CN104725393A - 一种岩白菜素的衍生物、制备方法及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及医药领域，特别涉及一种岩白菜素的衍生物、制备方法及应用。本发明岩白菜素的衍生物，具有以下结构，其中，R1为苯环、不同取代的苯基、吡啶、不同取代的吡啶基或脂肪链中的一种，这类衍生物是二氢异香豆素类化合物，结构中具有一个内酯环，可以在抗癌药物中得到应用。
Description
技术领域
本发明涉及医药领域，特别涉及一种岩白菜素的衍生物、制备方法及应用。
背景技术
癌症(Cancer)是当前危害人类生命和健康的严重疾病之一，目前化疗仍是其主要治疗手段之一。上个世纪九十年代以来，全世界已经有二百余种抗癌药物处于研究开发中，已有数十种化疗或辅助药物用于临床治疗，但是大多数药物只能缓解病情。且现有抗肿瘤药物大多数是化学合成药，存在着毒副作用大、易产生耐药性等问题。所以从自然界中寻找高效低毒的天然抗癌肿瘤活性化合物或进行结构改造合成其衍生物就成为当前抗肿瘤药物研究中的一个重要趋势。
岩白菜素(bergemn)为天然植物岩白菜中的主要活性成分，是一种二氢异香豆素类化合物，结构中具有一个内酯环，除岩白菜外也存在于其它植物中，是一种丰富易得的天然单体化合物。本发明所述的岩白菜素是从天然植物鬼灯檠中分离得到，现已经分离出成品(可参考文献：王俊平,李百华.鬼灯檠中岩白菜素的含量测定[J].中成药,1991,13(2):31-32.)。其具体的结构如下结构式所示：
本申请设计、合成了一系列结构新颖的岩白菜素衍生物，通过细胞水平抗肿瘤活性测试，我们发现此类化合物有很好的抗肿瘤活性，希望能够发展成为新的用于癌症的优良药物。
发明内容
本发明的第一目的是提供一种岩白菜素的衍生物。
为达到上述目的，具体采用如下的技术方案：
一种岩白菜素的衍生物，具有以下结构，
其中，R1为苯环、不同取代的苯基、吡啶、不同取代的吡啶基或脂肪链中的一种。
优选地，R1为苯环、苯环上至少一个氢原子被CH3-O-、-CN、-NO2、卤素或C1-C4的烷基取代的苯基、吡啶、至少一个氢原子被卤素取代的吡啶基、酯基、C1-C5的烷基或含羟基的脂肪链中的一种。
更优选地，R1为苯环、苯环上一个氢原子被CH3-O-、-CN、-NO2、-F或C1-C4的烷基取代的苯基、吡啶、一个氢原子被-Cl取代的吡啶基、酯基、C4-C5的烷基或含羟基的脂肪链中的一种。
最为本发明的最佳实施方式，岩白菜素的衍生物具有以下结构：
(1)、化合物1是在岩白菜素的苯基上引入炔基所得产物；
(2)、通式Ⅰ在通式Ⅰ中，R1为 -CH2CH(CH3)2、-CH2CH2CH2CH2CH3、-COOCH3、-CH2COOCH3、CH2CH2COOCH2CH3或-CH2OH中的一种，下面依次称为化合物2～17。
本发明的另一目的是提供了岩白菜素衍生物的制备方法，具体的，化合物1的制备方法包括以下步骤：
(1)将岩白菜素、KI和K2CO3加入到反应溶剂中，其中，按摩尔比岩白菜素：KI：K2CO3为1：(2～5)：(2～5)，搅拌至完全溶解，加入3-溴丙炔，按摩尔比3-溴丙炔：岩白菜素为(2～5)：1，在室温至100℃条件下反应至转化完全(转化是否完全可以通过TLC检测确定)；
(2)向步骤(1)所得的反应体系中加入乙酸乙酯和蒸馏水萃取得有机相，所述有机相用饱和食盐水洗涤，然后用无水NaSO4粉末干燥；
(3)将步骤(2)所得产物经过滤、浓缩，用硅胶柱层析分离纯化，纯化时用体积比为5:1～1:1的石油醚和乙酸乙酯的混合溶液进行洗脱，浓缩洗脱液即得化合物1。
