CN104805015B - 淡水微藻及其应用 - Google Patents

淡水微藻及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN104805015B
CN104805015B CN201410038729.8A CN201410038729A CN104805015B CN 104805015 B CN104805015 B CN 104805015B CN 201410038729 A CN201410038729 A CN 201410038729A CN 104805015 B CN104805015 B CN 104805015B
Authority
CN
China
Prior art keywords
microalgae
algae
application
freshwater
culture
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201410038729.8A
Other languages
English (en)
Other versions
CN104805015A (zh
Inventor
胡光荣
李福利
袁程
范勇
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Boeing China Co Ltd
Qingdao Institute of Bioenergy and Bioprocess Technology of CAS
Original Assignee
Boeing China Co Ltd
Qingdao Institute of Bioenergy and Bioprocess Technology of CAS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Boeing China Co Ltd, Qingdao Institute of Bioenergy and Bioprocess Technology of CAS filed Critical Boeing China Co Ltd
Priority to CN201410038729.8A priority Critical patent/CN104805015B/zh
Publication of CN104805015A publication Critical patent/CN104805015A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN104805015B publication Critical patent/CN104805015B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/89—Algae ; Processes using algae
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/12—Unicellular algae; Culture media therefor
    • C12N1/125—Unicellular algae isolates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N65/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing material from algae, lichens, bryophyta, multi-cellular fungi or plants, or extracts thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N65/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing material from algae, lichens, bryophyta, multi-cellular fungi or plants, or extracts thereof
    • A01N65/03—Algae
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
    • C12P7/6436—Fatty acid esters
    • C12P7/6445—Glycerides
    • C12P7/6463—Glycerides obtained from glyceride producing microorganisms, e.g. single cell oil
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/07—Bacillus
    • C12R2001/12—Bacillus polymyxa ; Paenibacillus polymyxa
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02E—REDUCTION OF GREENHOUSE GAS [GHG] EMISSIONS, RELATED TO ENERGY GENERATION, TRANSMISSION OR DISTRIBUTION
    • Y02E50/00—Technologies for the production of fuel of non-fossil origin
    • Y02E50/10—Biofuels, e.g. bio-diesel

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)

Abstract

本发明涉及微藻筛选的方法，具体的说是一种淡水微藻及其应用。微藻藻株为淡水微藻藻株Didymogenes sp.HN‑4，保藏时间为2013年10月24日，保藏编号是CGMCC No.8401。将所述微藻藻株用于生产油脂、生物柴油、藻类蛋白、脂肪酸或生物质。本发明还公开了上述藻株在不同培养基成分下的生长状况和油脂含量。是一种环保、成本低廉的生产生物柴油和降低微藻虫害的生产技术。

