CN104818305A - 脂肪酶催化合成3-取代-2-吲哚酮类化合物的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种以芳香醛与吲哚-2-酮为底物，以脂肪酶为催化剂，进行的Knoevenagel缩合反应生成3-取代-2-吲哚酮类化合物的方法。其中，3-取代-2-吲哚酮类化合物是合成吲哚类生物碱的重要中间体，同时也具有广泛的药理和生理活性。本发明提供的方法，产物收率为87.8-94.2%，反应条件温和，操作简单，生产成本低，产率高，底物谱宽，对环境污染小。
Description
技术领域
本发明属于生物催化技术领域，涉及一种脂肪酶催化的芳香醛与吲哚-2-酮的Knoevenagel缩合反应的方法。
背景技术
3-取代-2-吲哚酮类化合物是合成吲哚类生物碱的重要中间体，同时也具有广泛的药理和生理活性，例如抗菌活性、抗肿瘤活性、抗炎活性等。这类化合物一般是由吲哚-2-酮和芳香醛在哌啶、哌嗪等有机碱或它们的盐催化下，发生Knoevenage缩合反应而得。但这些催化工艺往往需要使用大量有机溶剂，造成环境污染，反应时间较长，产率也不是很高。但是，近年来出现了微波法、超声波法、研磨法等新方法，还是用了多种催化剂，包括固体催化剂、离子液体、固载催化剂等。但以上很大一部分催化反应体系存在着反应条件苛刻、成本高和难以获得等缺点。
酶作为一种生物催化剂，具有高催化效率、高专一性以及对环境友好等优点，在农药、香精香料、医药及其中间体等高附加值的化合物合成中得到了越来越多的应用。脂肪酶（lipase, E.C.3.1.1.3）是指一类能够催化甘油三酯水解生成脂肪酸、甘油和甘油单酯或二酯的酶，广泛存在于动植物和微生物体中，是工业生产中常见的一种水解酶，常用来催化水解、酯化、酯交换、氨解等反应。然而一种酶有特定的天然底物，因此研究生物酶除天然属性以外的其他催化特性显的特别重要。近年来，酶的催化多功能性已经引起了有机化学家的兴趣。多功能性酶已成功应用于Aldol缩合、Knoevenagel缩合、Michael加成、Henry反应等多种C-C键形成反应中。文献已报道多种脂肪酶能有效催化芳香醛与链状活性亚甲基发生Knoevenage反应，但是与杂环类活性亚甲基化合物的缩合反应至今未见文献报道。
发明内容
现有技术中Knoevenagel缩合反应基本都以化学催化的方法进行，本发明以脂肪酶为催化剂，以芳香醛，与吲哚-2-酮为底物经过缩合反应制得了3-取代-2-吲哚酮类化合物，因此提供了脂肪酶催化反应的新用途。
具体的，本发明的技术方案为：
以吲哚-2-酮为底物，利用脂肪酶催化进行Knoevenagel缩合反应生成3-取代-2-吲哚酮类化合物。对于脂肪酶作为催化剂的理解，应该理解为进行Knoevenagel缩合反应的新用途， 特别是其以吲哚-2-酮作为底物的缩合反应中。
脂肪酶催化合成3-取代-2-吲哚酮类化合物的方法，其中，以芳香醛和吲哚-2-酮为底物，在含有有机溶剂和水的体系中，将底物与脂肪酶接触，进行Knoevenagel缩合反应形成3-取代-2-吲哚酮类化合物。
本发明提供的方法中，缩合反应反应方程式为：
其中Ar为p-NO2C6H4、o-NO2C6H4、m-NO2C6H4、p-CNC6H5、2,4-Cl,ClC6H3、 2,6-Cl,ClC6H3、p-ClC6H4、p-BrC6H4、C6H5、p-MeOC6H5、2-furaryl、p-OHC6H4中的一种。
本发明所述的脂肪酶，为通常意义的脂肪酶，即脂肪酶（lipase, E.C.3.1.1.3），其能够催化甘油三酯水解生成脂肪酸、甘油和甘油单酯或二酯，来源于动植物或者微生物，常用来进行催化水解、酯化、酯交换、氨解等反应。
在本发明中脂肪酶可选自南极假丝酵母脂肪酶B（lipase from Candida antarctica）、猪胰脂肪酶（Porcine pancreas lipase），酶褶皱假丝酵母脂肪酶（Candida rugosa lipase），洋葱伯克霍尔德脂肪酶（Burkholderia cepacia lipase），黑曲霉脂肪酶（Lipase lipoprotein from Aspergillus niger），Novozym 435 脂肪酶(lipase B from Candida antarctica, immobilized on a macroporous acrylic resin)中的一种。其中脂肪酶优选猪胰脂肪（Porcine pancreas lipase）。
在本发明所述的方案中，有机溶剂为甲基叔丁基醚、甲苯、二氯甲烷、四氢呋喃、乙醇、乙腈、正己烷和二甲基亚砜中的一种，优选二甲基亚砜。
本发明所述的方法，在反应体系中，有机溶剂和水的数量关系为水份体积占水和有机溶剂总体积的比例10-20%。