具体的，步骤(1)所述溶剂选自丙酮、DMF或NMP(N-甲基吡咯烷酮)中的一种，其中当溶剂选用NMP时，效果最佳。溶剂的加入量以完全溶解样品最佳。反应溶剂NMP沸点为203℃，难以蒸 馏除去，且与水溶解性好，可以直接加水萃取除去。
在步骤(2)中，按体积比乙酸乙酯：蒸馏水：溶剂为(5～10)：(5～10):1。
在步骤(2)中，按体积比饱和食盐水：溶剂为(3～5):1。
在步骤(2)中，加入无水NaSO4粉末的量与分出有机相量按重量比(g/g)为1:10～1:15。
在步骤(2)中优选的干燥时间为15～30min。
作为一种最佳的实施方式，化合物1的制备方法包括以下步骤：
(1)将1mmol岩白菜素、3mmol KI和2mmolK2CO3加入到3mL NMP中，室温搅拌至样品完全溶解，再加入3mmol 3-溴丙炔，60℃条件下反应4h；
(2)向步骤(1)所得反应体系中直接加入15mL乙酸乙酯和15mL的蒸馏水萃取后，得到有机相，所述有机相用10mL的饱和食盐水洗涤，然后用无水NaSO4粉末干燥15～30min；
(3)将步骤(2)所得产物经过滤、浓缩，用硅胶柱层析分离纯化，纯化时用石油醚/乙酸乙酯1/1(V/V)进行洗脱，浓缩洗脱液即得化合物1(单一的白色粉末)。
本发明的技术方案，通式Ⅰ所代表的岩白菜素衍生物(化合物2-17)的反应历程如下反应式所示：
即首先利用岩白菜素制备得到岩白菜素的苯基上被3-溴丙炔取代得到化合物1，然后利用化合物1与叠氮化合物利用点击化学原料反应得到通式Ⅰ所代表的岩白菜素衍生物。
目前点击化学反应主要有4种类型：环加成反应、亲核开环反应、非醇醛的羰基化学以及碳碳多键的加成反应。目前广泛应用的点击化学反应是通过Cu(I)或Cu(II)催化，炔基与叠氮基反应生成区域选择性的1,2,3-三氮唑。
具体的，利用化合物1(岩白菜素的炔基化产物)与叠氮化合物制备通式Ⅰ所代表的岩白菜素衍生物具体包括以下步骤：在反应容器中加入化合物1和叠氮化合物，按摩尔比化合物1：叠氮化合物为1:(2～5)，然后加入CuSO4·5H2O和维生素C钠，按重量比化合物1：CuSO4·5H2O：维生素C钠为(0.1～0.2)：(0.1～0.2)：1，最后加入体积比为1:1～1:5的THF与H2O的混合溶剂或者体积比为1:1～1:5的t-BuOH与H2O的混合溶剂，使样品充分溶解，室温至100℃条件下进行1,3-偶极环加成反应，反应0.5～5h后即得通式Ⅰ所代表的岩白菜素衍生物。
作为一种具体的实施方式，利用岩白菜素的炔基化产物与叠氮化合物制备通式Ⅰ所代表的岩白菜素衍生物具体包括以下步骤：
取0.1mmol化合物1与0.25mmol叠氮化合物于25mL干燥的圆底烧瓶中，加入5mg的CuSO4·5H2O，5mg的维生素C钠，在3mLTHF-H2O(V/V＝1/1)或者3mL t-BuOH-H2O(V/V＝1/1)溶剂中常温条件下进行1,3-偶极环加成反应即通式Ⅰ所代表的岩白菜素衍生物。
所述岩白菜素的炔基化产物可采用本发明提供的制备方法进行制备。
所述叠氮化合物可选用现有技术中的任意产品，优选由如下的制备方法制备而得。
叠氮化合物的制备方法包括以下步骤：
(1)在反应容器中加入卤代化合物与叠氮化钠，按摩尔比卤代化合物：叠氮化钠为1:1～1:5，然后加入DMF使样品充分溶解，25～100℃条件下反应0.5～12h；
(2)反应结束后向反应液中加入***和蒸馏水进行萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，分出有机相，用无水NaSO4干燥，过滤，浓缩即得叠氮化合物。
具体的，在步骤(1)中所述卤代化合物选自溴化苄、4-甲基氯苄、4-乙基氯苄、4-叔丁基氯苄、对甲氧基氯苄、对氟氯苄、对氰基氯苄、对硝基氯苄、2-氯-5-氯甲基吡啶、2-氯甲基吡啶、1-溴代异戊烷、溴己烷、溴乙酸甲酯、3-溴丙酸甲酯、4-溴丁酸乙酯或2-溴乙醇中的一种。