Description

淡水微藻及其应用
技术领域
本发明涉及微藻筛选的方法，具体的说是一种淡水微藻及其应用。
背景技术
由于能源危机和全球变暖，加之人类对环境保护问题的重视，以及对未来化石燃料涨价的预期，寻找化石能源替代品的可再生新能源日益成为科学和产业界的研究热点。在新能源中，微藻柴油被认为是最有希望的可再生绿色能源之一。微藻具有较高的光合效率，能够充分利用边际土地资源进行规模化养殖，避免了与粮食作物竞争宝贵的土地资源。此外，微藻还能用于污水处理以及碳捕获。因此，发展微藻生物燃料也有利于环境保护。
微藻规模化培养最早始于20世纪60年代，20世纪70年代，由于能源危机，美国国家可再生能源实验室启动了水生生物物种计划（aquatic species program，ASP），筛选到生长速度快、油脂含量高的微藻300余株，探索利用微藻生产可再生能源的可行性。近年来，我国也对利用微藻生产生物燃料开展了大量的研究，并在该领域取得了长足的进展。
国内外的研究证明，利用微藻生产生物燃料在理论上是可行的。但是在实际生产中，由于微藻的规模化培养、收集和油脂的精炼等方面仍然存在着技术难题，导致应用微藻生产生物燃料过程中的成本居高不下，限制了微藻生物燃料产业化的实现。其中，微藻规模化养殖的成本占据了总生产成本的很大比例。造成微藻规模化养殖成本过高的因素主要包括：微藻光合效率远远低于理论值；生物量和油脂含量偏低；有害生物（如轮虫、真菌）的污染导致微藻细胞的大量死亡等。解决上述问题的关键在于筛选高光效、高含油和鲁棒性强的微藻菌种用于微藻规模化养殖以降低微藻生物燃料的生产成本。
微藻在室外的规模化培养过程中，容易受到许多有害生物的污染，从而影响微藻的活力与生物量的产出。其中，轮虫是能够取食微藻的微型浮游动物，爆发时其虫体密度在微藻培养容器中可达到1000头/ml，在短时间内吞噬微藻细胞，或促使微藻细胞发生凝集而沉降到培养容器底部，导致的微藻生物量损失可以高达九成。而且，目前尚无成熟而可靠的控制轮虫危害的方法。而在自然界中，已经有报道包括部分微藻在内的微型浮游植物能够抑制轮虫的生长。因此，从自然界中筛选抗轮虫微藻用于微藻生物燃料的生产与进一步开发室可行的途径之一。
发明内容
本发明目的在于提供一种淡水微藻及其应用。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：
一种淡水微藻：微藻藻株为淡水微藻藻株Didymogenes sp.HN-4，保藏时间为2013年10月24日，保藏编号是CGMCC No.8401。
一种淡水微藻的应用，将所述微藻藻株用于生产油脂、生物柴油、藻类蛋白、脂肪酸或生物质。
进一步的说，将所述微藻藻株于BG-11培养基中连续培养或批次培养，进而使微藻能够大量生产油脂、生物柴油、藻类蛋白、脂肪酸或生物质。
更进一步的说，将所述微藻首先初始培养而后扩大培养，初始培养的条件为：连续光照，光照强度为60～500μmol photons/m2/s1，温度为20℃～30℃；扩大培养的条件:连续光照，光照强度为60～1000μmol photons m-2s-1，温度为24℃～30℃。
所述BG-11培养基中NaNO3浓度为0.15g/L到1.5g/L；磷酸氢二钾浓度在0.04g/L。进一步的说，所述微藻培养中NaNO3浓度为0.375g/L。
一种淡水微藻的应用，所述微藻用于制备抑制轮虫的抑制剂。
将所述微藻培养在BG-11或TAP培养基中，所得培养液或滤液用于制备抑制轮虫的抑制剂。将所述微藻培养在TAP培养基中。
与现有技术相比，本发明专利具有以下优势：
1.应用潜力巨大：利用微藻生产生物柴油具有巨大的潜力，本发明的筛选的微藻藻株为Didymogenes sp.HN-4，属于一种少见的藻属，与其他微藻相比，该藻能够抑制轮虫的生长与爆发，在胁迫环境下能够稳定生长，具有较强的鲁棒性，并在细胞内积累大量的油脂，与其他报道的藻株相比具有巨大的优势。
2.油脂产率较高：本发明的微藻油脂含量最高为46.35%（油脂占细胞干重），培养周期12-16天，油脂含量和培养周期均较优。
3.本发明利用微藻藻株Didymogenes sp.HN-4生产生物柴油，并且在生产生物柴油的同时，能够抑制轮虫的生长与爆发。进而可将所述藻株用于大规模培养和用于生产油脂、生物柴油、藻类蛋白、脂肪酸和/或生物质成分的应用。
附图说明
图1为本发明实施例提供的藻细胞18S rRNA序列。
图2为本发明实施例提供的藻细胞ITS1-5.8S-ITS2序列。
图3为本发明实施例提供的微藻细胞扫描电镜形态图。
图4为本发明实施例提供的Didymogenes sp.HN-4微藻培养液滤液对轮虫生长的抑制图。
图5为本发明实施例提供的轮虫在Didymogenes sp.HN-4藻液和滤液中的生长形态图。
具体实施方式
根据下列实施例，可以更好的理解本发明专利。实施例中，所描述的物料配比、工艺条件及其结果仅用于说明本发明，而不应当限制权利要求书中所详细描述的本发明的范围。
本发明提供的油脂含量高、能够抑制轮虫生长的新分离的淡水微藻藻株Didymogenes sp.HN-4，其中所述分离的微藻藻株基因组包括一个以上选自由下列序列组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO:1（18S-369），SEQ ID NO:2（ITS1-5.8S-ITS2653）。所述藻株的形态特征见图3，藻细胞圆形，单细胞，直径4-6μm，藻细胞表面无特殊结构如鞭毛、网状结构、突起等。所述Didymogenes sp.HN-4藻株于2013年10月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，100101)，保藏编号为CGMCC No.8401，分类学命名为Didymogenes sp.。