本发明所述的方法，所述反应体系中，芳香醛和吲哚-2-酮的摩尔浓度比为芳香醛:吲哚-2-酮为1:1-2 。
本发明所述的方法，所述反应体系中，酶占总体积的浓度为5-30 mg/ml。
本发明所述的方法，所述反应体系中，所述反应的反应条件为：反应温度，15-55°C；反应时间5-25h。
本发明所述的方法，其中所述反应的具体步骤为：
（a）将芳香醛与吲哚-2-酮混合
（b）在底物中以此加入水和有机溶剂
（c）加入脂肪酶并与底物接触，催化生成3-取代-2-吲哚酮类化合物。
本发明所述的方法，还包括分离纯化3-取代-2-吲哚酮类化合物的步骤，具体的步骤为：
（a）将芳香醛与吲哚-2-酮混合
（b）在底物中以此加入水和有机溶剂
（c）加入脂肪酶并与底物接触，催化生成3-取代-2-吲哚酮类化合物
其特征在于，还包括以下步骤
（d）在体系中加入TLC（石油醚/乙酸乙酯）
（e）反应完毕后过滤除酶；
（f）滤液用水、乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，用无水MgSO4干燥过滤后，减压旋蒸，
（g）粗产物用柱层析分离并回收目标产物。
本发明的有益效果在于：
（1）提供了产物的新的合成方法。以脂肪酶为催化剂，提供了反应条件温和，操作简单，生产成本低，产率高，副产物少，底物适用范围宽，对环境污染小的3-取代-2-吲哚酮类化合物合成方法。
（2）发掘了脂肪酶的新用途，特别是以吲哚-2-酮为底物的Knoevenagel缩合反应。
（3）本发明所述的方法，产物收率为87.8-94.2%，相对于其他合成方法，具备较强的竞争优势。
附图说明
图1 3-（4-硝基苯亚甲基）-1,3-二氢-2H-吲哚-2-酮3-[4-Nitrobenzylidene]indoline-2-one核磁共振氢谱图。
图2 3-（2-硝基苯亚甲基）-1,3-二氢-2H-吲哚-2-酮3-[2-Nitrobenzylidene]indoline-2-one核磁共振氢谱图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步说明。所列的实施例仅作阐示之用，并表明本发明的精神和范围并非限于此中的细节及其修改案。
实施例1
本发明所涉及的生物酶及其他试剂均为市场购买，其中试剂均未经进一步纯化；核磁共振氢谱(1HNMR)用Bruker Advance 2B 400 核磁共振波谱仪进行测定，频率为400MHz，溶剂为氘代二甲基亚砜，内标为四甲基硅（TMS）。
所有实例中，脂肪酶催化的芳香醛与吲哚-2-酮的Knoevenagel缩合反应，其反应方程式为：
。
实例1：将2 mmol对硝基苯甲醛和2mmol吲哚-2-酮，加入10 ml反应瓶中，然后加入125mg猪胰脂肪酶，1ml去离子水，4ml DMSO，45°C下搅拌反应，TLC（石油醚/乙酸乙酯，1/1，v/v）监测反应进行情况。10h后过滤除酶，反应完毕后过滤除酶，滤纸和滤液分别用CH2Cl2和水洗涤三次。滤液用5ml水、10ml乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，用无水MgSO4干燥过滤后，减压旋蒸，粗产物经柱层析[石油醚/乙酸乙酯，9/1-2/1，v/v]分离即可得到纯化的目标产物，收率为94.2%，mp: 245–250°C。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 10.72 (s, 1H), 8.35 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.95 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.67 (s, 1H), 7.41 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.27 (t, J = 7.7, 0.8 Hz, 1H), 6.86 (m, J = 10.1, 8.5, 4.3 Hz, 2H)。
