CN104782481A - 借助游离小孢子培养和ems诱变创制大白菜突变体的方法 - Google Patents
借助游离小孢子培养和ems诱变创制大白菜突变体的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104782481A CN104782481A CN201410831439.9A CN201410831439A CN104782481A CN 104782481 A CN104782481 A CN 104782481A CN 201410831439 A CN201410831439 A CN 201410831439A CN 104782481 A CN104782481 A CN 104782481A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- mutant
- microspore
- chinese cabbage
- ems
- plant
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
本发明公开一种借助游离小孢子培养和EMS诱变创制大白菜突变体的方法,在游离小孢子培养过程中,利用EMS溶液对小孢子进行诱变处理,在培养获得的双单倍体植株中筛选和鉴定突变体。该方法旨在快速创制出纯合的大白菜突变体,为大白菜育种研究提供了新的种质资源,也可为大白菜功能基因组学研究提供突变材料。
Description
技术领域
本发明属于植物细胞工程技术领域,具体涉及一种在游离小孢子培养过程中与EMS诱变相结合创制大白菜突变体的方法。
背景技术
大白菜属于十字花科芸薹属A基因组植物,是我国种植面积最大的蔬菜作物。大白菜的基因组序列已经于2011年释放,其分子生物学研究进入了功能基因组阶段,大白菜突变体是其功能基因组学研究的重要材料。
人工诱变可以产生丰富的突变体材料。人工诱变的方法有很多种,包括物理(如辐射)诱变,化学诱变(如EMS诱变),T-DNA***诱变和AC/DS转座诱变等。其中,EMS是化学诱变中应用最广泛的诱变剂。与其他诱变剂相比,EMS诱变产生的点突变频率高,且多为显性突变,染色体畸变相对较少。
传统的诱变方法是利用诱变技术处理植株的种子,并在田间对诱变植株进行鉴定和选择。种子是最早也是最常用来作为EMS诱变处理的材料,但通常EMS诱变种子效率很低。游离小孢子培养可以为离体诱变提供新的途径,其在创制突变体方面具有明显的优势,可以快速获得目标性状、缩短创制纯合突变体的时间、提高诱变效率。本发明将游离小孢子培养和EMS诱变相结合,旨在快速创制纯合的大白菜 突变体。
发明内容
本发明的目的是创建一种快速创制大白菜突变体的新方法,将游离小孢子培养技术和EMS诱变相结合,旨在快速获得纯合的大白菜突变体,提高构建突变体库的效率。
本发明提供的借助游离小孢子培养和EMS诱变创制大白菜突变体的方法,主要步骤包括:
(1)所用的诱变材料为双单倍体纯系(DH系),在开花期选取小孢子发育期为单核晚期至二核早期的未开放花蕾,即长度为2-4mm,进行游离小孢子培养;
(2)在小孢子培养过程中,采用不同浓度0.04%、0.08%、0.12%[v/v]EMS溶液对小孢子进行诱变处理,处理时间均为10min,经过培养获得小孢子再生植株(M0);
(3)将M0代再生植株移栽到温室,利用流式细胞仪对其进行倍性鉴定,筛选出双单倍体植株;
(4)在获得的双单倍体植株中,通过对叶色、叶形、花瓣颜色、花瓣形态、雄蕊育性和株型等植物学性状鉴定,筛选出M0变异植株;
(5)将所有的M0代双单倍体植株自交,获得M1代种子;
(6)播种M1种子,进一步鉴定突变性状,筛选稳定遗传的突变体材料;
(7)经试验筛选,创制大白菜突变体的适宜EMS溶液浓度为0.08%;
上述步骤(2)的具体内容:将长度为2-4mm的未开放花蕾在超净工作台上经浓度为75%乙醇溶液表面消毒30s后,用浓度为0.1%氯化汞溶液消毒8min,再用无菌水冲洗3次,每次5min。
消毒后的花蕾放入灭过菌的小烧杯内,加入蔗糖浓度为130g·L-1,PH值为5.8的B5培养基,用无菌研棒碾压花蕾,使小孢子游离出来,用40μm孔径的尼龙网过滤含小孢子的悬浮液,收集滤液于10mL离心管中,1000rpm离心3min,弃上清液,沉淀加10mL B5培养基,摇匀,1000rpm离心3min,弃上清液,所得沉淀物即为纯净小孢子。此时,分别加入浓度为0(对照),0.04%,0.08%,0.12%(v/v)的EMS溶液,摇匀,处理10min后,1000rpm离心3min,弃上清液,将诱变处理后的小孢子用NLN培养基稀释,稀释密度至1~2×105个·mL-1,以每皿5mL小孢子悬浮液分装入直径60mm的无菌培养皿内,每皿添加100μL高温灭菌后的0.5g·L-1琼脂糖和10g·L-1活性炭混合液;用石蜡膜封口,33℃恒温箱中暗培养24小时,再转移至25℃培养箱暗培养10~15天,肉眼可见胚状体后,将培养皿转移到转数为40~60转/分钟摇床上继续暗培养,培养温度为25℃;将子叶期胚状体转接到MS培养基上,在25℃,16h/8h光周期条件下培养;获得小孢子再生植株后,再进一步将再生植株接种到MS培养基上进行生根培养。