在步骤(2)中，按体积比***：蒸馏水：DMF为(5～10)：(5～10):1。
在步骤(2)中，按体积比饱和食盐水：DMF为(3～5):1。
在步骤(2)中，无水NaSO4粉末的加入量与分出有机相量按重量比(g/g)为1:10～1:15。
在步骤(2)中优选的干燥时间为15～30min。
本发明以一种以丰富易得的岩白菜素为原料，设计合成了一系列结构新颖的岩白菜素衍生物，这类衍生物是二氢异香豆素类化合物，结构中具有一个内酯环，具有显著抑制食管癌EC9706细胞，胃癌MGC-803细胞，黑色素瘤B16细胞增殖、克隆形成、细胞周期和细胞凋亡的作用，可以在抗癌药物中得到应用。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1：化合物1的制备
(1)取1mmol岩白菜素与3mmol KI，2mmolK2CO3于反应溶剂3mL NMP中，室温搅拌至样品完全溶解，再加入3mmol 3-溴丙炔，60℃条件下反应4h，经TLC检测，反应结束。
(2)向(1)得到的反应体系中直接加入15mL乙酸乙酯和15mL的蒸馏水萃取后，有机层用10mL的饱和食盐水洗涤。有机相用无水NaSO4粉末干燥15～30min。
(3)将步骤(2)所得产物经过滤、浓缩，用硅胶柱层析分离纯化，石油醚/乙酸乙酯1/1(V/V)进行洗脱，洗脱部分浓缩得到单一的白色粉末目标产物。产率为66.7％。
经1H NMR检测，化合物1的结构表征如下：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm,TMS)δ7.49(s,1H),5.60(d,J＝5.8Hz,1H),5.31(d,J＝5.2Hz,1H),4.94(s,2H),4.85(d,J＝10.4Hz,1H),4.68(t,J＝11.3Hz,2H),4.51(s,1H),3.92(t,J＝9.7Hz,1H),3.86(s,3H),3.65(s,2H),3.53(s,2H).
上面核磁检测的数据经分析说明了生成目标产物1。
实施例2：化合物2的制备
1、制备叠氮化合物
取1mmol溴化苄与2mmol叠氮化钠于5mL干燥的圆底烧瓶中，加入2mL DMF，30℃条件下反应10h，TLC检测反应结束。向反应液中加入10mL***和10mL的蒸馏水进行萃取，有机相用6mL的饱和食盐水洗涤，有机层用无水NaSO4干燥15～30min，过滤，浓缩得苄基取代的叠氮化合物。
2、利用点击化学原理制备化合物2
取0.1mmol化合物1(40.2mg)与0.25mmol苄基取代的叠氮化合物于25mL干燥的圆底烧瓶中，加入5mg的CuSO4·5H2O，5mg的维生素C钠，在3mL THF-H2O(V/V＝1/1)或者3mL t-BuOH-H2O(V/V＝1/1)溶剂中常温条件下进行1,3-偶极环加成反应即生成化合物2，产率为86.9％。
经1H NMR检测，化合物2的结构表征如下：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm,TMS)δ8.30(s,1H),8.27(s,1H),7.56(s,1H),7.40-7.25(m,10H),5.63(s,2H),5.61(s,2H),5.34(d,J＝5.5Hz,1H),5.25(s,2H),5.07(q,J＝11.3Hz,2H),4.89(t,J＝5.8Hz,1H),4.76(d,J＝10.3Hz,1H),4.02(q,J＝7.1Hz,1H),3.91(t,J＝ 9.9Hz,1H),3.72(s,3H),3.37(s,2H).