实例2：将2 mmol邻硝基苯甲醛和2mmol吲哚-2-酮，加入10 ml反应瓶中，然后加入125mg猪胰脂肪酶，1ml去离子水，4ml DMSO，45°C下搅拌反应，TLC（石油醚/乙酸乙酯，1/1，v/v）监测反应进行情况。10h后后过滤除酶，反应完毕后过滤除酶，滤纸和滤液分别用CH2Cl2和水洗涤三次。滤液用5ml水、10ml乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，用无水MgSO4干燥过滤后，减压旋蒸，粗产物经柱层析[石油醚/乙酸乙酯，9/1-2/1，v/v]分离即可得到纯化的目标产物，收率为89.2%，mp:199-200°C。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 10.54 (s, 1H), 8.17 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.86 – 7.73 (m, 2H), 7.66 (dd, J = 16.9, 7.7 Hz, 2H), 7.26 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.01 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 6.83 (d, J = 7.7 Hz, 1H)。
实例3：将2 mmol对氯苯甲醛和2mmol吲哚-2-酮，加入10 ml反应瓶中，然后加入125mg猪胰脂肪酶，1ml去离子水，4ml DMSO，45°C下搅拌反应，TLC（石油醚/乙酸乙酯，1/1，v/v）监测反应进行情况。15h后后过滤除酶，反应完毕后过滤除酶，滤纸和滤液分别用CH2Cl2和水洗涤三次。滤液用5ml水、10ml乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，用无水MgSO4干燥过滤后，减压旋蒸，粗产物经柱层析[石油醚/乙酸乙酯，9/1-2/1，v/v]分离即可得到纯化的目标产物，收率为91.6%，mp:180-182°C。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 10.61 (s, 1 H), 7.72 (d, J=8.3 Hz, 2 H), 7.58 (m, 3 H), 7.47 (d, J=7.5 Hz, 1 H), 7.23 (t, J=7.5 Hz, 1 H), 6.85 (t, J=8.7 Hz, 2 H)。
实例4：将2 mmol苯甲醛和2mmol吲哚-2-酮，加入10 ml反应瓶中，然后加入125 mg猪胰脂肪酶，1ml去离子水，4ml DMSO，45°C下搅拌反应，TLC（石油醚/乙酸乙酯，1/1，v/v）监测反应进行情况。20h后后过滤除酶，反应完毕后过滤除酶，滤纸和滤液分别用CH2Cl2和水洗涤三次。滤液用5ml水、10ml乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，用无水MgSO4干燥过滤后，减压旋蒸，粗产物经柱层析[石油醚/乙酸乙酯，9/1-2/1，v/v]分离即可得到纯化的目标产物，收率为90.2%，mp:175-176°C。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ10.59 (s, 1 H), 7.69 (d, J=7.2 Hz, 2 H), 7.62 (s, 1 H), 7.49 (m, 4H), 7.22 (t, J=7.5 Hz, 1 H), 6.84 (dd, J=12.8, 7.9 Hz, 2 H)。
实例5：将2 mmol对甲氧基苯甲醛和2mmol吲哚-2-酮，加入10 ml反应瓶中，然后加入125mg猪胰脂肪酶，1ml去离子水，4ml DMSO，45°C下搅拌反应，TLC（石油醚/乙酸乙酯，1/1，v/v）监测反应进行情况。20h后后过滤除酶，反应完毕后过滤除酶，滤纸和滤液分别用CH2Cl2和水洗涤三次。滤液用5ml水、10ml乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，用无水MgSO4干燥过滤后，减压旋蒸，粗产物经柱层析[石油醚/乙酸乙酯，9/1-2/1，v/v]分离即可得到纯化的目标产物，收率为84.4%，mp: 158-159°C。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ10.54 (s, 1 H), 7.70 (d, J=8.7 Hz, 2 H), 7.64 (d, J=7.9 Hz, 1 H), 7.57 (s, 1 H), 7.21 (t, J=7.5 Hz, 1 H), 7.08 (d, J=8.7 Hz, 2 H), 6.86 (m, 2 H), 3.83 (s, 3 H)。
实例5：将2 mmol对甲氧基苯甲醛和2mmol吲哚-2-酮，加入10 ml反应瓶中，然后加入125mg 猪胰脂肪酶，1ml去离子水，4ml DMSO，45°C下搅拌反应，TLC（石油醚/乙酸乙酯，1/1，v/v）监测反应进行情况。20h后后过滤除酶，反应完毕后过滤除酶，滤纸和滤液分别用CH2Cl2和水洗涤三次。滤液用5ml水、10ml乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，用无水MgSO4干燥过滤后，减压旋蒸，粗产物经柱层析[石油醚/乙酸乙酯，9/1-2/1，v/v]分离即可得到纯化的目标产物，收率为84.4%，mp: 158-159°C。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ10.54 (s, 1 H), 7.70 (d, J=8.7 Hz, 2 H), 7.64 (d, J=7.9 Hz, 1 H), 7.57 (s, 1 H), 7.21 (t, J=7.5 Hz, 1 H), 7.08 (d, J=8.7 Hz, 2 H), 6.86 (m, 2 H), 3.83 (s, 3 H)。
实例6：将2 mmol对硝基苯甲醛和2mmol吲哚-2-酮，加入10 ml反应瓶中，然后加入200mg 猪胰脂肪酶，1ml去离子水，4ml 四氢呋喃，35°C下搅拌反应，TLC（石油醚/乙酸乙酯，1/1，v/v）监测反应进行情况。20h后过滤除酶，反应完毕后过滤除酶，滤纸和滤液分别用CH2Cl2和水洗涤三次，用无水MgSO4干燥过滤后，减压旋蒸，粗产物经柱层析[石油醚/乙酸乙酯，9/1-2/1，v/v]分离即可得到纯化的目标产物，收率为51.8%，mp: 245–250°C。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 10.72 (s, 1H), 8.35 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.95 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.67 (s, 1H), 7.41 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.27 (t, J = 7.7, 0.8 Hz, 1H), 6.86 (m, J = 10.1, 8.5, 4.3 Hz, 2H)。
实例7：将2 mmol对硝基苯甲醛和2mmol吲哚-2-酮，加入10 ml反应瓶中，然后加入200mg 猪胰脂肪酶，1ml去离子水，4ml 乙腈，35°C下搅拌反应，TLC（石油醚/乙酸乙酯，1/1，v/v）监测反应进行情况。20h后过滤除酶，反应完毕后过滤除酶，滤纸和滤液分别用CH2Cl2和水洗涤三次，用无水MgSO4干燥过滤后，减压旋蒸，粗产物经柱层析[石油醚/乙酸乙酯，9/1-2/1，v/v]分离即可得到纯化的目标产物，收率为40.6%，mp: 245–250°C。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 10.72 (s, 1H), 8.35 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.95 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.67 (s, 1H), 7.41 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.27 (t, J = 7.7, 0.8 Hz, 1H), 6.86 (m, J = 10.1, 8.5, 4.3 Hz, 2H)。
实例8：将2 mmol对硝基苯甲醛和2mmol吲哚-2-酮，加入10 ml反应瓶中，然后加入200mg 猪胰脂肪酶，0.5ml去离子水，4.5ml DMSO，35°C下搅拌反应，TLC（石油醚/乙酸乙酯，1/1，v/v）监测反应进行情况。10h后过滤除酶，反应完毕后过滤除酶，滤纸和滤液分别用CH2Cl2和水洗涤三次。滤液用5ml水、10ml乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，用无水MgSO4干燥过滤后，减压旋蒸，粗产物经柱层析[石油醚/乙酸乙酯，9/1-2/1，v/v]分离即可得到纯化的目标产物，收率为80.2%，mp: 245–250°C。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 10.72 (s, 1H), 8.35 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.95 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.67 (s, 1H), 7.41 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.27 (t, J = 7.7, 0.8 Hz, 1H), 6.86 (m, J = 10.1, 8.5, 4.3 Hz, 2H)。