微藻藻株的大规模培养，其具体操作步骤如下：微藻培养使用BG-11为培养基，向该培养基中接种藻株Didymogenes sp.HN-4于三角瓶中，其中初始接种密度OD750为0.1-0.3，然后在连续光照的条件下培养，光照强度为60～80μmol photons/m2/s，温度为24℃～30℃，培养4～6天，扩大培养至400ml柱式培养器中，光照强度为60～80μmol photons/m2/s，温度为24℃～30℃，培养14天，离心藻细胞液，收获微藻细胞。
Didymogenes sp.HN-4藻株可以在18℃～30℃温度条件下，50～1000μmolphotons/m2/s光照强度下正常生长。
培养第一方面的微藻藻株的培养基为BG-11培养基，培养方法为连续培养方法，所述方法包括初始培养和扩大培养，所述初始培养的条件为：连续光照，光照强度可以为60-500μmol photons/m2/s；优选，光照强度可以为60-300μmol photons/m2/s。更优选，光照强度可以为60-80μmol photons/m2/s，温度为24℃～30℃；扩大培养的条件:连续光照，光照强度为200-1000μmol photons/m2/s，优选，光照强度可以为200～600μmol photons/m2/s，更优选，光照强度可以为280-320μmol photons/m2/s，温度为24℃～30℃。
其中，上述培养微藻藻株的BG-11培养基的标准配方见实施例2，NaNO3浓度因培养目的不同而有所改变。优化培养中加入0.15g/L到1.5g/L的NaNO3，40mg/L的磷酸氢二钾；优选，培养微藻藻株的培养基中加入0.15g/L到0.75g/L的NaNO3，40mg/L的磷酸氢二钾。更优选，培养微藻藻株的培养基中NaNO3浓度可以为0.15g/L、0.75/L和1.50g/L，40mg/L的磷酸氢二钾。
所述的微藻在生物柴油、油脂、藻类蛋白、脂肪酸和/或生物质成分中的生产应用，藻株Didymogenes sp.HN-4在BG-11培养基中生长，通过微藻的生长积累油脂，以微藻生物质为原料生产生物柴油。
所述的微藻在抗轮虫中的生产应用，微藻藻株Didymogenes sp.HN-4在TAP或BG-11培养基中培养，其藻液和滤液能够抑制轮虫的生长。
具体，在BG-11培养基中培养所述微藻藻株，配方同实施例2。培养条件：灭菌三角瓶中静置或震荡培养，光照强度为100-200μmol photons/m2/s，温度为24℃～30℃。在TAP培养基中培养所述微藻藻株，配方同实施例4。培养条件：灭菌三角瓶中静置或震荡培养，光照强度为100-200μmol photons/m2/s，温度为24℃～30℃。
实施例1：Didymogenes sp.HN-4藻株的分离
Didymogenes sp.HN-4分离于湖南省某地池塘，具体过程为：用无菌瓶取适量池塘水样，在实验室无菌条件下，涂布BG-11培养基平板，置光照培养箱，25℃条件下培养至出现藻落，挑取多个藻落再进行多次划线分离的步骤，直至得到完全纯化的藻落。即得到HN-4，经18S rDNA和ITS1-5.8S-ITS DNA序列的测序分析，鉴定为Didymogenes属物种.。
在无菌条件下在固体平板上挑取Didymogenes sp.HN-4单菌落，经反复划线挑取获得纯化的藻落，其保藏信息为Didymogenes sp.HN-4藻株于2013年10月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，100101)，保藏编号为CGMCC No.8401。
实施例2：Didymogenes sp.HN-4藻液的初始培养
在实验室条件下，将上述Didymogenes sp.HN-4以试管斜面培养基划线保存，或者以三角瓶液体培养基形式保存，所用培养基为BG-11培养基，两种保存形式都是以2个月为一周期转接保存藻种的活性。用于接种的藻液一般在200μmol photons/m2/s以下的光照、25℃下培养7～10天的新鲜藻液，OD750达到2.0，以10％的接种量（体积比）接种至含有50ml灭菌BG-11培养液（NaNO31.5g/L；K2HPO440mg/L；MgSO4·7H2O75mg/L；CaCl2·2H2O36mg/L；柠檬酸6mg/L；柠檬酸铁铵6mg/L；Na2EDTA1mg/L；NaCO320mg/L；H3BO32.86mg/L；MnCl2·4H2O1.81mg/L；ZnSO4·7H2O0.222mg/L；NaMoO4·2H2O0.39mg/L；CuSO4·5H2O0.079mg/L；Co(NO3)2·6H2O0.049mg/L；去离子水1L，调节pH至7.4）的100ml的三角瓶中；然后在连续光照的条件下培养，光照强度为60～80μmol photons/m2/s，温度为24℃～30℃，培养7～9天至指数生长期末期，获得Didymogenes sp.HN-4藻液的初始藻液(此时OD750值为2.0)。
实施例3Didymogenes sp.HN-4藻液的扩大培养及其用于油脂的生产
将上述获得的初始藻液，接种于250ml的灭菌BG-11培养液（BG-11培养液中的成分为K2HPO440mg/L；MgSO4·7H2O75mg/L；CaCl2·2H2O36mg/L；柠檬酸6mg/L；柠檬酸铁铵6mg/L；Na2EDTA1mg/L；NaCO320mg/L；H3BO32.86mg/L；MnCl2·4H2O1.81mg/L；ZnSO4·7H2O0.222mg/L；NaMoO4·2H2O0.39mg/L；CuSO4·5H2O0.079mg/L；Co(NO3)2·6H2O0.049mg/L；去离子水1L，调节pH至7.4）中，同时向培养液中加入硝酸钠，硝酸钠的含量为0.375g/L，接入细胞终浓度OD750为0.2，采用柱式培养器，连续光照，光照强度为400～500μmol photons/m2/s，温度为24℃～30℃，CO2浓度在2%，通气培养16天后，收集、干燥、称重，生物量达到4.44g/L。