EMS溶液设0.04%,0.08%,0.12%(v/v)3个浓度梯度,将EMS溶于蔗糖浓度为130g·L-1,PH值为5.8的B5培养基中,抽滤备用,以未处理的小孢子作对照。
NLN培养基为含130g·L-1蔗糖,添加激素0.05mg·L-16-BA(6-苄氨基腺嘌呤)和0.05mg·L-1NAA(α-萘乙酸),PH值为5.8的NLN培养基。
诱导再生植株的MS培养基为含30g·L-1蔗糖,6.5~7.5g·L-1琼脂,pH值为5.8~6.0,未添加任何激素的MS培养基;诱导再生植株生根的MS培养基为含30g·L-1蔗糖,5.5g·L-1琼脂,0.1mg·L-1NAA(α-萘乙酸),pH值为5.8~6.0的MS培养基。
上述步骤(3)的具体内容:利用流式细胞仪对再生植株进行倍性鉴定,筛选出双单倍体植株。首先,取直径为1~2cm大小的新鲜嫩叶放入培养皿内,加入1.5~2.0mL Chopping Buffer缓冲液(15mmol·L-1三羟甲基氨基甲烷,2mmol·L-1乙二胺四乙酸二钠,0.5mmol·L-1精胺,80mmo1·L-1氯化钾,20mmo1·L-1氯化钠,0.1%[v/v]聚乙二醇辛基苯基醚和15mmo1·L-1二巯基乙醇,pH 7.5),用手术剪刀将叶片剪碎,然后,吸取上清液,用300目筛网将样品过滤到离心管内,1000rpm离心10min,离心后弃上清,沉淀加1mL PI(碘化丙啶)染液,混匀避光染色15min,最后,将样品用500目筛网过滤到上样管中,混匀上机检测,20s后分析仪自动形成代表该样品倍性的DNA含量峰值图;以已知二倍体的野生型诱变材料作为对照,使对照的DNA吸收峰处在200道(X轴)位置,每个待测植株分别测定3次,DNA吸收峰值处在200道的样本即为二倍体,而峰值处在100和400道的分别为单倍体和四倍体。
上述步骤(7)的具体内容:在获得的稳定遗传的突变体材料中, 其中绝大多数突变体(83.33%)均来自于浓度为0.08%的EMS溶液处理,由此,经本试验筛选,创制大白菜突变体的适宜EMS溶液浓度为0.08%。
本发明的积极效果
(1)所用的诱变原始材料为小孢子双单倍体系(DH系),它是遗传意义上的纯系。如果获得突变体,与野生型之间的遗传背景完全一致,只是在突变位点上存在差异,可以为克隆突变基因提供了理想的试验材料。
(2)在小孢子培养过程中,对单倍体小孢子进行诱变处理,突变了的小孢子再生成的双单倍体,即为纯合突变体,突变性状在当代就能表现,可以快速筛选出突变材料。
(3)以单倍体小孢子为诱变处理材料,便于扩大诱变处理的群体规模。游离小孢子培养技术具有快速获得纯合育种材料的优点,将其与EMS诱变相结合,可以极大地提高诱变效率,加快创制突变体的速度。
(4)本发明获得的大白菜纯合突变体,不仅可以为大白菜育种研究提供新的种质资源,还可为大白菜功能基因组学研究提供优良的突变材料。
附图说明
图1:经EMS诱变后培养获得的小孢子胚状体。
图1中:a:0处理;b:0.04%处理;c:0.08%处理;d:0.12%处理;
图2:经EMS诱变后小孢子胚状体的成苗情况。
图2中:a:直接成苗;b:愈伤组织;c:形成次生胚;d:胚褐化和白化;
图3:经EMS诱变后小孢子植株生根及移栽成活情况。
图3中:a:小孢子再生植株;b:生根的小孢子植株;c:待移栽的小孢子植株;d:移栽成活的小孢子植株;
图4:利用流式细胞仪鉴定再生植株中的单倍体。
图5:利用流式细胞仪鉴定再生植株中的双单倍体。
图6:利用流式细胞仪鉴定再生植株中的四倍体。
图7:M0代筛选出的变异植株。
图7中:a:叶片(‘FT’);b:叶片颜色深,较厚,叶脉明显;c:叶片卷曲,颜色深;d:叶片边缘锯齿;e:花器官(‘FT’);f:花瓣数目变异;g:花瓣发育退化;h:柱头外露;
图8:M1代鉴定出的株型突变体材料。
图8中:a:‘FT’;b:生长缓慢突变体;c:生长缓慢突变体的叶球(左)和‘FT’(右);d:结竖球突变体;e:结竖球突变体的叶球(左)和‘FT’(右);
图9:M1代鉴定出的花器官突变体材料。
