CN104651287A - 一种用于合成甘油葡糖苷的工程菌和应用 - Google Patents

Abstract

本公开涉及微生物合成高附加值化学品领域，具体而言是一种用于合成甘油葡糖苷的工程菌和应用。工程菌为GG转运***基因和/或GG合成负调控蛋白基因缺失的蓝细菌突变体。所述工程菌光照下能利用太阳能固定二氧化碳生长，而在盐胁迫作用下，能合成、积累并分泌甘油葡糖苷。本发明合成甘油葡糖苷的构建体，包含所述构建体的载体，包含所述构建体或用所述载体转化的蓝细菌，以及在蓝细菌中生产甘油葡糖苷的方法。而利用本发明描述的方法对光合自养蓝细菌进行***的代谢工程改造，使得盐胁迫下蓝细菌GG的产量提高到野生型的约4倍。

Description

一种用于合成甘油葡糖苷的工程菌和应用

技术领域

本发明涉及微生物合成高附加值化学品领域，具体而言是一种用于合成甘油葡糖苷的工程菌和应用。 

背景技术

甘油葡糖苷，一类甘油分子与葡萄糖分子以糖苷键结合的物质，根据葡萄糖分子的构型、结合甘油分子的位置以及甘油分子的构型分为多种。其中，自然界存在最多的，作为天然渗透压抵抗分子的是2-O-(α-D-gluco-pyranosyl)-sn-glycerol(以下简称GG)，即集胞藻PCC6803在盐胁迫下合成的主要分子，也被称为“兼容性分子(compatible solutes)”。现有研究表明，GG具有如下用途：（1）GG可以通过与细胞胞内大分子的相互作用来维持大分子的稳定构象，是一种大分子的稳定剂，可用于蛋白等大分子的长期保存，或大分子蛋白的冻干保护剂(Sawangwan,T.,Goedl,C.,Nidetzky,B.,2010.Glucosylglycerol and glucosylglycerate as enzyme stabilizers.Biotechnol.J.5,187-191.)。（2）GG具有保湿功能，也可以激活表皮细胞抗氧化酶，如超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶等的表达，可以作为一种化妆品添加剂使用，消除活性氧自由基，抗衰老（US20110207681A1）。（3）日本著名的白鹿清酒公司，由于其发酵酒产品中含有GG，所以对其生理药理作用进行了深入研究，并申请了相应专利，具体包括，GG可以降低血糖水平，有助于辅助治疗肥胖或糖尿病（JP2004-331576）；促进骨胶原和透明质酸的生成（JP2004-331579）；抑制脂肪细胞内中性脂的累积（JP2004-331580）；作为洁面的一种成分，洁面后可消除紧绷感（JP2004-331583）；可作为食品，饮料添加剂（JP2007-262023）；可作为药物添加剂，治疗过敏性皮炎（JP2009-161564）。 

目前合成GG的方法主要包括化学合成法、微生物合成法、酶催化合成法。化学合成方面，由于GG存在多种光学异构体，获得所需2-O-(α-D-gluco-pyranosyl)-sn-glycerol产率较低，且需要多步纯化；微生物合成方面，Martin Hagemann et al虽然曾经报道了利用Stenotrophomonas rhizophilastrain DSM14405合成GG并分泌至胞外，但最高产量仅约为29mg L^-1(Roder et al.,2005)；酶催化合成方面，日本白鹿清酒公司曾经报道了利用麦芽糖和甘油作为底物，利用α-葡糖苷酶合成GG，其清酒中GG的最高含量可达0.5%(Takenaka and Uchiyama,2000)。2008年，Bernd Nidetzky等报道了利用蔗糖和甘油作为底物，通过蔗糖磷酸化酶（sucrose phosphorylase）催化合成GG。其中，90%以上的蔗糖可以被转化为GG，后期通过吸附层析等纯化，GG的纯度可达98%，纯化回收率约为70%(Goedl et al.,2008)（US2009031872A1）。 

