一种香港四照花组织培养培养基
技术领域
本发明属于植物组织培养技术领域,具体涉及一种香港四照花组织培养培养基。
背景技术
香港四照花(Dendrobenthemiajaponica),又名山荔枝、青皮树,为山茱萸科四照花属常绿乔木。幼枝及幼叶疏被褐色细毛。因花序外有2对黄白色花瓣状大苞片;果熟红色或***状如草莓和荔枝,而得名山荔枝。聚花果球形红色。核果聚为球形的聚合果肉质,9~10月成熟,成熟后变为***,果实味甜可食及酿酒用。
香港四照花树形圆整,呈伞形,叶片光亮,树姿优美。花序苞片洁白,果序球形红艳,是观姿、观叶、观花、观果兼而有之的优良观赏植物。花瓣状苞片大而洁白覆盖满树,衬于光亮绿叶丛中,经风吹动如同群蝶起舞十分别致;成熟果实***颇鲜艳。叶片嫩时红色夏季绿色秋天变为褐色,在绿树丛中格外注目。抗寒、抗旱、尚无病虫害、且耐贫瘠、耐移植。集观叶、观花、观果于一体的优良景观绿化材料,尤其是冬季及早春全树***极其壮观,是极具开发前景的乡土彩叶树种,为景观绿化的新优树种。
在2009年出版的安徽农学通报中,吴方星、瞿彦长等公开了一种香港四照花的利用及育苗造林技术,先进行苗圃地选择,在播种前20d左右,用0.5%的高锰酸钾溶液浸种2h,捞出,用清水冲洗2次,然后用50e左右的温水浸种,待水温自然冷却后浸泡36h。捞出置于室温25e催芽。催芽过程中要勤观察、勤翻动、少量喷水,保持种子水分,约20d即可播种。播种时控制行距和深度,及时浇水,注意松土除草,同时每7d喷施012%高锰酸钾和1%的硫酸亚铁1次,预防苗木猝倒病,苗木生长期可喷施多菌灵或代森锌防治叶斑病。
同样,在2006年第8期出版的期刊经验交流中,张剑芳也公开了一种香港秀丽四照花的培育技术,通过采种与种子处理、圃地选择管理等,如播种后要经常观察,连续7天天晴,应浇水或灌溉一次。出苗达到40%时要逐步选择阴天揭草。如果出苗太密,应在出苗后1个月内及时间苗,保持每亩产苗2.2-2.5万株。出苗后1个月以内,如果天气炎热,要用40%透光率的遮阳网遮荫。出苗20天后至9月前,分别施三次肥,第1次施尿素5%;第2、3次施复合肥8%和10%。此外,在夏天梅雨季节要注意排水和灌溉。香港秀丽四照花抗逆性强,病虫害较少,如果出现根腐病,可用农用链霉素500倍液和退菌特800倍液混合浇根。叶斑病可用多菌灵700倍液喷雾,连续7天。
在2011年第19期公开的现代农业科技中,吴伟华、钟亚萍等公开了一种优良乡土绿化苗木秀丽香港四照花特征特性及育苗技术,与上述公开了两个技术类似。
可见,香港四照花现有繁殖技术主要采用种子播种育苗、也采用扦插、分蘖繁殖,大都存在以下缺点:
现有技术种子繁殖苗木会产生变异,不能保持优良性状和苗木不整齐,影响苗木质量;
现有技术扦插、分蘖繁殖虽然属于无性繁殖能保持优良性状,但是繁殖效率低、速度慢,不利于优良品种的大量繁殖和推广。
发明内容
本发明的目的之一是为了提供一种增殖系数高、生根率高、可以短期内大量规模化生产的香港四照花组织培养培养基。
为了实现本发明的目的,采用的技术方案是:
一种香港四照花组织培养培养基,其特征在于:包括初代培养培养基、继代增殖培养基、壮苗培养基和生根培养基,
所述初代培养培养基、继代增殖培养基、壮苗培养基和生根培养基均以母培养基为基本培养基,并都添加有植物生长调节剂、以及蔗糖20000~35000mg/L、卡拉胶6000~7000mg/L。
作为优选的技术方案:所述母培养基组成包括大量元素、微量元素、铁盐、有机附加物,所述母培养基按浓度计,包括:
大量元素:硝酸钾1600~4000mg/L、硝酸铵1400~3200mg/L、七水硫酸镁300~340mg/L、磷酸二氢钾150~180mg/L、二水氯化钙200~480mg/L;
微量元素:碘化钾0.8~1.0mg/L、四水硫酸锰20~25mg/L、七水硫酸锌、8~10mg/L、硼酸6~7mg/L、五水硫酸铜0.02~0.03mg/L、氯化钴0.02~0.03mg/L、二水钼酸钠0.2~0.3mg/L;
铁盐:七水硫酸亚铁25~30mg/L、乙二胺四乙酸二钠35~40mg/L;