图9中:a:早抽薹突变体(单株);b:早抽薹突变体(群体);c:早抽薹突变体,苗期叶缘上卷(深,右)和‘FT’(左);d:早抽薹突变体,苗期叶缘上卷(浅,右)和‘FT’(左);
图10:M1代鉴定出的叶片突变体材料。
图10中:a:‘FT’(左);b:苗期叶片黄化突变体(右);
注:‘FT’是指所用的诱变原始材料,它是小孢子DH系。
具体实施方式
实施例1,EMS诱变处理过程
一、植物材料
所用的诱变材料是大白菜早熟品种‘福田50’经小孢子培养获得的DH系,我们将其命名为‘FT’,它具有耐热、白花、叶球卵圆型特点。
本实验室中刘洋等人以‘FT’作为试验材料,在国际重要学术期刊《Euphytica》上已经发表了大白菜产量相关数量性状基因定位论文,英文题目为《Mapping quantitative trait loci for yield-related traits in Chinese cabbage(Brassica rapa L.ssp.pekinensis)》。
二、诱变处理
‘FT’的种子经过2℃低温春化处理15天后,于2013年9月播种于温室中。2013年12月,在开花期选取小孢子发育期为单核晚期至二核早期的未开放花蕾(长度为2-4mm)进行游离小孢子培养。在小孢子培养过程中,采用不同浓度0(对照),0.04%,0.08%,0.12%(v/v)的EMS溶液对小孢子进行诱变处理,每处理重复3次。
实施例2,游离小孢子培养过程
一、游离小孢子培养
将长度为2-4mm的未开放花蕾(小孢子发育期为单核晚期至二核早期)在超净工作台内经浓度为75%乙醇溶液表面消毒30s后, 用浓度为0.1%氯化汞溶液消毒8min,再用无菌水冲洗3次,每次5min。
消毒后的花蕾放入灭过菌的小烧杯内,加入蔗糖浓度为130g·L-1,PH值为5.8的B5培养基,用无菌研棒碾压花蕾,使小孢子游离出来,用40μm孔径的尼龙网过滤含小孢子的悬浮液,收集滤液于10mL离心管中,1000rpm离心3min,弃上清液,沉淀加10mL B5培养基,摇匀,1000rpm离心3min,弃上清液,所得沉淀物即为纯净小孢子。此时,分别加入浓度为0(对照),0.04%,0.08%,0.12%(v/v)的EMS溶液,摇匀,处理10min后,1000rpm离心3min,弃上清液,将诱变处理后的小孢子用NLN培养基稀释,稀释密度至1~2×105个·mL-1,以每皿5mL小孢子悬浮液分装入直径60mm的无菌培养皿内,每皿添加100μL高温灭菌后的0.5g·L-1琼脂糖和10g·L-1活性炭混合液;用石蜡膜封口,33℃恒温箱中暗培养24小时,再转移至25℃培养箱暗培养10~15天,肉眼可见胚状体后,将培养皿转移到转数为40~60转/分钟摇床上继续暗培养,培养温度为25℃;将子叶期胚状体转接到MS培养基上,在25℃,16h/8h光周期条件下培养;获得小孢子再生植株后,再进一步将再生植株接种到MS培养基上进行生根培养。
其中,EMS溶液设0.04%,0.08%,0.12%(v/v)3个浓度梯度,将EMS溶于蔗糖浓度为130g·L-1,PH值为5.8的B5培养基中,抽滤备用,以未处理的小孢子作对照;
NLN培养基为含130g·L-1蔗糖,添加激素0.05mg·L-16-BA(6- 苄氨基腺嘌呤)和0.05mg·L-1NAA(α-萘乙酸),PH值为5.8的NLN培养基;
诱导再生植株的MS培养基为含30g·L-1蔗糖,6.5~7.5g·L-1琼脂,pH值为5.8~6.0,未添加任何激素的MS培养基;诱导再生植株生根的MS培养基为含30g·L-1蔗糖,5.5g·L-1琼脂,0.1mg·L-1NAA(α-萘乙酸),pH值为5.8~6.0的MS培养基。
二、EMS对小孢子胚发生的影响
如图1所示,经过EMS诱变处理后,小孢子胚状体的发生出现了明显的剂量效应。采用不同浓度的EMS溶液处理小孢子,对小孢子胚状体的发生会产生不同的影响,我们在小孢子培养后第25天统计小孢子胚状体的诱导率(表1)。结果表明EMS抑制了小孢子胚发生和胚状体的发育,并且随着EMS溶液浓度的增加,小孢子胚状体的诱导率逐渐下降,不同浓度处理之间差异显著。
表1EMS对小孢子胚发生的影响
注:表中数据为3次重复平均值,邓肯新复极差测验,不同小写 字母为差异显著(P=0.05)。
三、EMS对胚状体成苗的影响
将胚状体转接到MS培养基上,在光照培养室中进行培养,3周后统计成苗率。统计结果表明,有的胚状体直接发育成再生植株(图2-a),有的胚状体形成了愈伤组织(图2-b),有的胚状体膨大的子叶或者胚轴上形成了次生胚(图2-c),有的胚状体发生褐化或者白化(图2-d)。如表2所示,经过EMS诱变处理后,与对照相比,小孢子胚状体的直接成苗率明显提高了,同时,形成愈伤率显著下降了,但形成次生胚,胚状体褐化和白化所占的比例没有发生明显的变化。结果表明,EMS诱变对胚状体直接成苗起到了一定的促进作用。