蓝细菌作为新一代光合微生物***正受到越来越多的关注（Angermayr,S.A.等人,2009）。在2009年中，国内外几个研究小组相继在利用蓝细菌生产生物燃料及生物基化学品方面取得突破：中国石油大学的傅鹏程教授将来源于运动发酵单胞菌（Zymomonas mobilis）的丙酮酸脱羧酶和乙醇脱氢酶基因在集胞藻PCC6803中共表达，实现了太阳能到生物乙醇的转化（产量为5.2mmol/OD₇₃₀/L/d）（Dexter J.和Fu,P.,2009）；美国加州大学伯克利分校Anastasios Melis教授的研究小组通过在集胞藻PCC6803中外源表达山葛（Pueraria montana）的异戊二烯合成酶基因，实现了在蓝细菌中生产异戊二烯（产量为50mg/g/d）（Lindberg,P.等人, 2009）；加州大学洛杉矶分校James C Liao教授也发表了他们最新的研究成果：通过基因工程手段实现了在聚球藻PCC7942中高效生产异丁醛（最高产量为6,230μg/L/h）（Atsumi,S.等人,2009），这项成果发表在Nature Biotechnology杂志上。2010年3月29日，PNAS杂志报道了美国亚历桑那州立大学的一项最新的研究成果，即在集胞藻PCC6803中生产和分泌游离脂肪酸（Liu,X.等人,2010）。 

蓝细菌（也称为蓝藻）是一类能够进行植物型产氧光合作用的原核微生物，它作为新一代工业微生物***合成GG具有如下优势:（1）蓝细菌能够吸收太阳能、固定二氧化碳作为碳源进行自养生长，培养成本低，且它们对环境适应能力强，生长迅速；（2）蓝细菌自身在盐胁迫作用下可以大量合成GG，用于抵抗盐胁迫对细胞造成的损伤，同时GG的合成及调控机制也得到了广泛的研究（Martin Hagemann，2011）；（3）蓝细菌遗传操作方便，遗传背景清晰，许多种类的基因组测序工作也已经陆续完成，这使得利用基因工程手段改造蓝细菌非常方便。其中，集胞藻（Synechocystis sp.）PCC6803是单细胞蓝细菌的代表物种，其全基因组测序于1996年完成，是最早完成全基因组测序的光合生物，也是目前研究最多的蓝细菌之一，被认为是理想的模式物种之一（Angermayr,S.A.等人,2009）。所以，通过基因工程改造蓝细菌集胞藻PCC6803，合成在化妆品、药物、保健品、食品等领域具有广泛用途的GG，具有重要的学术研究价值与实际应用前景。 

发明内容

本发明目的在于提供一种用于合成甘油葡糖苷的工程菌和应用。 

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为： 

一种用于合成甘油葡糖苷的工程菌，工程菌为GG转运***基因和/或GG合成负调控蛋白基因缺失的蓝细菌突变体。 

所述GG转运***基因为GG转运***中slr0529基因、slr0530基因、slr0531基因中的一种或几种。 

所述GG转运***基因为GG转运***中slr0530基因和slr0531基因，即ggtCD。所述蓝细菌突变体中还包括抗性标记基因，抗性标记基因选自壮观霉素抗性基因Omega片段(SEQ ID NO:9)、卡那霉素抗性基因片段(SEQ ID NO:10)或氯霉素抗性基因片段(SEQ ID NO:11)。 

所述蓝细菌为集胞藻(Synechocystis sp.)PCC6803、聚球藻(Synechococcus)PCC7002、聚球藻WH5701、聚球藻CB0101、聚球藻CB0205、聚球藻RCC307、聚球藻WH7803、聚球藻RS9917、聚球藻CC9311、聚球藻、聚球藻WH8016、聚球藻RS9916、聚球藻BL107、聚球藻CC9902、聚球藻WH8102、聚球藻CC9605、聚球藻WH8109、聚球藻PCC7335、Acaryochloris MBIC11017、Acaryochloris CCMEE5410、蓝杆藻(Cyanothece)CCY0110、蓝杆藻ATCC51142、微鞘藻(Microcoleus)PCC7420、鞘丝藻(Lyngbya)PCC8106、节旋藻(Athrospira)CS-328、节旋藻PCC8005或节旋藻NIES-39。 