有机成分:盐酸硫胺素0.1~0.3mg/L、盐酸吡哆辛0.4~0.8mg/L、烟酸0.4~0.8mg/L、甘氨酸1~3mg/L、肌醇100~130mg/L。
作为优选的技术方案:所述初代培养培养基中的植物生长调节剂包括:6-BA3~4mg/L、NAA0.1~0.2mg/L。
作为优选的技术方案:所述继代增殖培养基中的植物生长调节剂包括:6-BA2~3mg/L、NAA0.06~0.12mg/L。
作为优选的技术方案:所述壮苗培养基中的植物生长调节剂包括:6-BA1~2mg/L、NAA0.1~0.3mg/L。
作为优选的技术方案:所述生根培养基中的植物生长调节剂包括:IBA0.2~1mg/L、NAA0.1~0.3mg/L。
作为优选的技术方案:所述初代培养培养基中大量元素的组成为:硝酸钾3500~4000mg/L、硝酸铵2800~3200mg/L、七水硫酸镁300~340mg/L、磷酸二氢钾150~180mg/L、二水氯化钙400~480mg/L。
作为优选的技术方案:所述继代增殖培养基和壮苗培养基中大量元素的组成为:硝酸钾1600~2000mg/L、硝酸铵1400~2000mg/L、七水硫酸镁300~340mg/L、磷酸二氢钾150~180mg/L、二水氯化钙400~480mg/L。
作为优选的技术方案:所述生根培养基中大量元素的组成为:硝酸钾1600~2000mg/L、硝酸铵1400~2000mg/L、七水硫酸镁300~340mg/L、磷酸二氢钾150~180mg/L、二水氯化钙200~280mg/L。
实际上,继代增殖培养基、壮苗培养基和生根培养基中的微量元素、铁盐和有机成分与初代培养培养基中的相同,只是大量元素含量不同,因此它们的基本培养基都是类似的。初代培养培养基主要作用是诱导芽的生长,继代增殖培养基主要作用是刺激苗的生长速度,壮苗培养基可以使得苗长的更加健壮,而生根培养基有利于根的生长。
6-BA,化学名称:6-苄氨基腺嘌呤,IBA又叫“吲哚丁酸”,NAA为萘乙酸。母培养基与MS培养基类似,两者所含的成分基本相同,而区别在于每个成分的含量不同。而都以母培养基为基本培养基的初代培养培养基、继代增殖培养基、壮苗培养基和生根培养基,所含成分也基本相同,只是成分含量不同。
本发明具有的有益效果:
将香港四照花组织的培养基按照其生长阶段分成对应的四个培养基,并且每个培养基成分类似,只是为了适应植物每个阶段的生长而将某些成分进行了微调,通过该培养基,使得香港四照花表现出了很好的生长特性:
1、保持培养植物的优良特性;
2、采用该培养基培养,增殖系数高、生根率高;
3、本发明结合培养方法可以短期内大量规模化生产,繁殖效率高。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步描述,但本发明的保护范围不仅仅局限于实施例。
实施例1
一种香港四照花组织培养培养基,包括初代培养培养基、继代增殖培养基、壮苗培养基和生根培养基。所述初代培养培养基、继代增殖培养基、壮苗培养基和生根培养基均以母培养基为基本培养基,并都添加有植物生长调节剂、以及蔗糖20000mg/L、卡拉胶6500mg/L。
初代培养培养基中的母培养基组成为:
大量元素:硝酸钾3600mg/L、硝酸铵3000mg/L、七水硫酸镁320mg/L、磷酸二氢钾160mg/L、二水氯化钙440mg/L。
微量元素:碘化钾0.8mg/L、四水硫酸锰22.5mg/L、七水硫酸锌8.6mg/L、硼酸6mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、氯化钴0.025mg/L、二水钼酸钠0.25mg/L;
铁盐:七水硫酸亚铁27.5mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.5mg/L;
有机成分:盐酸硫胺素0.1mg/L、盐酸吡哆辛0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、甘氨酸2mg/L、肌醇100mg/L。