表2EMS对胚状体成苗的影响
注:总计是0.04%,0.08%和0.12%三个处理的总和。
百分比=100%×(胚数)/转胚数。
四、EMS对小孢子植株生根及移栽成活的影响
获得小孢子再生植株后,将再生植株接种到MS培养基上进行生 根培养(图3-a),2周后统计小孢子植株生根情况(图3-b)。待再生植株生根后,于2014年4月将再生植株移栽到温室进行培养(图3-c),3周后统计移栽成活率(图3-d)。结果表明,与对照相比,经过EMS诱变处理后,小孢子再生植株的生根率和移栽成活率均得到显著提高(表3)。
表3EMS对小孢子植株生根及移栽成活的影响
注:总计是0.04%,0.08%和0.12%三个处理的总和。
百分比=100%×(株数)/再生植株数。
实施例3,再生植株群体的倍性鉴定过程
一、利用流式细胞仪鉴定再生植株倍性
我们主要利用流式细胞仪对再生植株进行倍性鉴定,筛选出双单倍体植株。首先,取直径为1~2cm大小的新鲜嫩叶放入培养皿内,加入1.5~2.0mL Chopping Buffer缓冲液(15mmol·L-1三羟甲基氨基甲烷,2mmol·L-1乙二胺四乙酸二钠,0.5mmol·L-1精胺,80mmo1·L-1氯化钾,20mmo1·L-1氯化钠,0.1%[v/v]聚乙二醇辛基苯基醚和15mmo1·L-1二巯基乙醇,pH 7.5),用手术剪刀将叶片剪碎,然后,吸 取上清液,用300目筛网将样品过滤到离心管内,1000rpm离心10min,离心后弃上清,沉淀加1mL PI(碘化丙啶)染液,混匀避光染色15min,最后,将样品用500目筛网过滤到上样管中,混匀上机检测,约20s后分析仪自动形成代表该样品倍性的DNA含量峰值图;以已知二倍体的野生型诱变材料作为对照,使对照的DNA吸收峰处在200道(X轴)位置,每个待测植株分别测定3次,DNA吸收峰值处在200道的样本即为二倍体(图5),而峰值处在100和400道的分别为单倍体(图4)和四倍体(图6)。
二、EMS对小孢子再生植株倍性的影响
经过EMS诱变后,游离小孢子培养获得的再生植株的倍性没有发生明显的变化。与对照相比,再生植株群体中单倍体所占的比例升高了,但双单倍体和四倍体的比例有所下降(表4)。
表4EMS对小孢子再生植株倍性的影响
注:总计是0.04%,0.08%和0.12%三个处理的总和。
百分比=100%×(株数)/鉴定再生植株数。
实施例4,筛选和鉴定突变体过程
一、突变体的筛选与鉴定
经游离小孢子培养共获得1304株再生植株(M0),流式细胞仪鉴定倍性后,在获得的双单倍体植株中,通过对叶色、叶形、花瓣颜色、花瓣形态、雄蕊育性和株型等植物学性状的鉴定,筛选出大量发生表型变异的植株(表5)。将所有的M0代双单倍体植株自交,获得M1代种子。
2014年8月,播种M1种子,通过在田间进一步鉴定突变性状,筛选出可以稳定遗传的突变体材料(表6),并构建了一个包括株型、花器官和叶片等多种变异类型的突变体库。如表6所示,在获得的稳定遗传的突变体材料中,结竖球、早抽薹和叶片黄化突变体均来自于浓度为0.08%的EMS溶液处理,生长缓慢突变体来自于浓度为0.04%的EMS溶液处理,由此,经本试验筛选,创制大白菜突变体的适宜EMS溶液浓度为0.08%。
在筛选突变体的过程中,发现很多突变性状仅仅出现在M0代,经过自交后,M1代便恢复正常(图7),说明它们是不可遗传的突变性状,可能是由于生理损伤造成的,并且易受环境条件影响。
表5M0代变异植株的分类
表6M1代突变体性状的分类
二、突变体的分类与特征
1.株型突变体
‘FT’的叶球呈卵圆型,叶片皱缩、叠抱(图8-a)。
(1)生长缓慢突变体
突变体在结球期表现出生长缓慢的趋势,最终导致其结球非常的小,变异频率为0.08%(图8-b,c)。
(2)结竖球突变体
突变体的球形发生了变化,表现为结竖球,变异频率为0.15%(图8-d,e)。
2.花器官突变体
突变体表现为早抽薹性状,变异频率为0.15%(图9-a,b)。在苗期时,‘FT’的叶片平滑,无皱褶,突变体的叶片亮且较硬,同时叶片边缘出现上卷现象,其中一个上卷程度较深(图9-c),另一个上卷程度较浅(图9-d)。
3.叶片突变体
‘FT’的叶片呈绿色(图10-a),在苗期,突变体表现为叶片黄化,变异频率为0.08%(图10-b)。
Claims (1)
1.一种借助游离小孢子培养和EMS诱变创制大白菜突变体的方法,其特征在于步骤如下:
(1)所用的诱变材料为小孢子双单倍体纯系,在开花期选取小孢子发育期为单核晚期至二核早期的未开放花蕾,即长度为2-4 mm,进行游离小孢子培养;