上面核磁检测的数据经分析说明了生成目标产物2。
实施例3：化合物3的制备
化合物3的制备方法与化合物2的制备方法其区别仅在于，利用4-甲基氯苄与叠氮化钠反应制备生产4-甲基苄基叠氮。利用点击化学原理制备化合物3时的产率为88.8％。
经1H NMR检测，化合物3的结构表征如下：
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.02(s,1H),7.94(s,1H),7.51(s,1H),7.15(dd,J＝14.2,10.1Hz,8H),5.51(s,2H),5.47(s,2H),5.15(d,J＝11.5Hz,1H),5.05(d,J＝11.5Hz,1H),4.46(d,J＝10.3Hz,1H),3.88-3.77(m,2H),3.76(s,3H),3.68(dd,J＝11.4,6.6Hz,1H),3.39(dd,J＝18.1,9.8Hz,1H),3.29(s,2H),2.28(s,6H).
上面核磁检测的数据经分析说明了生成目标产物3。
实施例4：化合物4的制备
化合物4的制备方法与化合物2的制备方法其区别仅在于，利用4-乙基氯苄与叠氮化钠反应制备生产4-乙基苄基叠氮。利用点击化学原理制备化合物4时的产率为91.3％。
经1H NMR检测，化合物4的结构表征如下：
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.02(s,1H),7.96(s,1H),7.52(s,1H),7.19-7.14(m,8H),5.60(d,J＝11.3Hz,1H),5.52(s,2H),5.49(s,2H),5.18(s,2H),5.05(d,J＝11.4Hz,1H),4.52(d,J＝10.2Hz,1H),3.90-3.81(m,2H),3.76(s,3H),3.40(t,J＝6.7Hz,2H),3.34(s,2H),2.59(q,J＝7.6Hz,4H),1.17(t,J＝7.6Hz,6H).
上面核磁检测的数据经分析说明了生成目标产物4。
实施例5：化合物5的制备
化合物5的制备方法与化合物2的制备方法其区别仅在于，利用4-叔丁基氯苄与叠氮化钠反应制备生产4-叔丁基苄基叠氮。利用点击化 学原理制备化合物5时的产率为80.8％。
经1H NMR检测，化合物5的结构表征如下：
1H NMR(400MHz,Acetone,ppm,TMS)δ8.17(s,2H),7.59(s,1H),7.39(dd,J＝8.5,3.4Hz,4H),7.27(dd,J＝13.5,8.5Hz,4H),5.59(s,4H),5.27(s,2H),5.16(d,J＝10.8Hz,1H),5.06(d,J＝10.8Hz,1H),4.69(d,J＝10.3Hz,1H),3.96-3.90(m,2H),3.80(s,3H),3.75(dd,J＝12.5,5.0Hz,1H),3.47(d,J＝7.9Hz,1H),3.40(s,2H),1.26(s,18H).
上面核磁检测的数据经分析说明了生成目标产物5。
实施例6：化合物6的制备
化合物6的制备方法与化合物2的制备方法其区别仅在于，利用对甲氧基氯苄与叠氮化钠反应制备生产对甲氧基苄基叠氮。利用点击化学原理制备化合物6时的产率为91.7％。
经1H NMR检测，化合物6的结构表征如下：
1H NMR(400MHz,Acetone,ppm,TMS)δ8.14(s,1H),8.12(s,1H),7.55(s,1H),7.34-7.26(m,4H),6.92-6.87(m,4H),5.55(s,2H),5.53(s,2H),5.26(s,2H),5.18-4.99(m,2H),4.62(d,J＝10.3Hz,1H),4.03(q,J＝7.1Hz,1H),3.95-3.91(m,1H),3.91-3.88(m,1H),3.79(s,3H),3.75(s,3H),3.75(s,3H),3.72(d,J＝4.8Hz,1H),3.43(s,2H).
上面核磁检测的数据经分析说明了生成目标产物6。
实施例7：化合物7的制备
化合物7的制备方法与化合物2的制备方法其区别仅在于，利用对氟氯苄与叠氮化钠反应制备生产对氟苄基叠氮。利用点击化学原理制备化合物7时的产率为96.3％。
经1H NMR检测，化合物7的结构表征如下：
1H NMR(400MHz,Acetone,ppm,TMS)δ8.22(s,1H),8.21(s,1H),7.57(s,1H),7.47-7.37(m,4H),7.13(ddd,J＝8.8,6.0,3.4Hz,4H),5.65(s,2H),5.64(s,2H),5.28(s,2H),5.19-5.02(m,2H),4.69(d,J＝ 10.3Hz,1H),4.03(q,J＝7.1Hz,1H),3.95(t,J＝7.6Hz,1H),3.93-3.89(m,1H),3.81(s,3H),3.74(dd,J＝12.5,5.0Hz,1H),3.41(s,2H).