培养15天后，通过离心获得藻渣，经冷冻干燥(Alpha1-2LD plus,德国MartinChrist，温度-55℃)24小时后获得Didymogenes sp.HN-4的干燥粉。所述干燥粉的油脂提取采用氯仿-甲醇（2:1,v:v）体系（50mg藻粉使用6ml的氯仿-甲醇混合液），在30℃下180rpm振荡过夜，离心后取上清液，并添加适量的甲醇和水，使氯仿、甲醇、水的体积比为10:10:9，离心分层后取下层氯仿层，并采用通氮气的方法使氯仿挥发干，残留的油脂经干燥后称重分析（具体操作方法参照文献Bligh EG,Dyer WJ.A rapid method of total lipidextraction and purification.Can J Biochem Physiol1959;377:911-7.）。油脂在氮气保护下干燥，称重分析后，获得的油脂含量为46.35%。
实施例4：Didymogenes sp.HN-4用于抗轮虫测试
将实施例1获得的Didymogenes sp.HN-4初始藻液接种于30ml的灭菌TAP培养液（Tris2.42g/L；NH4Cl0.375g/L；MgSO4·7H2O0.1g/L；CaCl2·2H2O0.05g/L；K2HPO40.108g/L；KH2PO40.054g/L；Na2EDTA·2H2O0.2g/L；ZnSO4·7H2O0.22g/L；H3BO30.057g/L；MnCl2·4H2O0.1g/L；FeSO4·7H2O0.01g/L；CoCl2·6H2O0.03g/L；CuSO4·5H2O0.03g/L；(NH4)6Mo7O24·4H2O0.02g/L）或BG-11培养液（NaNO31.5g/L；K2HPO440mg/L；MgSO4·7H2O75mg/L；CaCl2·2H2O36mg/L；柠檬酸6mg/L；柠檬酸铁铵6mg/L；Na2EDTA1mg/L；NaCO320mg/L；H3BO32.86mg/L；MnCl2·4H2O1.81mg/L；ZnSO4·7H2O0.222mg/L；NaMoO4·2H2O0.39mg/L；CuSO4·5H2O0.079mg/L；Co(NO3)2·6H2O0.049mg/L；去离子水1L，调节pH至7.4）中，接入细胞终浓度OD750为0.2，连续光照，光照强度为150～200μmol photons/m2/s，温度为30℃，同时接种轮虫，轮虫的初始密度调节为30头/ml，震荡培养8天，每隔两天记录藻液中的轮虫密度和藻细胞的密度。在第8天，轮虫的密度小于100头/ml，而且在整个培养过程中，轮虫的密度也小于100头/ml，轮虫的增长率在Didymogenes sp.HN-4的TAP和BG-11培养液中分别为0.16和0.203，其生长受到明显的抑制。轮虫在Didymogenes sp.HN-4的藻液中行动变得迟缓，取食减少（轮虫消化***中的微藻数量很少），虫体肿胀（图5）。
实施例5：Didymogenes sp.HN-4微藻培养滤液用于抑制轮虫生长
将实施例1中获得的Didymogenes sp.HN-4初始藻液接种于500ml的灭菌TAP培养液中，培养条件与实施例4同，接种后藻液的初始浓度OD750为0.2，连续光照，光照强度为150～200μmol photons/m2/s，温度为24℃～30℃，CO2浓度在1%，震荡培养6-8天后，离心，收集上清液。上清液使用滤膜(0.22μm)过滤3次去除微藻细胞得到TAP滤液。在50ml三角瓶中分别注入30ml Didymogenes sp.HN-4的TAP滤液、30ml Didymogenes sp.HN-4的75%TAP滤液（75%滤液为TAP滤液：无菌水=3:1（v:v））和30ml Didymogenes sp.HN-4的50%滤液（50%滤液为TAP滤液：无菌水=1:1），然后补充相应的营养盐，使其浓度等于新鲜TAP培养液中的浓度（Tris2.42g/L；NH4Cl0.375g/L；MgSO4·7H2O0.1g/L；CaCl2·2H2O0.05g/L；K2HPO40.108g/L；KH2PO40.054g/L；Na2EDTA·2H2O0.2g/L；ZnSO4·7H2O0.22g/L；H3BO30.057g/L；MnCl2·4H2O0.1g/L；FeSO4·7H2O0.01g/L；CoCl2·6H2O0.03g/L；CuSO4·5H2O0.03g/L；(NH4)6Mo7O24·4H2O0.02g/L）。在上述滤液中接种Chlorella sp.微藻和轮虫，轮虫的初始密度为30头/ml。6天后记录上述滤液中的轮虫密度和藻细胞密度。在100%滤液中，轮虫的密度受到了明显的抑制，小于160头/ml（图4）。
实施例6：Didymogenes sp.HN-4在跑道池中培养时对轮虫生长的抑制
将实施例1中获得的Didymogenes sp.HN-4初始藻液接种于500ml的灭菌BG-11培养液中，培养条件与实施例4同，接种后藻液的初始浓度OD750为0.2，连续光照，光照强度为150～200μmol photons/m2/s，温度为24℃～30℃，6天后收集所有的藻细胞，重新接种于5LBG-11培养液中，6天后收集藻细胞接种于40L BG-11培养液中，当OD750达到2.0后，接种于开放式跑道池的240L BG-11培养液中，自然光照（0～1500μmol photons/m2/s），昼夜交替，温度24℃～32℃，间歇补充CO2。同时接种轮虫，轮虫的初始密度为30头/ml。6天后记录跑道池中的轮虫密度和Didymogenes sp.HN-4的生物量分别为326头/ml和0.7g/L。