(2)在小孢子培养过程中,采用不同浓度0.04%,0.08%,0.12% [v/v] EMS溶液对小孢子进行诱变处理,处理时间均为10 min,经过培养获得小孢子再生植株(M0);
(3)将M0代再生植株移栽到温室,利用流式细胞仪对其进行倍性鉴定,筛选出双单倍体植株;
(4)在获得的双单倍体植株中,通过对叶色、叶形、花瓣颜色、花瓣形态、雄蕊育性和株型等植物学性状鉴定,筛选出M0变异植株;
(5)将所有的M0代双单倍体植株自交,获得M1代种子;
(6)播种M1种子,进一步鉴定突变性状,筛选稳定遗传的突变体材料;
(7)经试验筛选,创制大白菜突变体的适宜EMS溶液浓度为0.08%。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201410831439.9A CN104782481B (zh) | 2014-12-29 | 2014-12-29 | 借助游离小孢子培养和ems诱变创制大白菜突变体的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201410831439.9A CN104782481B (zh) | 2014-12-29 | 2014-12-29 | 借助游离小孢子培养和ems诱变创制大白菜突变体的方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN104782481A true CN104782481A (zh) | 2015-07-22 |
CN104782481B CN104782481B (zh) | 2017-03-08 |
Family
ID=53548041
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201410831439.9A Expired - Fee Related CN104782481B (zh) | 2014-12-29 | 2014-12-29 | 借助游离小孢子培养和ems诱变创制大白菜突变体的方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN104782481B (zh) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105606519A (zh) * | 2016-01-08 | 2016-05-25 | 南京林业大学 | 一种快速鉴定杨柳科植物倍性的方法 |
CN111778275A (zh) * | 2020-07-02 | 2020-10-16 | 珠海市农腾乐油植物科技有限公司 | 一种快周期油菜在油菜功能基因研究领域的应用及方法 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1998049889A1 (en) * | 1997-05-08 | 1998-11-12 | Calgene, Inc. | Production of improved rapeseed exhibiting yellow-seed coat |
CN101449657A (zh) * | 2008-12-30 | 2009-06-10 | 天津科润农业科技股份有限公司 | 一种ems诱变花椰菜小孢子获得抗寒dh突变体的方法 |
-
2014
- 2014-12-29 CN CN201410831439.9A patent/CN104782481B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1998049889A1 (en) * | 1997-05-08 | 1998-11-12 | Calgene, Inc. | Production of improved rapeseed exhibiting yellow-seed coat |
CN101449657A (zh) * | 2008-12-30 | 2009-06-10 | 天津科润农业科技股份有限公司 | 一种ems诱变花椰菜小孢子获得抗寒dh突变体的方法 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
代双艳: ""EMS诱变花蕾结合小孢子培养获得大白菜突变体的研究"", 《河北农业大学硕士学位论文》 * |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105606519A (zh) * | 2016-01-08 | 2016-05-25 | 南京林业大学 | 一种快速鉴定杨柳科植物倍性的方法 |