上面核磁检测的数据经分析说明了生成目标产物7。
实施例8：化合物8的制备
化合物8的制备方法与化合物2的制备方法其区别仅在于，利用对氰基氯苄与叠氮化钠反应制备生产对氰基苄基叠氮。利用点击化学原理制备化合物8时的产率为74.7％。
经1H NMR检测，化合物8的结构表征如下：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm,TMS)δ8.35(s,1H),8.31(s,1H),7.84(dd,J＝7.8,3.6Hz,4H),7.56(s,1H),7.47-7.39(m,4H),5.75(s,2H),5.74(s,2H),5.59(d,J＝4.6Hz,1H),5.27(s,2H),5.08(q,J＝11.3Hz,2H),4.79(s,1H),3.91(t,J＝9.9Hz,1H),3.74(s,3H),3.65(d,J＝5.0Hz,1H),3.60-3.53(m,1H),3.33(s,2H).
上面核磁检测的数据经分析说明了生成目标产物8。
实施例9：化合物9的制备
化合物9的制备方法与化合物2的制备方法其区别仅在于，利用对硝基氯苄与叠氮化钠反应制备生产对硝基苄基叠氮。利用点击化学原理制备化合物9时的产率为74.4％。
经1H NMR检测，化合物9的结构表征如下：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm,TMS)δ8.36(s,1H),8.33(s,1H),8.24(d,J＝2.4Hz,2H),8.22(d,J＝2.4Hz,2H),7.56(s,1H),7.51(t,J＝9.1Hz,4H),5.82(s,2H),5.80(s,2H),5.58(d,J＝5.2Hz,1H),5.29(s,3H),5.08(q,J＝11.4Hz,2H),4.78(d,J＝2.8Hz,1H),3.91(t,J＝9.9Hz,1H),3.75(s,2H),3.64(dd,J＝13.9,8.8Hz,1H),3.59-3.52(m,1H),3.32(s,2H).
上面核磁检测的数据经分析说明了生成目标产物9。
实施例10：化合物10的制备
化合物10的制备方法与化合物2的制备方法其区别仅在于，利用2-氯-5-氯甲基吡啶与叠氮化钠反应制备生产2-氯-5-叠氮甲基吡啶。利用点击化学原理制备化合物10时的产率为62.8％。
经1H NMR检测，化合物10的结构表征如下：
1H NMR(400MHz,Acetone,ppm,TMS)δ8.46(s,1H),8.46(s,1H),8.31(s,2H),7.82(td,J＝8.2,2.6Hz,2H),7.57(s,1H),7.47(dd,J＝8.3,3.3Hz,2H),5.76(s,2H),5.76(s,2H),5.30(s,2H),5.19-5.04(m,2H),4.74(d,J＝10.3Hz,1H),4.03(q,J＝7.1Hz,1H),4.00-3.94(m,1H),3.91(dd,J＝12.4,1.7Hz,1H),3.81(s,3H),3.74(dd,J＝12.4,5.2Hz,1H),3.41(s,2H).
上面核磁检测的数据经分析说明了生成目标产物10。
实施例11：化合物11的制备
化合物11的制备方法与化合物2的制备方法其区别仅在于，利用2-氯甲基吡啶与叠氮化钠反应制备生产2-叠氮甲基吡啶。利用点击化学原理制备化合物11时的产率为71.2％。
经1H NMR检测，化合物11的结构表征如下：
1H NMR(400MHz,C5D5N,ppm,TMS)δ8.79(s,2H),8.66-8.61(m,3H),8.53(s,1H),8.07(s,1H),7.63(s,1H),7.61-7.54(m,2H),7.25-7.20(m,1H),7.15(ddd,J＝18.6,7.5,4.9Hz,2H),5.93(s,2H),5.89(s,2H),5.68(d,J＝11.0Hz,1H),5.55(d,J＝11.0Hz,1H),5.50(s,2H),5.12(d,J＝10.2Hz,1H),4.76-4.70(m,1H),4.63(t,J＝9.8Hz,1H),4.53(d,J＝8.4Hz,1H),4.41-4.35(m,1H),4.02(s,3H).
上面核磁检测的数据经分析说明了生成目标产物11。
实施例12：化合物12的制备
化合物12的制备方法与化合物2的制备方法其区别仅在于，利用1-溴代异戊烷与叠氮化钠反应制备生产1-叠氮异戊烷。利用点击化学原理制备化合物12时的产率为76.5％。
经1H NMR检测，化合物12的结构表征如下：
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.12(s,1H),8.07(s,1H),7.57(s,1H),5.24(s,2H),5.16(d,J＝11.1Hz,1H),5.08(d,J＝11.2Hz,1H),4.68(d,J＝10.4Hz,1H),4.43(dd,J＝16.3,7.6Hz,4H),4.00-3.93(m,1H),3.86(s,3H),3.81-3.73(m,2H),3.45(dd,J＝15.5,7.5Hz,1H),3.29(s,2H),1.83-1.72(m,4H),1.48(ddd,J＝18.2,13.4,6.7Hz,2H),0.94(t,J＝6.3Hz,12H).
上面核磁检测的数据经分析说明了生成目标产物12。
实施例13：化合物13的制备
化合物13的制备方法与化合物2的制备方法其区别仅在于，利用溴己烷与叠氮化钠反应制备生产叠氮己烷。利用点击化学原理制备化合物13时的产率为87.8％。
经1H NMR检测，化合物13的结构表征如下：
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.11(s,1H),8.08(s,1H),7.61(s,1H),5.27(s,2H),5.18(d,J＝11.1Hz,1H),5.11(d,J＝11.2Hz,1H),4.72(d,J＝10.4Hz,1H),4.41(q,J＝7.3Hz,4H),4.02-3.91(m,2H),3.87(s,3H),3.82-3.78(m,1H),3.47(d,J＝7.9Hz,1H),3.31(s,2H),1.95-1.83(m,4H),1.29(dd,J＝13.1,10.9Hz,12H),0.88(dd,J＝8.7,4.3Hz,6H).
上面核磁检测的数据经分析说明了生成目标产物13。
实施例14：化合物14的制备
化合物14的制备方法与化合物2的制备方法其区别仅在于，利用溴乙酸甲酯与叠氮化钠反应制备生产4-叠氮丁酸乙酯。利用点击化学原理制备化合物14时的产率为91.6％。
经1H NMR检测，化合物14的结构表征如下：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.25(s,1H),8.23(s,1H),7.59(s,1H),5.61(s,1H),5.45(s,2H),5.43(s,2H),5.29(s,2H),5.15-5.04(m, 2H),4.87-4.75(m,2H),3.94(t,J＝9.8Hz,1H),3.79(s,1H),3.76(s,3H),3.72(s,6H),3.35(s,2H).
上面核磁检测的数据经分析说明了生成目标产物14。
实施例15：化合物15的制备
化合物15的制备方法与化合物2的制备方法其区别仅在于，利用3-溴丙酸甲酯与叠氮化钠反应制备生产3-叠氮丙酸甲酯。利用点击化学原理制备化合物15时的产率为68.1％。
经1H NMR检测，化合物15的结构表征如下：
1H NMR(400MHz,Acetone,ppm,TMS)δ8.15(s,1H),8.15(s,1H),7.59(s,1H),5.29(s,2H),5.15(d,J＝10.8Hz,1H),5.06(d,J＝10.8Hz,1H),4.71(ddd,J＝8.1,7.1,3.7Hz,4H),4.00(t,J＝9.8Hz,1H),3.93(dd,J＝12.4,1.7Hz,1H),3.86(s,3H),3.82(d,J＝9.1Hz,1H),3.76(dd,J＝12.4,5.4Hz,1H),3.63(s,3H),3.62(s,3H),3.48(d,J＝8.4Hz,1H),3.41(s,2H),3.03(td,J＝6.6,2.2Hz,4H).