Claims (9)

1.一种淡水微藻，其特征在于：微藻藻株为淡水微藻藻株Didymogenes sp.HN-4，保藏时间为2013年10月24日，保藏编号是CGMCC No.8401。
2.一种权利要求1所述的淡水微藻的应用，其特征在于：将所述微藻藻株用于生产油脂、生物柴油、藻类蛋白、脂肪酸。
3.按权利要求2所述的淡水微藻的应用，其特征在于：将所述微藻藻株于BG-11培养基中连续培养或批次培养，进而使微藻能够生产油脂、生物柴油、藻类蛋白、脂肪酸。
4.按权利要求3所述的淡水微藻的应用，其特征在于：将所述微藻首先初始培养而后扩大培养，初始培养的条件为：连续光照，光照强度为60～500μmol photons/m2/s，温度为20℃～30℃；扩大培养的条件:连续光照，光照强度为60～1000μmol photons/m2/s，温度为24℃～30℃。
5.按权利要求3所述的淡水微藻的应用，其特征在于：所述BG-11培养基中NaNO3浓度为0.15g/L到1.5g/L。
6.按权利要求5所述的淡水微藻的应用，其特征在于：所述微藻培养中NaNO3浓度为0.375g/L。
7.一种权利要求1所述的淡水微藻的应用，其特征在于：所述微藻用于制备抑制轮虫的抑制剂。
8.权利要求7所述的淡水微藻的应用，其特征在于：将所述微藻培养在BG-11或TAP培养基中，所得培养液或滤液用于制备抑制轮虫的抑制剂。
9.权利要求8所述的淡水微藻的应用，其特征在于：将所述微藻培养在TAP培养基中。
CN201410038729.8A 2014-01-26 2014-01-26 淡水微藻及其应用 Active CN104805015B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410038729.8A CN104805015B (zh) 2014-01-26 2014-01-26 淡水微藻及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410038729.8A CN104805015B (zh) 2014-01-26 2014-01-26 淡水微藻及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN104805015A CN104805015A (zh) 2015-07-29
CN104805015B true CN104805015B (zh) 2018-01-16

