CN104719013A - 一种野生棉或半野生棉抗盲蝽蟓性鉴定方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种野生棉或半野生棉抗盲蝽蟓性鉴定方法，具体为：在网室内种植鉴定品种；网室外面罩上80-100目尼龙网；于棉花生长的10-12叶期人工接种绿盲蝽混合群体，每平方米1头；释放盲蝽蟓前10天净笼，在网室内喷施辛硫磷1500倍液；接虫后7-10天调查各鉴定品种顶尖3片叶片的危害程度和每株棉花侧枝总数和侧枝被害数；计算叶片危害指数、侧枝被害率、侧枝危害减退率；判别鉴定品种的抗性级别。本方法排除了其他害虫和天敌等因素的干扰，鉴定结果稳定、可靠，实用性和可操作性强。

Description

一种野生棉或半野生棉抗盲蝽蟓性鉴定方法

技术领域

本发明属于植物保护技术领域，具体涉及一种野生棉或半野生棉抗盲蝽蟓性鉴定方法。

背景技术

虽然转基因抗虫棉已经有效遏止了棉铃虫的危害，但培育含有来自棉属内抗虫基因的自然抗虫棉仍具有重要意义。近年来，一些科研工作者也在致力于利用野生棉向陆地棉转育有益基因的研究，但未见得到有价值且性状稳定的种质。

我国已经从亚洲棉、比克氏棉、瑟伯氏棉、斯托克氏棉、异常棉、斯特提棉、索马里棉、墨西哥半野生棉、鲍莫尔氏棉、阔叶棉、蓬蓬棉等野生种中转育抗棉铃虫特性，从亚洲棉、异常棉、斯托克氏棉、蓬蓬棉等野生种中转育了抗棉蚜特性，育成抗虫外源血缘种质共97份，这类种质资源的抗虫性已经达到了抗级、有的达到了高抗水平。它们是培育自然抗虫棉品种的优良抗虫基因库，也可以用来改良转基因抗虫棉，综上所述，我国棉花远缘杂交进行种质资源创造已经进入国际先进行列，逐渐达到了种质资源研究利用的实用阶段。远缘杂交产生的高代种质系、特异种质和一些品种或品系组成具有野生棉外源基因的陆地棉种质的全部内容，无论从种质数量，还是种质质量上，它们都将会对今后的棉花育种产生深远的影响。

现阶段对棉田盲蝽蟓的控制主要依靠化学杀虫剂，随着杀虫剂的大量使用势必造成盲蝽蟓对杀虫剂产生抗性，寻找新的盲蝽蟓控制途径十分必要。当前科学家还没有挖掘和克隆到有效的控制盲蝽蟓的基因，培育转基因抗盲蝽的棉花品种还需较长的时间。同时经过长期的人工驯化和定向培育,使现今的棉花栽培种的遗传多样性越来越狭窄。然而，陆地棉栽培种之外的其他栽培种、野生种系、野生种等远缘种属,由于其分布区域的环境及长期的自然选择,使它们具有丰富的遗传多样性,含有可被棉花育种应用的许多优良基因，如抗旱、抗病虫、抗寒、种子无腺体植株有腺体、雄性不育以及纤维细强的潜在特性等。而且自然抗虫棉抗虫性来自棉属内，抗虫稳定性强，标靶害虫不易产生抗虫性，且不会对环境和生物安全产生不利影响。

因此致力于利用野生棉或半野生棉中筛选抗盲蝽蟓品种材料，并通过分子标记方法，聚合创造新材料，提供给育种家使用，已经成为迫在眉睫的工作。因此，急需研究适用于野生棉或半野生棉抗盲蝽蟓的鉴定方法。

转基因抗虫棉大面积种植后，棉田害虫的地位发生演化，盲蝽蟓等次要害虫上升为主要害虫，其为害呈日益严重的趋势。由于以前盲蝽蟓并非主要害虫，且大部分研究抗性鉴定方法围绕着栽培品种进行，对野生棉或半野生棉这种原生态的抗性内属性利用较少，甚至是空白。

