体的应用。

由于相较于正常细胞，在不同肿瘤细胞中XRCC2蛋白的表达呈显著上调，并且由XRCC2启动子(pXRCC2)介导的GFP及Luciferase能够在肿瘤细胞中特异 性表达，因此所述的pXRCC2-GFP与pXRCC2-Luciferase用于制备肿瘤诊断试剂。

利用在肿瘤细胞中特异性激活的蛋白启动子及具有较强细胞毒性的蛋白实现靶向性肿瘤治疗是肿瘤基因治疗的一种重要方式。将pXRCC2-DTA质粒转染入不同细胞并进行细胞计数后发现，pXRCC2-DTA剂量依赖性地抑制肿瘤细胞的生长，而对正常细胞几乎不产生生长抑制作用。基于此，认为由XRCC2启动子介导毒蛋白的表达能够选择性地杀伤肿瘤细胞，是一种安全有效的肿瘤治疗方式。因此所述的pXRCC2-DTA、pXRCC2-其他毒蛋白用于制备肿瘤治疗药物。

针对肿瘤生长、侵袭、转移、信号转导及微环境中的关键标志物，应用分子成像新方法，在活体状态下对肿瘤组织进行准确的定位，实现基于标志物的恶性肿瘤早期、特异及准确诊断，对于肿瘤的治疗及预后具有极其重要的意义。因此，利用XRCC2启动子活性在肿瘤细胞中显著增强这一分子特性，基于AAV-XRCC2-Luciferase及Fugw-pXRCC2-Luciferase重组质粒的成功构建及细胞水平功能的验证，推测由XRCC2启动子介导Luciferase在肿瘤细胞中的特异性表达能够实现在体肿瘤的可视化，推动临床肿瘤诊断学的长足发展，因此所述的AAV-pXRCC2-Luciferase及Fugw-pXRCC2-Luciferase用于制备肿瘤诊断试剂。

相较于已发现的其他肿瘤特异性启动子，XRCC2启动子具有在正常、肿瘤细胞中活性差异大及片段长度小易于病毒载体的构建等突出优势，因此XRCC2启动子具有应用于肿瘤基因治疗及诊断的巨大潜力。

附图说明

图1、XRCC2在不同细胞中mRNA水平的相对表达量差异结果；

图2、由XRCC2启动子介导的GFP蛋白在不同细胞中的表达水平差异结果；

图3、由XRCC2启动子介导的Luciferase在不同细胞中的表达水平差异结果；

图4、由XRCC2启动子介导的DTA蛋白表达对不同细胞的抑制作用差异结果；

图5、含pXRCC2-Luciferase的AAV病毒颗粒在不同细胞中的表达水平差异结果；

图6、含pXRCC2-Luciferase的Fugw病毒颗粒在不同细胞中的表达水平差异结果；

图7、Ad2-DTA-NHEJ质粒图谱。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施例对本发明进行详细说明。

以下实施例所用细胞系如下：

MJT为人皮肤成纤维细胞系，IMRT为人肺成纤维细胞系，P1、P2及P3为人原代眼睑细胞系，HMEC1、HMEC2、HMEC3及HMEC4为人乳腺上皮细胞系，Hela为人***细胞系，HT1080为人纤维肉瘤细胞系，MCF-7、MDA-MB-231、HCC1954及T47D为人乳腺上皮癌细胞系。

实施例1

Real Time RT-PCR技术检测不同细胞中XRCC2mRNA水平的表达量情况

(1)细胞总RNA提取

离心收集细胞后加入1ml Trizol试剂充***解。加入200μl氯仿剧烈振荡30秒，置于冰浴中静置2-3分钟，4℃，12000rpm，离心5分钟。溶液产生分层，小心移取定量的上层液体至另一个RNA酶free的离心管中，加入等体积的异丙醇，轻微振荡混匀，置于冰浴中静置10分钟后，4℃，12000rpm，离心5分钟。弃上清，沉淀用75％乙醇洗涤2次。洗涤完毕后弃去乙醇溶液，挥干。用适量DEPC水溶解RNA，于65℃水浴中助溶15分钟。采用核酸蛋白测定仪对所提取的RNA进行纯度及浓度测定。总RNA可直接进行后续实验或保存于-80℃中备用。

(2)逆转录

根据RNA浓度，取定量RNA(1-2μg)，加入如表1中的随机引物2μl，并补加DEPC水至10μl，于PCR仪中65℃加热变性15分钟。后于上述反应体系中加入5×逆转录缓冲液4μl、10mM dNTP 3μl、RNA酶抑制剂0.5μl、40u/μl M-MuLV逆转录酶1μl并用DEPC水补齐至总反应体积为20μl，于PCR仪中按照已设定程序进行逆转录反应。

(3)聚合酶链反应 

将逆转录反应所得产物按如下反应体系进行目的片段的扩增：cDNA0.6μl、正、反引物各0.6μl、2×SYBR Premix Ex Taq 10μl及DEPC水8.2μl。扩增程序为：95℃变性10秒后进行40次95℃，5秒；61℃，20秒；72℃，30秒的循环。末次循环后测定引物的溶解曲线。各引物序列如表1所示。

表1 Real Time RT-PCR实验所用引物序列

参考图1，可以看出，相较于正常细胞，在不同肿瘤细胞中XRCC2蛋白的表达呈显著上调。

实施例2

载体克隆

(1)pXRCC2-GFP质粒的构建 

以MJT细胞的基因组DNA为模板，XRCC2 5’及XRCC2 3’分别为上下游引物，PCR扩增5’端含有EcoRI、3’端含有AgeI酶切位点的XRCC2启动子(pXRCC2)序列。将pRad51C-GFP质粒及扩增完成的pXRCC2片段用限制性内切酶EcoRI及AgeI进行酶切，跑胶鉴定并回收相应片段后进行连接反应，构建完成目标质粒。

(2)pXRCC2-Luciferase质粒的构建

以pXRCC2-GFP质粒为模板，采用上下游引物XRCC2-Luciferase 5’及XRCC2-Luciferase 3’PCR扩增两端分别含有NheI及HindIII酶切位点的pXRCC2。将pXRCC2片段与pGL3-basic质粒采用NheI及HindIII进行酶切。跑胶鉴定后，分别回收pXRCC2片段及pGL3-basic质粒的线性化片段并进行连接反应，构建完成目标质粒。

(3)pXRCC2-DTA质粒的构建 

采用上下游引物XRCC2-DTA5’及XRCC2-DTA3’，以Ad2-DTA-NHEJ质粒(该质粒图谱如图7所示，其中第8558-8785位编码Ad2序列，第10058-10738位编码DTA蛋白)为模板PCR扩增两端分别含有AgeI与NotI酶切位点的DTA片段。将该DTA片段及pXRCC2-GFP质粒分别采用AgeI及NotI进行酶切。回收相应片段并进行连接反应，构建完成目标质粒。

(4)AAV-pXRCC2-Luciferase质粒的构建

将正义链序列为CGCGTGCTAGCGAATTCGGTACCT，反义链序列为CTAGAGGTACCGAATTCGCTAGCA的oligo进行褪火反应，并分别采用限制性内 切酶MluI及XbaI酶切经褪火完成的片段。同时将AAV-MCS质粒采用上述两个内切酶进行酶切，连接酶切完成后的相应片段，构建完成的质粒命名为质粒1。将质粒1及pXRCC2-Luciferase质粒采用NheI及XbaI酶切后的相应产物进行连接反应，构建完成目标质粒。

(5)Fugw-pXRCC2-Luciferase质粒的构建

设计并合成正义链序列为TAAGCTAGCTCTAGAG，反义链序列为TAATTCGATCGAGATCTCTTAA的oligo片段，进行褪火反应。分别采用限制性内切酶PacI及EcoRI酶切Fugw慢病毒载体，胶回收后得到线性化片段。连接该线性化片段和已褪火的oligo片段，得到Fugw-oligo载体。采用限制性内切酶NheI、XbaI及SalI酶切pXRCC2-Luciferase质粒，并同时采用NheI及XbaI酶切Fugw-oligo载体。跑胶鉴定后胶回收pXRCC2-Luciferase和Fugw-oligo线性化片段并进行连接反应，构建完成目标质粒。

表2载体克隆所用引物序列

实施例3

质粒转染

(1)pXRCC2-GFP质粒的转染 

将处于对数生长期的不同细胞采用胰酶消化，离心收集2×10⁵细胞，加入0.5μg pXRCC2-GFP质粒及0.005μg用作转染效率内参的DsRed质粒，并用电转液补足至20μl，使用Amaxa 4D(Lonza)电转仪进行电转，不同细胞所采用的转染程序如表3所示。转染质粒72小时后，收集细胞进行流式细胞术检测。

表3不同细胞的转染程序

由XRCC2启动子介导的GFP在不同细胞中的表达水平差异如图2所示，相较于正常细胞，由XRCC2启动子(pXRCC2)介导的GFP能够在肿瘤细胞中特异性表达。

(2)pXRCC2-Luciferase质粒的转染

将处于对数生长期的不同细胞采用胰酶消化，离心收集2×10⁵细胞，加入0.5μg pXRCC2-Luciferase质粒，用电转液补足至20μl，利用如表3所示的不同电转程序在Amaxa 4D(Lonza)电转仪上进行质粒转染。转染质粒72小时后，收集细胞计数并进行荧光素酶活性检测(试剂盒购自Promega)。

由XRCC2启动子介导的Luciferase在不同细胞中的表达水平差异如图3所示，相较于正常细胞，由XRCC2启动子(pXRCC2)介导的Luciferase能够在肿瘤细胞中特异性表达。

(3)pXRCC2-DTA质粒的转染 

在110μl OPTI-MEM培养基中加入3.3μl Fugen6转染试剂后分别加入1μg SV40-Luciferase及0、0.05、0.1μg pXRCC2-DTA质粒，以pGL3-basic质粒作为阴性对照。将上述溶液均匀混合后室温静置15分钟。将该混合物均匀加入处于对数生长期的不同细胞中。72小时后对各实验组进行细胞计数。

结果如图4所示，pXRCC2-DTA剂量依赖性地抑制肿瘤细胞的生长，而对正常细胞几乎不产生生长抑制作用。基于此，我们认为由XRCC2启动子介导毒蛋白 的表达能够选择性地杀伤肿瘤细胞，是一种安全有效的肿瘤治疗方式。

(4)AAV-pXRCC2-Luciferase/GFP质粒的转染

在1ml无抗生素无血清的DMEM培养基中加入10μg AAV-pXRCC2-Luciferase/GFP、10μg RC及10μg pHelper质粒，混匀后加入60μl转染试剂p-pei，并于室温静置20分钟后将上述混合物加入处于对数生长期的AAV-293细胞中。常规培养3天后，采用反复冻融法裂解细胞并收集病毒颗粒。取一定量AAV-pXRCC2-Luciferase/GFP病毒颗粒分别感染不同细胞3天后，采用流式细胞术检测表达绿色荧光的细胞数，并同时采用荧光素酶活性检测方法检测不同细胞内的荧光素酶活性，以荧光素酶活性/表达绿色荧光细胞数的比值指征不同细胞中相对荧光素酶活性。

其结果如图5所示，可以看出，AAV-pXRCC2-Luciferase/GFP质粒在肿瘤细胞中存在特异性表达，其表达水平明显高于正常细胞，由于XRCC2启动子活性在肿瘤细胞中显著增强这一分子特性，推测由XRCC2启动子介导Luciferase在肿瘤细胞中的特异性表达能够实现在体肿瘤的可视化，推动临床肿瘤诊断学的长足发展。

(5)Fugw-pXRCC2-Luciferase质粒的转染

在500μl无抗生素无血清的DMEM培养基中加入5μg Fugw-pXRCC2-Luciferase/GFP、3.75μgΔ8.9及2.5μg VSVG质粒，混匀后加入30μl p-pei转染试剂，室温静置20分钟后将上述混合物加入处于对数生长期的293FT细胞中。3天后收集细胞上清，55000g离心2.5小时，弃上清，用一定量新鲜培养基重悬病毒颗粒。在不同处于对数生长期的细胞中加入等量Fugw-pXRCC2-Luciferase及Fugw-GFP病毒溶液。感染3天后，采用流式细胞术检测表达绿色荧光的细胞数，并同时采用荧光素酶活性检测方法检测不同细胞内的荧光素酶活性，以荧光素酶活性/表达绿色荧光细胞数的比值指征不同细胞中相对荧光素酶活性。

其结果如图6所示，可以看出，Fugw-pXRCC2-Luciferase质粒在肿瘤细胞中存在特异性表达，其表达水平明显高于正常细胞，由于XRCC2启动子活性在肿瘤细胞中显著增强这一分子特性，推测由XRCC2启动子介导Luciferase在肿瘤细胞中的特异性表达能够实现在体肿瘤的可视化，推动临床肿瘤诊断学的长足发展。

上述的对实施例的描述是为便于该技术领域的普通技术人员能理解和使用发明。熟悉本领域技术的人员显然可以容易地对这些实施例做出各种修改，并把在此 说明的一般原理应用到其他实施例中而不必经过创造性的劳动。因此，本发明不限于上述实施例，本领域技术人员根据本发明的揭示，不脱离本发明范畴所做出的改进和修改都应该在本发明的保护范围之内。

。

Claims (9)

1.一种XRCC2启动子，其特征在于，其序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一种含有XRCC2启动子的载体，其特征在于，包括pXRCC2-GFP、pXRCC2-Luciferase、pXRCC2-DTA、pXRCC2-其他毒蛋白、AAV-pXRCC2-Luciferase及Fugw-pXRCC2-Luciferase，其中pXRCC2指代XRCC2启动子。

3.根据权利要求2所述的一种含有XRCC2启动子的载体，其特征在于，所述的DTA为白喉毒素的A亚基，其序列如SEQ ID NO.2所示；所述的其他毒蛋白包括凋亡家族蛋白caspase3、caspase6、caspase7、caspase8。

4.一种如权利要求2所述的含有XRCC2启动子的载体的构建方法，其特征在于，

(1)pXRCC2-GFP质粒的构建：

以人皮肤成纤维细胞系细胞的基因组DNA为模板，XRCC25’及XRCC23’分别为上下游引物，PCR扩增5’端含有EcoRI、3’端含有AgeI酶切位点的pXRCC2序列，将pRad51C-GFP质粒及扩增完成的pXRCC2片段用限制性内切酶EcoRI及AgeI进行酶切，跑胶鉴定并回收相应片段后进行连接反应，构建完成pXRCC2-GFP质粒；

(2)pXRCC2-Luciferase质粒的构建：

以pXRCC2-GFP质粒为模板，采用上下游引物XRCC2-Luciferase 5’及XRCC2-Luciferase 3’PCR扩增两端分别含有NheI及HindIII酶切位点的pXRCC2，将pXRCC2片段与pGL3-basic质粒采用NheI及HindIII进行酶切，跑胶鉴定后，分别回收pXRCC2片段及pGL3-basic质粒的线性化片段并进行连接反应，构建完成pXRCC2-Luciferase质粒；

(3)pXRCC2-DTA质粒的构建：

采用上下游引物XRCC2-DTA 5’及XRCC2-DTA 3’，以Ad2-DTA-NHEJ质粒为模板PCR扩增两端分别含有AgeI与NotI酶切位点的DTA片段，将该DTA片段及pXRCC2-GFP质粒分别采用AgeI及NotI进行酶切，回收相应片段并进行连接反应，构建完成pXRCC2-DTA质粒；

(4)AAV-pXRCC2-Luciferase质粒的构建：

将正义链序列为CGCGTGCTAGCGAATTCGGTACCT，反义链序列为CTAGAGGTACCGAATTCGCTAGCA的oligo进行褪火反应，并分别采用限制性内切酶MluI及XbaI酶切经褪火完成的片段，同时将AAV-MCS质粒采用限制性内切酶MluI及XbaI酶进行酶切，连接酶切完成后的相应片段，构建完成的质粒命名为质粒1，将质粒1及pXRCC2-Luciferase质粒采用NheI及XbaI酶切后的相应产物进行连接反应，构建完成AAV-pXRCC2-Luciferase质粒；

(5)Fugw-pXRCC2-Luciferase质粒的构建：

设计并合成正义链序列为TAAGCTAGCTCTAGAG，反义链序列为TAATTCGATCGAGATCTCTTAA的oligo片段，进行褪火反应，分别采用限制性内切酶PacI及EcoRI酶切Fugw慢病毒载体，胶回收后得到线性化片段，连接该线性化片段和已褪火的oligo片段，得到Fugw-oligo载体，采用限制性内切酶NheI、XbaI及SalI酶切pXRCC2-Luciferase质粒，并同时采用NheI及XbaI酶切Fugw-oligo载体，跑胶鉴定后胶回收pXRCC2-Luciferase和Fugw-oligo线性化片段并进行连接反应，构建完成Fugw-pXRCC2-Luciferase质粒。

5.根据权利要求4所述的一种含有XRCC2启动子的载体的构建方法，其特征在于，引物XRCC25’序列如SEQ ID NO.7所示，

引物XRCC23’序列如SEQ ID NO.8所示，

引物XRCC2-Luciferase 5’序列如SEQ ID NO.9所示，

引物XRCC2-Luciferase 3’序列如SEQ ID NO.10所示，

引物XRCC2-DTA 5’序列如SEQ ID NO.11所示，

引物XRCC2-DTA 3’序列如SEQ ID NO.12所示。

6.一种如权利要求2所述的含有XRCC2启动子的载体在制备肿瘤治疗药物或肿瘤诊断试剂中的应用。

7.根据权利要求6所述的一种含有XRCC2启动子的载体的应用，其特征在于，所述的pXRCC2-GFP与pXRCC2-Luciferase用于制备肿瘤诊断试剂。

8.根据权利要求6所述的一种含有XRCC2启动子的载体的应用，其特征在于，所述的pXRCC2-DTA、pXRCC2-其他毒蛋白用于制备肿瘤治疗药物。

9.根据权利要求6所述的一种含有XRCC2启动子的载体的应用，其特征在于，所述的AAV-pXRCC2-Luciferase及Fugw-pXRCC2-Luciferase用于制备肿瘤诊断试剂。