上面核磁检测的数据经分析说明了生成目标产物15。
实施例16：化合物16的制备
化合物16的制备方法与化合物2的制备方法其区别仅在于，利用4-溴丁酸乙酯与叠氮化钠反应制备生产4-叠氮丁酸乙酯。利用点击化学原理制备化合物16时的产率为68.1％。
经1H NMR检测，化合物16的结构表征如下：
1H NMR(400MHz,Acetone,ppm,TMS)δδ8.62(s,2H),8.06(s,1H),5.76(s,2H),5.64(d,J＝10.8Hz,1H),5.54(d,J＝10.8Hz,1H),5.21(d,J＝10.3Hz,1H),4.95(td,J＝6.9,1.5Hz,4H),4.52(q,J＝7.1Hz,4H),4.47-4.41(m,1H),4.39(dd,J＝12.4,1.8Hz,1H),4.34(s,3H),4.31-4.26(m,1H),4.22(dd,J＝12.4,5.3Hz,1H),3.69(s,2H),2.78(dt,J＝11.6,7.2Hz,4H),2.64(td,J＝7.0,4.7Hz,4H),1.64(t,J＝7.1Hz,6H).
上面核磁检测的数据经分析说明了生成目标产物16。
实施例17：化合物17的制备
化合物17的制备方法与化合物2的制备方法其区别仅在于，利用2-溴乙醇与叠氮化钠反应制备生产2-叠氮乙醇。利用点击化学原理制备化合物17时的产率为68.2％。
经1H NMR检测，化合物17的结构表征如下：
1H NMR(400MHz,D2O)δ8.01(s,1H),7.91(s,1H),7.28(s,1H),5.01(s,2H),4.85(s,2H),4.49(d,J＝10.3Hz,1H),4.44-4.31(m,4H),3.87(s,1H),3.85-3.78(m,4H),3.70(s,2H),3.62(d,J＝9.5Hz,1H),3.59(s,3H).3.35(d,J＝4.9Hz,2H).
上面核磁检测的数据经分析说明了生成目标产物17。
实验例：
我们对所合成的化合物首先进行了体外抗癌细胞活性筛选。
1、测试原理
MTT法全称为3-(4,5-Dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2H-Tetrazolium bromide，汉语化学名为3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐(商品名：噻唑蓝)，是一种黄颜色的染料。活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值(也有用570nm波长)，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
2、仪器、试剂、材料与受试样品
仪器：超净工作台，CO2培养箱，多功能倒置显微镜，离心机，自动酶标仪，96孔培养板。
试剂：DMEM、1640培养基，10％灭活小牛血清(FBS)，PBS溶解液，二甲基亚砜(DMSO)，三联液(10％SDS+5％异丙醇+12 mMHCl)，噻唑蓝(MTT)。
材料(细胞株)：人食管癌EC9706肿瘤细胞、胃癌MGC-803肿瘤细胞、黑色素瘤B16肿瘤细胞。
受试样品：本申请的化合物1-17及岩白菜素(本发明所述的岩白菜素是从天然植物鬼灯檠中分离得到，现已经分离出成品。可参考文献：王俊平,李百华.鬼灯檠中岩白菜素的含量测定[J].中成药,1991,13(2):31-32.)。
3、实验方法
样品配制：取受试样品用DMSO溶解化合物，超声溶解，浓度100mM/L，所得药物溶液可在-20℃条件下储存。
贴壁细胞的MTT实验：贴壁细胞包括人食管癌EC9706肿瘤细胞、胃癌MGC-803肿瘤细胞、黑色素瘤B16肿瘤细胞。
收集对数期细胞，用完全DMEM培养基悬浮，并调整细胞悬液浓度为3×104/mL，接种96孔细胞培养板，100μL/孔。置37℃，5％CO2培养箱培养24小时，弃去上清，加入新鲜完全DMEM培养基，90μL/孔，并加入不同浓度待测药物溶液，10μL/孔，每个浓度设3个复孔；空白孔加入DMEM培养基10μL/孔；本底孔加入不含细胞的培养基100μL/孔。置37℃，5％CO2孵育48小时。每孔加入100μL MTT溶液(0.5mg/mL,不完全DMEM培养基配制)，继续置培养箱孵育4h。4h后终止培养，弃去上清，每孔加入150μL二甲基亚砜，置摇床上低速振荡5min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪570nm处测量各孔的吸光值。