发明内容

本发明的目的是提供一种野生棉或半野生棉的抗盲蝽蟓的鉴定方法，本方法排除了其他害虫和天敌等因素的干扰，鉴定结果稳定、可靠，实用性和可操作性强。

本发明所采用的技术方案是，一种野生棉或半野生棉的抗盲蝽蟓的鉴定方法，包括以下步骤：

(1)试验在网室内进行，在网室内种植鉴定品种，每材料种植10株，均重复3次，网室内棉花栽培行距0.80m、株距0.25m，苗期需要防治1-2次棉蚜；

(2)网室外面罩上80-100目尼龙网，以阻止害虫及天敌的侵入；

(3)于棉花生长的10-12叶期人工接种绿盲蝽混合群体，每平方米1头，所释放的盲蝽蟓均为采自田间自然种群，并在室内用四季豆饲养、生命活力强的群体；

(4)释放盲蝽蟓前10天净笼，在网室内喷施辛硫磷1500倍液，杀灭害虫和天敌；

(5)接虫后7-10天调查棉花上部3片叶片的危害程度和每株棉花侧枝总数和侧枝被害数；

(6)、计算叶片危害指数、侧枝被害率、侧枝危害减退率；

(7)根据不同材料上盲蝽危害叶片指数、侧枝被害减退率判别鉴定品种的抗性级别。

本发明的特点还在于，

步骤(5)中叶片的危害程度级别判定标准如下：0级为叶片无危害状；1级为叶片轻微受害，受害面积低于5％；2级为叶片中等危害，受害面积大于5％，小于20％；3级为叶片严重受害，受害面积大于20％，小于50％；4级为叶片危害同对照品种，受害面积大于50％。

步骤(6)中叶片危害指数的计算方法如下：叶片为害指数为每株棉花上部3片叶片的危害级别的平均值：

$X=\frac{X1+X2+X3}{X}---\left(1\right);$

公式(1)中：

X1、X2、X3分别代表每株棉花顶部三片叶受盲蝽危害后的级别；

X为每株棉花顶部三片叶受盲蝽危害后的危害指数。

步骤(6)中侧枝被害率的计算方法如下：

$Y=\frac{a}{a+b}\×100\%---\left(2\right)$

公式(2)中：

a为每株棉花上受盲蝽危害侧枝数；

b为每株棉花上健康侧枝数；

Y为每株棉花受盲蝽危害后侧枝被害百分率。

步骤(6)中的计算方法如下：

$Z=\frac{(Y0-Y1)}{Y0}\×100\%---\left(3\right)$

公式(3)中：

Y0为对照棉花上侧枝危害百分率；

Y1为鉴定棉花上侧枝危害百分率；

Z为鉴定棉花的侧枝危害减退率。

步骤(7)中的野生棉或半野生棉抗盲蝽蟓性性判定标准如下：

(a)侧枝被害减退率<12.5％，叶片危害指数<1时，野生棉或半野生棉抗盲蝽蟓性的抗性程度为高抗；

(b)侧枝被害减退率为12.5％～25％，叶片危害指数为1～2时，野生棉或半野生棉抗盲蝽蟓性的抗性程度为抗；

(c)侧枝被害减退率为25％～40％，叶片危害指数为2～3时，野生棉或半野生棉抗盲蝽蟓性的抗性程度为中抗；

(d)侧枝被害减退率为40％～60％，叶片危害指数为3～4时，野生棉或半野生棉抗盲蝽蟓性的抗性程度为低抗；

(e)侧枝被害减退率>60％，叶片危害指数>4时，野生棉或半野生棉抗盲蝽蟓性的抗性程度为感。

本发明的有益效果是：研究了野生棉或半野生棉对棉蚜的控制作用，并通过比较田间小区试验、网室试验试验，研究提出了野生棉或半野生棉抗盲蝽蟓性鉴定方法。本方法排除了其他害虫和天敌等因素的干扰，鉴定结果稳定、可靠，实用性和可操作性强。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明进行详细说明。

本发明提供一种野生棉或半野生棉的抗盲蝽蟓的鉴定方法，步骤如下：

(1)试验在网室(长6米、宽2.5米、高2.0米)内进行，在网室内种植鉴定品种，每材料种植10株，均重复3次，网室内棉花栽培行距0.80m、株距0.25m,苗期可防治1-2次棉蚜；