一种用于合成甘油葡糖苷的工程菌的构建方法： 

1）构建用于敲除蓝细菌中编码能够吸收胞外GG的转运***基因的质粒； 

2）构建用于敲除蓝细菌中编码的能够抑制GG合成的负调控蛋白基因的质粒； 

3)将步骤1）所得质粒转化到蓝细菌中即得到工程菌；或是将步骤1）和步骤2）所得质粒先后转化到蓝细菌中即得到工程菌。 

一种用于合成甘油葡糖苷的工程菌的应用，所述工程菌在合成甘油葡糖苷中的应用。 

所述工程菌光照下能利用太阳能固定二氧化碳生长，而在盐胁迫作用下，能合 成、积累并分泌甘油葡糖苷。 

相关术语

蓝细菌（也称为蓝藻）是一类光合自养的原核微生物，其能够利用太阳能，固定二氧化碳。 

GG转运***（glucosylglycerol transport system）是集胞藻PCC6803用于将胞外GG转运至胞内的蛋白复合体，包含三个亚基，分别是slr0529基因（ggtB，substrate-binding protein）、slr0530基因（ggtC，permease protein）、slr0531基因（ggtD，permease protein）。研究结果表明，这三个亚基只要一个被敲除，集胞藻PCC6803就失去了将胞外GG回收至胞内的功能（Mikkat,S.,Hagemann,M.,2000.Molecular analysis of the ggtBCD gene cluster of Synechocystis sp.strain PCC6803encoding subunits of an ABC transporter for osmoprotective compounds.Arch Microbiol.174,273-82.）ggpS基因编码甘油葡萄糖苷磷酸合成酶(glucosylglycerol phosphate synthase)，该酶催化集胞藻PCC6803GG合成途径的第一步反应；敲除该基因，细胞不能合成GG，并对盐胁迫敏感(Marin K.等人，1998)。 

ggpR基因编码一个转录调控蛋白，是集胞藻PCC6803GG合成关键基因ggpS转录的负调控蛋白。敲除该基因，能够解除其对于ggpS的转录抑制，使得ggpS基因转录本含量增加(Klahn,S.,et al.(2010)"The gene ssl3076encodes a protein mediating the salt-induced expression of ggpS for the biosynthesis of the compatible solute glucosylglycerol in Synechocystis sp.strain PCC6803"J Bacteriol192(17):p.4403-12.)。 

在本发明的实施方案中，载体（vector）是指能够将DNA片段（目的基因）转移到受者细胞中的一种自我复制的DNA分子。 

本发明所具有的优点： 

本发明合成甘油葡糖苷的构建体，包含所述构建体的载体，包含所述构建体或用所述载体转化的蓝细菌，以及在蓝细菌中生产甘油葡糖苷的方法。而利用本发明描述的方法对光合自养蓝细菌进行***的代谢工程改造，使得盐胁迫下蓝细菌GG的产量提高到野生型的约4倍。 

附图说明

图1为本发明实施例提供的质粒pWD12的基本结构图。其中，分别将集胞藻PCC6803ggtCD基因上下游约1kb的片段及Omega抗性基因按照图示方式串联在一起，用于敲除ggtCD基因。 

图2为本发明实施例提供的质粒pWD41的基本结构图。其是通过PCR将ggpR基因上下游基因扩增后***pMD18-T simple载体上，然后通过酶切将卡那抗性基因***该片段中间。 

图3为柱式光反应器培养基因工程藻株的实物照片。 

图4为柱式光反应器培养条件下基因工程藻株的GG产量图。A图为各藻株分泌到胞外的GG含量；B图为各藻株总的GG产量。Wild type代表集胞藻PCC6803野生型菌株；ΔggtCD代表集胞藻PCC6803ΔggtCD基因突变株；ΔggtCDΔggpR代表集胞藻PCC6803ggtCD和ggpR双突变株。 