4、实验数据计算方法
根据实验结果，按点斜法原理算出与正规法相当接近的全部IC50的有关数据。
基本公式：
1.IC50:IC50＝Log-1[Xm-i×(∑p–0.5)+i/4×(1-Pm-Pn)]
2.含0％及100％死亡率的LD50：
IC50＝Log-1[Xm-i×(∑p–0.5)]
式中Xm为最高死亡率Pm组的剂量对数值，i为组距，Pm为最高死亡率，Pn为最低死亡率，n为各组内动物数。
活性结果如下：
从以上抗肿瘤活性结果可以看到，本发明的化合物均具有显著的 癌细胞抑制活性，尤其是化合物4、5、7、9、11、12、13对EC9706细胞有较好的抑制作用，化合物5、15对MGC803细胞有强的抑制作用，化合物5、7、9对B16细胞有好的抑制作用。本发明的化合物可以应用在治疗与恶性肿瘤相关的代谢疾病中。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
Claims (9)
1.一种岩白菜素的衍生物，其特征在于，具有以下结构，
其中，R1为苯环、不同取代的苯基、吡啶、不同取代的吡啶基或脂肪链中的一种。
2.根据权利要求1所述的岩白菜素的衍生物，其特征在于，R1为苯环、苯环上至少一个氢原子被CH3-O-、-CN、-NO2、卤素或C1-C4的烷基取代的苯基、吡啶、至少一个氢原子被卤素取代的吡啶基、酯基、C1-C5的烷基或含羟基的脂肪链中的一种。
3.根据权利要求1或2所述的岩白菜素的衍生物，其特征在于，R1为 -CH2CH(CH3)2、-CH2CH2CH2CH2CH3、-COOCH3、-CH2COOCH3、CH2CH2COOCH2CH3或-CH2OH中的一种。
4.权利要求1-3任一项所述岩白菜素衍生物的制备方法，其特征在于，化合物1的制备方法包括以下步骤：
(1)将岩白菜素、KI和K2CO3加入到N-甲基吡咯烷酮反应溶剂中，其中，按摩尔比岩白菜素：KI：K2CO3为1：(2～5)：(2～5)，搅拌至完全溶解，加入3-溴丙炔，按摩尔比3-溴丙炔：岩白菜素为(2～5)：1，室温至100℃条件下反应至转化完全；
(2)向步骤(1)所得的反应体系中加入乙酸乙酯和蒸馏水萃取得有机相，所述有机相用饱和食盐水洗涤，然后用无水NaSO4粉末干燥；
(3)将步骤(2)所得产物经过滤、浓缩，用硅胶柱层析分离纯化，纯化时用体积比为5:1～1:1的石油醚和乙酸乙酯的混合溶液进行洗脱，浓缩洗脱液即得化合物1。
5.根据权利要求4所述的岩白菜素衍生物的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述溶剂选自丙酮、DMF或NMP中的一种。
6.根据权利要求4或5任一项所述的岩白菜素衍生物的制备方法，其特征在于，还包括以下步骤：
在反应容器中加入化合物1和叠氮化合物，按摩尔比化合物1：叠氮化合物为1:(2～5)，然后加入CuSO4·5H2O和维生素C钠，按重量比化合物1：CuSO4·5H2O：维生素C钠为(0.1～0.2)：(0.1～0.2)：1，最后加入体积比为1:1～1:5的THF与H2O的混合溶剂或者体积比为1:1～1:5的t-BuOH与H2O的混合溶剂，使样品充分溶解，室温至100℃条件下进行1,3-偶极环加成反应，反应0.5～5h后即得通式Ⅰ所代表的岩白菜素衍生物。
7.根据权利要求6所述的岩白菜素衍生物的制备方法，其特征在于，所述叠氮化合物的制备方法包括以下步骤：
(1)在反应容器中加入卤代化合物与叠氮化钠，按摩尔比卤代化合物：叠氮化钠为1:1～1:5，然后加入DMF使样品充分溶解，25～100℃条件下反应0.5～12h；
(2)反应结束后向反应液中加入***和蒸馏水进行萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，分出有机相，用无水NaSO4干燥，过滤，浓缩即得叠氮化合物。
8.根据权利要求7所述的岩白菜素衍生物的制备方法，其特征在于，所述卤代化合物选自溴化苄、4-甲基氯苄、4-乙基氯苄、4-叔丁基氯苄、对甲氧基氯苄、对氟氯苄、对氰基氯苄、对硝基氯苄、2-氯-5-氯甲基吡啶、2-氯甲基吡啶、1-溴代异戊烷、溴己烷、溴乙酸甲酯、3-溴丙酸甲酯、4-溴丁酸乙酯或2-溴乙醇中的一种。
9.权利要求1-3任一项所述岩白菜素衍生物在抗癌药物中的应用。
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