实例9：将2 mmol对硝基苯甲醛和2mmol吲哚-2-酮，加入10 ml反应瓶中，然后加入125mg 猪胰脂肪酶，1ml去离子水，4ml DMSO，25°C下搅拌反应，TLC（石油醚/乙酸乙酯，1/1，v/v）监测反应进行情况。10h后过滤除酶，反应完毕后过滤除酶，滤纸和滤液分别用CH2Cl2和水洗涤三次。滤液用5ml水、10ml乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，用无水MgSO4干燥过滤后，减压旋蒸，粗产物经柱层析[石油醚/乙酸乙酯，9/1-2/1，v/v]分离即可得到纯化的目标产物，收率为65.5%，mp: 245–250°C。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 10.72 (s, 1H), 8.35 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.95 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.67 (s, 1H), 7.41 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.27 (t, J = 7.7, 0.8 Hz, 1H), 6.86 (m, J = 10.1, 8.5, 4.3 Hz, 2H)。
实例10：将2 mmol对硝基苯甲醛和2 mmol吲哚-2-酮，加入10 ml反应瓶中，然后加入25mg 猪胰脂肪酶，1ml去离子水，4ml DMSO，45°C下搅拌反应，TLC（石油醚/乙酸乙酯，1/1，v/v）监测反应进行情况。5h后过滤除酶，反应完毕后过滤除酶，滤纸和滤液分别用CH2Cl2和水洗涤三次。滤液用5ml水、10ml乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，用无水MgSO4干燥过滤后，减压旋蒸，粗产物经柱层析[石油醚/乙酸乙酯，9/1-2/1，v/v]分离即可得到纯化的目标产物，收率为96.8%，mp: 245–250°C。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 10.72 (s, 1H), 8.35 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.95 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.67 (s, 1H), 7.41 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.27 (t, J = 7.7, 0.8 Hz, 1H), 6.86 (m, J = 10.1, 8.5, 4.3 Hz, 2H)。
实例12：将2 mmol对硝基苯甲醛和4mmol吲哚-2-酮，加入10 ml反应瓶中，然后加入150mg 猪胰脂肪酶，1ml去离子水，4ml DMSO，45°C下搅拌反应，TLC（石油醚/乙酸乙酯，1/1，v/v）监测反应进行情况。5h后过滤除酶，反应完毕后过滤除酶，滤纸和滤液分别用CH2Cl2和水洗涤三次。滤液用5ml水、10ml乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，用无水MgSO4干燥过滤后，减压旋蒸，粗产物经柱层析[石油醚/乙酸乙酯，9/1-2/1，v/v]分离即可得到纯化的目标产物，收率为96.6%，mp: 245–250°C。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 10.72 (s, 1H), 8.35 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.95 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.67 (s, 1H), 7.41 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.27 (t, J = 7.7, 0.8 Hz, 1H), 6.86 (m, J = 10.1, 8.5, 4.3 Hz, 2H)。