具体实施方式

实施例1：构建用于转化蓝细菌的载体 

序列表信息： 

SEQ ID NO:1：PCC6803ggtCD基因序列。 

SEQ ID NO:2：PCC6803ggpR基因序列。 

SEQ ID NO:3：引物ggtCD-up-Fwd的序列。 

SEQ ID NO:4：引物ggtCD-up-Rev的序列。 

SEQ ID NO:5：引物ggtCD-down-Fwd的序列。 

SEQ ID NO:6：引物ggtCD-down-Rev的序列。 

SEQ ID NO:7：引物ggpR-Fwd的序列。 

SEQ ID NO:8：引物ggpR-Rev的序列。 

SEQ ID NO:9：壮观霉素抗性基因Omega片段序列。 

SEQ ID NO:10：卡那霉素抗性基因片段序列。 

SEQ ID NO:11：氯霉素抗性基因片段序列。 

1、用于在蓝细菌集胞藻PCC6803基因组中敲除ggtCD基因的质粒pWD12的构建 

以ggtCD-up-Fwd（5’-GCTGCTAATGGTTATGAAGTTCCTGG-3’）和ggtCD-up-Rev（5’-CAGTCTCTAGGGTGGGCAATATTAGATA-3’）为引物对，以集胞藻PCC6803基因组为模板进行PCR，并将PCR产物克隆到pMD18-T载体（Takara,Catalog No.:D101A）中，从而得到质粒pWD9。用DraI（Takara,Catalog No.:D1037A）酶切质粒pRL57（Cai Y.等人，1990），回收约1.9kb的Omega片段；将质粒pWD9经XbaI（Takara,Catalog No.:D1093A）酶切，用T4DNA聚合酶（Fermentas,Catalog No.:EP0061）补平，回收线性pWD9的载体片段；将上述两片段相连得到质粒pWD11。再以ggtCD-down-Fwd（5’-GAAGTACCATTGCCGTCATTTTGTTG-3’）和ggtCD-down-Rev（5’-ATTACTCAGTTGGATGGTAACAGGG-3’）为引物对，以集胞藻PCC6803基因组为模板进行PCR，将PCR片段克隆到pMD18-T载体中，得到质粒pWD10；利用PstI（Takara,Catalog No.:D1093A）和EcoRI（Takara,Catalog No.:D1040A）两个内切酶从质粒pWD11上切下ggtCD-up及Omega片段，T4DNA聚合酶补平；以SalI（Takara,Catalog No.:D1080A）酶切pWD10，T4DNA聚合酶补平，回收线性的pWD10载体片段；将两个片段连接得到质粒pWD12。 

上述PCR反应体系以及条件如下： 

50μL反应体系(体系中除了模板、引物和水之外，其他均购自Fermentas公司)：5μL 10X Taq Buffer with(NH4)₂SO₄、4μL 25mM MgCl₂、2μL dNTP Mix(2.5mM each)、2.5U Taq DNA Polymerase、1.25U pfu DNA Polymerase、10ng集胞藻PCC6803基因组DNA、加入两条引物至浓度200nM、加水补齐至50μL。反应条件：95度，5分钟；加热程序(95度，30秒；55度，30秒；72度，2分钟)循环30次；72度，10分钟。 

2、用于在蓝细菌集胞藻PCC6803基因组中敲除ggpR基因的质粒pWD41的构建以ggpR-Fwd（5’-TAAATCCGCCCGTTCCCTCT-3’）和ggpR-Rev（5’-GGTCTACCACAACCCGTCTG-3’）为引物对，以集胞藻PCC6803基因组为模板进行PCR(PCR反应体系及条件同上)，并将PCR产物克隆到pMD18-T simple载体（Takara,Catalog No.:D103A）中，从而得到质粒pWD37。将质粒pRL446用BamHI（Takara,Catalog No.:D1010A）酶切，T4DNA聚合酶补平，回收1kb的片段；再将质粒pWD37用HpaI酶切（Takara,Catalog No.:D1064A），回收5kb的片段；以上两片段连接，从而得到pWD41。 

实施例2：蓝细菌的转化以及转化体的筛选 

为了敲除GG转运***基因ggtCD，首先用质粒pWD12转化集胞藻PCC6803野生 型菌株，通过抗生素筛选得到ggtCD突变株WD037；而为了在ggtCD突变株的基础上进一步敲除ggpR，再随后用质粒pWD41转化ggtCD突变株，得到ggtCD和ggpR双突变株WD094。详细的蓝细菌转化和筛选方法如下： 

1.质粒pWD12转化集胞藻PCC6803野生型菌株： 

1）取处于对数生长期（OD₇₃₀约为0.5～1.0）的PCC6803野生型藻细胞10mL，离心收集细胞；并用新鲜的BG11培养基洗涤细胞两次，再将细胞重悬于1mL BG11培养基中，其中BG11培养基为1.5g L^-1NaNO₃,40mg L^-1K₂HPO₄·3H₂O,36mg L^-1CaCl₂·2H₂O,6mg L^-1柠檬酸,6mg L^-1柠檬酸铁铵,1mg L^-1EDTA二钠盐,20mgL^-1NaCO₃,2.9mg L^-1H₃BO₃,1.8mg L^-1MnCl₂·4H₂O,0.22mg L^-1ZnSO₄·7H₂O,0.39mg L^-1NaMoO₄·2H₂O,0.079mg L^-1CuSO₄·5H₂O和0.01mg L^-1CoCl₂·6H₂O。 