继代增殖培养基和壮苗培养基中大量元素的组成为:硝酸钾1800mg/L、硝酸铵1500mg/L、七水硫酸镁320mg/L、磷酸二氢钾160mg/L、二水氯化钙440mg/L。
生根培养基中大量元素的组成为:硝酸钾1800mg/L、硝酸铵1500mg/L、七水硫酸镁320mg/L、磷酸二氢钾160mg/L、二水氯化钙240mg/L。
继代增殖培养基、壮苗培养基和生根培养基中的微量元素、铁盐和有机成分与初代培养基中的相同。
初代培养培养基中的植物生长调节剂包括:6-BA3.2mg/L、NAA0.15mg/L。
继代增殖培养基中的植物生长调节剂包括:6-BA2.5mg/L、NAA0.061mg/L。
壮苗培养基中的植物生长调节剂包括:6-BA1.5mg/L、NAA0.2mg/L。
生根培养基中的植物生长调节剂包括:IBA0.5mg/L、NAA0.2mg/L。
实施例2
一种香港四照花组织培养培养基,包括初代培养培养基、继代增殖培养基、壮苗培养基和生根培养基。所述初代培养培养基、继代增殖培养基、壮苗培养基和生根培养基均以母培养基为基本培养基,并都添加有植物生长调节剂、以及蔗糖25000mg/L、卡拉胶6000mg/L。
初代培养培养基中的母培养基组成为:
大量元素:硝酸钾1600mg/L、硝酸铵1400mg/L、七水硫酸镁300mg/L、磷酸二氢钾150mg/L、二水氯化钙200mg/L;
微量元素:碘化钾0.8mg/L、四水硫酸锰20mg/L、七水硫酸锌8mg/L、硼酸6mg/L、五水硫酸铜0.02mg/L、氯化钴0.02mg/L、二水钼酸钠0.2mg/L;
铁盐:七水硫酸亚铁25mg/L、乙二胺四乙酸二钠35mg/L;
有机成分:盐酸硫胺素0.1mg/L、盐酸吡哆辛0.4mg/L、烟酸0.4mg/L、甘氨酸1mg/L、肌醇100mg/L。
继代增殖培养基和壮苗培养基中大量元素的组成为:硝酸钾2000mg/L、硝酸铵1400mg/L、七水硫酸镁340mg/L、磷酸二氢钾180mg/L、二水氯化钙480mg/L。
生根培养基中大量元素的组成为:硝酸钾2000mg/L、硝酸铵2000mg/L、七水硫酸镁340mg/L、磷酸二氢钾180mg/L、二水氯化钙200mg/L。
继代增殖培养基、壮苗培养基和生根培养基中的微量元素、铁盐和有机成分与初代培养基中的相同。
初代培养培养基中的植物生长调节剂包括:6-BA3mg/L、NAA0.1mg/L。
继代增殖培养基中的植物生长调节剂包括:6-BA2mg/L、NAA0.06mg/L。
壮苗培养基中的植物生长调节剂包括:6-BA1mg/L、NAA0.1mg/L。
生根培养基中的植物生长调节剂包括:IBA0.2mg/L、NAA0.1mg/L。
实施例3
一种香港四照花组织培养培养基,包括初代培养培养基、继代增殖培养基、壮苗培养基和生根培养基。所述初代培养培养基、继代增殖培养基、壮苗培养基和生根培养基均以母培养基为基本培养基,并都添加有植物生长调节剂、以及蔗糖35000mg/L、卡拉胶7000mg/L。
初代培养培养基中的母培养基组成为:
大量元素:硝酸钾4000mg/L、硝酸铵3200mg/L、七水硫酸镁340mg/L、磷酸二氢钾180mg/L、二水氯化钙480mg/L;
微量元素:碘化钾1mg/L、四水硫酸锰25mg/L、七水硫酸锌10mg/L、硼酸7mg/L、五水硫酸铜0.03mg/L、氯化钴0.03mg/L、二水钼酸钠0.3mg/L;
铁盐:七水硫酸亚铁30mg/L、乙二胺四乙酸二钠40mg/L;
有机成分:盐酸硫胺素0.3mg/L、盐酸吡哆辛0.8mg/L、烟酸0.8mg/L、甘氨酸3mg/L、肌醇130mg/L。
继代增殖培养基和壮苗培养基中大量元素的组成为:硝酸钾3500mg/L、硝酸铵3000mg/L、七水硫酸镁340mg/L、磷酸二氢钾180mg/L、二水氯化钙480mg/L。
生根培养基中大量元素的组成为:硝酸钾3000mg/L、硝酸铵2500mg/L、七水硫酸镁340mg/L、磷酸二氢钾180mg/L、二水氯化钙200mg/L。
继代增殖培养基、壮苗培养基和生根培养基中的微量元素、铁盐和有机成分与初代培养基中的相同。