Family

ID=53690218

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201410038729.8A Active CN104805015B (zh) 2014-01-26 2014-01-26 淡水微藻及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN104805015B (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106995817B (zh) * 2016-01-26 2020-08-14 中国科学院青岛生物能源与过程研究所 一种编码叶绿体碳酸酐酶基因在构建耐高浓度co2且快速生长的工业工程微藻中的应用
CN114164115B (zh) * 2021-12-10 2023-05-16 成都大学 一种新的淡水产油微藻物种及其培养方法和应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102656261A (zh) * 2009-09-18 2012-09-05 菲科尔生物技术国际公司 利用控制的光照的微藻发酵

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102656261A (zh) * 2009-09-18 2012-09-05 菲科尔生物技术国际公司 利用控制的光照的微藻发酵

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Estuarine Microbial Food Web Patterns in a Lake Erie Coastal Wetland;P.J. Lavrentyev等;《Microbial Ecology》;20041109;第48卷;第567-577页 *
Generic concept in Chlorella-related coccoid green algae (Chlorophyta, Trebouxiophyceae);W. Luo等;《Plant Biology》;20100623;第12卷(第3期);第545-553页 *
Photosynthetic efficiency and lipid accumulation are affected by the concentration of carbon in microalgae Micractinium pusillum Y-002;X. Deng等;《African Journal of Biotechnology》;20110921;第10卷(第55期);第11600-11610页 *
Polyphyletic distribution of bristle formation in Chlorellaceae: Micractinium, Diacanthos, Didymogenes and Hegewaldia gen. nov. (Trebouxiophyceae, Chlorophyta);T. Pröschold等;《Phycological Research》;20100107;第58卷;第1-8页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN104805015A (zh) 2015-07-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102586116B (zh) 一种普通小球藻及其培养方法和应用
CN106467896B (zh) 一种耐受高ph的凯氏拟小球藻及其培养应用
CN104611227B (zh) 一种耐受高ph的斜生栅藻及其选育方法
CN102268377A (zh) 用兼养和富氮-缺氮两阶段培养策略提高产油微藻生物量和油脂累积的方法
CN104593265B (zh) 一株高产油栅藻及其筛选、培养方法和应用
CN107177505A (zh) 一株栅藻及其培养方法和应用
CN106467897A (zh) 一种富含油脂的栅藻及其培养应用
CN107460216A (zh) 一种利用烟气生产微藻油脂的方法
CN109576314A (zh) 一种混合培养制备微藻油脂的方法
CN107460215A (zh) 一种微藻混合培养生产油脂的方法
CN103555584B (zh) 产油单针藻lb50的获得及应用
CN105296376A (zh) 一种提高斜生栅藻生物量和油脂质量的共生菌体系及其应用
CN104805015B (zh) 淡水微藻及其应用
CN104328053A (zh) 一种高产油栅藻及其培养方法和应用
CN104357327A (zh) 一种利用豆制品废水大规模培养微藻的方法
CN109880856A (zh) 一种开放式生产微藻油脂的方法
CN105063012B (zh) 一种酵母融合子的制备及快速筛选方法
CN102321545B (zh) 一株产雷公藤甲素的内生真菌
CN103160440B (zh) 一株栅藻藻株及其应用
CN103540533B (zh) 产油单针藻lb59的获得及应用
CN105713934B (zh) 一种生产微藻油脂的方法
CN107460217A (zh) 一种混合培养制备微藻油脂的方法
CN105713935B (zh) 一种微藻混合培养生产油脂的方法
CN104498361B (zh) 一株微小拟双孢藻及其应用和培养方法
CN104560720B (zh) 一株海洋拟双孢藻及其应用和培养方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
EXSB Decision made by sipo to initiate substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C41 Transfer of patent application or patent right or utility model
TA01 Transfer of patent application right

Effective date of registration: 20150917

Address after: 266101 Shandong Province, Qingdao city Laoshan District Songling Road No. 189

Applicant after: Qingdao Institute of Bioenergy and Bioprocess Technology, Chinese Academy of Sciences

Applicant after: Boeing (China) Investment Co., Ltd.

Address before: 266101 Shandong Province, Qingdao city Laoshan District Songling Road No. 189

Applicant before: Qingdao Institute of Bioenergy and Bioprocess Technology, Chinese Academy of Sciences

GR01 Patent grant
GR01 Patent grant