实例13：将2 mmol对硝基苯甲醛和2mmol吲哚-2-酮，加入10 ml反应瓶中，然后加入125mg 褶皱假丝酵母脂肪酶，1ml去离子水，4ml DMSO，45°C下搅拌反应，TLC（石油醚/乙酸乙酯，1/1，v/v）监测反应进行情况。25h后过滤除酶，反应完毕后过滤除酶，滤纸和滤液分别用CH2Cl2和水洗涤三次。滤液用5ml水、10ml乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，用无水MgSO4干燥过滤后，减压旋蒸，粗产物经柱层析[石油醚/乙酸乙酯，9/1-2/1，v/v]分离即可得到纯化的目标产物，收率为73.5%，mp: 245–250°C。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 10.72 (s, 1H), 8.35 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.95 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.67 (s, 1H), 7.41 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.27 (t, J = 7.7, 0.8 Hz, 1H), 6.86 (m, J = 10.1, 8.5, 4.3 Hz, 2H)。
Claims (10)
1.脂肪酶催化进行Knoevenagel缩合反应的新用途，其特征在于，催化反应体系的底物为吲哚-2-酮。
2.脂肪酶催化合成3-取代-2-吲哚酮类化合物的方法，其特征在于，以芳香醛和吲哚-2-酮为底物，在含有有机溶剂和水的体系中，将底物与脂肪酶接触，进行Knoevenagel缩合反应形成3-取代-2-吲哚酮类化合物。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述反应反应方程式为：
其中Ar为p-NO2C6H4、o-NO2C6H4、m-NO2C6H4、p-CNC6H5、2,4-Cl,ClC6H3、 2,6-Cl,ClC6H3、p-ClC6H4、p-BrC6H4、C6H5、p-MeOC6H5、2-furaryl、p-OHC6H4 、C6H5CH=CH、P-FC6H4、p-MeC6H5、o- MeC6H5、o- MeOC6H5中的一种；Ar优选为p-NO2C6H4、o-NO2C6H4、m-NO2C6H4、p-CNC6H5、2,4-Cl,ClC6H3、 2,6-Cl,ClC6H3、p-ClC6H4、p-BrC6H4、C6H5、p-MeOC6H5、2-furaryl、p-OHC6H4中的一种。
4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述脂肪酶选自南极假丝酵母脂肪酶B（lipase from Candida antarctica）、猪胰脂肪（Porcine pancreas lipase），酶褶皱假丝酵母脂肪酶（Candida rugosa lipase），洋葱伯克霍尔德脂肪酶（Burkholderia cepacia lipase），黑曲霉脂肪酶（Lipase lipoprotein from Aspergillus niger），Novozym 435 脂肪酶(lipase B from Candida antarctica, immobilized on a macroporous acrylic resin)中的一种，优选猪胰脂肪（Porcine pancreas lipase）。
5.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述有机溶剂为甲基叔丁基醚、甲苯、二氯甲烷、四氢呋喃、乙醇、乙腈、正己烷和二甲基亚砜中的一种，优选二甲基亚砜。
6.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述反应体系中，水份体积占水和有机溶剂总体积的比例为10-20%。
7.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述反应体系中，芳香醛和吲哚-2-酮的摩尔浓度比为芳香醛:吲哚-2-酮为1:1-2 。
8.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述反应体系中，酶占总体积的浓度为5-30 mg/ml。
9.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述反应的反应条件为：反应温度，15-55°C；反应时间5-25h。
10.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述反应的具体步骤为：
（a）将芳香醛与吲哚-2-酮混合
（b）在底物中以此加入水和有机溶剂
（c）加入脂肪酶并与底物接触，催化生成3-取代-2-吲哚酮类化合物。
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