(2)网室外面罩上80-100目尼龙网，以阻止害虫及天敌的侵入；

(3)于棉花生长的10-12叶期人工接种绿盲蝽混合群体，每平方米1头，所释放的盲蝽蟓均为采自田间自然种群，并在室内用四季豆饲养、生命活力强的群体；

(4)释放盲蝽蟓前10天净笼，在网室内喷施辛硫磷1500倍液，杀灭害虫和天敌；

(5)接虫后7-10天调查棉花上部3片叶片的危害程度和每株棉花侧枝总数和侧枝被害数；叶片受害症状为叶片呈现不均匀的孔洞、出现褐色或黑色斑；棉蕾受害症状为棉蕾苞叶呈现黑色刺点、严重的棉蕾变黑色。叶片危害级别判定标准：0级为叶片无危害状；1级为叶片轻微受害，受害面积低于5％；2级为叶片中等危害，受害面积大于5％，小于20％；3级为叶片严重受害，受害面积大于20％，小于50％；4级为叶片危害同对照品种，受害面积大于50％。

(6)计算叶片危害指数(公式(1))、侧枝被害率(公式(2))、侧枝危害减退率(公式(3))；叶片为害指数为每株棉花上部3片叶片的危害级别的平均值。

$X=\frac{X1+X2+X3}{X}---\left(1\right)$

公式(1)中：

X1、X2、X3分别代表每株棉花顶部三片叶受盲蝽危害后的级别；

X为每株棉花顶部三片叶受盲蝽危害后的危害指数。

$Y=\frac{a}{a+b}\&times;100\%---\left(2\right)$

公式(2)中：

a为每株棉花上受盲蝽危害侧枝数；

b为每株棉花上健康侧枝数；

Y为每株棉花受盲蝽危害后侧枝被害百分率。

$Z=\frac{(Y0-Y1)}{Y0}\&times;100\%---\left(3\right)$

公式(3)中：

Y0为对照棉花上侧枝危害百分率；

Y1为鉴定棉花上侧枝危害百分率；

Z为鉴定棉花的侧枝危害减退率。

(7)根据不同材料上盲蝽危害叶片指数、侧枝被害减退率判别鉴定品种的抗性级别。

表1野生棉或半野生棉抗盲蝽蟓性性判定标准

抗性程度	侧枝被害减退率(％)	叶片危害指数
			高抗	<12.5	<1
抗	12.5～25	1～2
			中抗	25～40	2～3
低抗	40～60	3～4
			感	>60	>4

实例：

1、实验方法：

(1)试验在网室(长6米、宽2.5米、高2.0米)内进行，在网室内种植鉴定品种，每材料种植10株，均重复3次，网室内棉花栽培行距0.80m、株距0.25m,苗期可防治1-2次棉蚜；

(2)网室外面罩上80-100目尼龙网，以阻止害虫及天敌的侵入；(3)于棉花生长的10-12叶期人工接种绿盲蝽混合群体，每平方米1头，所释放的盲蝽蟓均为采自田间自然种群，并在室内用四季豆饲养、生命活力强的群体；

(4)释放盲蝽蟓前10天净笼，在网室内喷施辛硫磷1500倍液，杀灭害虫和天敌；

(5)接虫后7-10天调查棉花上部3片叶片的危害程度和每株棉花侧枝总数和侧枝被害数；叶片受害症状为叶片呈现不均匀的孔洞、出现褐色或黑色斑；棉蕾受害症状为棉蕾苞叶呈现黑色刺点、严重的棉蕾变黑色。叶片危害级别判定标准:0级为叶片无危害状；1级为叶片轻微受害，受害面积低于5％；2级为叶片中等危害，受害面积大于5％，小于20％；3级为叶片严重受害，受害面积大于20％，小于50％；4级为叶片危害同对照品种，受害面积大于50％。

(6)计算叶片危害指数、侧枝被害率、侧枝危害减退率；叶片为害指数为每株棉花上部3片叶片的危害级别的平均值；

(7)根据不同材料上盲蝽危害叶片指数、侧枝被害减退率判别鉴定品种的抗性级别。

2、实验结果：

由实验结果可见，网室内种植筛选材料共计149份，对侧枝危害减退率数据采用DPS 7.05软件LSD法进行多重比较分析。差异性分析结果如表2，结果表明，野生棉或半野生棉抗盲蝽蟓性判定标准叶片危害指数和侧枝危害减退率判定。