初代培养培养基中的植物生长调节剂包括:6-BA4mg/L、NAA0.2mg/L。
继代增殖培养基中的植物生长调节剂包括:6-BA3mg/L、NAA0.12mg/L。
壮苗培养基中的植物生长调节剂包括:6-BA2mg/L、NAA0.3mg/L。
生根培养基中的植物生长调节剂包括:IBA1mg/L、NAA0.3mg/L。
实施例4
一种香港四照花组织培养培养基,包括初代培养培养基、继代增殖培养基、壮苗培养基和生根培养基。所述初代培养培养基、继代增殖培养基、壮苗培养基和生根培养基均以母培养基为基本培养基,并都添加有植物生长调节剂、以及蔗糖30000mg/L、卡拉胶6800mg/L。
初代培养培养基中的母培养基组成为:
大量元素:硝酸钾2800mg/L、硝酸铵2300mg/L、七水硫酸镁330mg/L、磷酸二氢钾170mg/L、二水氯化钙460mg/L;
微量元素:碘化钾0.9mg/L、四水硫酸锰24mg/L、七水硫酸锌9mg/L、硼酸6.8mg/L、五水硫酸铜0.03mg/L、氯化钴0.03mg/L、二水钼酸钠0.28mg/L;
铁盐:七水硫酸亚铁28mg/L、乙二胺四乙酸二钠38mg/L;
有机成分:盐酸硫胺素0.25mg/L、盐酸吡哆辛0.87mg/L、烟酸0.7mg/L、甘氨酸2.5mg/L、肌醇120mg/L。
继代增殖培养基和壮苗培养基中大量元素的组成为:硝酸钾2500mg/L、硝酸铵2000mg/L、七水硫酸镁320mg/L、磷酸二氢钾170mg/L、二水氯化钙440mg/L。
生根培养基中大量元素的组成为:硝酸钾2500mg/L、硝酸铵2000mg/L、七水硫酸镁320mg/L、磷酸二氢钾170mg/L、二水氯化钙220mg/L。
继代增殖培养基、壮苗培养基和生根培养基中的微量元素、铁盐和有机成分与初代培养基中的相同。
初代培养培养基中的植物生长调节剂包括:6-BA3.4mg/L、NAA0.25mg/L。
继代增殖培养基中的植物生长调节剂包括:6-BA2.5mg/L、NAA0.08mg/L。
壮苗培养基中的植物生长调节剂包括:6-BA0.5mg/L、NAA0.25mg/L。
生根培养基中的植物生长调节剂包括:IBA0.6mg/L、NAA0.2mg/L。
选取生长较整齐的香港四照花茎段,冲洗干净后分别选用实施例1-4的培养基进行培养,每组试验培养20瓶,每瓶5个,光照时间、光照强度、温度控制等培养参数完全一致,45天后观察并统计茎段发芽生长情况,如下表1所示
表1香港四照花芽的生长情况
|
诱导芽个数 |
生长状态 |
实施例1 |
82 |
芽浓绿,生长较快 |
实施例2 |
86 |
芽浓绿,生长快 |
实施例3 |
88 |
芽浓绿,生长快 |
实施例4 |
84 |
芽浓绿,生长快 |
由表1可知,通过初代培养培养基,诱导芽个数多,芽的生长状态好。
将诱导出来的健康小芽转入继代增殖培养基中进行增殖培养,增殖培养周期为35天,增殖培养后统计并测量增殖系数和生长高度,增殖系数=瓶苗在一个周期内形成的有效苗数/接种苗数,如下表2所示:
表2香港四照花芽的增殖培养情况
由表2可知,通过增殖培养基培养后,香港四照花在增殖过程中生长良好,增殖系数很生长高度值都很高。
将增殖培养基中培养后的芽在壮苗培养基中培养后,继续接种到生根培养基中进行生根培养,培养30天后查看并计算生根率和平均根长,其中生根率=生根的外植体数/接种的外植体数×100%,平均根长=根的总长度/根的总
数;结果如下表3所示,
表3香港四照花芽的生根培养情况
由表3可知,通过生根培养基的培养,香港四照花的芽生根率高,根长,体现出了良好的生长特性。
综上所述,通过本发明的培养基能大大提高增殖系数和生根率,易于短期内大量规模化生产,繁殖效率高。
最后应说明的是:以上实施例仅用以说明本发明而并非限制本发明所描述的技术方案;因此,尽管本说明书参照上述的各个实施例对本发明已进行了详细的说明,但是,本领域的普通技术人员应当理解,仍然可以对本发明进行修改或等同替换;而一切不脱离本发明的精神和范围的技术方案及其改进,其均应涵盖在本发明的权利要求范围中。