CN105606519B (zh) * | 2016-01-08 | 2018-04-24 | 南京林业大学 | 一种快速鉴定杨柳科植物倍性的方法 |
CN111778275A (zh) * | 2020-07-02 | 2020-10-16 | 珠海市农腾乐油植物科技有限公司 | 一种快周期油菜在油菜功能基因研究领域的应用及方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN104782481B (zh) | 2017-03-08 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP4139429B2 (ja) | 細胞質雑種Lactuca属植物およびその作出方法 | |
CN105230491B (zh) | 四倍体蓖麻的培育方法 | |
CN106171958A (zh) | 一种小麦赤霉病抗病育种方法 | |
Zhang et al. | Induction of tetraploids in ‘Red Flash’caladium using colchicine and oryzalin: morphological, cytological, photosynthetic and chilling tolerance analysis | |
Momotaz et al. | Production of intergeneric hybrids between Brassica and Sinapis species by means of embryo rescue techniques | |
CN100496225C (zh) | 棉花叶柄组织培养与高分化率材料选育方法 | |
Feng et al. | Plant regeneration via protoplast electrofusion in cassava | |
CN111543310A (zh) | 利用水稻籼粳亚种间杂交/加倍的四倍体重组自交系进行育种的方法 | |
CN108353790A (zh) | 一种花生高油品种的培育方法 | |
CN103299896A (zh) | 一种广适性耐抽苔春白菜游离小孢子的培养方法 | |
CN103782902A (zh) | 一种借助60Co-γ射线诱变和小孢子培养创制大白菜突变体的方法 | |
CN108077080A (zh) | 一种花生高油体的离体定向筛选方法 | |
CN104782481A (zh) | 借助游离小孢子培养和ems诱变创制大白菜突变体的方法 | |
CN102550404B (zh) | 一种梅花叶片愈伤组织高效诱导方法 | |
CN101401550B (zh) | 诱导茄子小孢子形成胚状体的方法及其专用培养基 | |
CN108770678B (zh) | 一种海稻与粳稻恢复系的杂交育种选育方法 | |
CN102181424A (zh) | 原生质体不对称融合制备抗霜霉结球甘蓝新种质的方法 | |
CN113475394B (zh) | 一种明叶藓多倍体的培育方法 | |
CN113711906B (zh) | 一种抗病优质结球甘蓝种质资源创制方法 | |
CN104604676A (zh) | 一种用于红百合组织培养的培养基 | |
CN102210266B (zh) | 一种用于细叶百合组织培养的培养基 | |
CN114027180A (zh) | 一种文冠果多倍体的培育方法及其应用 | |
Savenko et al. | Creating doubled rice haploids with pyriculariosis resistant genes | |
CN113951131A (zh) | 一种利用水稻基因组分析技术快速选育三系水稻保持系和不育系的方法 | |
CN111937742A (zh) | 芙蓉菊与甘菊的属间远缘杂种创制方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
EXSB | Decision made by sipo to initiate substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20170308 Termination date: 20171229 |
|
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |