CN104962549A - 一种沼泽红假单胞菌同步化浓缩的方法及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种沼泽红假单胞菌同步化浓缩的方法，包括以下步骤：步骤一、培养基配制及消毒灭菌；步骤二、接种培养；步骤三、菌体同步化处理；步骤四、物理浓缩处理。经该方法处理得到的沼泽红假单胞菌可达 7.3×10 12 个/g，菌体形态均匀，生长处于同一时期，高效复活；本发明同时公开了一种沼泽红假单胞菌同步化浓缩的应用，通过上述方法制得的高浓度沼泽红假单胞菌适口性好，在养殖前期可作为生物饵料，提供蛋白和B族维生素；在养殖中后期，可用于调控水质，定期泼洒沼泽红假单胞菌有利于在养殖中下层水体形成优势菌相，有效抑制致病菌。
Description
技术领域
本发明涉及微生态制剂的技术领域，尤其涉及一种沼泽红假单胞菌同步化浓缩的方法及应用。
背景技术
沼泽红假单胞菌 (Rhodop seudanonas palustris)属于光合细菌的一种，属于红螺菌科，红假单胞菌属，细胞短或长杆状，弧形或螺旋形；以二***或芽殖方式繁殖。本菌含有细菌叶绿素a或b和类群1,2,4的类胡萝卜素，以及尚未包括在上述类群中的一些类胡萝卜素。可作为一种水质净化剂，由于沼泽红假单胞菌光能异养，兼性好养，在光照厌氧或黑暗微好氧的条件下都能生长，对于降低氨氮、亚硝酸盐、COD含量，以及提高溶解氧有显著效果；作为一种饲料添加剂，菌体富含菌体蛋白和B族维生素，适口性好，营养丰富，在水产养殖业上有广阔的应用前景。
目前，市售光合细菌种类繁多，性状大多是液体。常规培养出的沼泽红假单胞菌有如下缺点：1、菌体不同生长阶段混杂，生长速度难以控制；2、菌体易沉降分层，影响产品性状；3、复活率低，在培养后期，培养基耗竭导致菌体大量死亡，次级代谢产物（如硫）积累，毒害菌体细胞。有鉴于此，本发明人研究和设计了一种沼泽红假单胞菌同步化浓缩的方法及应用，本案由此产生。
发明内容
本发明的目的在于提供一种沼泽红假单胞菌同步化浓缩的方法及应用，本发明通过对沼泽红假单胞菌的生长周期进行红-蓝光照调整，减缓菌体代谢活动，促使所有菌体细胞形态一致，通过添加大分子吸附材料促进菌-液分离，以获得高浓缩菌泥，再加入载体及干燥剂使之充分分散，最终制成高质量的粉剂形态。
为实现上述目的，本发明解决其技术问题的技术方案是：
一种沼泽红假单胞菌同步化浓缩的方法，包括以下步骤：
步骤一、沼泽红假单胞菌培养
三角瓶培养，称取乙酸钠8g/l，氯化铵2g/l，酵母膏3g/l，盐卤5ml/l，氯化钙0.5g/l，黄腐酸钾0.8g/l，磷酸氢二钾1g/l，以上试剂溶解后用浓度为3%双氧水消毒30分钟；灭菌完毕加入碳酸氢钠2g/l溶解,装入1L三角瓶中；或者，
大规模培养，称取乙酸钠8kg/t，氯化铵2 kg/t，酵母膏3 kg/t，盐卤5 L/t，氯化钙0.5 kg/t，黄腐酸钾0.8 kg/t，磷酸氢二钾1 kg/t，以上试剂溶解后用浓度为3%双氧水消毒30分钟；灭菌完毕加入碳酸氢钠2 kg/t溶解，加入到塑料袋中；
步骤二、接种培养
按20%接种量接种沼泽红假单胞菌菌液，32℃，3000-5300lx白炽灯光照条件下培养72h-96h，将培养液稀释100倍，在660nm处测定OD值达到1.8以上；接种所使用的器具均灭菌处理，接种过程无菌操作；
步骤三、菌体同步化处理
将培养液置于黑暗条件下，不接触自然光，按红光:蓝光比例为4：1～1：1进行搭配照射，照射3～5h；目的是使沼泽红假单胞菌代谢活动逐步减慢，形态逐渐趋于一致；
步骤四、物理浓缩处理
向上述同步化处理后的培养液中加入聚丙烯酰胺阳离子、羧甲基纤维素钠、瓜尔豆胶、黄原胶、壳聚糖的一种或几种，比例为0.5%～1.5%，避光处保存3.5-5小时，去掉上清液，即可得超浓缩沼泽红假单胞菌，细胞数目可达7.3×1012个/g。
一种沼泽红假单胞菌同步化浓缩的应用，取上述经物理浓缩后的沼泽红假单胞菌一份，向其中加入保护剂聚乙二醇400、海藻糖、甘油、谷氨酸钠、吐温80的一种或几种，添加量为8%～35%，混合均匀，即得沼泽红假单胞菌超浓缩活菌制剂；本品性状为液体，有效沼泽红假单胞菌数目可达7×1011 个/ml。
一种沼泽红假单胞菌同步化浓缩的应用，取上述物理浓缩后的沼泽红假单胞菌一份，向其中加入二氧化硅、硫酸钠、氧化钙、玉米芯粉及硫酸镁中的一份或几份，低温喷雾干燥处理，粉剂晾干后加入酵母粉一份到三份；制得沼泽红假单胞菌浓缩菌粉；按此方法做成的粉剂产品中沼泽红假单胞菌细胞数目可达5.0×109 个/g。
本发明利用沼泽红假单胞菌吸收利用红蓝光谱波长的不同（红光主要波长范围610nm～720 nm，蓝光主要波长范围400nm～520 nm），通过对沼泽红假单胞菌的生长周期进行红-蓝光照调整，减缓菌体代谢活动，促使所有菌体细胞形态一致；通过添加大分子吸附材料促进菌-液分离，以获得高浓缩菌泥。向上述浓缩后的沼泽红假单胞菌菌液中加入载体和适量干燥剂使之充分分散，做成粉剂形态。
具体实施方式
实施例1
一种沼泽红假单胞菌同步化浓缩的方法，包括以下步骤：
步骤一、沼泽红假单胞菌培养
三角瓶培养，称取乙酸钠8g/l，氯化铵2g/l，酵母膏3g/l，盐卤5ml/l，氯化钙0.5g/l，黄腐酸钾0.8g/l，磷酸氢二钾1g/l，以上试剂溶解后用浓度为3%双氧水消毒30分钟；灭菌完毕加入碳酸氢钠2g/l溶解,装入1L三角瓶中；或者，
大规模培养，称取乙酸钠8kg/t，氯化铵2 kg/t，酵母膏3 kg/t，盐卤5 L/t，氯化钙0.5 kg/t，黄腐酸钾0.8 kg/t，磷酸氢二钾1 kg/t，以上试剂溶解后用浓度为3%双氧水消毒30分钟；灭菌完毕加入碳酸氢钠2 kg/t溶解，加入到塑料袋中；
步骤二、接种培养
按20%接种量接种沼泽红假单胞菌菌液，32℃，3000-5300lx白炽灯光照条件下培养72h-96h，将培养液稀释100倍，在660nm处测定OD值达到1.8以上；接种所使用的器具均灭菌处理，接种过程无菌操作；
步骤三、菌体同步化处理
将培养液置于黑暗条件下，不接触自然光，按红光:蓝光比例为4：1～1：1进行搭配照射，照射3～5h；目的是使沼泽红假单胞菌代谢活动逐步减慢，形态逐渐趋于一致；
步骤四、物理浓缩处理
向上述同步化处理后的培养液中加入聚丙烯酰胺阳离子、羧甲基纤维素钠、瓜尔豆胶、黄原胶、壳聚糖的一种或几种，比例为0.5%～1.5%，避光处保存3.5-5小时，去掉上清液，即可得超浓缩沼泽红假单胞菌，细胞数目可达7.3×1012个/g。
实施例2
一种沼泽红假单胞菌同步化浓缩的应用，取上述经物理浓缩后的沼泽红假单胞菌一份，向其中加入保护剂聚乙二醇400、海藻糖、甘油、谷氨酸钠、吐温80的一种或几种，添加量为8%～35%，混合均匀，即得沼泽红假单胞菌超浓缩活菌制剂；本品性状为液体，有效沼泽红假单胞菌数目可达7×1011 个/ml。
实施例3
一种沼泽红假单胞菌同步化浓缩的应用，取上述物理浓缩后的沼泽红假单胞菌一份，向其中加入二氧化硅、硫酸钠、氧化钙、玉米芯粉及硫酸镁中的一份或几份，低温喷雾干燥处理，粉剂晾干后加入酵母粉一份到三份；制得沼泽红假单胞菌浓缩菌粉；按此方法做成的粉剂产品中沼泽红假单胞菌细胞数目可达5.0×109 个/g。
实施例4
取南美白对虾养殖后期池塘污泥6份，每份100g，与纯净水等重量混合，混匀后测定初始COD、氨氮、、溶解氧、亚硝酸盐指标（COD和溶解氧指标采用国标方法测定，氨氮和亚硝酸盐指标采用分析试剂盒测定）。实验分实验组和对照组，每组两个平行试验；取实施例1浓缩沼泽红假单胞菌1.0ml稀释1000倍，实验组一加入1.0ml稀释后溶液混合均匀；实验组二加入1.0g实施例3粉剂产品混合均匀；对照组加入等重量水混合均匀；放置48h测定上述各项指标，实验结果如下表所示：
由上表数据可知：产品使用前后选取的测量指标数值有较大改善：相比使用前和对照组数据，两个实验组的有毒有害指标（COD、氨氮、亚硝酸盐指标）均显著降低，尤其氨氮和亚硝酸盐指标由含量超标降至低于检出限范围，实验组的溶解氧指标有明显升高，达到正常范围以内。
实验表明：使用上述实施例产品对于降解氨氮、COD、亚硝酸盐指标效果明显，这对于改善养殖中后期老化水体的底质和水质有显著效果。本产品中的高浓度沼泽红假单胞菌适口性好，在养殖前期可作为生物饵料，提供蛋白和B族维生素；在养殖中后期，可用于调控水质，定期泼洒沼泽红假单胞菌有利于在养殖中下层水体形成优势菌相，有效抑制致病菌。
沼泽红假单胞菌经同步化和浓缩处理后，可以有效延长保质期，减少分层及菌体死亡等现象。粉剂产品中添加的有效载体能加快沼泽红假单胞菌的复苏，快速发挥作用。
Claims (3)
1.一种沼泽红假单胞菌同步化浓缩的方法，其特征在于：包括以下步骤：
步骤一、沼泽红假单胞菌培养
三角瓶培养，称取乙酸钠8g/l，氯化铵2g/l，酵母膏3g/l，盐卤5ml/l，氯化钙0.5g/l，黄腐酸钾0.8g/l，磷酸氢二钾1g/l，以上试剂溶解后用浓度为3%双氧水消毒30分钟；灭菌完毕加入碳酸氢钠2g/l溶解,装入1L三角瓶中；或者，
大规模培养，称取乙酸钠8kg/t，氯化铵2 kg/t，酵母膏3 kg/t，盐卤5 L/t，氯化钙0.5 kg/t，黄腐酸钾0.8 kg/t，磷酸氢二钾1 kg/t，以上试剂溶解后用浓度为3%双氧水消毒30分钟；灭菌完毕加入碳酸氢钠2 kg/t溶解，加入到塑料袋中；
步骤二、接种培养
按20%接种量接种沼泽红假单胞菌菌液，32℃，3000-5300lx白炽灯光照条件下培养72h-96h，将培养液稀释100倍，在660nm处测定OD值达到1.8以上；接种所使用的器具均灭菌处理，接种过程无菌操作；
步骤三、菌体同步化处理
将培养液置于黑暗条件下，不接触自然光，按红光:蓝光比例为4：1～1：1进行搭配照射，照射3～5h；目的是使沼泽红假单胞菌代谢活动逐步减慢，形态逐渐趋于一致；
步骤四、物理浓缩处理
向上述同步化处理后的培养液中加入聚丙烯酰胺阳离子、羧甲基纤维素钠、瓜尔豆胶、黄原胶、壳聚糖的一种或几种，比例为0.5%～1.5%，避光处保存3.5-5小时，去掉上清液，即可得超浓缩沼泽红假单胞菌，细胞数目可达7.3×1012个/g。
2.一种沼泽红假单胞菌同步化浓缩的应用，其特征在于：取权利要求1所述的经物理浓缩后的沼泽红假单胞菌一份，向其中加入保护剂聚乙二醇400、海藻糖、甘油、谷氨酸钠、吐温80的一种或几种，添加量为8%～35%，混合均匀，即得沼泽红假单胞菌超浓缩活菌制剂；本品性状为液体，有效沼泽红假单胞菌数目可达7×1011 个/ml。
3.一种沼泽红假单胞菌同步化浓缩的应用，其特征在于：取权利要求1所述的经物理浓缩后的沼泽红假单胞菌一份，向其中加入二氧化硅、硫酸钠、氧化钙、玉米芯粉及硫酸镁中的一份或几份，低温喷雾干燥处理，粉剂晾干后加入酵母粉一份到三份；制得沼泽红假单胞菌浓缩菌粉；按此方法做成的粉剂产品中沼泽红假单胞菌细胞数目可达5.0×109 个/g。
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106244459A (zh) * | 2016-08-31 | 2016-12-21 | 沈阳化工研究院有限公司 | 一种假单胞菌干粉及其制备方法 |
| CN109929783A (zh) * | 2019-04-22 | 2019-06-25 | 广东宏隆生物科技有限公司 | 沼泽红假单胞菌的培养基及培养方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101407774A (zh) * | 2008-11-20 | 2009-04-15 | 中国科学院广州地球化学研究所 | 一种光合细菌制剂的制备工艺 |
| CN102212491A (zh) * | 2011-03-29 | 2011-10-12 | 天津市农业生物技术研究中心 | 一种高细胞浓度光合细菌的简易培养方法 |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101407774A (zh) * | 2008-11-20 | 2009-04-15 | 中国科学院广州地球化学研究所 | 一种光合细菌制剂的制备工艺 |
| CN102212491A (zh) * | 2011-03-29 | 2011-10-12 | 天津市农业生物技术研究中心 | 一种高细胞浓度光合细菌的简易培养方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| D. WESTMACOTT等: "Synchronous Growth of Rhodopseudomonas palustris from the Swarmer Phase", 《JOURNAL OF GENERAL MICROBIOLOGY》 * |
| 沈萍 主编: "《微生物学》", 31 August 2009 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106244459A (zh) * | 2016-08-31 | 2016-12-21 | 沈阳化工研究院有限公司 | 一种假单胞菌干粉及其制备方法 |
| CN109929783A (zh) * | 2019-04-22 | 2019-06-25 | 广东宏隆生物科技有限公司 | 沼泽红假单胞菌的培养基及培养方法 |
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