表2野生棉或半野生棉盲蝽侧枝减退率差异性分析结果

通过抗性标准判定149份材料中，高抗材料3份，编号为65、147和58，抗性材料5份，编号为108、78、33、168、17，中抗材料5份，编号分别为24、149、86、34、20，低抗材料24份，编号分别为53、152、62、50、55、14、154、175、159、135、127、77、46、42、119、25、145、49、48、66、32、174、10、70，其余112份材料为感性材料。

Claims (6)

1.一种野生棉或半野生棉抗盲蝽蟓性鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)试验在网室内进行，在网室内种植鉴定品种，每材料种植10株，均重复3次，网室内棉花栽培行距0.80m、株距0.25m，苗期需要防治1-2次棉蚜；

(2)网室外面罩上80-100目尼龙网，以阻止害虫及天敌的侵入；

(3)于棉花生长的10-12叶期人工接种绿盲蝽混合群体，每平方米1头，所释放的盲蝽蟓均为采自田间自然种群，并在室内用四季豆饲养、生命活力强的群体；

(4)释放盲蝽蟓前10天净笼，在网室内喷施辛硫磷1500倍液，杀灭害虫和天敌；

(5)接虫后7-10天调查棉花上部3片叶片的危害程度和每株棉花侧枝总数和侧枝被害数；

(6)、计算叶片危害指数、侧枝被害率、侧枝危害减退率；

(7)根据不同材料上盲蝽危害叶片指数、侧枝被害减退率判别鉴定品种的抗性级别。

2.根据权利要求1所述的野生棉或半野生棉抗盲蝽蟓性鉴定方法，其特征在于，所述步骤(5)中叶片的危害程度级别判定标准如下：0级为叶片无危害状；1级为叶片轻微受害，受害面积低于5％；2级为叶片中等危害，受害面积大于5％，小于20％；3级为叶片严重受害，受害面积大于20％，小于50％；4级为叶片危害同对照品种，受害面积大于50％。

3.根据权利要求2所述的野生棉或半野生棉抗盲蝽蟓性鉴定方法，其特征在于，所述步骤(6)中叶片危害指数的计算方法如下：叶片为害指数为每株棉花上部3片叶片的危害级别的平均值：

$X=\frac{X1+X2+X3}{3}---\left(1\right);$

公式(1)中：

X1、X2、X3分别代表每株棉花顶部三片叶受盲蝽危害后的级别；

X为每株棉花顶部三片叶受盲蝽危害后的危害指数。

4.根据权利要求1所述的野生棉或半野生棉抗盲蝽蟓性鉴定方法，其特征在于，所述步骤(6)中侧枝被害率的计算方法如下：

$Y=\frac{a}{a+b}\&times;100\%---\left(2\right)$

公式(2)中：

a为每株棉花上受盲蝽危害侧枝数；

b为每株棉花上健康侧枝数；

Y为每株棉花受盲蝽危害后侧枝被害百分率。

5.根据权利要求1所述的野生棉或半野生棉抗盲蝽蟓性鉴定方法，其特征在于，所述步骤(6)中的计算方法如下：

$Z=\frac{(Y0-Y1)}{Y0}\&times;100\%---\left(3\right)$

公式(3)中：

Y0为对照棉花上侧枝危害百分率；

Y1为鉴定棉花上侧枝危害百分率；

Z为鉴定棉花的侧枝危害减退率。

6.根据权利要求1所述的野生棉或半野生棉抗盲蝽蟓性鉴定方法，其特征在于，所述步骤(7)中的野生棉或半野生棉抗盲蝽蟓性性判定标准如下：

(a)侧枝被害减退率<12.5％，叶片危害指数<1时，野生棉或半野生棉抗盲蝽蟓性的抗性程度为高抗；

(b)侧枝被害减退率为12.5％～25％，叶片危害指数为1～2时，野生棉或半野生棉抗盲蝽蟓性的抗性程度为抗；

(c)侧枝被害减退率为25％～40％，叶片危害指数为2～3时，野生棉或半野生棉抗盲蝽蟓性的抗性程度为中抗；

(d)侧枝被害减退率为40％～60％，叶片危害指数为3～4时，野生棉或半野生棉抗盲蝽蟓性的抗性程度为低抗；

(e)侧枝被害减退率>60％，叶片危害指数>4时，野生棉或半野生棉抗盲蝽蟓性的抗性程度为感。