2）取上述0.2mL细胞悬液于新的EP管中，加入2～3μg的pWD12表达质粒，混匀，并置于30℃、30μE m^-2s^-1光照条件下温育5小时。 

3）将步骤2）温育后的藻细胞与DNA的混合物涂布于铺在BG11平板（未加抗生素）上的硝酸纤维素膜上，并置于30℃、30μE m^-2s^-1光照条件下培养24小时。然后，将硝酸纤维素膜转移到含有10μg mL^-1壮观霉素的BG11平板上，并在30℃、30μE m^-2s^-1的条件下继续培养大约5～7天，挑取转化子，即ggtCD突变株WD037，将突变株在新鲜的添加有10μg mL^-1壮观霉素的BG11中富集，富集后接入到添加有10μg mL^-1壮观霉素的液体BG11培养基中培养，保存待用。 

2.质粒pWD12转化集胞藻PCC6803野生型菌株，再随后用质粒pWD41转化ggtCD突变株： 

1）取处于对数生长期（OD₇₃₀约为0.5～1.0）的上述ggtCD突变株WD037藻细胞10mL，离心收集细胞；并用新鲜的BG11培养基洗涤细胞两次，再将细胞重悬于1mL BG11培养基中，其中BG11培养基为1.5g L^-1NaNO₃,40mg L^-1K₂HPO₄·3H₂O,36mg L^-1CaCl₂·2H₂O,6mg L^-1柠檬酸,6mg L^-1柠檬酸铁铵,1mg L^-1EDTA二钠盐,20mg L^-1NaCO₃,2.9mg L^-1H₃BO₃,1.8mg L^-1MnCl₂·4H₂O,0.22mg L^-1ZnSO₄·7H₂O,0.39mg L^-1NaMoO₄·2H₂O,0.079mg L^-1CuSO₄·5H₂O和0.01mg L^-1CoCl₂·6H₂O。 

2）取上述0.2mL细胞悬液于新的EP管中，加入2～3μg的pWD41表达质粒，混匀，并置于30℃、30μE m^-2s^-1光照条件下温育5小时。 

3）将步骤2）温育后的藻细胞与DNA的混合物涂布于铺在BG11平板（未加抗生素）上的硝酸纤维素膜上，并置于30℃、30μE m^-2s^-1光照条件下培养24小时。然后，将硝酸纤维素膜转移到含有含有10μg mL^-1壮观霉素以及25μg mL^-1卡那霉素霉素的BG11平板上，并在30℃、30μE m^-2s^-1的条件下继续培养大约5～7天，挑取转化子，即ggtCD和ggpR双突变株WD094，将突变株在新鲜的添加有10μg mL^-1壮观霉素和20μg mL^-1卡那霉素霉素的BG11中富集，富集后接入到添加有10μg mL^-1壮观霉素和20μg mL^-1卡那霉素霉素的液体BG11培养基中培养，保存待用。 

其中突变株WD037和双突变株WD094均保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏单位地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期均为2013年10月31日。突变株WD037保藏号为CGMCC No.8428，分类学命名为集胞藻Synechocystis sp.；突变株WD094保藏号为CGMCC No.8429,分类学命名为集胞藻Synechocystis sp.。 

实施例3：用蓝细菌野生型菌株或经基因工程改造的蓝细菌突变株生产GG 

1、蓝细菌菌株培养和GG产量分析步骤： 

（1）培养方式一：摇瓶培养。普通500毫升三角烧瓶，装300mL液体BG11培养基（含相应浓度抗生素），初始接种菌株OD₇₃₀浓度为0.05，在30℃、30μE m^-2s^-1光照条件下，通空气培养7～8天。 

其中菌株分别为集胞藻PCC6803野生型菌株、突变株WD037、双突变株WD094。 

培养方式二：柱式光反应器培养。普通玻璃管，柱高575mm，直径30mm，装液量200mL。初始接种菌株OD₇₃₀浓度为1，在30℃、100μE m^-2s^-1光照条件下，通含5%（体积比）CO₂的空气进行培养，待菌株培养至对数生长末期（OD₇₃₀为7～8），加入用BG11溶液配置的饱和5M NaCl溶液，调整至NaCl终浓度为600mM。 

其中菌株分别为集胞藻PCC6803野生型菌株、突变株WD037、双突变株WD094。 

（2）盐胁迫后，每隔24时分别取样上述两种方式培养的不同菌株样品1ml，而后以10000g，离心5min，分别将上清吸入另一EP管中； 

（3）胞内GG测定：将上述得到沉淀分别用1ml80%乙醇溶液重悬，65℃水浴4h抽提GG，以10000g离心5min分离上清至10ml离心管中，于55℃氮气吹干，加入纯水溶解后，稀释过滤进行离子色谱分析（参见表1）； 

（4）胞外GG测定： 

1）直接将第（2）歩离心后的上清稀释到GG浓度为10-20mg L^-1，过滤后进行离子色谱分析。 

2）离子色谱分析采用DIONEX的ICS-3000ion-exchange chromatography system，色谱柱为MA1analytical column。洗脱条件为：用800mM NaOH洗脱，流速为0.4ml min^-1。（参见表1） 

将上述分别所得突变株WD037（ggtCD突变株）和WD094（ggtCD和ggpR双突变株）在柱式光反应器中进行了培养，测定了GG的产量，结果如图3和表1所示。结果表明，经过基因工程改造后，蓝细菌合成GG的能力大幅提高：敲除GG转运***基因ggtCD后，WD037GG总产量相对于野生型提高了1.6倍(达到248.52mg L^-1)，而且胞外GG含量占到总产量的55%；而在此基础上进一步敲除GG合成负调控蛋白基因ggpR，GG总产量进一步提高到433.69mg L^-1，相对于WD037进一步提高了75%。 

这些实验结果，证明了蓝细菌通过光合作用合成并分泌GG的能力；也证明了通过敲除GG转运***基因以及GG合成负调控蛋白基因，能够有效提高蓝细菌GG的产量。 

表1.柱式培养条件下基因工程藻株的GG产量 

注： 

盐胁迫时间取决于GG合成量是否持续上升。 

本领域技术人员将会意识到，可以对如具体实施方案中所示的本发明进行众多改变和/或修饰，而不背离如广泛描述的本发明的精神或范围。因此，这些实施方案在所有方面被视为举例说明性的而非限制性的。参考文献 

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Claims (8)

1.一种用于合成甘油葡糖苷的工程菌，其特征在于：工程菌为GG转运***基因和/或GG合成负调控蛋白基因缺失的蓝细菌突变体。

2.按权利要求1所述的用于合成甘油葡糖苷的工程菌，其特征在于：所述GG转运***基因为GG转运***中slr0529基因、slr0530基因、slr0531基因中的一种或几种。

3.按权利要求1所述的用于合成甘油葡糖苷的工程菌，其特征在于：所述GG转运***基因为GG转运***中slr0530基因和slr0531基因，即ggtCD。

4.按权利要求1所述的用于合成甘油葡糖苷的工程菌，其特征在于：所述蓝细菌突变体中还包括抗性标记基因，抗性标记基因选自壮观霉素抗性基因Omega片段(SEQ ID NO:9)、卡那霉素抗性基因片段(SEQ ID NO:10)或氯霉素抗性基因片段(SEQ ID NO:11)。

5.按权利要求1所述的用于合成甘油葡糖苷的工程菌，其特征在于：所述蓝细菌为集胞藻(Synechocystis sp.)PCC6803、聚球藻(Synechococcus)PCC7002、聚球藻WH5701、聚球藻CB0101、聚球藻CB0205、聚球藻RCC307、聚球藻WH7803、聚球藻RS9917、聚球藻CC9311、聚球藻、聚球藻WH8016、聚球藻RS9916、聚球藻BL107、聚球藻CC9902、聚球藻WH8102、聚球藻CC9605、聚球藻WH8109、聚球藻PCC7335、Acaryochloris MBIC11017、Acaryochloris CCMEE5410、蓝杆藻(Cyanothece)CCY0110、蓝杆藻ATCC51142、微鞘藻(Microcoleus)PCC7420、鞘丝藻(Lyngbya)PCC8106、节旋藻(Athrospira)CS-328、节旋藻PCC8005或节旋藻NIES-39。

6.一种权利要求1所述的用于合成甘油葡糖苷的工程菌的构建方法，其特征在于：

1）构建用于敲除蓝细菌中编码能够吸收胞外GG的转运***基因的质粒；

2）构建用于敲除蓝细菌编码的能够抑制GG合成的负调控蛋白基因的质粒；

3)将步骤1）所得质粒转化到蓝细菌中即得到工程菌；或是将步骤1）和步骤2）所得质粒先后转化到蓝细菌中即得到工程菌。

7.一种权利要求1所述的用于合成甘油葡糖苷的工程菌的应用，其特征在于：所述工程菌在合成甘油葡糖苷中的应用。

8.按权利要求7所述的用于合成甘油葡糖苷的工程菌的应用，其特征在于：

所述工程菌光照下能利用太阳能固定二氧化碳生长，而在盐胁迫作用下，能合成、积累并分泌甘油葡糖苷。